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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

INGENIERÍA EN SISTEMAS AMBIENTALES

PRÁCTICA 12

“DETERMINACIÓN DE TOXICIDAD EN
MUESTRAS DE AGUA, USANDO MICROTEST
(MICRODETERMINACIÓN)”
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

EQUIPO NO. 3 Grupo: 5AM1

 Aparicio Almazán Brenda Guadalupe


 Vázquez Jiménez Mabel Jirivett
EQUIPO 1:

 García Hernández Katia Mariela


 Miranda Onofre Viviana Aislinn

PROFESOR(ES):
 M. en C. Gisela Boll Argüello
 M. en C. Claudia Paulina Dotor Vázquez
 Dra. Jane Castillo Vera

FECHA DE REALIZACIÓN: 20 de Marzo al 03|| de Abril del 2018

FECHA DE ENTREGA: 24 de Mayo del 2018


OBJETIVOS.

1. Determinar la toxicidad de un cuerpo de agua midiendo la actividad deshidrogenasa de


un microorganismo de prueba.
2. Comparar el efecto tóxico de diferentes soluciones problema.

RESULTADOS.

En esta práctica se tomaron muestras de agua y cepa de Bacillus cereus.

A continuación se muestran las lecturas de absorbancia obtenidas por los equipos

Tabla 1 Lecturas de Absorbancia


Serie A Serie B Serie C Serie D
Equipo Tubo 1 Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo 1 Tubo 2 Tubo Tubo Tubo 2 Tubo
2 3 1 2 3 3 1 3
1 0.0005 0.006 0.002 0.11 0.049 0.073 0.052 0.053 0.065 0.056 0.043 0.078
2 0.012 0.003 0.009 0.032 0.014 0.034 0.061 0.042 0.04 0.088 0.104 0.126
3 0.01 0.037 0.007 0.108 0.058 0.033 0.09 0.07 0.056 0.028 0.059 0.12
4 0.006 0.031 0.004 0.126 0.073 0.072 0.046 0.093 0.07 0.046 0.022 0.019
5 0.0555 0.051 0.059 0.09 0.084 0.087 0.0118 0.0117 0.0113 0.066 0.0121 0.074
6 0.006 0.006 0.006 0.125 0.11 0.086 0.09 0.123 0.067 0.116 0.116 0.085
7 0.007 0.003 0.008 0.121 0.112 0.082 0.105 0.111 0.109 0.112 0.115 0.105
8 0.005 0.008 0.007 0.029 0.026 0.023 0.136 0.071 0.06 0.088 0.089 0.088
9 0.008 0.003 0.005 0.001 0.002 0.006 0.006 0.007 0.026 0.026 0.01 0.022
10 0.007 0.006 0.008 0.106 0.122 0.091 0.174 0.181 0.063 0.107 0.203 0.18

Con la siguiente ecuacion se obtuvo el porcentaje de inhibicion para la solucion problema


proporcionada a cada equipo

Ecuación:

(𝐵 − 𝐴) − (𝐶 − 𝐴)
%𝐼 = 𝑥100
(𝐵 − 𝐴)

Donde:

I= Inhibición de la actividad de l deshidrogenasa.

A= Absorbancia promedio del testigo de reactivos.

B=Absorbancia promedio del testigo de células.

C= Absorbancia promedio de la muestra problema.

Equipo 1 y 3 Toxicidad en muestras de agua usando microtest Página 1


Ejemplo:

(0.061 − .0028333) − (0.05666667 − 0.002833)


%𝐼 = 𝑥100
(0.061 − 0.002833)

%𝑰 = 𝟕. 𝟒𝟒𝟗𝟖𝟓𝟔𝟕%

Fig.1 Escala de toxicidades.

Tabla 2 Determinación de la Toxicidad de las Muestras Problema

Promedio de ABS 480


% de
Estación Equipo Serie A Serie B Serie C Interpretación del resultado
inhibición
0.0566666 Toxico inhibitorio. Moderadamente
1 0.0028333 0.061 7.4498567
1 7 toxico
0.0933333 Toxico inhibitorio .Moderadamente
6 0.006 0.1175 21.6741405
3 toxico
0.0476666 Toxico estimulante. Altamente
2 0.006 0.02666667 -101.612903
7 estimulante.
2
0.1083333
7 0.006 0.105 -3.36700337 Toxico estimulante. No toxico
3
Toxico estimulante. Altamente
3 0.0235 0.0455 0.072 -120.454545
estimulante.
3
Toxico estimulante. Altamente
8 0.006666 0.026 0.089 -325.862069
estimulante
0.0696666 Toxico inhibitorio .Moderadamente
4 0.013666 0.0903333 26.9565217
4 7 toxico
9 0.005333 0.003 0.0065 150 Toxico inhibitorio. Altamente Toxico
5 0.05325 0.0855 0.01175 228.682171 Toxico inhibitorio. Altamente Toxico
5 Toxico estimulante. Altamente
10 0.007 0.10633333 0.1775 -71.6442953
estimulamente

Equipo 1 y 3 Toxicidad en muestras de agua usando microtest Página 2


Fig.2 Grafica % Inhibición vs Estación, de acuerdo a la determinación de la toxicidad de las muestras problema.

Tabla 3 Determinación de la Toxicidad de las Soluciones Problema

Promedio de ABS 480


Solución %
Equipo Serie A Serie B Serie D Interpretación del resultado
problema de inhibición
0.002833
1 0.061 0.059 3.43839542 Toxico inhibitorio. No toxico
Glucosa 3
2 0.006 0.0266666 0.115 -427.419355 Toxico estimulante. Toxico
3 0.0235 0.0455 0.0435 9.09090909 Toxico inhibitorio. No toxico
0.013666
Extracto 4 0.0903333 0.029 80 Toxico inhibitorio. Toxico
6
de suelo
0.006666
8 0.026 0.088333 -322.413793 Toxico estimulante. Toxico
6
9 0.005333 0.003 0.024 900 Toxico inhibitorio. Toxico
Acetato de 5 0.05325 0.0855 0.0507 107.906977 Toxico inhibitorio. Toxico
plomo 6 0.006 0.1175 0.116 1.34529148 Toxico inhibitorio. No toxico
Toxico estimulante. Moderadamente
Aguas 7 0.006 0.105 0.110666 -5.72390572
toxico
residuales
10 0.007 0.1063333 0.1915 -85.738255 Toxico estimulante. Toxico

Equipo 1 y 3 Toxicidad en muestras de agua usando microtest Página 3


1000

800
% Inhibición vs Equipo
600
% de Inhibición

400

200

0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
-200

-400

-600
Equipo

Fig.3 Grafica %Inhibición vs Estación, de acuerdo a la determinación de la toxicidad de soluciones problema .

DISCUSIÓN.

Esta práctica tuvo como objetivo determinar la toxicidad de un cuerpo de agua usando la cepa
Bacillus Cereus esta es una bacteria genéticamente diversa que se encuentra comúnmente en
el ambiente y se comparó el efecto toxico de diferentes soluciones problema ( glucosa, extracto
de suelo, acetato de plomo y aguas residuales), para ella se utilizaron 4 series A (testigo de
reactivos), B(testigo de células), C (muestra problema) y D (Soluciones problema), a las cuales
se les tomo lectura de absorbancia ya que el sustrato cuando pasa a su forma reducida produce
color el cual es medible por espectrofotómetro a 480nm como se observa en la Tabla1.

Bacillus cereus es productora de toxinas que pueden causar dos tipos de enfermedades: una
caracterizada por diarrea y la otra, denominada toxina emética, por causar náuseas y vómitos.
Es por ello que es de gran interés diagnóstico, es anaerobia facultativa y utiliza el la enzima
deshidrogenasa para reducir el NAD a NADH y llevar a cabo su actividad respiratoria, por otro
lado, cuando existe presencia de Cloruro de Trifenil Tetrazolio (TTC) este actúa como inhibidor
competitivo del NAD, reduciendo así hasta TPF, dando un color rojo, que indica la estimulación
respiratoria del TTC a TPF gracias a la Deshidrogenasa.

En las estaciones con un porcentaje de inhicion negativo podemos decir que el TTC no inhibió
completamente la reduccion de NAD a NADH, por el contrario, en las estaciones que se obtuvo

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un porciento de inhibicion, positivo podemos decir que existió un grado de competencia entre el
NAD y el TTC por reducirse hasta sus compuestos NADH y TPF respectivamente, podemos decir
que los valores negativos tienen un efecto toxico ligeramente inhibitorio o incluso estimulante,
mientras que los valores positivos pueden ser desde no toxicos (0-5%) hasta ligeramente toxico
(5-50%) o toxico (50-100%) para la respiración de Baccillus cereus.

En la tabla 2 se observan que el mayor porcentaje de toxicidad se encuentra en la estación 5 con


un valor del 228% y el menor porcentaje de toxicidad se observa en la estación 8 con 325% es
decir que los compuestos que ahí se encuentran sirven como estimulante para la actividad
deshidrogenasa de los microrganismos presentes en el cuerpo de agua en este caso Bacillus
Cereus. En las estaciones 1,6 y 4 se observa una toxicidad moderada, en la estación 7 se
observa un efecto no tóxico, en las estaciones 9 y 5 se observa un efecto altamente toxico esto
se debe a que la actividad de la deshidrogenasa de Bacillus cereus es estimulador de la toxicidad
de un cuerpo de agua recordemos que las estaciones 9 y 5 eran estaciones con espacio abierto
donde se practica la agricultura y existe la posibilidad del uso de plaguicidas, estas características
son factores que afectan el cuerpo de agua que pasa por estas estaciones. La estación 3 es
donde se encontraba la cascada más grande, donde se unen el afluente del río con la pequeña
laguna que forma la caída de la cascada estos factores deberían influir en una mayor toxicidad
del cuerpo de agua sin embrago encontramos que fueron estimulantes para la actividad
deshidrogenasa.

En la tabla 3 se observa el efecto de algunas soluciones problema utilizadas, el acetato de plomo


se considera el mayor inhibidor de la actividad deshidrogenasa con el 107.9% mientras que la
glucosa es la solución que estimula en mayor porcentaje esta actividad con 427.41% y es lógico
ya que B. cereus es capaz de utilizar glucosa, fructuosa y trehalosa para desarrollarse. La
mayoría de las cepas hidroliza activamente el almidón, la caseína y la gelatina.

CONCLUSIÓNES.

 El Cloruro de Trifenil Tetrazolio (TTC) utiliza la enzima deshidrogenasa para reducirse a


APF.
 Bacillus cereus utiliza el NAD para su actividad respiratoria a través de su reducción de
NAD a NADH, a través de la enzima deshidrogenasa.

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CUESTIONARIO

1. ¿En las normas Mexicanas, qué organismos se utilizan para determinar toxicidad?

Organismo Norma Mexicana


Daphnia magna straus (Crustacea-cladocera).
 NORMA MEXICANA NMX-AA-087-1995-
Artemia franciscana kellogg (Crustacea – SCFI
anostraca)  NMX-AA-110-1995-SCFI
Photobacterium phosphoreum
Escherichia coli
Bacillis sp, bacillus cereus

2. Discuta la validez de extrapolar los resultados de toxicidad obtenidos con otros grupos
taxonómicos.

Se considera viable la extrapolación de resultados en cuanto a toxicidad con otros grupos


taxonómicos ya que en la mayoría de los métodos se aplican los mismos principios generales
siempre y cuando los grupos tengan comportamientos similares entre y la calidad de los datos
disponibles así como la duración probable de la exposición.

Se debe contar con un factor e evaluación para extrapolar a la "vida real" los datos obtenidos a
partir de los experimentos de laboratorio. Si se dispone de suficientes datos de toxicidad, se
pueden usar diversos métodos de extrapolación y debe haber normas de calidad ambiental.

También se debe hacer un cálculo de los riesgos y las medidas de reducción de riesgos.

El objetivo de los factores de evaluación es permitir la extrapolación de los datos experimentales


de las pruebas de toxicidad a los efectos del ecosistema. Se supone que:

A pesar de que la sensibilidad del ecosistema es una característica compleja, puede estar
cercana a la sensibilidad de las especies más sensibles (en el caso de descargas localizadas,
se deben tener en cuenta las especies sensibles que sean específicas del lugar).

La protección de la estructura de la comunidad (por ejemplo, lista de especies, diversidad, clase


por tamaño y edad) garantiza la protección de la función del ecosistema (por ejemplo, fijación y
transferencia de energía, productividad, resistencia a perturbaciones, reciclaje de nutrientes).

Al determinar en el laboratorio la especie más sensible a los efectos tóxicos de una sustancia, la
extrapolación posterior puede basarse en los datos sobre dicha especie.

El funcionamiento de cualquier ecosistema en el que exista esa especie, estará protegido


siempre y cuando no se altere la estructura ecológica. La hipótesis de trabajo, aunque arbitraria,
es que la protección de la especie más sensible con un límite de confianza de 95% protegerá la
estructura del ecosistema y, en consecuencia, su función.

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Al establecer los factores de evaluación, hay que tomar en cuenta varias incertidumbres que son
inherentes al hecho de extrapolar datos de laboratorio de una sola especie a ecosistemas con
múltiples especies. Estas incertidumbres se pueden resumir como sigue:

Variaciones entre especies

Extrapolación de toxicidad aguda a toxicidad crónica

Extrapolación de datos de laboratorio a niveles seguros en el terreno

Métodos de prueba

Bibliografía

 Normas Oficiales Mexicanas NOM-AA-87-1995-SCFI1 Fuente: SCFI NORMA MEXICANA NMX-


AA-087-1995-SCFI http://legismex.mty.itesm.mx/normas/aa/aa087.pdf
 Campbell R. 1987. Ecología microbiana .Limusa, México
 Atlas, R.M. y Bartha R. 1981. Microbial Ecology. Fundamentals and Applications. Adison
Wesley, Massachusetts

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