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Universidad Autónoma de San Luis

Potosí.

Facultad de ingeniería.

Carrera: Ing. Agroindustrial

Laboratorio de biotecnología

Práctica 1: Mutagénesis por radiación


ultravioleta.

M.C. Garibay Flores Cecilia Ylliana

Victor Alvarado Alonso


Jacob Macías Valadez
Luis Fernando Rojas Villegas

Fecha: 19/09/2018
REPORTE DE LABORATORIO
NOMBRE DE LA PRÁCTICA: MUTAGÉNESIS
NOMBRE ALUMNO: VICTOR NOMBRE ALUMNO: LUIS
ALAVARADO ALONSO FERNANDO ROJAS VILLEGAS
NOMBRE ALUMNO: JACOB MACIAS
VALADÉZ
LABORATORIO: BIOTECNOLOGÍA FECHA: 19/09/2018

Introducción:
Una de las terminologías antiguas sobre la mutagenesis se refiere a “la definición
que dio De Vries (1901) de la mutación era la de cualquier cambio heredable en el
material hereditario que no se puede explicar mediante segregación o
recombinación.” (Mcclintock, Boca De Dragón, & Muller, 1953, p. 1)1, en
comparación con una nueva terminología dada “manipulation of genes by inducing
random or specific mutations.” (Lázaro, 2015)2 ,con ello se puede decir que la
mutagénesis se refiere a un cambio en el ADN por una manipulación provocada o
espontánea y esta afecta a las colonias de forma heredable.
Con ello entramos a la rama que se divide en dos, “Mutación espontánea: se
produce de forma natural o normal en los individuos.Mutación inducida: se produce
como consecuencia de la exposición a agentes mutagénicos químicos o físicos.”
(Mcclintock et al., 1953)1, en lo que la práctica se basa en una mutagénesis inducida
por radiación ultravioleta, la cual ayuda a crear colonias modificadas a placer del ser
humano, y que estas mismas pueden ser utilizadas en la industria para procesos y
no esperar a que estas mutaciones se den de forma específica.
“La radiación UV tiene un efecto letal y mutagénico, que depende de su longitud de
onda.” (Iáñez,1998)3, con esto dependemos de la longitud de onda usada y el
tiempo en el que se tiene expuesto la colonia a la radiación ultravioleta, con esto
dependemos de la longitud de onda usada y el tiempo en el que se tiene expuesto
la colonia a la radiación ultravioleta,
El cambio realizado por la lámpara ultravioleta es con longitudes de onda constantes
e intensidades altas para dar un cambio mutagénico acelerado.
El proceso que se usara está basado en una metodología aplicada en varias
investigaciones, consiste en realizar el medio de cultivo en agar nutritivo, dejar
reposar el agar durante 24 horas y comenzar el sembrado del cultivo que en esta
práctica será E.coli, después dejaremos que crezca el cultivo y de ahí se tomara
una muestra para cada caja en la que se medirán los tiempos a la exposición a la
radiación ultravioleta a una intensidad baja que es con la que se cuenta en el
laboratorio, se volverán a incubar por 24 horas y se registraran los datos obtenidos,
demostrando si la práctica cumple con lo expuesto por los autores, que la radiación
ultravioleta genera mutaciones en la bacteria.
Los mismos autores expresan que las mutaciones son útiles en la práctica para no
crear una nueva variedad y que no afecte al ambiente en el que se presentan,
además de evitar una extinción de especie por crear otras variedades.
Hipótesis:
Si el tiempo cambia entonces la bacteria E.coli presenta mayor numero e
mutaciones y muertes porque la radiación a la que se encuentra expuesta genera
cambios en el ADN.
Diagrama de flujo:

Esterelizar a 121°C
Aforar a 250mL
Colocar 5.75Grm por 15 minutos a
Preparación del con agua a 60° C y Llenar las cajas
de agar en un 1.5lb de presión
medio de cultivo revolver por 8 petri con el agar
matraz Erlenmeyer junto con las cajas
minutos
a esterelizar

Esperar la Se coloco a
solidificación y Sembrar en la Se sembraron 5 10cm de la base
meter al caja de cultivo y Realizar la cajas de petri la lampara e luz
refrigerador colocarlo por 37 tinción de Gram apartir de la ultravioleta.
cubiertas con minutos. colonia principal En los tiempos:
papel aluminio 0, 3, 9, 15, 30.
Resultados:
Preparación del Agar:
1000ml |23grms agar|/|250ml| = 5.75 grms de agar

Caja sin exposición a los rayos ultravioleta

Caja con 3 minutos de exposición a los rayos


ultravioleta

Caja con 9 minutos de exposición a los rayos


ultravioleta
Caja con 15 minutos de exposición a los rayos
ultravioleta

Caja con 30 minutos de exposición a los rayos


ultravioleta

Todas las cajas, siendo la primera el testigo donde se tomó la muestra y la


segunda siendo el tiempo 0.
Observaciones:
Al momento de hacer la siembra, el cultivo se contamino. Al desechar las cajas Petri
se mezclaron con las cajas Petri esterilización lo que provoco que estas se
contaminaron, se recuperó de una caja una pequeña muestra de cultivo E.coli sin
contaminar.

Con la caja recupera se tomaron muestras para todos los equipos y así realizar la
práctica.

Se debe tomar más precauciones al momento de realizar la siembra de cultivos, así


como manejar un almacenamiento controlado, donde no se mezclen las cajas Petri
esterilizadas con las cajas Petri contaminadas.
Las cajas realizadas para la siembra de rayos ultravioleta se contaminaron, por una
mala calidad de trabajo, resultando que la caja Petri de 0 minutos siendo la más
contaminada y las demás con pequeñas colonias diferentes a E.coli.
Discusión:
Los resultados obtenidos son distintos a los explicados por los autores, ya que ellos
manejan tiempos más largos y con intensidades más altas, el enfoque de onda
manejado por ambos es el mismo de 254nm (Secretaría de Energía, 2015, p. 10),
este mismo autor maneja cambios considerados a partir de los 20 a 40 minutos
expuestos a la radiación ultravioleta, en el caso de la práctica se muestran pequeños
cambios de la caja de 15 minutos a la de 30 minutos mostrando una ligera expansión
y cambio de tonalidad de la bacteria. Esta variación en tiempo podría efectuarse en
que la investigación realizada por la secretaria de energía utilizo una variedad PQ30
la cual es distinta.

Conclusión:
El objetivo de la práctica se cumplió, ya que se observó un cambio en las colonias
conforme más tiempo pasaban en exposición a los rayos ultravioleta. Aunque no se
puede dar una respuesta exacta, los cambios presentados a la exposición son poco
notables, por el manejo de una intensidad baja y por el tiempo a la que se estuvo
expuesta, con ello podemos notar un ligero cambio de la caja muestra a la caja que
se mantuvo 30 minutos, podemos confirmar que la teoría expuesta por mas autores
se cumple. Como equipo podemos concluir que la obtención de colonias mutantes
mediante exposición de rayos ultravioleta incrementa conforme el tiempo sin crear
alteraciones en el medio donde se sembró.
Bibliografía:
1.-Lázaro, E. (2015). Encyclopedia of Astrobiology, 27833.
https://doi.org/10.1007/978-3-662-44185-5
2.-Mcclintock, B., Boca De Dragón, M., & Muller, H. J. (1953). La Mutación.
Retrieved from https://www.ucm.es/data/cont/media/www/pag-56185/11-La
mutación.pdf
3.-Ibañez, Enrique información recuperada el dia 18 de septiembre de 2018 de:
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/micro-ianez/18_micro.htm#uv
4.-Secretaría de Energía. (2015). Instituto Nacional de Investigaciones Nucleares,
52(55), 1–2. Retrieved from
http://www.inin.gob.mx/plantillas/acercadeinin.cfm?clave=2

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