CAPÍTULO 4

RADICALES LIBRES

Y ANTIOXIDANTES
 CAPÍTULO 4
RADICALES LIBRES Y ANTIOXIDANTES

Como se mencionó anteriormente, todos los organismos aeróbicos, como producto de su metabolismo,
originan la formación de moléculas oxidantes. Las reacciones de oxidación-reducción (redox) son
biológicamente esenciales para la generación de compuestos de alta energía. Éstos se utilizan como
fuente para los procesos del metabolismo celular e involucran la transferencia de electrones.1-3 En la
actualidad, se acepta la propuesta respecto a que la tasa metabólica de las especies determina la esperanza
de vida, es decir, a mayor gasto metabólico por consumo de oxígeno, menor tiempo de vida.4 Esta
aseveración apoya la teoría de que el envejecimiento es producido por el incremento en el número de
radicales de oxígeno endógeno generados en las células y cuya acumulación produce un daño irreversible a las
biomoléculas. Esta teoría llamada de los radicales libres (RL) del envejecimiento fue propuesta por Denham
Harman en 19565 y es la más plausible, hasta el momento, para explicar este proceso, además de una serie de
enfermedades crónico-degenerativas como: diabetes mellitus, ateroesclerosis, enfermedad de Alzheimer,
cataratas, artritis reumatoide y cáncer, entre otras.1, 3,6,7

En este capítulo revisaremos brevemente los aspectos bioquímicos generales de la formación de RL y los
mecanismos antioxidantes que contrarrestan su efecto.

4.1. RADICALES LIBRES Y ESTRÉS OXIDATIVO

Los radicales libres (RL) son especies químicas que poseen en el último orbital un electrón no apareado,
por lo que, son capaces de extraer un electrón de las moléculas vecinas para completar su orbital,
convirtiéndose en componentes altamente reactivos y oxidantes. Una de las moléculas más susceptibles de
ser transformada es el oxígeno molecular (O2), su reducción involucra cuatro electrones y genera tres
especies reactivas de oxígeno (ERO2): anión superóxido (O2 ). peróxido de hidrógeno (H2O2) y radical
hidroxilo (OH*) (Figura 4.1).1-3,6,7

Figura 4.1. Los cuatro pasos de la reducción del oxígeno molecular a agua con la
generación de tres especies reactivas de oxígeno (EROs).

El H2O2 no es un radical libre, pero cae en la categoría de EROs por ser un compuesto intermediario e importante
en la bioquímica de los RL, ya que, se descompone fácilmente en presencia de metales de transición, para
producir el más reactivo y dañino RL de oxígeno, el radical hidroxilo (OH·).3-7 Varios metales de transición
reaccionan con el H2O2, pero al que se le ha puesto más atención es al hierro. En el mecanismo mediado por
hierro, las sales ferrosas reaccionan con H2O2 para formar
59
60 RADICALES LIBRES Y ANTIOXIDANTES

6,7
OH· por medio de una reacción llamada de Fenton. (Figura 4.2)

Fe (II) + H2O2 OH·+OH- + Fe(III)

Figura 4.2. Reacción de Fenton que involucra la presencia de sales ferrosas.

Por su parte, el O2-· puede reducir ciertos quelatos férricos, interviniendo en la reacción de formación
de OH·. La reacción condensada, sin los intermediarios del hierro, entre O2-' y H2O2 se conoce como
reacción de Haber-Weiss (Figura 4.3).6,7

O2- +H2O2 OH·+OH- + O2

Figura 4.3. Reacción de Haber-Weiss catalizada por hierro.

Los RL son generalmente producidos por reacciones de transferencia de electrones, las cuales
pueden ser mediadas por acciones enzimáticas que involucran a la cadena respiratoria, la fagocitosis,
el sistema citocromo P450, reacciones del retículo endoplasmico, la acción enzimática de xantina
oxidasa y la síntesis de prostaglandinas; además de reacciones no enzimáticas del oxígeno con
compuestos orgánicos o iniciadas por radiaciones ionizantes. Principalmente, son formados a través
de reacciones de oxidación-reducción (redox).6-8
Se considera a la mitocondria como la principal fuente de RL, debido a que en este organelo es donde
se produce la mayor parte de energía para la célula.4,6-8 La producción de O2_* mitocondrial ocurre en
dos puntos de la cadena de transporte de electrones (cadena respiratoria), en el llamado complejo I
(NADH deshidrogenasa) y en el complejo III (ubiquinona-citocromo creductasa). Bajo condiciones
normales, el complejo III es el principal centro de producción de EROs. Los electrones de las
deshidrogenasas de los complejos I y II son transferidos a la coenzima Q o ubiquinona (Q),
produciéndose la reducción de la coenzima (QH2) que subsecuentemente sufre dos reducciones
consecutivas de un electrón, en el llamado ciclo Q, usando formas oxidada y reducida de los
citocromos b y c. Se forma un radical de la coenzima Q (Q-) que es inestable y lleva a la producción de
O2_· por la transferencia de electrones directamente del oxígeno molecular (Figura 4.4).4

Figura 4.4. Ciclo Q para la producción de O

 CAPITULO 4 61

Otra especie reactiva de oxígeno es el llamado oxígeno singulete (1O2) que no es propiamente un radical libre
porque no contiene un electrón impar, ya que, los dos electrones de la última órbita ocupan el mismo orbital y
tienen los spin paralelos, es decir están apareados. Es una molécula muy reactiva y capaz de oxidar
rápidamente muchas otras, incluyendo ácidos grasos poli-insaturados. Se forma principalmente por
reacciones fotoquímicas y en los eosinófilos.8-10

Además del O2, el nitrógeno también es capaz de formar RL dos óxidos: óxido nítrico (NO*) y dióxido nítrico
(NO2*), conformando las llamadas especies reactivas del nitrógeno (ERNs). El NO* es un RL gaseoso derivado
de la oxidación del nitrógeno guanído-terminal del aminoácido L-arginina, en una reacción oxidativa que
consume oxígeno molecular y reduce equivalentes en la forma reducida de la coenzima nicotina-adenina-
dinucleótido fosfato (NADPH) para formar L-citrulina, esta reacción es catalizada por la enzima óxido nítrico
sintetasa (NOS) (Figura 4.5).9-12

NOS
L-arginina + O2 +NADPH NO· + L-citrulina

Figura 4.5. Formación del radical de óxido nítrico a partir de arginina, oxígeno y NADPH.

-*
Los radicales OH*, O2 y NO* son capaces de reaccionar con las biomoléculas produciendo RL orgánicos
menos reactivos. El OH* reacciona con los carbonos centrales de las moléculas en forma RH, tales como
proteínas, carbohidratos, lípidos y ácidos nucléicos, convirtiéndolas en radicales (R*), este radical libre
carbono-central reacciona rápidamente con el oxígeno para formar un radical más estable llamado peroxílo
(ROO*) que a su vez puede tomar parte en otras reacciones para producir radicales alcoxilos (RO'). Así
mismo, los átomos de azufre en forma de compuestos sulfhidrilo (RSH) también pueden ser convertidos en
RL formando los radicales tiol (RS*).10 Por otro lado, el O2_· reacciona con el NO* para formar peroxinitrilo
(ONOO-).6-10 El peroxinitrilo es un poderoso oxidante que daña muchas moléculas biológicas y que a pH ácido
se puede descomponer liberando pequeñas cantidades de OH* independientemente de la catálisis de
metales. También, bajo ciertas condiciones, puede reaccionar con residuos de aminoácidos produciendo
nitrotirosina, compuesto que lleva a la inactivación enzimática (Figura 4.6).9,10
De todas las biomoléculas que pueden ser atacadas por RL, los lípidos son probablemente los más
susceptibles. Las membranas celulares son ricas en ácidos grasos poli-insaturados que son fácilmente
oxidables por un proceso conocido como lipoperoxidación o peroxidación lipídica. Este proceso daña
directamente la estructura de la membrana celular indirectamente a otros componentes celulares por la producción
de aldehidos reactivos. La lipoperoxidación se lleva a cabo por medio de una serie de reacciones en cadena
de tres pasos: iniciación, propagación y terminación. En la iniciación un ácido graso poliinsaturado es atacado
por un RL (OH·, RO· o ROO·) que abstrae un átomo de hidrógeno (H*) de un grupo metileno (—CH—) que
tenga un doble enlace adyacente, esta abstracción deja un carbono central desapareado (—*CH—). El radical
carbono-central sufre un rearreglo molecular para formar un dieno conjugado que, posteriormente, se combina
con O2 para formar un ROO*; este nuevo RL puede a su vez abstraer un átomo de hidrógeno de otro ácido
graso y así se propaga la reacción. La peroxidación continúa hasta que el sustrato se termina o se presenta un
antioxidante para romper la secuencia de la propagación (Figura 4.7).9,10
62 RADICALES LIBRES Y ANTIOXIDANTES

Figura 4.6. Formación da radlcalea orgánicot aacundarioa a partir da EROa y NO*.

Figura 4.7. Reacciones da inicio y propagación da la lipoparoxidaclón.

 CAPÍTULO 4 63

También existen sistemas enzimáticos que llevan a cabo reacciones de lipoperoxidación como parte de su acción
catalítica, tal es el caso de las ciclo-oxigenasas y lipoxigenasas que utilizan RL como intermediarios en las
reacciones de formación de endoperóxidos e hidroperóxidos, respectivamente. En estos casos, el RL se
localiza en los sitios activos de las proteínas.9

La extensa lipoperoxidación en las membranas biológicas causa pérdida de la fluidez, caída del potencial
de membrana, incremento de la permeabilidad a H * y otros iones y, eventualmente, liberación del
contenido celular y de los organelos causando la muerte celular.9

En las proteínas los RL producen carboxilación, pérdida de sulfhidrilos, fragmentación de moléculas, nitración,
enrollamientos erróneos de las estructuras secundarias o pérdida de la conformación de estructuras terciarias
y cuaternarias, reacciones espontáneas con glucosa (glucosilación) y entrecruzamíentos de tipo covalente.13-16
Todos los residuos de aminoácidos de las proteínas son sujetos de ataque por parte del OH*, siendo los de
preferencia: tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina, metionina y cisterna.13,14 Las proteínas oxidadas son
fácilmente degradadas por enzimas proteolíticas debido a la carboxilación, creación de nuevos grupo N-
termmales o cambios conformacionales. Se ha demostrado que el ONOO- oxida a las proteínas de
membrana y cítoplasmáticas afectando su naturaleza física y química.14-16
La glucosilación envuelve la interacción no enzimática entre los azúcares reductores, principalmente glucosa, con
los grupos amino de las proteínas para formar bases de Schiff que sufren un rearreglo molecular para formar
cetoaminas o compuestos de Amadori (Capítulo 3). Es un proceso que ocurre en varias semanas, por lo
que, afecta proteínas de larga vida. Estos productos glucosilados en presencia de O2.· y Fe(ll) forman
productos de fragmentación que posteriormente se condensan conformando los llamados productos
finales de glucosilación avanzada (AGEs, Advenced Glucosyiation End-products) o productos avanzados
de Maíllard. Hay suficiente evidencia que muestra que estos productos se incrementan con la edad, por lo que,
13,17
se relacionan con el envejecimiento.

Con respecto a los carbohidratos, el efecto de los RL parece centrarse en las reacciones de glucosilación
con proteínas, otros efectos son poco conocidos.16

El ADN no está exento del proceso oxidativo, tanto el nuclear como el mitocondrial.10 Al respecto Ames estimó
que una célula de rata recibe 100 000 golpes oxidativos en el ADN/día producidos por OH*,18 es decir, de cada
1012 moléculas de oxígeno que entran a la célula/día, es posible que 1 en 200 dañen al ADN.19 Las EROs pueden
causar entrecruza miento de proteínas-ADN, intercambio de cromátides hermanas, daño a la estructura de
desoxirribosa-fosfato y oxidación de las cuatro bases nitrogenadas.19-21 Las modificaciones oxidativas en las
bases producen mutaciones, mientras que la oxidación de la desoxirribosa puede inducir liberación de bases y
rompimiento en cadena sencilla de las hebras de ADN.16,21 Por lo general, los OH* producen múltiples productos
de oxidación de las bases como 8-hidroxiadenina y timidina glicol; el 1O2 preferentemente modifica la guanina
por 8-hidroxilación formando los compuestos 8-hidroxi-2'-desoxiguanosina (80HdG) y su base libre 8-
hidroxiguanina (80HG).21 La reactividad del OH' hacia la desoxirribosa varía considerablemente, siendo los
16
carbonos 4 y 5 los más susceptibles, la lesión predominantemente observada es el rompimiento de la
22
hebra mediado por hierro y H2O2.
64 RADICALES LIBRES Y ANTIOXIDANTES

Adicionalmente a lo expresado con anterioridad, se sugiere que el incremento de EROs puede representar
una común, pero no universal, señal de estrés celular. Cuando el estrés es severo, la supervivencia es
dependiente de la habilidad de la célula para adaptarse o resistir el estrés y de reparar o reemplazar las
moléculas dañadas. Se han encontrado varios mecanismos de respuesta al estrés en las células a través de
4
caminos de señalización transcripcional y post-transcripcional que actúan sobre genes específicos. De éstos,
el sistema transcripcional del factor nuclear kappa B (NF-KB) se activa con concentraciones micromolares de
H2O2 en varios tipos celulares, así como, por la acción moderada pro-oxidante en el sistema redox del glutatión.
Un gran cuerpo de evidencia experimental ha sugerido que las EROs co-modulan la activación de NF-KB en
ciertos tipos celulares y bajo ciertas condiciones, así mismo, se ha descrito que este factor está
relacionado con la expresión de la óxido nítrico sintetasa (NOS).11

Para prevenir la formación de moléculas oxidantes y para reparar el daño oxidativo a los tejidos y
biomoléculas, todos los organismos aeróbicos poseen un complejo armónico de defensas antioxidantes
enzimáticos y no enzimáticos. El balance entre la producción de RL y las defensas antioxidantes determina el
grado de estrés oxidativo,4 de tal manera que se puede decir que el estrés oxidativo (EOx) es el desequilibrio
bioquímico propiciado por la producción excesiva de RL que provocan daño oxidativo a las biomoléculas y
no puede ser contrarrestado por los sistemas antioxidantes.2

4.2. SISTEMAS ANTIOXIDANTES

Se define como antioxidante a aquella "sustancia que, presente en bajas concentraciones comparada con los
sustratos oxidables, retarda o previene significativamente la oxidación de esos sustratos".9,33 Esta definición
enfatiza la importancia de la fuente de estrés oxidativo y el blanco medido (el sustrato oxidable), aunque hay
algunas moléculas que no cumplen exactamente con los requerimientos de la definición, como es el caso de
la albúmina.23

Los antioxidantes pueden actuar en diferentes etapas en una secuencia oxidativa, de ahí que su sitio de acción
puede ser intracelular, en la membrana celular o extracelular.

4.2.1. Antioxidantes celulares

Las células tienen formidables defensas contra el daño oxidativo, constituido básicamente por enzimas, por
lo que, la protección antioxidante ocurre a diferentes niveles:9-24

a) Previniendo la formación de RL.

b) Interceptando los radicales cuando son formados.
c) Reparando el daño oxidativo causado por los radicales.
d) Incrementando la eliminación de las moléculas dañadas por medio de
apoptosis.
e) No reparando excesivamente las moléculas dañadas para minimizar la
introducción de mutaciones.
f) Induciendo y asistiendo los antioxidantes enzimáticos y agentes
destoxificantes.
 CAPITULO 4 65

4.2.2. Antioxidantes de la membrana celular

Debido a la doble característica de la membrana celular, hidrofóbica en el interior e hidrofílica en el exterior, se

requiere de diferentes tipos de antioxidantes: moléculas liposolubles en el interior de la membrana e
hidresolubles en la parte externa.9

4.2.3. Antioxidantes extracelulares

Se han descrito en los líquidos celulares algunas variantes de enzimas que actúan a este nivel. Diferentes
proteínas atrapadoras de iones metálicos y compuestos de bajo peso molecular, y proteínas con actividad
de oxidación-reducción (redox).9

Para un mejor entendimiento de la acción de los antioxidantes, se han clasificado de acuerdo a su función,
dividiéndolas en tres grupos: primarios, secundarios y terciarios (Cuadro4.1, Figura 4.8).25,26

Sistemas Antioxidantes

Figura 4.8. Clasificación de los sistemas antioxidantes.

Cada uno de estos sistemas antioxidantes, in vivo, tienen diferentes mecanismos de acción, los cuales
describiremos brevemente a continuación.

4.3. ANTIOXIDANTES PRIMARIOS

Son los que previenen la formación de RL evitando así el daño oxidativo. Son el primer nivel de protección.
Hay tres mecanismos por los cuales se lleva a cabo su acción: a) descomponiendo enzimáticamente, los
hidroperóxidos formados y el H202 generado; b) quelando los iones metálicos
66 RADICALES LIBRES Y ANTIOXIDANTES

Cuadro 4.1. Sistemas de defensa contra el daño oxidativo. (Modificado de Niki, 1999).

Sistema antioxidante Antioxidante

1. Antioxidantes preventivos o primarios. Suprimen la

formación de radicales libres:

a. Descomposición no-radical de hidraperóxidos o Enzimas:

peróxido de hidrógeno (H2O2). - Catalasa (CAT)
- Glutatión peroxidasa (GPx)

b. Secuestro de iones metálicos catalíticos por Proteínas:

quelación. - Transferrina, ferritina
- Ceruloplasmina
- Albúmina
- Metalotioneínas

c. Remoción o depuración de especies reactivas de

oxígeno. Enzimas: -Superóxido
dismutasa(SOD)
2. Antioxidantes "atrapadores" de radicales o a. Hidrofílicos:
secundarios. Atrapan radicales para inhibirla cadena - Vitamina C
de iniciación o romper la cadena de propagación. - Ácido úrico
- Bilirrubina
- Albúmina
b. Lipofílicos:
- Vitamina E
- Vitamina A y Carotenoides
- Melatonina
- Estrógenos

3. Enzimas reparadoras y de novo o terciarios. - Reparadoras de lípidos

Reparan el daño y reconstituyen las biomoléculas. - Reparadoras de proteínas
- Reparadoras de ADN

potencialmente oxidantes por medio de proteínas, y c) removiendo o depurando enzimáticamente las EROs
que han sido formadas.

4.3.1. Descomposición no radical de hidroperóxidos y peróxido de hidrógeno.

■ CATALASA (CAT)
Es una enzima constituida por cuatro subunidades protéicas. Cada una contiene un grupo hemo en el sitio
activo, por lo que, es una hemoproteína. Cada subunidad generalmente contiene una molécula de NADPH
unida a ella, la cual ayuda a estabilizar a la enzima. Se encuentra en los
 CAPÍTULO 4 67

peroxisomas celulares y en el citoplasma, principalmente en el hepatocito y los eritrocitos, aunque

también está presente a bajas concentraciones en las células del cerebro, corazón y músculo
esquelético.27-28 Cataliza la reacción de descomposición del H2O2 (Figura 4.9).

2H2O2 2H2O + O2

Figura 4.9. Reacción de descomposición del H2O2 catalizada por catalasa.

Es considerada una enzima antioxidante porque regula los niveles de H2O2 que, si se encuentran
elevados, pueden producir un exceso de OH* a través de las reacciones de Fenton y Haber-Weiss.28 Si
la concentración de H2O2 es fija, la velocidad inicial de remoción será proporcional a la concentración
de CAT presente. Esta reacción de descomposición del H2O2 puede ser seguida por la pérdida de la
27
absorción a 240 nm o por la medición de la liberación de O2 utilizando un electrodo de oxígeno.

- GLUTATIÓN PEROXIDASA (GPx, GSH-Px)

Enzima constituida por cuatro subunidades protéicas, cada una de las cuales contiene un átomo de
selenio (Se) en su sitio activo. El Se, probablemente, se encuentra en forma de selenio-cisteína, es
decir, en el aminoácido cisteína que contiene normalmente un átomo de sulfuro (R-SH) se encuentra
un átomo de selenio (R-SeH).27 A nivel celular se encuentra en citoplasma y mitocondria.28

Cataliza la oxidación del glutatión reducido (GSH) a glutatión oxidado (GSSG) a expensas de H2O2
(Figura 4.10).

H2O2 + 2 GSH GSSG + 2 H20

Figura 4.10. Reacción de oxidación del glutatión catalizada por GPx.

La mayoría del glutatión in vivo está presente como GSH. Se ha encontrado alta actividad enzimática
en el hígado y eritrocitos, moderada en el corazón, hígado y cerebro, y baja en el músculo.27,28

La enzima es específica para GSH como donador de iones hidrógeno, aunque es capaz de aceptar
otros peróxidos, no sólo H2O2. Aparentemente el GSH reduce al Se y la forma reducida de la enzima
reacciona con el H2O2, es por ello que los organismos animales requieren de trazas de Se para un
buen funcionamiento antioxidante.27

La razón GSH/GSSG en las células normales se mantiene alta, por lo que, el mecanismo para regresar
el GSSG a GSH es llevado a cabo por medio de glutatión reductasa (GR), una enzima formada por dos
subunidades protéicas (cada una con un flavin-adenin-dinucleótido (FAD) en su sitio activo) que
cataliza la reacción a expensas de una molécula de NADPH.27,28
68 RADICALES LIBRES Y ANTIOXIDANTES

El NADPH requerido es provisto en los tejidos animales, principalmente, por una compleja vía
metabólica conocida como vía oxidativa de las pentosas fosfato, en donde la primera reacción es
catalizada por la enzima glucosa 6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH).27

La velocidad a la cual la vía de las pentosas fosfato opera está controlada por el suministro de
nicotina-adenina-dinucléotido fosfato (NADP+) de la G6PDH. Como la GR actúa y la razón NADPH/
NADP+ disminuye, la vía de las pentosas fosfato acelera el reemplazo a NADPH.27

Se ha descrito que la CAT y la GPx actúan en cooperación para remover el H2O2 formado en las
diversas reacciones metabólicas, principalmente la llevada a cabo por la superóxido dismutasa
(SOD).27

La acción de la GPx puede ser valorada de diferentes maneras, ya sea midiendo la liberación de
GSSG o por acción de la enzima en un hidroperóxido orgánico en presencia de H2O2.27,28

4.3.2. Quejantes de iones metálicos

Son básicamente proteínas séricas, dentro de las cuales se encuentran: trasferrina, ferritina,
ceruloplasmina, albúmina, a-lactoalbúmina, β-lactoglobulina,inmunoglobulinas y otras proteínas no
identificadas de la leche de vaca pasteurizada. Su principal mecanismo antioxidante incluye la
remoción de radicales libres por aminoácidos tales como tirosina y cisteína, y la quelación de metales
de transición. También se reporta que las proteínas séricas incrementan los niveles de glutatión, al ser
fuentes naturales de cisteína y glutamilcisteína, precursores de la síntesis de glutatión.29

- TRANSFERRINA Y FERRITINA

El hierro ionizado en su forma ferrosa (Fe2*) tiene un efecto tóxico pro-oxidante derivado de la
reacción de Fenton, el cual es prevenido por las proteínas enlazantes de hierro: transferrina y
ferritina.

La tranferrina es una β2-globulina que "atrapa" al Fe2+ para distribuirlo a los sitios de absorción,
almacenamiento y utilización, une dos iones por mol de proteína9,30. Se han identificado receptores
celulares específicos para el hierro de la transferrina en hígado y placenta, pero los que ofrecen una
mayor área de receptores son los reticulocitos y los precursores eritroides de la médula ósea.30

La ferritina representa un grupo heterogéneo de proteínas hidrosolubles, relativamente termoestables,

presentes en casi todas las células, principalmente en hígado, bazo y médula ósea, y que almacenan
hierro en una forma relativamente inerte, y que además lo pueden liberar cuando se necesita para
efectuar procesos metabólicos dependientes de hierro como la síntesis de hemoglobina. Posee un
centro de hierro polinuclear rodeado de una cubierta protéica. Incorpora el Fe2* y lo oxida a Fe3+, lo
deposita en el interior del núcleo y lo libera cuando se enfrenta con agentes reductores como las
flavinas reducidas y el GSH.30,31
La acción antioxidante de ambas proteínas, y demás enlazantes de hierro, se debe a que el hierro
unido a ellas no está disponible para estimular reacciones de radicales como la lipoperoxidación o la
formación de OH·, convirtiéndose en una parte importante del sistema de defensa antioxidante
 CAPÍTULO 4 69

extracelular. Las proteínas no se dañan fácilmente por el H2O2 o los lipoperóxidos y sólo liberan los
iones de hierro a pH ácido.27

- CERULOPLASMINA
Es una α2-glucoproteína quelante de cobre en un 90% y que contiene 6 átomos de este metal por
molécula. También tiene la habilidad de oxidar el Fe2+ a Fe3+ sin liberar radicales de oxígeno
intermediarios, por lo que, se le conoce como ferroxidasa,27,31,32 siendo esta característica lo que la
hace ser considerada como una proteína antioxidante, ya que, mantiene el metal dentro de su sitio
activo.27 Es sintetizada en el hígado y localizada primariamente en el suero.31

La acción de ferroxidasa de la ceruloplasmina permite inhibir la formación de lipoperóxidos u OH·,

dependiente de hierro, a partir de H2O2. También tiene una actividad no significativa de "superóxido
dismutasa" o "catalasa", ya que, puede reaccionar con O2_· y HzO2.27 Inhibe la liberación de hierro
dependiente de O2_· de la ferritina, limitando la biodisponibilidad de éste in vivo al reincorporarlo a la
enzima cuando es liberado.31

La pequeña cantidad de cobre plasmático no unida a ceruloplasmina se enlaza a histidina, péptidos

pequeños y albúmina. Ninguna de estas formas de cobre puede, aparentemente, generar oxidantes
reactivos.27

Su actividad puede ser medida mediante su acción de oxidasa utilizando compuestos oxidables que
absorben en el espectro de luz visible.32

- ALBÚMINA
Es la más abundante de las proteínas séricas circulantes. Dentro de sus variadas funciones se
encuentra la de antioxidante tanto de forma primaria como secundaria. Es la responsable de más del
33
35% de la actividad antioxidante del plasma. Esta actividad se basa en su habilidad para unir iones
cobre inhibiendo la lipoperoxidación y la formación de OH· cobre-dependientes. Estas reacciones se
llevan a cabo en la superficie de la proteína y la dañan, por lo que, es considerada como un
"antioxidante sacrificado", pero debido a su alta concentración plasmática y su rápido recambio es que
el daño es probablemente insignificante. De esta manera, aunque la unión de cobre a albúmina provoca
daño en la molécula bajo ciertas circunstancias, se previenen reacciones de oxidación en blancos más
importantes.27

También es un poderoso removedor de ácido hipocloroso (HCIO), un oxidante producido por la enzima
mieloperoxidasa (MPO) en las células fagocíticas activadas. La MPO funciona como genuina oxidasa
dependiente de O2y no de H2O2 como co-sustrato para la oxidación de compuestos.34 Nuevamente, la
albúmina actúa reaccionando con el HCIO y protegiendo de la oxidación a blancos más importantes.27

Dentro de otras de sus funciones se encuentra la unión a compuestos no hidrosolubles como la

bilirrubina. Stocker, Glazer y Ames han sugerido que la albúmina unida a bilirrubina actúa como un
antioxidante en algunos sistemas lipidícos, aunque la prevención del daño oxidativo a través de los
mecanismos de cobre y HCIO son propios de la proteína.27
70 RADICALES LIBRES Y ANTIOXIDANTES

- METALOTIONEINAS
Son proteínas de bajo peso molecular (aproximadamente 6500 daltons) que se encuentran en el
citoplasma de las células eucariotes, especialmente en hígado, riñón e intestino. Probablemente
también pueden entrar al núcleo. Son ricas en sulfuras (-SH) y poseen la habilidad de unir iones de
metales como zinc (Zn2+), cobre (Cu+), cadmio (Cd2+) y mercurio (Hg2+).27 Se han descrito dos
isoformas en la mayoría de los vertebrados, metalotioneína I y II.35

Su producción es inducida por estrés oxidativo de diferentes orígenes: físico, químico y por citocinas;
por lo que, se considera que son protectoras del estrés oxidativo por diferentes mecanismos.35 La
propiedad de secuestrar al Cu+ disminuye la generación de radicales promovidos por este metal, el
Zn2+ liberado de la Zn-metalotioneína puede inhibir la peroxidación lipídica y su alto contenido en
grupos-SH las hace excelentes removedores de O2 singulete (1O2) y OH·.27,35

4.3.3. Remoción o depuración de especies reactivas de oxígeno.

- SUPERÓXIOO DISMUTASA (SOD)

Fue descrita por McCord y Fridovich en 196827 como una enzima que se encarga de la dismutación
del ión superóxido (02~') por medio de la reacción que se presenta en la Figura 4.11.

202- + 2H+ H2O2 + O2

Figura 4.11. Reacción de dismutación llevada a cabo por SOD.

Se conocen tres formas moleculares (isoenzimas):27,36

- • Cobre-Zinc-superóxido dismutasa (CuZn-SOD) en citoplasma.

- • Manganeso-superóxido dismutasa (Mn-SOD), en la matriz mitocondrial.
- • Cobre-Zinc-superóxido dismutasa (EC-SOD), de alto peso molecular en líquidos
extracelulares.

Las enzimas citoplasmáticas CuZn-SOD son las más abundantes, tienen un peso molecular
aproximado de 32 000 daltons y contienen dos subunidades proteicas, cada una con dos sitios activos
uno que contiene un ion cobre y otro con zinc. En la reacción de dismutación, el cobre sufre un proceso
alternado de oxidación y reducción, mientras que el Zn na tiene acción catalítica sino que únicamente
estabiliza a la molécula. Por su parte, la actividad de las Mn-SOD es dependiente del tejido y la
especie, encontrándose que los eritrocitos de mamíferos no contienen esta forma de la enzima.27 La
isoenzima extracelular (EC-SOD) es secretora y remueve principalmente el O2-• del espacio
extracelular. Las tres isoenzimas tienen la misma actividad catalítica específica y funcionan juntas de
manera complementaria como consecuencia a su diferente distribución celular y subcelular.36

Debido a que en la reacción de dismutación se produce H2O2 se observa un incremento de éste en los
tejidos. El H2O2 es tóxico, y por la reacción de Fenton mediada por Fe2+ se produce OH•, de