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Farmacología y Terapéutica 174 (2017) 63 - 78

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Farmacología y Terapéutica

revista Página de inicio: www.el sev i er .com / l Ocate / pharmthera

editor asociado: B. Rodríguez

Los exosomas: herramientas de administración de terapia y biomarcadores de enfermedades

Lucio Barile una , • , Giuseppe Vassalli una , segundo , ••


una Laboratorio de Celular y Molecular Cardiología, Fundación Cardiocentro Ticino, Lugano, Suiza para el Instituto de Medicina Regenerativa (SIRM), Taverne, Suiza
segundo Departamento de Cardiología, Hospital Universitario de Medicina Lausana (CHUV), Lausana, Suiza

artículo info resumen

Disponible en Internet el 12 de febrero de 2017 Prácticamente todas las células en el organismo secretan vesículas extracelulares (EVs), una población heterogénea de bicapa lipídica vesículas de
membrana-cerrado que transportar y entregar las cargas útiles de proteínas y ácidos nucleicos a células receptoras, desempeñando así un papel central en la
palabras clave: comunicación célula-célula. Los exosomas, los vehículos eléctricos de tamaño nanométrico de origen endosomal, regulan muchos procesos fisiopatológicos
miRNA entrega
incluyendo las respuestas inmunes y en Florida inflamación, crecimiento tumoral, y la infección. Los sujetos sanos y pacientes con diferentes enfermedades liberan
exosoma de
exosomas con diferentes contenidos de ARN y proteínas en la circulación, lo que puede bemeasured como biomarcadores. El descubrimiento de exosomas como
microvesículas de
portadores naturales de pequeños ARN y proteínas funcionales ha planteado un gran interés en la administración de fármacos fi ELD, como itmay ser posible
Drogas
aprovechar estas vesículas para suministro terapéutico de los genes miARN, siRNA, ARNm, lncRNA, péptidos, y fármacos sintéticos. Sin embargo, exosomas
sistémicamente entregados se acumulan en el hígado, riñón y bazo. exosomas dirigidas pueden ser obtenidos mediante la visualización de moléculas de
direccionamiento, tales como péptidos o fragmentos de anticuerpos que reconocen antígenos diana, en la superficie exterior de exosomas. Visualización de
glicosilfosfatidilinositol (GPI) -anclada nanocuerpos sobre SVE es una nueva técnica que permite la visualización EV de una variedad de proteínas, incluyendo
anticuerpos, proteínas indicadoras, y signalingmolecules. Sin embargo, exosomas secretadas naturalmente muestran aceptabilidad farmacéutica limitada.
exosomemimetics reconstituidos que incorporan componentes deseables de exosomas naturales en liposomas o nanopartículas sintéticas, y se ensamblan utilizando
procedimientos controlables pueden ser farmacéuticamente más aceptables. En esta comunicación, ReviewThe comprensión actual de papeles fisiológicos
andpathophysiological de exosomas, sus posibles aplicaciones como marcadores de diagnóstico, y los esfuerzos actuales para desarrollar sistemas de
administración de fármacos basado en exosoma mejoradas.

© 2017 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados.

Contenido

1. Introducción. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 64

2. clases de vesículas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 64

3. Biogénesis de los exosomas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 64

4. Lípidos y composición de proteínas de exosomas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . sesenta


cinco y

5. RNA clasificación en exosomas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66

6. la captación de exosoma. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66

7. Los exosomas regulan funciones celulares. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66

abreviaturas: AAV, virus adeno-asociado; APC, célula presentadora de antígenos; SNC, sistema nervioso central; CSF, cefalorraquídeo Florida UID; DC, células dendríticas; VEB, virus de Epstein-Barr; EGFR, epidérmico receptor del factor de
crecimiento; EEF, factores de elongación eucariotas; ESCRT, complejo endosomal de clasificación necesaria para el transporte; EV, vesícula extracelular; GFP, verde Florida proteína fluorescente; GM-CSF, granulocitos / monocitos factor estimulante de
colonias; GPI, glicosilfosfatidilinositol; GP1, glipicano-1; VHC, hepatitis C virus; VIH, inmunodeficiencia humana fi virus de la ciencia; HSP, proteína de choque térmico; HSPG, proteoglicanos heparán sulfato; HSV, virus del herpes simple; ICAM, molécula de
adhesión intercelular; IL, interleucina; ILV, vesícula intraluminal; IFN α,
interferón α; LAMP, proteína de membrana lisosoma-asociado; LFA-1, asociado a la función de linfocitos antígeno-1; lncRNA, largo ARN no codificante; MAGE, el gen de antígeno de melanoma; MHC, complejo principal de histocompatibilidad; ARNm, ARN
mensajero; miARN, microRNA; MRP-1, resistencia a múltiples fármacos asociada a la proteína-1; MSC, de células madre mesenquimatosas; MVBs, cuerpo multivesicular; OVA, ovoalbúmina; PDGFR, receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas;
PrPEET, espongiformes transmisibles proteína priónica encefalopatía asociada; RVG, la rabia glicoproteína viral; siRNA, pequeños ARN de interferencia; tdTomato, dímero en tándem de tomate; TGF β, factor de crecimiento transformante β; TIM-4, immunoglobulin-
de células T y de tipo mucina que contiene el dominio molécula-4; TLR, Toll-like receptor; TNF, factor de necrosis tumoral; TSG101, gen de susceptibilidad tumor 101; VEGF, factor de crecimiento endotelial vascular; VPS4, la proteína vacuolar de clasificación
asociada a la proteína 4; VSV-G, estomatitis vesicular virus-G.

• Correspondencia a: L. Barile, SIRM, a través de ai Soi 24, 6807 Taverne, Suiza.


•• Correspondencia a: G. Vassalli, Cardiocentro Ticino, a través de Tesserete 48, 6900 Lugano, Suiza.
Correos electrónicos: lucio.barile@cardiocentro.org (L. Barile), giuseppe.vassalli@cardiocentro.org (G. Vassalli).

http://dx.doi.org/10.1016/j.pharmthera.2017.02.020
0163-7258 / © 2017 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados.
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8. EVs como portadores de la información genética. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 67

9. Vehículos eléctricos y patógenos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 68

10. Exosomas como biomarcadores de enfermedades. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 68

11. Potencial terapéutico de los vehículos eléctricos secretadas de forma natural. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 68

12. Biodistribución de exosomas sistémicamente entregados. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 69

13. Cargando exosomas con moléculas de carga exógenos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 70

14. exosomas dirigidos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 70

15. Arti fi miméticos exosome CIAL. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 72

dieciséis. Las respuestas inmunes a los exosomas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 72

17. Experiencia en ensayos clínicos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73

18. Conclusión. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73

Estafa Florida icto de intereses. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73

Expresiones de gratitud. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73

Referencias. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73

1. Introducción como derramamiento de vesículas ( Shedden, Xie, Chandaroy, Chang, y Rosania, 2003 ) O
micropartículas ( Shantsila, Kamphuisen, y Labios de 2010 ), Que tienden a ser más grandes que los
En primer lugar se describen como pequeñas vesículas bywhichmaturating reticulocitos ovejas exosomas (intervalo de tamaño: 50 - 1000 nm); (III) los cuerpos apoptóticos (intervalo de tamaño: 50 - 5000
descartan componentes celulares obsoletos ( Johnstone, Adam, Hammond, Orr, y Turbide, 1987; Pan & nm), que resultará fromthe fraccionamiento del contenido celular de las células que mueren por
Johnstone, 1983; Tranvías, Lauter, Salem, y Heine, 1981 ), Exosomas y otras vesículas extracelulares apoptosis ( Cline & Radic, 2004; Hristov, Erl, Linder, y Weber, 2004 ). Como es evidente, estas
secretadas (EVs) se nowconsidered una célula formade prominente y universal - la comunicación celular. poblaciones de los vehículos eléctricos se solapan en tamaño. Como resultado de una mejor
Fundamentalmente todas las células en los vehículos eléctricos de liberación organismo que son comprensión de su biogénesis, el origen de los vehículos eléctricos se ha convertido en un importante
absorbidos por las células circundantes o circulan en la sangre y, finalmente, se toman por las células a cali fi er para su identidad. En consecuencia, los exosomas son de origen endosomal EV (de Simons y
una distancia. transporte EVs moléculas biológicamente activos, incluyendo proteínas y ácidos nucleicos Raposo, 2009 ), Mientras que microvesículas forman típicamente por el derramamiento de membrana,
que regulan la expresión génica y la función celular en células diana. Como tal, los vehículos eléctricos especialmente de las células lesionadas o transformadas ( MuralidharanChari, Clancy, Sedgwick, y
median autocrinos, efectos paracrinos y endocrinos que pueden ser explotadas terapéuticamente ( Andaloussi, D'Souza-Schorey de 2010 ). Sobre la base de la proteómica análisis comparativos, la población
Mager, Breake fi campo, y Madera, 2013 ). Por ejemplo, células madre mesenquimales (MSC) y otras heterogénea EV se puede subdividir en vesículas grandes, medianas, y pequeñas granulación a baja
células progenitoras utilizados en los estudios de terapia celular median efectos citoprotectores, (2000 × sol), intermedios (10.000 × sol), y altas (100.000 x sol) velocidad de sedimentación,
angiogénicos, y regenerativas que se recapitulan por los vehículos eléctricos que liberan ( Baglio, Pegtel, respectivamente, siendo este último el sedimento ultracentrifugación clásicamente considerado como
y Baldini, 2012; Barile et al., 2014 ). Esta observación plantea la excitante perspectiva de “ La terapia con que contiene exosomas. Ambos exosomal y nonexosomal subpoblaciones estaban presentes dentro de
células sin las células ”. Los esfuerzos para aprovechar los vehículos eléctricos como portadores de pequeñas vesículas (tamaño medio de segundo 200 nm), que se subdivide en cuatro categorías: (i) bona
signalingmolecules para aplicaciones terapéuticas se han centrado en los exosomas, los vehículos fi Delaware exosomas coenriched en exosoma (CD63, CD81, CD9) y marcadores endosoma como
eléctricos de tamaño nanométrico de origen endosomal. Otra área de intensa investigación es el uso de sintenina-1 y el gen de susceptibilidad tumor 101 (TSG101); (Ii) pequeña EVs desprovisto de CD63 /
los vehículos eléctricos como biomarcadores de la enfermedad. Los sujetos sanos y pacientes con CD81 pero enriquecido en CD9; (Iii) los pequeños vehículos eléctricos desprovistos de CD63 / CD9 /
diferentes enfermedades secretan EVs con diferentes contenidos en la circulación y corporal CD81; (Iv) las pequeñas EVs enriquecidos en proteínas de matriz extracelular o factores derivados del
suero ( Kowal et al., 2016 ). Por ahora, es importante reconocer que la nomenclatura tiende a ser utilizado
más bien libremente, y que puede ser dif fi culto en la práctica para distinguir los exosomas de otros
vehículos eléctricos.

Florida fluidos, que pueden ser medidos para fines de diagnóstico.


Para contextualizar exosomas como vectores potenciales Biotherapeutics anddrugdelivery
dentro del más amplio fi campo de la biología de la vesícula, el conocimiento actual de su biogénesis,
la composición y los roles funcionales en la salud y la enfermedad se resume en la parte inicial de
esta comunicación. A continuación, dirigirse papeles potenciales de exosomas como indicadores de
3. Biogénesis de los exosomas
enfermedades y nuevos sistemas de administración de drogas exosomebased. información más
completa sobre la clasificación fi de cationes, la composición, y las funciones de los vehículos
surgen los endosomas de invaginaciones de la membrana plasmática y se fusionan con cargas
eléctricos se pueden encontrar en http://www.isev.org (Sociedad Internacional para extracelular
útiles moleculares ordenados en el retículo endoplasmático y procesados ​en el complejo de Golgi,
vesículas), http://www.asemv.org (Sociedad Americana de exosomas andMicrovesicles), http://microvesicles.org
formando endosomas multivesiculares (también denominado como cuerpos multivesiculares; MVBs).
(Vesiclepedia, un compendio para EVswith anotación comunidad continua) ( Kalra et al., 2012 ),
Cuando MVBs maduro y finalmente se fusionan con la membrana plasmática, su contenido se libera
en el espacio extracelular como exosomas ( Figura 1 ). proteínas RabGTPase regulan fusión de MVBs
con la membrana celular ( Pfeffer, 2010 ) Y el tráfico espacio-temporal fi c de vesículas ( Stenmark de
http://www.exocarta.org (ExoCarta, un compendio basado en la web de la carga exosomal) ( Keerthikumar
2009 ). complejo Endosomal de clasificación necesaria para el transporte (ESCRT) es la maquinaria
et al., 2016 ), Y http://exrna.org (Programa de comunicación de RNA extracelular).
molecular central de la formación exosoma en endosomas ( Février y Raposo, 2004; Hurley, 2010;
Raiborg y Stenmark, 2009; Stoorvogel, 2015 ). El sistema ESCRT comprende cuatro complejos
multi-proteína (ESCRT-0, -I, -II, -III) proteína, la proteína vacuolar asociado de clasificación de 4
2. Clases de vesícula -Vta1 (VPS4), y el homodímero Alix. ESCRT-0 participa en la agrupación de la carga y la
ubiquitinación de los receptores de endocitosis ( Katzmann, Odorizzi, y Emr, 2002; Katzmann, Stefan,
la clasificación fi cación de EVs como una mezcla heterogénea de partículas de membrana ha Babst, y Emr, 2003 ). En endosomas, proteínas de la membrana ubiquitinadas entrar en la vía MVB
sido inconsistente y algo confuso. Tres poblaciones principales se han distinguido: (i) los exosomas, mientras que las proteínas nonubiquitinated se reciclan de nuevo a la membrana plasmática o para el
inicialmente dE fi define como 50 - 100 partículas de bicapa lipídica nm liberadas de las células; complejo de Golgi. TSG101, un componente
entonces el rango de tamaño se incrementó a incluir partículas tan pequeñas como 20 nm de
diámetro y aquellos tan grandes como 150 nm de diámetro, aunque un intervalo de tamaño de 30 -

100 nm se utilizó en la mayoría de los estudios; (Ii) microvesículas, también denominado


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Exosomes
Size: 50-150 nm

Lysosome Exocytic Markers: CD63; CD9; Alix; TSG101;


(degradation) MVB Tetraspanins; MHCI; HSP70
MVB Origin: Multivesicular endosomes
Lipids: Sphingomielin,
Phosphatidylserine
Early
endosome
endocytosis
ESCRT III
MVB
Microvesicles
Size: 100-1000 nm
ESCRT II
Markers: CD40; CD62; integrins
Origin: Plasma membrane
Golgi-
ESCRT I Lipids: Phosphatidylserine
modified Ubiquitin
(TSG101)
proteins

ESCRT 0

Golgi

ESCRT:
Endosomal
ER
Sorting Membrane particles
Complexes
Size: 50-80 nm
Nucleus Required for
Markers: CD133; integrins; GRP94
Transport
Origin: Plasma membrane
Ubiquitin Lipids: ?
Golgi modified Protein

Transmembrane Protein

Cytosolic Protein

Fig. 1. Biogenesis of exosomes and interactions with recipient cells. Exosomes originate by internal budding of the plasma membrane giving rise to early endosomes. By maturation through a process that involves interactions with the Golgi
complex, early endosomes become late endosomes. The membrane of late endosomes forms intraluminal vesicles (ILVs) that have incorporated proteins from the plasma membrane and from the Golgi, along with nucleic acids. ILVs are
contained within multivesicular bodies (MVBs) that either fuse with the plasma membrane to release them as exosomes into the extracellular space, or are sent to lysosomes for degradation. The endosomal-sorting complex required for transport
(ESCRT) is the key molecular machinery of protein sorting into exosomes. TSG101 (tumour susceptibility gene 101) is a component of the ESCRT-1 sub-complex.

of ESCRT-I, forms complexes with ubiquitinated cargo proteins and activates ESCRT-II. As a result, Kim, Kim, & Gho, 2013; Simpson, Lim, Moritz, & Mathivanan, 2009 ). Brie fl y, exosomes released from
MVB proteins are sequestered and the deubiquitination enzyme is recruited to remove ubiquitin from different cell types contain different lipids and proteins. However, the lipid composition of exosomes
the proteins prior to their sorting into intraluminal vesicles (ILVs). Molecules that inhibit ESCRT may differs from that of the plasma membrane of the parent cell, in part because exosomes also contain
hinder exosome release at once ( Gross, Chaudhary, Bartscherer, & Boutros, 2012; Hoshino et al., lipids from the Golgi. Exosome membranes are enriched in glycosphingolipids, cholesterol ( Llorente
2013; Tamai et al., 2010 ). An RNA interference screen targeting 23 components of ESCRT and et al., 2013; Morelli et al., 2004 ), phosphatidylserine ( Laulagnier et al., 2004 ), and ceramide. Their
associated proteins showed that silencingof TSG101 reduced the secretion of vesicle-associated lipid composition accounts for their unique rigidity. A role for ceramide in budding of exosome vesicles
CD63 and major histocompatibility complex class II (MHC-II) molecules, whereas depletion of VPS4B intoMVBs was reported ( Trajkovic et al., 2008 ).
enhanced this secretion fromMHC-II-expressing HeLa cells ( Colombo et al., 2013 ). Silencing of Alix
increased MHC-II exosomal secretion. Formation of exosomes despite inhibition of ESCRT
components points to the existence of an ESCRT-independent pathway possibly involving
tetraspanins, heat shock proteins (HSPs), ceramides, cholesterol, and phosphatidic acids ( Kowal, Exosomes are a heterogeneous population of EVs expressing heterogeneous patterns of surface
Tkach, & Théry, 2014 ). molecules. Because they are frequently analysed as a bulk isolate, certain molecular markers are
commonly found in exosomes. These markers include tetraspanins (CD9, CD63, CD81), Alix, HSP70,
HSP90, GTPases (e.g., eukaryotic elongation factors [EEFs] 1A1 and 2), and MHC molecules ( Blanchard
et al., 2002; Wolfers et al., 2001 ). However, some of the “ common ” markers may be restricted to
subsets of exosomes derived from a single-cell source. CD9 participates in fusion processes in many
Not all vesicles in theMVBs are sorted for release. Together with autophagy, the MVB pathway cells ( Miyado et al., 2000 ) and may facilitate fusion of exosomes to recipient cells ( van den Boorn,
delivers a signi fi cant share of cellular material to lysosomes. The autophagy (ATG)-core machinery Schlee, Coch, & Hartmann, 2011 ). Exosomes released from many, but not all, cells contain MHC
and ESCRT couple cargo sorting to form transport intermediates ( Huber & Teis, 2016 ). Why certain class I (MHC-I) molecules. Human monocyte-derived dendritic cells (DCs) generated in vitro in the
MVBs are sent to lysosomes for degradation ( Denzer, Kleijmeer, Heijnen, Stoorvogel, & Geuze, 2000; presence of IL-4 and IL-3 released exosomes with increased densities of MHC-I ( Johansson, Admyre,
Futter, Pearse, Hewlett, & Hopkins, 1996; Pant, Hilton, & Burczynski, 2012 ) versus fusion with plasma Scheynius, & Gabrielsson, 2008 ). These exosomes and those secreted by various cell lines, unlike
membrane for release is poorly understood. Secreted MVBs are richer in cholesterol ( Möbius et al., their parent cells, displayed a signi fi cant part of their MHC-I content in the form of fully folded disul fi de-linked
2002 ) and preferentially fuse with the plasma membrane ( Verweij, Middeldorp, & Pegtel, 2012 ), as MHC-I dimers ( Lynch et al., 2009 ). Formation of MHC-I dimers was controlled by the redox
compared to degredatory MVBs. environment ( Makhadiyeva et al., 2012 ). Moreover, different human tumour entities shed
MHC-I-related chain molecules A and B ( Chitadze et al., 2013 ). MHC-II molecules are expressed on
exosomes released by antigen-

4. Lipid and protein composition of exosomes

An in-depth discussion of the lipidomics and proteinomics of exosomes is beyond the scope of
this article (for reviews, see Choi,
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presenting cells (APCs) including DCs, macrophages, B cells, microglia, and intestinal epithelial cells. Receptor binding can initiate exosome uptake ( Miyanishi et al., 2007; Nolte-'t Hoen, Buschow,
Immature DCs express low levels of MHC-II. Anderton, Stoorvogel, &Wauben, 2009 ). Fusion ( Prada &Meldolesi, 2016 ) and endocytotic processes
In these cells, peptide-loaded MHC-II molecules are ubiquitinated, resulting in their including clathrincoated pits, pinocytosis, caveolae, macropinocytosis ( Fitzner et al., 2011 ), and
endocytosis and sorting into ILVs for lysosomal degradation. Conversely, in phagocytosis may participate in the internalization of exosomes by different cell types ( Morelli et al.,
activatedDCsMHC-IImolecules are not ubiquitinated and are expressed on the cell surface. Sorting of 2004; Tian, ​Wang, Wang, Zhu, y Xiao, 2010 ). La inhibición de la captación de exosomal usando
MHCII into exosomes may be independent of ubiquitination. In DCs loaded with antigen, cognitively dynasore, un inhibidor de la endocitosis potente, no bloqueó completamente la absorción de
interacting antigen-speci fi c CD4+T cells activated an alternate MVB sorting mechanism for MHC-II exosomas secretadas por el virus de Ebstein Barr (EBV) células infectadas ( Pegtel et al., 2010 ),
whereby DCs formed MVBs with MHC-II and CD9 carrying luminal vesicles that were secreted as Consistente con múltiples mecanismos de entrada para los exosomas incluso a través de la
exosomes and transferred to the interacting T cells ( Buschow et al., 2009 ). Another study showed membrana plasmática. La unión de exosomas a la membrana plasmática está mediada por las
that soluble MHC-II proteins promoted suppressive activity in CD4+T cells and that exosomemediated moléculas de adhesión clásicos que participan en la celda - interacciones de las células, por ejemplo,
immune tolerance was dependent upon MHC-II ( Bakela, Kountourakis, Aivaliotis, & Athanassakis, integrinas y moléculas de adhesión intercelular (ICAM). moléculas exosomal adicionales que
2015 ). Moreover, exosomes from DCs and other APCs mediated intercellular transfer of MHC-I/II participan en la captación celular incluyen lactadherin, fosfatidilserina, proteoglicanos de sulfato de
leading to the formation of so-called “ MHC-dressed cells ” that activated or regulated T cells via heparano (HSPGs), y tetraspanins. Se informó de regulación Tetraspanin dependiente de la
pre-formed antigen peptide-MHC complexes without requiring any further processing ( Nakayama, captación de exosoma por las células endoteliales ( Rana y Zoller, 2011 ). Los receptores que
2015 ). While exosomes carry proteins expressed by the parent cell, their protein composition is not contribuyen a la absorción incluyen integrinas, receptores scavenger, receptores de complemento, y
identical with that of the parent cell, indicating selective protein sorting. The underlying mechanism is immunoglobulin- de células T y mucina-dominio-molécula que contiene-4 (TIM-4) que se une a
poorly understood but may involve interactions between tetraspanins and other transmembrane fosfatidilserina ( György, Hung, Breake fi campo, y Leonard, 2015; Grabar, Subra, Silvente-Poirot, y
proteins that form protein complexes in membrane microdomains ( Yanez-Mo, Barreiro, Poirot, 2011 ). señalización a través de ligandos de la superficie de ligando-receptor está involucrado
Gordon-Alonso, Sala-Valdes, & Sanchez-Madrid, 2009 ). For example, the multivalent adaptor en muchos procesos incluyendo la activación de células T por exosomas derivados de DC ( Thery et
syntenin couples to membrane proteins and to Alix which, in turn, binds to ESCRT-III and participates al., 2002 ), La angiogénesis ( Martínez y Andriantsitohaina de 2011 ), Y la progresión del cáncer ( Cho
in the sorting of syndecan membrane proteins into exosomes ( Baietti et al., 2012; Roucourt, et al., 2011 ). Microvesículas fromglioma células que expresan el receptor truncado factor de
Meeussen, Bao, Zimmermann, & David, 2015 ). crecimiento formade epidérmico (EGFR), EGFRvIII, se demostró que la transferencia de esta
proteína oncogénica a células tumorales circundantes que no la expresan ( Al-Nedawi, Meehan,
Kerbel, Allison, y Rak, 2009 ). Esta observación exempli fi transferencia de receptores de la superficie
de las células aceptoras través de la fusión ed EV-mediada con su membrana plasmática.

5. RNA sorting into exosomes


EVs pueden explotar vías de entrada virales para la entrega de la carga ( Van Dongen, Masoumi,
Los exosomas contienen ácidos nucleicos que incluyen ARNm, microRNA (miRNA), ARN Witwer, y Pegtel, 2016 ). Ambas moléculas virales y no virales pueden facilitar la fusión de los
ribosómico, ARN no codificante largo (lncRNA), y de forma variable algunos de ADN. miARN es una vehículos eléctricos con células aceptoras. Los exosomas de virus de la hepatitis C (VHC) células
clase de pequeños ARN no codificantes que regulan la expresión génica a nivel post-transcripcional ( Yates,infectadas fueron enriquecidos en CD81 y glicoproteínas de HCV y posiblemente fueron tomadas a
Norbury, y Gilbert, 2013 ). El repertorio de miARN de exosomas varía como una función de la célula través de la fusión ( Masciopinto et al., 2004 ). inmunodeficiencia Bothhuman fi virus ciencia (VIH)
madre y su estado fisiológico ( Gibbings, Ciaudo, Erhardt, y Voinnet de 2009 ). La composición de andEVs lectinas Relyon, moléculas de unión de ácido siálico expresadas en una variedad de
exosomas es un proceso estrechamente regulado que ismodulated por factores ambientales leucocitos y células del estroma, como receptores de las células objetivo. VIH se demostró que
incluyendo condiciones de activación celular y el estrés ( de Jong et al., 2012 ). La complejidad de apuntar a los DC mieloides mediante el receptor CD169 / Siglec-1, una unión a la ganglioside3
presente en la superficie de partículas de virus lectina ( Puryear, Yu, Ramírez, Reinhard, y
themechanisms underlyingmiRNA clasificación en exosomas sólo se está empezando a surgir ( Villarroya-Beltri,
Baixauli, Gutiérrez-Vázquez, SánchezMadrid, y Mittelbrunn, 2014 ). Derribo de las proteínas ESCRT Gummuluru 2012 ). CD169 also captured B-cell-secreted exosomes by macrophages ( Saunderson,
no afectó a este proceso ( Kosaka et al., 2010 ). La evidencia reciente sugiere que la especificidad fi c Dunn, Crocker, & McLellan, 2014 ). HSPGs appeared to participate in the capture of herpes simplex
motivos presentes en certainmiRNAsmay facilitar su incorporación en exosomas mediante la unión a virus (HSV) and in the internalisation of exosome-like EVs produced by cancer cells ( Christianson,
especí fi proteínas c chaperon, tales como hnRNPA2B1 sumoylated, un riboprotein nuclear Svensson, van Kuppevelt, Li, & Belting, 2013 ). Themechanism throughwhich exosome cargo is
released into the cytoplasmand the fate of exosomal components inacceptor cells are incompletely
heterogéneo que dirige miRNA tráfico fi cking a MVBs y su liberación a través de los exosomas ( Villarroya-Beltri
et al., 2013 ). En los macrófagos, los cambios dependientes de la activación de células de los niveles understood. Real-time analysis using fl uorescencemicroscopy and single particle tracking showed that
objetivo miARN aparecieron para regular miRNA clasificación en exosomas ( Squadrito et al., 2014 ). exosomes from PC12 cells were attached onto plasma membrane from the medium and moved in a
En las células B humanas, se encontró que la distribución de subconjuntos de miRNAs entre las slow drifted mode indicative of diffusion in local microenvironments of cytoplasm ( Tian et al., 2013 ). El
células y sus exosomas secretadas ser no aleatoria, como 3 ' miRNAs adenylated finales-estaban movimiento de exosomas entonces cambia a un modo dirigido rápida, lo que sugiere la
sobrerrepresentados en las células y 3 ' miRNAs uridylated finales-estaban sobrerrepresentados en internalización exosoma y el transporte activo a lo largo de actina fi lamenta o microtúbulos a los
exosomas ( Koppers-Lalic et al., 2014 ). Estas lisosomas. La evidencia reciente sugiere que los exosomas pueden ser reclutados como vesículas
individuales hasta el cuerpo celular por SUR fi ng en fi lopodia, así como fi lopodia agarrando y tirando
de movimientos para llegar a los puntos calientes en el endocítica fi base de lopodial. Después de la
internalización, exosomas shuttlewithin vesículas de endocitosis para escanear el retículo
endoplásmico antes de ser ordenados en los lisosomas ( Heusermann et al., 2016 ).

fi ndings suggest that miRNA sorting into exosomes may be regulated by post-transcriptional modi fi cations.
Understanding how proteins and RNA are sorted into exosomes will be crucial to appreciate how cells
modify their molecular payloads under different conditions.

6. Exosome uptake 7. Los exosomas regulan funciones celulares

Exosomes interact with target cells through multiple mechanisms ( de Curtis & Meldolesi, 2012; Una variedad de tipos de células incluyendo las DC y otras APCs ( Thery et al., 2002 ),
Mittelbrunn & Sánchez-Madrid, 2010 ). mastocitos ( Skokos, Goubran-Botros, Roa, y Mecheri, 2002 ), B
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y las células T ( Clayton, Turkes, Navabi, Mason, y Tabi, 2005; Taylor & Gercel-Taylor, 2005 ), células EVs play central roles in tumour growth andmetastasis. Tumour antigen presented by
epiteliales intestinales ( van Niel et al., 2001 ), neuronas ( Faure et al., 2006 ), los miocitos cardíacos ( Guptatumour-derived EVs in association with MHC was taken up and processed by DCs, which then
& Knowlton, 2007 ), Las MSC ( Lai et al., 2010 ), células endoteliales ( de Jong et al., 2012 ), y células triggered potent CD8+ Tcell – mediated anti-tumour immune responses ( Blanchard et al., 2002;
cancerosas ( Taylor & Gercel-Taylor, 2005; Zhao, Liu, Xiao, y Cao, 2015 ) Segregar los vehículos Wolfers et al., 2001 ). Distinct subsets of tumour-derived EVs modulate anti-tumour immune
eléctricos. Los primeros estudios investigaron exosomas de células inmunes. DC maduras secretan responses, thus facilitating tumour growth ( Taylor & Gercel-Taylor, 2005; Zhao et al., 2015 ) via
exosomas que contienen MHC-I / II presentar antígenos al sistema inmunitario ( Segura, Amigorena, y regulation of gene expression ( Qu et al., 2009; Valadi et al., 2007 ), cell proliferation ( Qu et al., 2009 ),
Thery, 2005 ). exosomas DCderived se muestran para facilitar el rechazo del tumor dependiente de migration and invasion ( Graves et al., 2004; Higginbotham et al., 2011; Sung, Ketova, Hoshino,
células inmunes ( Zitvogel et al., 1998 ). Donantes DC derivadas de exosomas promovidas respuestas Zijlstra, & Weaver, 2015 ). Se muestran las células de glioma de entregar EGFRvIII través de EVs
aloinmunitarias y el rechazo de aloinjertos de órganos sólidos ( Liu et al., 2016 ). Por otro lado, los para que rodea las células de glioma, en el que EGFRvIII activa la transformación de las vías de
exosomas de DCs de IL-10 tratadas con suprimidas en Florida inflamación y la artritis inducida por señalización y regulan la expresión de genes diana, incluyendo factor de crecimiento endotelial
colágeno en ratones ( Kim et al., 2005 ). El receptor de la célula T se encuentra en la superficie de vascular (VEGF), anti-apoptótica Bcl-x (L), y ciclina p27 inhibidor de la cinasa dependiente ( Al-Nedawi
microvesículas en ciernes en el centro sinapsis inmunológica. las células B que portan proteínas et al., 2008 ). exosomas Tumourderived nos llevaron a suministrar péptidos proangiogénicos y
MHC cognado reciben receptores de células T a partir de células T e inician las señales miRNAs a microvascular células endoteliales para promover la angiogénesis tumoral ( Hood, Pan,
intracelulares en respuesta a microvesículas sinápticas aisladas ( Choudhuri et al., 2014 ). Las células Lanza, y Wickline, 2009; Janowska-Wieczorek et al., 2005; Skog et al., 2008; Zhang, Yin, Lai, y Lim,
T activadas liberado exosomas miARN-cargado que regulaban la inmunidad por la orientación APCs 2014 ). Los exosomas de células de cáncer pancreático iniciados formación nicho pre-metastásico en
( Mittelbrunn et al., 2011 ). Sin embargo, se informó de la secreción de los vehículos eléctricos con el hígado ( Costa-Silva et al., 2015 ). Los exosomas de melanomas metastásicos altamente inducidos
actividad coestimuladora de las células T por las células T CD4 + citotóxicas ( van der Vlist et al., leakiness vascular en los sitios pre-metastásicas y
2012 ). Placenta-derived EVs may suppress maternal immune rejection of the fetus by inhibiting T-cell
signaling and by promoting apoptosis of activated lymphocytes through display of Fas ligand and
tumour necrosis factor (TNF)-related apoptosis-inducing ligand ( Stenqvist, Nagaeva, Baranov, &
Mincheva-Nilsson, 2013; Taylor, Akyol, & Gercel-Taylor, 2006 ). During viral infection, placental
exosomes transferred viral resistance to nonplacental cells via delivery of autophagy-inducing
miRNAs ( DelormeAxford et al., 2013 ). In a different context, regulatory T cells secreted “ instruido ” células bonemarrowprogenitor hacia un fenotipo proangiogénico ( Peinado et al., 2012 ).
miRNA-loaded exosomes that inhibited pathogenic T helper (Th)-1 cells ( Okoye et al., 2014 ). ThemiRNA contenido de los vehículos eléctricos de cáncer derivado regula andmigration crecimiento
Exosome-mediated, MHC-II-dependent immune tolerance ( Bakela et al., 2015 ) has been mentioned del tumor. Por ejemplo, miR-105 secretada por células de cáncer de mama metastásico facilitados
above. A recent study showed that exosomal miR-146a and miR-155 passed between immune cells en migración celular apuntando el apretado proteína de unión ZO-1 ( Zhou et al., 2014 ). La evidencia
vivo, y que exosomal miR-146a inhibe inducida por endotoxina en Florida inflamación en los ratones, reciente sugiere que los exosomas pueden participar en la transferencia de la resistencia a los
mientras que miR-155 empeoró ( Alexander et al., 2015 ). funciones reguladoras de EVs en en Florida inflamación
medicamentos en el cáncer. transferencia de exosoma mediada funcional P-glicoproteína y múltiples
en diversos en Florida enfermedades inflamatorias ( Buzas, Gyorgy, Nagy, Falus, y Gay, 2014 ), fármacos resistencia asociada-proteína-1 (MRP-1) a partir de resistente a las células tumorales
Arteriosclerosis ( Hulsmans y Holvoet, 2013 ), Y en el sistema nervioso central (SNC) ( Gupta y sensibles a fármacos y la adquisición de resistencia a múltiples fármacos de drogas por se informó de
Pulliam, 2014 ) ha sido reportado. En el SNC, los vehículos eléctricos están involucrados un lugar este último ( Ji et al, 2015.; Lopes-Rodrigues et al., 2016 ). Otro estudio reciente mostró que los
destacado, en el transporte de señales recíprocas entre células gliales y las neuronas myelinating, exosomas derivados de MSC fueron tomadas arriba y hacia abajo de los genes regulados reguladoras
promoviendo así la supervivencia neuronal, bymicroglia responsesmediated inmune, y el conjunto de de la transcripción en células de cáncer ( Yang, Otte, y Hass, 2015 ). Estas fi hallazgos ilustran
sinapsis y la plasticidad al tiempo que desempeña un papel importante en la propagación de EV-mediada diafonía bi-direccional entre las células tumorales y no tumorales.
enfermedades neurodegenerativas y el cáncer cerebral ( Budnik, Ruiz-Cañada, y Wendler, 2016;
Rajendran et al., 2014 ). exosomas derivados de Oligodendroglia mejorado la viabilidad de las
neuronas cultivadas en condiciones de estrés y se detectaron en las neuronas después de en vivo inyección
en el cerebro de ratón ( Frühbeis, Frohlich, y Kramer-Albers, 2012 ). Circulantes exosomas de 8. EVs como portadores de la información genética
pacientes con enfermedad de Parkinson neuronas protegidas contra el estrés ( Tomlinson et al., 2015 ).
Por otro lado, los vehículos eléctricos participan en el embalaje y la propagación de las proteínas mal Mediante la entrega de ácidos nucleicos a las células diana, los vehículos eléctricos intercambian
plegadas asociados con enfermedades neurodegenerativas ( Coleman & Hill, 2015 ). transmisión información genética entre las células. Se muestran exosomas de un ratón y una línea de mastocitos
exosoma mediada de agregados de isoforma dysbindin-1B codificadas por el gen de susceptibilidad humanos (MC / 9 y HMC-1, respectivamente) y de los mastocitos de ratón derivados de médula ósea
DTNBP1 esquizofrenia inducida por efectos tóxicos en las neuronas una larga distancia lejos del sitio primaria para contener ARN a partir de
de la agregación inicial en el cerebro de ratón ( Zhu, Shen, y Xu, 2015 ). En pacientes con la ~ 1300 genes ( Valadi et al., 2007 ). In vitro Traducción mostró que los ARNm exosomal eran
enfermedad de Alzheimer, el péptido beta-amiloide liberado de las células en asociación con funcionales. Después de la transferencia de ARN exosomal ratón para humanmast células, proteínas
exosomas acumulados en las placas en el cerebro ( Rajendran et al., 2006 ). La vía secretora newmouse fueron encontrados en las células receptoras, lo que indica que el ARNm exosomal
exosome transportado amiloide proteína precursora fragmentos carboxilo-terminal de la célula en el transferido fue traducido después de entrar en la célula. Los informes adicionales soportados entrega
espacio extracelular del cerebro ( Pérez-González, Gauthier, Kumar, y Levy, 2012 ). se detectó funcional EV-mediada de mRNA ( Deregibus et al., 2007; Mizrak et al, 2013.; Skog et al., 2008 ) Y
espongiformes transmisibles proteína priónica encefalopatía asociada (PrPEET) en los vehículos ARN pequeños ( Choudhuri et al, 2014.; Mittelbrunn et al., 2011; Skog et al., 2008; Zhou et al., 2014 )
eléctricos de plasma en una variante adaptada a ratón de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob ( Saa Para aceptor células. EVs derivados de o bien el pulmón o células de médula ósea de hígado
et al., 2014 ). La vía de esfingomielinasa neutra se demostró para regular el embalaje de la proteína entrado in vitro
priónica en exosomas ( Guo, de Bellingham, y Hill, 2015 ).
y la expresión inducida de proteínas especi fi c para el tejido de pulmón o el hígado de origen ( Quesenberry
et al., 2014 ). Estas fi hallazgos indican que los vehículos eléctricos tienen la capacidad de cambiar el
fenotipo de las células vecinas.
Circulantes virales y tumorales-derivedmiRNAs se empaquetan en vehículos eléctricos ( Chugh
et al., 2013 ) Que protegen el ARN de la degradación de ribonucleasa ( Castanotto y Rossi, 2009 ). A la
inversa, sintético miRNA desnudo tiene una corta vida media en la circulación, que puede ser
mejorada por modi químico fi cationes ( Wang et al., 2015 ), Y en mayor medida por la carga en los
vehículos eléctricos. miRNAdelivered través de exosomas reprimidos genes diana en las células
receptoras ( Montecalvo et al., 2012; Pegtel et al., 2010; Squadrito et al., 2014 ).

To what extent EV-delivered RNA is intact and functional is unclear. A recent study showed that
while both exosomes and microvesicles from transiently transfected cells delivered reporter mRNA to
recipient
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cells, the deliveredmRNAwas rapidly degraded and was not translated ( Kanada et al., 2015 ). 2008 ). Circulating exosomes from glioblastoma patients showed increased levels of EGFRvIII mRNA,
Microvesicles, but not exosomes, delivered functional plasmid DNA in vivo. Another study addressed which can bemeasured for glioblastoma diagnosis ( Skog et al., 2008 ). This method may serve the
exchanges of tumour-derived EVs between cell populations and cargo RNA translation ( Lai et al., role of a
2015 ). EVmembranes were labeledwith enhanced green fl proteína fluorescente (EGFP) y de dímero “ fl uid-biopsy ”, evitando así la necesidad de un procedimiento quirúrgico para eliminar las biopsias de
en tándem de tomate (tdTomato) N-terminal se fusionan con una señal de palmitoylation (PalmEGFP, tejido del cerebro para la detección de proteína EGFRvIII. EGFR localizada a exosomemembranes
PalmtdTomato). Para supervisar EV-RNA de carga, las transcripciones que codifican PalmtdTomato se ensayó como un posible marcador para el diagnóstico del cáncer de pulmón ( Yamashita et al.,
se marcaron secuencias withMS2RNAbinding anddetected por co-expresiónde una fusión 2013 ). -1 glipicano (GP1) exosomas positivas de proteoglicano se detectaron en el suero de
bacteriophageMS2 capa de proteína-EGFP. multiplexación de Florida fluorescentes y reporteros pacientes con cáncer de páncreas con especificidad absoluta fi la ciudad y la sensibilidad,
bioluminiscentes EVmembrane demostraron dinámicas rápidas de absorción EV y la traducción de los distinguiéndolos de los sujetos sanos y pacientes con una enfermedad pancreática benigna ( Melo et
ARNm de carga EV-entregado en las células cancerosas dentro de 1 hr después de la transferencia al., 2015 ). Los niveles de exosomas GP1-positivo correlacionados con la carga tumoral y la
horizontal entre las células. Un estudio distinto se dirigió a la abundancia de moléculas de miARN en supervivencia de los pacientes pre- y post-quirúrgicas, lo que sugiere una relevancia pronóstica del
preparaciones de exosoma de fi cinco diferentes fuentes (plasma, seminal Florida UID, países en marcador. En ratones, exosomas GP1-positivos detectados fiablemente lesiones intraepiteliales
desarrollo, los mastocitos y las células de cáncer de ovario). fracciones exosoma contenían sólo una pancreáticas a pesar de señales negativas por resonancia magnética. Plasmamicrovesicles
pequeña minoría de contenido themiRNA de plasma, y ​la abundancia de miRNAs individuales en secretadas por las células acinares de la próstata se investigaron como material de partida para la
exosomeswas bajas ( Chevillet et al., 2014 ). papeles funcionales de exosomal transferencia miARN se identi fi cación de nuevos marcadores para el cáncer de próstata ( Tavoosidana et al., 2011 ).
estudiaron en un modelo de macrófagos-a-endotelial comunicación celular ( Squadrito et al., 2014 ). proteómica pro fi ling de exosomas identi fi marcadores candidatos ed de la enfermedad ( Duijvesz et
Las células endoteliales dE fi ciente en Dicer, una enzima RNasa III requerido para la generación de al., 2013 ). Los pacientes que experimentaron recurrencia del carcinoma hepatocelular después del
miRNAs, se cultivaron en presencia de exosomas de Dicer-pro fi ciente o Dicer-de fi macrófagos trasplante hepático mostraron mayores niveles de un biomarcador miARN en exosomas suero ( Sugimachi
cientes. A pesar de que bona fi Delaware transferencia de frommacrophages actividad miARN a las et al., 2015 ). Los exosomas también han sido evaluados como indicadores biológicos de un número
células endoteliales a través de exosomeswas observaron, la contribución de exogenousmiRNAs de enfermedades no cancerosas de múltiples órganos, incluyendo el SNC ( Kawikova y Askenase,
para apuntar repressionwasmodest gen. La mayoría de los exosomas captado por las células 2015 ), Hígado ( Masyuk, Masyuk, y Larusso, 2013 ), Riñón ( Spanu, van Roeyen, Denecke, Floege, y
endoteliales terminaron en los lisosomas. Las diferencias en la célula donante, modelo experimental, Muhlfeld, 2014 ), pulmón ( Levänen et al., 2013 ), y arterias ( Hoefer et al., 2015 ). En el SNC, resultados
andpuri fi procedimiento catión puede dar cuenta de la estafa Florida igir resultados de estos estudios. de neurodegeneración tau inducida de acumulación extracelular de la proteína tau anormalmente
procesada ( Saman et al., 2012 ). En el modelo taupatía M1C neuroblastoma, Tau parecía ser
exportado a través de los exosomas y se enriquece en AT270 fosfo-tau, un biomarcador de la
enfermedad de Alzheimer temprano. El cefalorraquídeo elevados Florida uid (CSF) niveles de AT270
fosfo-tau visto en los casos leves de la enfermedad de Alzheimer esporádica a moderada resultó de
enriquecimiento selectivo de fosfo-tau en las fracciones exosomal de CSF en relación con tau total
CSF. El incremento en fosfo-tau con inicio de la enfermedad se asoció con un aumento marcado en
9. vehículos eléctricos y patógenos la fracción exosomal. En otro estudio, los niveles de proteínas autolysosomal (catepsina D, proteína
lisosoma asociada a la membrana [LAMP] 1, y las proteínas ubiquitinylated) en pacientes
EVs share biological features with enveloped viruses, such as HSV-1, EBV, and vaccinia virus distinguidos neuralmente derivados exosomas de suero con la enfermedad de Alzheimer preclínica
regarding biogenesis, biophysical properties, cell entry, and functional protein and RNA delivery to de los controles y los pacientes con demencia fronto-temporal ( Goetzl et al., 2015 ). proteómica pro fi identi
target cells ( Meckes & Raab-Traub, 2011 ). Several enveloped viruses exploit the cellular vesiculation ling fi ed proteínas diferencialmente abundantes en exosomas de suero de pacientes con enfermedad
machinery for budding and assembly ( Rossman & Lamb, 2011 ). EVs secreted by cells infected by de Parkinson y sujetos sanos ( Tomlinson et al., 2015 ). Con respecto a la enfermedad pulmonar,
enveloped viruses carry viral envelope factors thatmediate EV attachment and possibly fusionwith exosomas de lavado broncoalveolar Florida fluidos de pacientes asmáticos o sujetos sanos mostraron
target cells. This process is so ef fi cient that EVs outcompete actual viral particles for cell entry ( Vallhov diferentes pro miARN fi Les ( Levänen et al., 2013 ). En cuanto a las enfermedades cardiovasculares, el
et al., 2011 ). Exosomes released fromHSV-1- or EBVinfected cells exported functional viral mRNA aumento de miR-192 niveles en suero exosomas predijo el posterior desarrollo de la insuficiencia
and miRNA to uninfected cells ( McLauchlan, Addison, Craigie, & Rixon, 1992; Meckes et al., 2010; cardíaca en los pacientes después de un infarto agudo de miocardio ( Matsumoto et al., 2013 ).
Pegtel et al., 2010 ). Microvesicles from HIV-infected cells transferred CD4 receptor and chemokine Finalmente, exosomas urinarios se han utilizado como material de partida para biomarcadores para
receptor CCR5 to noninfectable cells, which acquired susceptibility to infection ( Ratajczak, renal, urogenital, y enfermedades sistémicas ( Huebner et al, 2015.; Spanu et al., 2014 ). Los niveles
Wysoczynski, Hayek, Janowska-Wieczorek, & Ratajczak, 2006 ). HIV-1-mediated activation of the DC elevados de fetuina-A inurinary exosomas correlacionados con lesión renal aguda ( Zhou et al., 2006 ).
immunoreceptor triggered the release of exosomes containing the pro-apoptotic protein DAP-3 that Los estudios clínicos en curso de EVmarkers diagnóstico se resumen en tabla 1 . La mayoría de los
induced apoptosis in uninfected CD4+ T cells ( Mfunyi et al., 2015 ). A possible role for EVs in the estudios se centran en el cáncer, y un estudio aborda la enfermedad de Parkinson.
transmission of PrPTSE has been mentioned above ( Saa et al., 2014 ). A role for EVs in bacterial
infection is exempli fi ed by recent data showing lysosome exocytosis and expulsion of
exosome-encased uropathogenic E. coli infecting bladder epithelial cells ( Miao, Li, Zhang, Xu, &
Abraham, 2015 ).

10. Exosomes as biomarkers of diseases A pesar de los numerosos informes de significación fi asociaciones cativos de biomarcadores EV
con diversas enfermedades, los resultados de los estudios individuales se ajustan mal. Las diferencias
Exosomes released by cells into the circulation and bodily fl uids display different protein and metodológicas en EV puri fi catión puede contribuir a esta falta de coincidencia ( Taylor y Shah, 2015 ).
RNA contents in healthy subjects and patients with different diseases, which can be measured as Para una aplicación dada, es obligatorio para comprobar la sensibilidad y especificidad fi ciudad de la
potential diagnostic markers ( Clayton, Harris, Court, Mason, & Morgan, 2003; Pant et al., 2012; prueba en bien de fi nidas condiciones.
Revenfeld et al., 2014 ). Tumour-derived exosomes are rich in miRNAs that may serve as tumour
markers ( Kumar, Gupta, Shankar, & Srivastava, 2015; Mishra, 2014; Schwarzenbach, 2015 ). Patients
with glioblastoma multiforme differed from healthy subjects in their RNA content of serum EVs ( Noerholm 11. potencial terapéutico de EVs secretados naturalmente
et al., 2012; Taylor & Gercel-Taylor,
EVs naturalmente liberadas fromcertain tipos de células exhiben potencial terapéutico. EVs MSC
derivadas de recapitulan inmunomodulador
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tabla 1
estudios clínicos en curso de marcadores EV de diagnóstico.

ESTUDIAR Estado Tema Región Fuente de ClinicalTrials.gov


exosomas identi fi er

Interrogación de la señalización intercelular exosome mediada en pacientes con cáncer de páncreas El cáncer de reclutamiento Estados Unidos Sangre NCT02393703
la validación clínica de una firma genética exosome urinaria en los hombres que presentan por sospecha de cáncer de próstata Completado el cáncer Estados Unidos Orina NCT02702856
Que circula exosomas como potenciales biomarcadores pronósticos y predictivos en el cáncer gástrico avanzado El cáncer de reclutamiento sangre Europa NCT01779583
(pacientes “ EXO-PPP Estudio “)
pruebas de exosoma como una modalidad de cribado para escamosas orofaríngea papilomavirus humano positivo El cáncer de reclutamiento Estados Unidos células primarias NCT02147418
El carcinoma de células cultivadas

proteínas LRRK2 y Otros novela de exosoma en la enfermedad de Parkinson El reclutamiento de Parkinson EE.UU. Blood, NCT01860118 orina
estudio piloto con el objetivo de cuantificar una proteína de estrés en la sangre y en la orina para el seguimiento y El cáncer de reclutamiento Europa sangre, orina NCT02662621
Diagnóstico precoz de los tumores sólidos malignos (EXODIAG)
Aislamiento y caracterización de las vesículas extracelulares secretadas por el endometrio humano Reclutamiento Europa endometrial NCT02797834
Florida UID

Los primeros biomarcadores de la respuesta del tumor en alta dosis de radioterapia hypofractionated paquete de palabra 3: El cáncer de reclutamiento sangre Europa NCT02439008
respuesta inmune
Evaluación de la expresión de microARN en la sangre y la citología para detectar el esófago de Barrett y El cáncer de reclutamiento Estados Unidos Bilis NCT02464930
neoplasia asociada

citoprotectores de las actividades de sus células madre ( Baglio et al, 2012.; Yeo et al., 2013 ). Exosomes puri fi ed from human peripheral blood activated the HSP70/ Toll-like receptor (TLR) 4
exosomas derivados de MSC de la médula ósea eran protectores en modelos de lesión miocárdica pro-survival pathway in cardiac myocytes ( Vicencio et al., 2015 ). EVs released from endothelial
por isquemia / reperfusión ( Lai et al., 2010 ), Hipertensión pulmonar inducida por hipoxia ( Lee et al., progenitor cells stimulated angiogenesis in cultured endothelial cells via miR-126 and miR-296
2012 ), Y la lesión cerebral ( Doeppner et al, 2015.; Zhang et al., 2015 ). Estos exosomas igualmente transfer ( Deregibus et al., 2007 ), Promovido la angiogénesis en un modelo de isquemia de las
estimularon el crecimiento de neuritas en astrocitos en cultivo mediante transferencia miR-133b ( Xin extremidades posteriores ( Ranghino et al., 2012 ), Y protegido de la lesión renal por isquemia /
et al., 2012 ). EVs cordMSC derivado umbilicales humanos eran protectora en modelos de lesión reperfusión ( Cantaluppi et al., 2012 ). Los exosomas secretadas por la diferenciación de las células
renal aguda ( Bruno et al., 2009 ) Y el hígado neuronales estimulados diferenciación neuronal en las MSC humanas ( Takeda y Xu, 2015 ). Los
exosomas de embrionario CSF ​apoyado ampli fi cación de las células madre neurales cultivadas ( Feliciano,
fi fibrosis ( Li et al., 2013b ). exosomas MSC derivadas de inhibitedbreast crecimiento del cáncer a través Zhang, Nasrallah, Lisgo, y Bordey, 2014 ). exosomas suero que contiene miR-219 estimularon CNS
de VEGF abajo-regulación y la transferencia de miR-16 en ratones ( Lee et al., 2013 ). funcionalidades mielinización ( PUSIC y Kraig, 2014 ). exosomas neuronales secuestradas amiloide intracerebral β
Sin embargo, alterados de líneas celulares de cáncer ( Yang et al., 2015 ), Atenuados rechazo inmune
de tumor ( Kordelas et al., 2014 ), Y se informó igualmente un aumento del crecimiento tumoral como
resultado de exosomas derivados de MSC. autoinmunidad También, exosomas MSC derivadas de
islotes inducida en ratones NOD ( Rahman, Regn, Bashratyan, y Dai, 2014 ). péptido ( Yuyama et al., 2015 ). Infusión de exosomas neuronales en el cerebro disminuyó A β y los
depósitos de amiloide en un modelo de ratón de la enfermedad de Alzheimer. Estas fi hallazgos ponen
de relieve el papel de los exosomas neuronales en A β holgura, lo que sugiere que su regulación a la
EVs secretados por las células inmunes inducen la estimulación inmune o inhibición en condiciones baja podría estar relacionado con una β acumulación y, en última instancia, el desarrollo de la
diferentes. La capacidad de los vehículos eléctricos DC derivadas de presentar antígenos a las enfermedad.
systemhas inmunes sido explotada en la vacunación basada en EV contra el cáncer y la infección ( Viaud
et al., 2010 ). Una ventaja potencial de estas vacunas es que preferentemente inducen las respuestas de
tipo Th1 y la inmunidad mediada por células, que es clave para fi luchar contra las infecciones virales y 12. Biodistribución de exosomas sistémicamente entregados
bacterianas. EVs liberados por DCs pulsadas con toxoide de difteria respuestas inducidas de tipo Th1 en
receptores no tratados previamente ( Colino y pargo, 2006 ). Los exosomas que llevan antígenos de Después de la administración sistémica, la biodistribución de los vehículos eléctricos en Florida uye
micobacterias indujeron una reacción de tipo Th1 contra M. tuberculosis ( Cheng y Schorey, 2013 ). Por el la ef terapéutico fi cacia y la toxicidad ( György et al., 2015 ). Al igual que cualquier otro
contrario, las vacunas basadas en subunidades de proteínas inducidas preferentemente las respuestas nanotherapeutics, sin modificar fi exosomas ed entregados sistémicamente en animales acumulados
de tipo Th2 y la inmunidad mediada por anticuerpos. Los exosomas antígenos carryingmycobacterial preferentemente en hígado, riñón, y el bazo, y se eliminan rápidamente por excreción biliar, renal fi filtración,
superaron a las vacunas basadas en subunidades de proteínas para la inhibición del crecimiento de M. o fagocitosis en el sistema reticuloendotelial, respectivamente. concentraciones de exosoma
tuberculosis en el pulmón de ratón ( Cheng y Schorey, 2013 ). exógenos en los tejidos diana eran muy bajos. El destino de los vehículos eléctricos entregados en
vivo se evaluó mediante el etiquetado de biotinilación andmetabolic luciferasa, seguido de
bioluminiscencia y Florida tomografía de fluorescencia mediada en ratones ( Lai et al., 2014 ). EVs se
detectaron predominantemente en el bazo, hígado, pulmón y riñón 30 min después de la inyección iv.
DCs reguladoras que sobreexpresan citocinas inmunomoduladoras (IL-4, IL-10, factor de Una fase de distribución rápida de 20 min, probablemente re Florida eja redistribución rápida de los
crecimiento transformante β [ TGF β]) EVs secretados con actividad inmunosupresora en modelos de vehículos eléctricos hasta el hígado y el pulmón, fue seguido por un tiempo de distribución de fase de
artritis inducida por colágeno y la colitis inducida por medicamentos ( Bianco, Kim, Morelli, y Robbins, re Florida eja eliminación del cuerpo a través del hígado y el riñón. Otros estudios investigaron el
2007; Robbins & Morelli, 2014 ). En un modelo de trasplante de corazón, exosomas de las CD destino de iv inyecta exosomas derivado de melanoma marcadas con PKH67 o XenoLight DiR
inmaduras donantes aumentaron esplénica Foxp3 + células T reguladoras y el rechazo del injerto colorantes de membrana. exosomas marcadas con PKH67 se detectaron en el hígado, bazo, pulmón
tardío ( Peche et al., 2004 ). Los exosomas secretadas por células T activadas inducida por la muerte y médula ósea ( Peinado et al., 2012 ). exosomas marcadas con DiR XenoLight se encontraron en el
de las células parentales a través de la expresión de ligando de Fas ( Monleon et al., 2001 ). hígado, pulmón, bazo, riñón, cerebro, los intestinos y el tejido tumoral ( Ohno, Ishikawa, y Kuroda,
Exosomes released from interferon- α ( IFN- α)- 2013a; Ohno et al., 2013b ). Sin embargo, un significante fi Se informó de asociación no puede y
prolongado de exosomas inyectado intra-tumourally con tejido tumoral ( Smyth et al., 2015 ).
treated macrophages or liver sinusoidal cells delivered antiviral RNAs and proteins to hepatocytes
and reduced replication of hepatitis B virus in a hepatitis B model ( Li et al., 2013a ).

We recently reported that human adult cardiac-resident progenitor cells secreted EVs with
cardioprotective and proangiogenic activities. Intramyocardial injection of these EVs reduced scar and
improved cardiac function after myocardial infarction in rats ( Barile et al., 2014 ). Los exosomas atraviesan barreras biológicas complejas tales como la mucosa intestinal y la
barrera hematoencefálica. Una ruta de administración intranasal
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se aplicó a exosomal entrega a thebrain. EVs administrarse por vía intranasal cargados con la un modelo de rata de lesión de la médula espinal, neuronas exosomas derivados corticales embrionarias
curcumina, y agente anti-oxidante, cruzó la barrera hematoencefálica, localizada en las células cargadas con siRNA contra la proteína de la mota-como apoptosis que contiene un dominio de
microgliales en el cerebro, y inhibieron inmice encefalomielitis autoinmune ( Zhuang et al., 2011 ). Por reclutamiento de caspasas, una en Florida factor de inflamatoria que se regula positivamente después de
vía intranasal exosomas entregados loadedwith catalasa, una enzima antioxidante, se captado por la lesión de la médula espinal, derribado los niveles de proteína diana por 76% ( de Rivero Vaccari et al.,
las células microgliales en el cerebro y mediada efectos neuroprotectores en modelos de ratón de la 2015 ). Mientras que hasta un 90% ef siRNA loading fi deficiencia se informó en los vehículos eléctricos
enfermedad de Parkinson ( Haney et al., 2015 ). derivadas de monocitos ( Wahlgren et al., 2012 ), La duplicación de los experimentos realizados por un
grupo independiente sugiere que siRNA encapsulación puede ser debido en gran parte a no especificada fi
c formación de agregados como resultado de la interacción de cationes multivalentes, liberado de los
13. Carga de exosomas con moléculas de carga exógenos electrodos de metal en la cubeta de electroporación, independiente de la presencia de los vehículos
eléctricos ( Kooijmans et al., 2013 ). Estas fi hallazgos ilustran la variable ef fi ciencia de EV de carga con
Como portadores naturales de moléculas de señalización, exosomas ofrecen características siRNA por electroporación, y el potencial terapéutico de la transferencia exosomal siRNA.
atractivas para la entrega terapéutico, incluyendo biocompatibilidad, estabilidad en la circulación,
permeabilidad de la barrera biológica, baja inmunogenicidad, y baja toxicidad. La expresión de CD55 y
CD59 puede contribuir a la estabilidad EV en la sangre mediante la prevención de la lisis mediada por el
complemento ( Clayton et al., 2003 ). Al ser de tamaño nanométrico, exosomas pueden evadir la rápida La electroporación también puede usarse para cargar vehículos eléctricos con fármacos de
eliminación por el sistema de fagocitos mononucleares ( van den Boorn et al., 2011 ). molécula pequeña. Hasta un 20% ef encapsulación fi deficiencia se logró por electroporación
exosomas derivados de DC / mezclas de doxorrubicina ( Tian et al., 2014 ). Alternatively, synthetic
drugs can be bound non-speci fi cally to EVs. Mixing curcumin with exosomes improved the
EVs pueden ser loadedwith cargomolecules terapéuticos. estrategias de carga con moléculas bioavailability and anti-in fl ammatory ef fi cacy of this drug in a model of LPS-induced septic shock ( Sun
et al., 2010 ). Incubation ofmonocyte/macrophage-derived exosomes with catalase at room
exógenas pueden subdividirse en dos grupos principales: ex vivo extracelular de carga EV, y in vitro intracelular
de carga EV durante EV biogénesis ( György et al., 2015 ). técnicas de carga pasiva se han empleado temperature and permeabilization with soponin, freeze – thaw cycles, sonication, and extrusion
para loadEVswithmiRNA ( Ohno et al., 2013a, 2013b ), Pequeña horquilla de ARN ( Rechavi et al., resulted in high loading ef fi ciency, sustained delivery, protection of catalase from protease
2009 ), MRNA ( Deregibus et al., 2007; Mizrak et al, 2013.; Skog et al., 2008 ), y proteínas ( Bianco et degradation, and exosome-mediated neuroprotection in models of Parkinson disease ( Haney et al.,
al., 2007; Robbins & Morelli, 2014 ). Sin embargo, ex vivo carga de puri- 2015 ). A frequently applied in vitro intracellular strategy of EV loadingwith cargo molecules uses
engineered EV-producing cells, as discussed below. An alternate approach relies on the traf fi cking de
las proteínas ancladas a la membrana oligoméricos a los vehículos eléctricos. La proteína exógena
fi ed EVs con pequeñas moléculas de ARN perjudiquen las funcionalidades de estas moléculas ( Vader, se fusiona con dos dominios que median la agregación y la membrana de la localización, por
Kooijmans, Stremersch, y Raemdonck, 2014 ). EVs comparten varias propiedades físico-químicas con ejemplo, mediante la adición de un resto miristoil. Este enfoque se validó utilizando una proteína
liposomas. transferencia de ácido nucleico en liposomas implica la formación de complejos indicadora GFP ( Shen, Wu, Yang, y Gould, 2011 ). Interferencia de oligómero proteína formationwith
electrostática de los ácidos nucleicos cargados negativamente a través de los lípidos catiónicos, que función de la proteína en las células diana sigue siendo de potencial preocupación ( Marcus y
pueden causar toxicidad. La carga superficial negativa de EVs impide la formación de complejos de Leonard, 2013 ). Otra estrategia para la carga de vehículos eléctricos con ácidos nucleicos aprovecha
ácido nucleico electrostática. Para sortear este obstáculo, ARN interferente pequeño (siRNA) fue los mecanismos de empaquetamiento vírico. Durante la producción de virus adeno-asociado (AAV)
pre-complejado mediante liposomas catiónicos antes de la fusión con los vehículos eléctricos ( Wahlgren vectores, una fracción de los vectores se asoció con exosomas y superó convencionalmente puri fi ed
et al., 2012 ). En otro estudio, nanovesículas exosoma-como de supresores tolerizado células T AAV vectores en ef transducción fi ciencia ( Maguire et al., 2012 ). También, hepatitis A virus liberado
frommiR-150-de fi ratones cientes se incubaron con miR-150, y los nanovesículas adquirieron las por las células fue envuelto en membranas derivadas del huésped que se parecían a los exosomas y
propiedades inmunosupresoras observadas con nanovesículas fromwildtypemice ( Bryniarski et al., fue totalmente infeccioso ( Feng et al., 2013 ). Por lo tanto, los virus sin envoltura pueden asociar con
2013 ). Esto no studydid dirección de la ubicación precisa de la relación miRNAwith exógeno a las EVs para formar partículas híbridas virus-EV que combinan las ventajas respectivas de los vehículos
vesículas; sin embargo, thismiRNAwas probable situado a la superficie exterior de las vesículas. La eléctricos (baja inmunogenicidad, focalización) y virus (la expresión génica estable).
encapsulación de los ácidos nucleicos en el núcleo de las vesículas, imitando su ubicación natural,
puede ser preferible.

Los exosomas se pueden cargar con miRNA terapéutico imitan o antagonista usando varias
técnicas ( Xitong y Xiaorong, 2016 ): (I) cotransfección de células productoras con dos plásmidos, o
cotransducción con dos virus, uno que codifica el precursor de miARN, hsa-miARN, y el otro que Independientemente de la loadingmethod utilizado, la incorporación no deseada de las proteínas
codifica el péptido de fusión de orientación, o alternativamente un vector bicistrónico que contiene los derivadas de células no deseadas o ARN (por ejemplo, los genomas retrovirales) ( Gould, Booth, y
dos casetes de expresión; (Ii) La electroporación se puede utilizar para crear poros transitorios en Hildreth, 2003 ) En EVmay ocurrir. Se necesitan tecnologías novedosas que eliminan moléculas no
themembrane para facilitar la migración de los pequeños ARN a través de él. Este ef técnica logrado fi cientedeseadas a partir de células EV productoras o impiden su incorporación en las vesículas liberadas.
carga de exosomas withmiRNAs y desmontables de su expresión del gen diana ( Alvarez-Erviti et al.,
2011; Cooper et al, 2014.; Tian et al., 2014 ); (Iii) la transfección transitoria de miRNAs utilizando
reactivos de transfección disponibles comercialmente.
14. exosomas Targeted

El pro biodistribución fi les de EVs secretados naturalmente sin modi-


siRNA es una clase de los ARN de doble cadena que interfieren con la expresión de especi fi c fi cationes a su composición prohíben su administración sistémica. Sin embargo, EVs secretados por
geneswith secuencias de nucleótidos complementarias por causingmRNA avería. La excelente unos pocos selección de objetivos exhiben tipos de células. EVs DCderived son reclutados por las
especí secuencia fi ciudad de siRNAs reduce el riesgo de efectos fuera de objetivo. En contraste, células T activadas a través de interacciones entre ICAM-1 expresado asociado a la función
miRNAs no requieren completo la unión a sus secuencias de ARNm diana y actúan de forma ondc-EVs y linfocitos antígeno-1 (LFA-1) expresado en células T ( Nolte-'t Hoen et al., 2009 ).
sinérgica en múltiples genes diana. Hasta el 25% ef siRNA loading fi deficiencia se logró mediante la exosomas derivados de células B-son reclutados por los macrófagos hepáticos y esplénicos través
electroporación de exosoma / siRNAmixtures derivados de DC ( Alvarez-Erviti et al., 2011 ). Los de interacciones entre α 2,3-ligados ácidos siálicos expresan en células B exosomas y sialoadhesin
exosomas cargadas con siRNA contra BACE1, una proteína implicada en la patogénesis de la (CD169) expresado en los macrófagos ( Saunderson et al., 2014 ). EVs secretados por la mayoría de
enfermedad de Alzheimer, derribados mRNA de BACE1 en un 60% y la proteína BACE1 en un 62%, las células muestran tropismo limitada a una específica fi células de tipo C, sin embargo, y se
y la reducción de los efectos nocivos β- amiloide 1 - 42 proteína por 55% en la corteza cerebral de los requieren, por tanto, dirigidas a estrategias para EVs sistémicamente entregados ( Figura 2 ).
ratones. En
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ICAM-1 LFA-1

CD21 célula T
Ácido nucleico

gp350 de EBV
VSV-G
células B

-Molécula pequeña
fármaco fusión
celular

LAMP-2b
macrófagos
CD169 RVG
ácidos siálicos
Los Las balsas lipídicas
LAMP-2b receptor
dominio PDGFR TM nach

iRGD
GPI de anclaje GGGGS2
enlazador nanoanticuerpo GE11 neurona
EGFR anti-EGFR
EGFR
integrina αβ
célula

cancerosa

Figura 2. EVs bioingeniería para la entrega dirigida de fármacos. Ejemplos de EV de orientación a especí fi se muestran las células c receptores. Diana puede ser logrado por ingeniería las células parentales utilizando construcciones de fusión entre un ligando de dirección y una proteína transmembrana EV, tales como

LAMP-2b o PDGFR TMdomain. Orientación ligandsmay incluir naturalmente occurringmolecules, tales como gp350 de EBV (que se une selectivamente a las células B a través de la interacción con el marcador B linaje CD21), RVG (que se dirige a receptor nach sobre las neuronas), y residuos de ácido siálico (absorción

whichmediate por los macrófagos mediante la unión a CD169 ). ICAM-1 contribuye a la unión a través de la interacción con LFA-1 de células B. Ejemplos de péptidos de direccionamiento sintéticos presentados en la superficie EV incluyen GE11 (que se dirige a EGFR en las células tumorales) y iRGD (que objetivos

integrinas y neuropilins). Anti-EGCF-nanoanticuerpos ligados a GPI-anclajes a través de enlazadores GGGGS2 se han utilizado para orientar EGFR en las células tumorales. VSV-G facilita indiscriminadamente la fusión celular. EVs pueden transportar medicamentos de carga de molécula pequeña y / o ácidos nucleicos

(Abreviaturas: EBV, virus de Epstein-Barr; EGFR, epidérmico receptor del factor de crecimiento; GPI, glicosilfosfatidilinositol; ICAM-1, molécula de adhesión intercelular-1; iRGD, la internalización de arginina-glycineasparagine ; LAMP-2, la membrana lisosoma asociada a la proteína-2; LFA-1, asociado a la función de

linfocitos antígeno-1; nach, la acetilcolina nicotínico; PDGFR dominio TM, receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas, el dominio transmembrana; RVG, glicoproteína del virus de la rabia; VSV-G, de la estomatitis vesicular virus glicoproteína). molécula de adhesión intercelular-1; iRGD, la internalización de

arginina-glycineasparagine; LAMP-2, la membrana lisosoma asociada a la proteína-2; LFA-1, asociado a la función de linfocitos antígeno-1; Nach, nicotínico de acetilcolina; dominio PDGFR TM, receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas, el dominio transmembrana; RVG, glicoproteína del virus de la rabia;

VSV-G, de la estomatitis vesicular virus glicoproteína). molécula de adhesión intercelular-1; iRGD, la internalización de arginina-glycineasparagine; LAMP-2, la membrana lisosoma asociada a la proteína-2; LFA-1, asociado a la función de linfocitos antígeno-1; Nach, nicotínico de acetilcolina; dominio PDGFR TM, receptor del

factor de crecimiento derivado de plaquetas, el dominio transmembrana; RVG, glicoproteína del virus de la rabia; VSV-G, de la estomatitis vesicular virus glicoproteína).

Orientación de exosomas a un tipo de célula dado puede llevarse a cabo mediante la visualización Hammerschmidt, y Zeidler, 2011 ). Ejemplos de péptidos sintéticos dirigidos receptores conocidos
de un ligando en la superficie exterior de los exosomas mediante la inserción de la secuencia codificante incluyen péptido GE11, que se dirige a EGFR ( Li et al., 2005 ), Y iRGD (internalización de
del ligando en marco a las secuencias de codificación entre el péptido señal y N-terminal de themature arginina-glicina-asparagina) péptido, que se dirige a integrinas y neuropilins ( Pang et al, 2014.; Yu et
péptido de una proteína de transmembrana ( Alvarez-Erviti et al., 2011; Cooper et al., 2014 ). Para la al., 2013 ). exosomas GE11-dirigida se recogieron más ef fi cientemente de exosomas no orientados
focalización péptido corto, esto se puede conseguir por una reacción en cadena de la polimerasa de por injertos de tumor humano EGFR positivo en ratones ( Ohno et al., 2013a, 2013b ). Tanto dirigidos
ADN superpuestas de dos pasos (PCR), followedby el casete insertionof el marco de lectura fusedopen y no dirigidos exosomas acumulada en el hígado, sin embargo, lo que indica que la orientación no
(ORF) en un plásmido de expresión lentiviral bicistrónico, y la transducción de células productoras. Los impidió la entrega desviado. Los péptidos receptores targetingunknown sobre los tejidos destinados
vehículos eléctricos liberados llevarán el péptido ligando / homing en su superficie ( Xitong y Xiaorong, también han sido identificados fi ed ( Lee et al, 2015.; Thapa et al., 2008 ). Las tres proteínas
2016 ). Debido a ligandos biológicos fusionados con una de las proteínas de la membrana forman transmembrana que se han utilizado ampliamente en la orientación exosome son LAMP-2b,
moléculas grandes, sin embargo, la mala expresión o plegamiento de estas proteínas de fusión, o lactadherin, y receptores del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR). DC inmaduras
visualización incorrecta de la proteína de direccionamiento en la superficie exosome permanecer de ingeniería genética que expresa una construcción de fusión del péptido iRGD y LAMP-2b liberados
potencial preocupación. fragmentos de ligandos de núcleo (para receptores conocidos) o mensajeras EVs orientados iRGD. Tras la carga con doxorrubicina mediante electroporación, los vehículos
péptidos (por receptores desconocidos) son más pequeños que los ligandos naturales, y por lo tanto eléctricos orientados iRGD entregados doxorrubicina selectivamente a xenoinjertos de cáncer de
puede ser preferible para la presentación en superficie en exosomas. fragmentos de ligandos núcleo mama, reducen el crecimiento tumoral en ratones, y causaron menos toxicidad cardiaca inducida por
novedosos y péptidos mensajeras han sido descubiertos por la presentación en fagos ( Smith, 1985 ). la fármacos en comparación con los vehículos eléctricos no orientados ( Tian et al., 2014 ). Este último
se recogieron principalmente en el hígado y el bazo, y no reducir el crecimiento del tumor. Los
identi fi cación de péptidos homing que se unen a receptores desconocidos requiere en vivo biopanning ( Costantini
et al., 2012 ). Ejemplos de péptidos de origen natural mensajeras incluyen gp350 de EBV, que se dirige a exosomas liberados de las DC que expresan una construcción de fusión del péptido RVG y
las células B a través de interactionwith la CD21 B lineagemarker, y glicoproteína viral de la rabia LAMP-2B se detectaron especí fi camente en las neuronas, microglia, y oligodendrocitos en el cerebro
(RVG), que se dirige a los receptores de acetilcolina en las neuronas. El cotransfer de proteína funcional de ratón ( Alvarez-Erviti et al., 2011 ). el EF-
CD154 (ligando CD40), que activa las células inmunes a través del receptor CD40, en exosomas
gp350-positivo adaptados a explosiones B malignas de patientswith B leucemia inducida
inmunogenicidad explosión linfocítica crónica de células T autólogas reactivas al tumor ( Ruiss, Jochum,
Mocikat,
fi ciencia de exosomas orientados RVG estaba limitado por la escisión enzimática del péptido señal.
La introducción de un motivo de glucosilación en este péptido una mejor prestación exosome a
células de neuroblastoma en vivo ( Hung y Leonard, 2015 ).
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Cuando se inserta la secuencia codificante de un péptido de dirección en marco en-entre las miméticos pueden ayudar a evitar estas barreras ( van der Meel et al., 2014 ). vesículas lipídicas
secuencias codificantes del péptido señal y el dominio C1C2 de lactadherin, y el casete de fusión se sintéticas (liposomas) sharewith exosomas naturales una estructura de bicapa de fosfolípidos
expresa en las células usando un vector de transferencia de genes, los exosomas secretadas esférica aproximadamente 100 nm de diámetro, que puede servir como una estructura primitiva para
mostrarán el péptido dirigido en su superficie. células de ovario de hámster chino transfectadas con miméticos de exosoma ( Kooijmans, Vader, vanDommelen, van Solinge, y Schiffelers 2012 ). Los
construcciones de fusión de C1C2 e IL-2 o de granulocitos / monocitos factor estimulante de colonias liposomas se pueden cargar con componentes exosomal, para imitar de origen natural exosomas, y
(GM-CSF) exosomas liberados enriquecidas en las citoquinas recombinantes ( Delcayre et al., 2005 ) con moléculas terapéuticas incluyendo proteínas recombinantes, ácidos nucleicos, y fármacos
.Murine fi- sintéticos ( Malam, Loizidou, y Seifalian de 2009 ). Terapias basadas en liposomas y nanopartículas
han sido aprobados para aplicaciones clínicas ( Fenske y Cullis, 2008 ). los
células brosarcoma ingeniería genética para expresar una construcción de fusión de C1C2 y
ovoalbúmina de huevo de pollo (OVA) antígeno secretado exosome-obligado OVA y creció más lento
que las células tumorales que secretan OVA soluble en ratones, lo que indica que el antígeno composición lipídica de los liposomas pueden ser modulados.
exosome unida superó antígeno soluble en ef inmunoestimulador fi cacia ( Zeelenberg et al., 2008 ). Un La fosfatidilserina representa un buen componente candidato de miméticos de exosoma, ya que
estudio reciente comparó dos enfoques para asociar el antígeno OVA a EVs: por fusión con el contribuye a la estabilidad y la absorción de exosomas naturales, mientras que también regulan la
dominio C1C2 de lactadherin, que está expuesto en la superficie EV, o por fusión a retroviral proteína maduración de DC ( Chen, Doffek, Sugg, y Shilyansky, 2004 ). La adición de colesterol a las vesículas
de la cápside de la mordaza, que se incorpora partículas similares a virus insidemembrane-cerrado ( Sedlik de fosfatidilserina puro puede mejorar la fusión de cationes inducida ( Shavnin et al., 1988 ). La adición
et al., 2014 ). Ambas vacunas de ADN inducida por OVA-específicos fi c CD8 + las células T y de un glucosilceramida de cadena corta a liposomas compuestos de hidrogenado
anticuerpos IgG totales con ef comparable fi ciencia, y la reducción en vivo progresión de
OVAexpressing tumores en ratones. vacuna La OVA-C1C2-codificación, pero no la vacuna soja fosfatidilcolina, colesterol, y
Gag-OVA, preferentemente estimulado antígeno-específica fi células T CD4 + c. Para facilitar antígeno diestearilfosfatidiletanolamina-PEG2000 mejoró efectos de entrega doxorrubicina y anti-tumorales en
presentación cruzada, EGFR-2 humano, antígeno carcinoembrionario ( Hartman et al., 2011 ), ratones ( van Lummel et al., 2011 ). Curiosamente, los lípidos Puri fi ed a partir de nanopartículas
Próstata-específico fi antígeno c, o la fosfatasa ácida prostática ( Rountree et al., 2011 ) Se muestra en EV-como intestino derivados y reconstituido en liposomas confieren las actividades inhibidoras de NK
la superficie exosome por acoplamiento lactadherin. Los exosomas que muestran ya sea antígeno de células T de las nanopartículas originales a los liposomas ( Deng et al., 2013 ). Incorporación de
prostático crecimiento del cáncer de próstata inhibido. display Lactadherin mediada por receptor-2 de proteínas de membrana funcionales en liposomas Se ha informado ( Aimon et al., 2011; Erb,
la somatostatina, un G proteincoupled receptor, se utilizó en la superficie exosome para la detección Tangemann, Bohrmann, Muller, y Engel, 1997; Varnier et al., 2010 ). Sin embargo, los liposomas de
de drogas ( Estelles et al., 2007 ). carga con múltiples proteínas o altas cantidades de siRNAormiRNA sigue siendo un dif fi tarea de
culto ( Lakhal & Wood, 2011 ). En un estudio de prueba de concepto, liposomas recubiertos con un
número optimizado de los complejos MHC / péptido-I y un específico seleccionado aprobados por la
FDA fi gama c de ligandos para la adhesión, activación y supervivencia inducida por la activación y la
expansión de antigenspeci funcional fi células T c in vitro y en vivo ( De La Peña et al., 2009 ).
Alternativamente, las superficies EV se pueden recubrir con fragmentos de anticuerpo que
reconoce antígenos expresados ​en células diana ( Pasquetto, Vecchia, Covini, Digilio, y Scotti, 2011 ).
nanovesículas exosoma-como recubiertas con antígeno-específica fi cadenas c ligeras de anticuerpo
dirigidas a las células T efectoras entregados con éxito miRNA-150 inmunosupresores de las células T
CD8 + supresoras a las células T efectoras, y se indujeron antígeno-específica fi inhibición c de la 16. Las respuestas inmunes a los exosomas
sensibilidad de contacto ( Bryniarski et al., 2013 ).
A diferencia de vectores de transferencia génica virales o liposomas ( Seow & Wood, 2009 ),
Más recientemente, las células EV productoras se transfectaron con vectores que codifican Exosomas autólogas muestran inmunogenicidad despreciable. iv inyecciones repetidas de exosomas
nanoanticuerpos anti-EGFR fusionados a glicosilfosfatidilinositol (GPI) péptidos señal de anclaje a las autólogos de células dendríticas inmaduras no desencadenan signi fi respuestas inmunes de
células diana tumorales EGFR que expresa ( Kooijmans et al., 2016 ). Visualización de los nanocuerpos consideración en ratones ( Alvarez-Erviti et al., 2011 ). Sin embargo, las aplicaciones terapéuticas para
unidas a GPI sobre EVs mucho mayor unión a células tumorales que dependen de la densidad de los eventos clínicos agudos (por ejemplo, infarto de miocardio) requeriría preparaciones de exosoma
EGFR. GPIanchoring puede proporcionar una valiosa estrategia para la visualización EV de una listos para el uso en el almacenamiento. preparaciones de exosoma congelados se pueden
variedad de proteínas, incluyendo anticuerpos, proteínas indicadoras, y moléculas de señalización. almacenar durante largos períodos de tiempo sin pérdidas importantes en la actividad funcional.
preparaciones de exosoma almacenados se derivan más fácilmente a partir de células de donantes
alogénicos. Sin embargo, la creación de bancos de exosomas autólogas, en analogía con los bancos
Aparte de péptidos dirigidos, péptidos que faciliten indiscriminadamente la captación de los vehículos de células madre autólogas, es teóricamente posible, aunque esta opción sería poco práctico, caro y
eléctricos, tales como virus de la proteína-G de la estomatitis vesicular (VSV-G), se pueden mostrar en los posiblemente innecesaria. Los exosomas de células donantes alogénicos ofrecen varias ventajas
vehículos eléctricos. VSV-G se presentan EVs logra entrega de la carga mejorada y respuestas inmunes potenciales sobre los autólogas. Los exosomas derivados de células de donantes jóvenes y sanos
terapéuticas para exosomal vacunas ( Temchura et al., 2008 ). podrían mostrar las actividades funcionales superiores en comparación con los exosomas fromold o
enfermos, aunque esto aún no se ha demostrado. Zhuo et al., 2010 ). Otra ventaja potencial de los
exosomas alogénicas es que un gran número de lotes del producto medicinal puede derivarse de las
15. Arti fi miméticos exosome ciales células de un único donante. Como resultado, muchos pacientes pueden ser tratados con el mismo
producto, lo que facilita la evaluación de muchos parámetros, por ejemplo, la variabilidad
Todas las estrategias descritas anteriormente relé en vehículos eléctricos secretadas de forma interindividual, efectos de dosificación, seguridad, y ef fi cacy.Whether exosomas alogénicos se
natural sin o con modificaciones limitadas fi cationes a su composición. Sin embargo, exosomas pueden utilizar con seguridad en humanos es una pregunta sin respuesta hasta ahora crucial.
exhibir estructuras complejas que son dif fi culto para caracterizar farmacéuticamente. Su composición
varía con el tipo celular productora y su estado fisiológico, así como protocolos withmanufacturing. el
Puri fi-
cación de las poblaciones individuales de los vehículos eléctricos es un procedimiento complejo. Mientras

poblaciones puras de los exosomas se pueden aislar a partir de líneas celulares de exosoma secretoras,

estos exosomas, a diferencia de los liberados a partir de células primarias autólogas, tienen potencial

inmunogénico y oncogénico. Por otra parte, los vehículos eléctricos desempeñan papeles multifacéticos en la exosomas Naturalmente secretadas expresan moléculas de reconocimiento inmunes incluyendo
salud y la enfermedad, incluyendo la transferencia intercelular de patógenos y proteínas asociadas a la funcional MHC-I y / o MHC-II en función de su origen celular ( Caby, Lankar, Vincendeau-Scherrer,
enfermedad, que están lejos de ser entendido ( Camussi et al., 2011; Meckes y Raab-Traub, 2011; Saa et al., Raposo, y Bonnerot, 2005; Lynch et al., 2009 ). La evidencia experimental sugiere que alogénico
2014 ). Estas características representmajor barreras para la traducción de los exosomas secretadas de forma exosomesmay ser-hypo inmunogénica andwell tolerado inmany circunstancias. Una sola
natural a la clínica. exosome ingeniería administración sistémica de exosomas de BALB / c
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Tabla 2
Planificada o los estudios clínicos terapéuticos en curso.

Estudiar Estado Tema Fase Región Fuente de exosomas Ruta de ClinicalTrials.gov


administración identi fi er

Estudio que investiga la capacidad de la planta de exosomas para entregar Desconocido Cáncer yo Estados Unidos exosomas vegetales Suplemento NCT01294072
curcumina con el tejido normal y cáncer de colon (cúrcuma) dietético
Efecto de plasma derivado exosomas en la cicatrización de heridas cutáneas Todavía no Úlcera este de exosomas sanguíneos La aplicación NCT02565264
reclutar Asia autólogos local (diario)

Efecto de microvesículas y exosomas terapia en β- masa celular en Tipo Inscribirse con La diabetes II - III África umbilical de sangre de cordón Infusión NCT02138331
Me diabetes mellitus (DM1) invitación MSCmicrovesicles derivados intravenosa
capacidad de la planta de exosomas comestible para prevenir la mucositis oral asociada Reclutamiento Cáncer yo Estados Unidos exosomas vegetales (uva) Suplemento NCT01668849
con el tratamiento de quimiorradiación de cáncer de cabeza y cuello dietético
Trial de una vacunación con tumor dendríticas cargadas con antígeno Desconocido Cáncer II derivado de células dendríticas Europa La vacunación (por NCT01159288
exosomas derivados de células (CSET 1437) exosomas vía oral)

DC donantes no pudo activar esplénica países en desarrollo en recipientmice B10 ( Morelli et al., 2004 ). cicatrización de la herida. Otro estudio evalúa microvesículas y exosomas en la terapia β- la masa de
Un estudio reciente investigó la inmunogenicidad de EVs secretados por xenogénico (humano) o células células en el tipo 1 diabetes mellitus.
derivadas de cardioesfera alogénicos. Repetida inyecciones subcutáneas de EVs derivados de las
células humanas inducidas humoral progresiva y las respuestas inmunes mediadas por células, como se 18. Conclusión
esperaba, aunque a niveles más bajos en comparación con inyecciones de sus células parentales ( Mirotsou,
Tremmel, et al., 2015 ). Vehículos eléctricos alogénicos no indujeron signi fi cativos respuestas inmunes Como mediadores de la comunicación intercelular, los vehículos eléctricos pueden ser aprovechadas
después de la administración repetida. Estas tanto para fines diagnósticos y terapéuticos. Mientras exosomas secretadas de forma natural pueden mediar

bene fi efectos ciales en ciertas condiciones de la enfermedad, exosomas dirigidos loadedwith


fi hallazgos sugieren que los vehículos eléctricos alogénicos pueden ser adecuados para aplicaciones therapeuticmoleculesmay optimizar zos
clínicas. Los estudios futuros tendrán que abordar no sólo la respuesta inmune a los exosomas de donantes fi cacia mientras que también reduce la entrega desviado. Las moléculas terapéuticas pueden incluir
alogénicos, sino también en riesgos de Florida amación, la inducción de la autoinmunidad y la transferencia de moléculas biológicas que son dif fi culto para entregar intracelularmente sin el uso de un portador, tal
patógenos, incluyendo los retrovirus endógenos ( Gould et al., 2003 ). como los genes miARN, siRNA y proteínas recombinantes, así como fármacos de molécula pequeña
sintéticos. protocolos de aislamiento EV y caracterización se están moviendo hacia aplicaciones
clínicas ( Xu, Greening, Zhu, Takahashi, y Simpson, 2016 ). EVs derivados de DC han demostrado ser
17. La experiencia en ensayos clínicos seguro en fase I / II de ensayos clínicos en pacientes con cáncer. Sin embargo, la estructura
compleja y la composición variable y actividad funcional de exosomas secretadas de forma natural
La seguridad de anti-tumor basado-EV y vacunas anti-bacterianas fue probado en varios ensayos pueden limitar su aceptabilidad farmacéutica. Una posible alternativa es el desarrollo de
clínicos de fase-I y un ensayo de fase II. En un ensayo de fase-I, las DC de los pacientes con exosomemimetics fabricado con grado clínico, Puri fi ed lípidos sintéticos y proteínas recombinantes, y
melanoma avanzado se aislaron y se pulsaron con antígeno tumoral. Los exosomas que presentan el ensamblados usando procedimientos controlables. Los componentes seleccionados de exosomas
antígeno tumoral eran puri fi ed y se inyecta por vía intradérmica y por vía subcutánea a thepatients. naturales se pueden incorporar en liposomas o nanopartículas para mejorar la estabilidad,
administrationwas exosome toleradas durante un máximo de 21 meses. Un leve en Florida se observó inmunogenicidad, la orientación, y la absorción. Sin embargo, los componentes precisos de
reacción inflamatoria en el sitio de inyección en algunos pacientes. Uno de los 15 pacientes mostraron exosomas naturales que son críticos para la entrega terapéutico no se han establecido claramente
una especificidad fi cmelanoma antígeno de células T de respuesta y una reducción en el tamaño del todavía.
tumor ( Escudier et al., 2005 ). Otro ensayo de fase-I involucrado la administración de vehículos
eléctricos de DCs autólogas pulsadas con el gen de antígeno de melanoma (MAGE) péptidos a
pacientes portadores de cáncer de pulmón de células no pequeñas. EVs administrados semanalmente
durante 4 semanas fueron bien tolerados. Un tercio de los pacientes mostraron MAGEspeci fi respuestas
c de células T ( Morse et al., 2005 ). A distintos fase-I EVs ensayo evaluó aisladas a partir de ascitis
Estafa Florida icto de interés
autólogo Florida uid en pacientes portadores de cáncer colo-rectal, con o sin tratamiento con GM-CSF.
leve en Florida se observó inflamación en el sitio de inyección. terapia EV / GM-CSF El ochenta por
Autores declaran que no son sin aire Florida ictos de interés. En nombre de mi co-autor,
ciento de los pacientes tratados combinados mostraron respuestas de linfocitos T citotóxicos para el
Giuseppe Vassalli, declaro que los autores no tienen ningún aire real o potencial Florida icto de
péptido del cáncer de colon CAP-1, con una estabilización clínica y oneminor respuesta ( Dai et al.,
interés, incluyendo cualquier fi-
2008 ). Otro ensayo de fase-I mostró que las vacunas de vesículas de membrana externa del serogrupo
financiera, relaciones personales o de otro tipo con personas u organizaciones dentro de los tres
Bmeningococcal eran segura y efectiva ( Sandbu et al., 2007 ). Un reciente estudio de fase II evaluó IFN γ-
años de iniciar el trabajo que pudiera manera inapropiada en Florida influencia, o ser percibida en el Florida
exosomas derivados de DC cargadas withMHC I / II restringidas antígenos del cáncer como la
influencia, el diseño del estudio o la interpretación de datos.
inmunoterapia de mantenimiento después de la quimioterapia de inducción en pacientes que portan
cáncer inoperable no pequeñas de pulmón de células sin la progresión del tumor ( Besse et al., 2015 ).
El criterio de valoración principal fue observar al menos el 50% de los pacientes con la supervivencia
Expresiones de gratitud
libre de progresión a los 4 meses después de la interrupción de la quimioterapia. Veintidós pacientes
recibieron la terapia. Un paciente exhibió una hepatotoxicidad grado-III. Siete pacientes (32%) de
GV y LB son los destinatarios de una beca de investigación por parte de la Na- suiza
estabilización experimentado de más de 4 meses; Por lo tanto, no se alcanzó el punto final primario.
Fundación de Ciencias cional (31003A_169306), Fundación Suiza del corazón n ° 4433; Fundación
Estos resultados sugieren que las vacunas de exosoma derivados de DC pueden ser seguros y pueden
Cecilia-Augusta, Lugano (Suiza); SHK Stiftung für Fundación Herz und Kreislaufkrankheiten.
promover las respuestas de células T y NK en pacientes ( Pitt et al., 2016 ). Planificados o en curso
estudios terapéuticos se enumeran en Tabla 2 . Varios estudios se centran en el cáncer. Un estudio se
ocupa de los efectos de los exosomas derivados de plasma sobre cutánea
referencias

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Alexander, M., Hu, R., Runtsch, MC, Kagele, DA, Mosbruger, TL, Tolmachova, T., ...
O ' Connell, RM (2015). microRNAs exosoma-entregado modulan la en Florida la respuesta inflamatoria a la
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