Está en la página 1de 6

ANTECEDENTES

HEMOGLOBINA
La hemoglobina es una proteína globular constituida por cuatro subunidades
proteicas. Cada subunidad, está formada por una cadena polipeptídica denominada
globina, que está unida de modo no covalente a un grupo hemo. En el centro del
anillo hay un ion Hierro Fe2+ que puede combinarse con una molécula de oxígeno.
La determinación de la concentración de hemoglobina total es indicativa de la
capacidad de transporte de oxígeno y anhídrido carbónico de la sangre entre los
pulmones y otros tejidos, siendo también importante como paso inicial en la
detección de la anemia. La tasa de hemoglobina puede hallarse disminuida como
consecuencia de una hemorragia, hemólisis o como resultado de un daño en la
médula ósea que afecte la formación de hematíes. Por el contrario, la concentración
de hemoglobina en sangre puede verse aumentada cuando el intercambio de gases
a través de los pulmones se halla alterada, así como en otros diversos trastornos.
La determinación de hemoglobina se basa en el método colorimétrico. Para ello, el
Fe (ΙΙ) de todas las formas de hemoglobina, con excepción de la sulfohemoglobina,
debe ser oxidado por el ferrocianuro a Fe(ΙΙΙ) convirtiéndolas en metahemoglobina
que, a la vez, reacciona con cianuro ionizado (CN) formándose
cianmetahemoglobina, un derivado muy estable que absorbe a 540 nm. La
intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hemoglobina
total en la muestra.
El reactivo de Drabking permite la obtención de cianometahemoglobina de una
muestra de sangre. Para determinar la concentración de hemoglobina se requiere
un patrón estándar cuya concentración de hemoglobina es conocida. Se obtienen
sus absorbancias y se efectúan los cálculos, los cuales van a ser diferentes,
dependiendo si el reactivo empleado es comercial o elaborado en laboratorio.
Si es comercial, la concentración de hemoglobina se obtiene mediante la sustitución
de la siguiente formula:
Amuestra x Factor = concentración en g/dl hemoglobina total.
Siendo A= absorbancia de la muestra + reactivo de Drabking
Factor= 36.8 (establecido en el patrón o estándar).

Cuantificación de Hemoglobina con base a la curva de calibración.


Para este método, se realiza una gráfica con el fin de poder contrastar las
absorbancias de la muestra con las absorbancias de diferentes patrones cuya
concentración de Hb es conocida.
Colocamos en el eje Y la absorbancia y en el eje X la concentración.
Se anota en la gráfica, las absorbancias de los patrones (a diferentes
concentraciones conocidas)
Se traza una recta que pase por los puntos de los patrones. Posteriormente
anotamos las absorbancias de las muestras y leemos su concentración.
Los valores de referencia para hombres son de 13.5 a 15.5 gr/dl y de mujeres 11.5
a 16,5 gr/dl.

VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR


La velocidad de sedimentación es un análisis de sangre que puede revelar
actividad inflamatoria en el organismo. En una muestra de sangre obtenida con
EDTA, los glóbulos rojos sedimentan debido a su mayor densidad (1,10 g/ml) frente
a la del plasma (1,03 g/ml), descendiendo lentamente hasta el fondo de un tubo
wintrobe. Este es el motivo de que, al cabo de un tiempo, los componentes
corpusculares se separen del plasma sanguíneo. Normalmente la VSG de un
hombre sano alcanza una altura máxima de 5 mm a la primera hora y en una mujer
sana, 8 mm como máximo. La lectura a la segunda no debe sobrepasar los 15 mm
y 20 respectivamente. La velocidad con que lo hacen depende de tres factores:
1)Formación de grumos
2)la concentración de fibrinógeno
3)concentración de globulinas alfa y beta.
Hay tres etapas en el proceso de la velocidad de sedimentación:
a) el periodo inicial, de pocos minutos, con la formación de pilas de monedas.
b) periodo de 1 a 2 horas, durante las cuales la sedimentación ocurre a velocidad
más o menos constante.
c) periodo de empaque lento.

Hematocrito
El hematocrito indica el porcentaje del volumen de la sangre compuesto por glóbulos
rojos. El hematocrito se estima casi siempre con la ayuda de algún dispositivo
automatizado, en el que dicho parámetro se calcula a partir de las estimaciones del
recuento de hematíes y el VCM. Sin embargo, también se realiza en laboratorio
manualmente centrifugando la sangre en tubos de wintrobe. El método de capilar
se emplea para la determinación del microhematocrito.
Metodología. –
Dosificación de Hemoglobina
Equipo: Celdas
Espectrofotómetro Gradilla
Reloj Papel milimétrico
Material: Reactivos:
Sangre obtenida con EDTA Diluyente de Drabking
Pipeta de Salí Solución patrón de Hemoglobina de
60 mg/dl
Pipeta volumétrica de 5 ml
Tubos de ensayo de 13x100 mm

Procedimiento:
Reactivo de Drabking
Cianuro de potasio 0.050 gr
Ferrocianuro de potasio 0.200 gr
Bicarbonato de sodio 1.000 gr
Agua Destilada. 1000 ml

La solución debe ser transparente y colocada en frasco de vidrio obscuro


resguardada de la luz. Estable por dos meses.
Para la curva de calibración:
Marcar 6 tubos de ensaye y pipetear de acuerdo a la siguiente tabla:
Conc. Hb Blanco 4 8 12 16 20
Sol valoradora 0 1 2 3 4 5
Reactivo de 5 4 3 2 1 0
Drabking

Mezclar bien y transferir las soluciones a cubetas o celdas según sea el caso y medir
las absorbancias de cada dilución contra el blanco.
Graficar la absorbancia de cada dilución en las ordenadas contra su concentración
en las abscisas.
Un factor de calibración se obtiene de la siguiente manera:
𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟
F= 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎

Una vez obtenido este, la concentración de hemoglobina en una muestra se obtiene


de la siguiente manera:
Concentración Hb= Absorbancia x factor.
1. En un tubo de 13x100 mm, medir 5 ml de diluyente de Drabking y lavar en
ellos 0.02 ml de sangre bien mezclada con pipeta de Salí. Mezclar.
2. Reposar a temperatura ambiente por 15 minutos y leer contra diluyente de
Drabking como blanco a 540 nm
3. Leer el % de Hemoglobina en la curva de calibración.

Velocidad de sedimentación globular


Equipo
Gradilla de Wintrobe
Material
Sangre obtenida con EDTA
Gradilla
Cronometro
Pipeta Pasteur de punta larga con bulbo
Tubos de Wintrobe
Procedimiento:
1.- con jeringa y cánula cargar de abajo hacia arriba sin dejar burbujas hasta la
marca 100 o 10 en un tubo de wintrobe.
2.- dejar el tubo en posición perfectamente vertical y a temperatura ambiente
3.- Transcurrida una hora leer el largo de la columna de plasma sobre las células
como valor de la eritrosedimentacion.
Cifras normales. –
Hombre 0-7 mm con promedio de 4 mm
Mujer 0-15 mm con promedio de 10 mm
Niños 1-15 mm con promedio de 5 a 10 mm
Hematocrito
Equipo
Lector de Hematocrito
Centrifuga
Microcentrifuga

Material
sangre obtenida con EDTA
Tubos de wintrobe
Jeringa y cánulas de Wintrobe
Capilares de 75x 1.5 mm
Procedimiento
Método de wintrobe
Consiste en llenar un tubo estrecho de 110 mm de longitud y de un diámetro de 2.5
a 3 mm, con fondo plano. Con jeringa y cánula cargar de abajo hacia arriba sin dejar
burbujas hasta la marca 100 o 10 en un tubo de wintrobe.
Se centrifuga el tubo a 2500 rpm durante 30 minutos. Para llevar a volumen
constante. Este volumen se reporta como % de volumen globular o hematocrito.
El tubo tiene una doble escala de 0 a 10 cm, divididos en mm por la derecha y de
10 a 0 por la izquierda. Para la lectura del valor hematocrito se lee en la escala a la
derecha.
Método del capilar. -
1.- con la muestra de sangre bien mezclada se procede a llenar ¾ partes del capilar.
2.- se sella el extremo colorido del capilar con plastilina o calentando.
3.- centrifugar durante 5 minutos a 10,000 rpm o 10 minutos a 7500 rpm.
4.-leer el por ciento de volumen de los eritrocitos. Esto se simplifica con una plantilla
de lectura. Si no se tiene plantilla, con escala milimétrica medir en mm la longitud
de la columna de los eritrocitos y sangre total.
𝑙𝑜𝑛𝑔𝑖𝑡𝑢𝑑 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐𝑜𝑙𝑢𝑚𝑛𝑎 𝑑𝑒 𝐺𝑅
Hct=𝑙𝑜𝑛𝑔𝑖𝑡𝑢𝑑 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐𝑜𝑙𝑢𝑚𝑛𝑎 𝑑𝑒 𝑠𝑎𝑛𝑔𝑟𝑒 𝑥 100
Bibliografía. –
 Mollison, P.L. (1987). Transfusión de sangre en medicina clínica. Ed.
Reverte. 91 pp.
 Gerhard Thews y Ernst Mutschler (1983). Anatomía, fisiología y
patofisiologia del hombre. Ed, Reverte. 130 pp.
 Ferrer, A.P. (2009). Medicina Transfusional. Ed, Medica Panamericana. 174
pp.