Está en la página 1de 16

Instituto Politécnico Nacional

Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología

Métodos Cuantitativos

Grupo 2LM2

Práctica No. 14
“Determinación espectrofotométrica de la constante de acidez del
indicador químico verde de bromocresol.”

Equipo 5

Integrantes:
 De la Torre Ramos David Ulises
 García Barrera Jorge Luis
 Legaspi Salazar Diego

Profesores:
 Bolaños Valerio Emma
 Hernández Muñoz Alfonso

Fecha de Entrega: 16/10/18


Objetivos:

1. Trazar el espectro de absorción de la forma ácida y de la forma básica del verde de


bromocresol.
2. Determinar la longitud de onda de máxima absorción de la forma ácida y de la forma
básica del verde de bromocresol.
3. Determinar el valor de la constante de acidez del verde de bromocresol.

Introducción:

La forma ácida del indicador tiene un color, tal como el amarillo, con su correspondiente lmax a
una longitud de onda, y la forma básica tiene otro color, tal como el azul, con su correspondiente
lmax a una longitud de onda diferente. El verde de bromocresol es un indicador orgánico para
valoración ácido-base. Su intervalo de transición de pH es aproximadamente entre 3.8-5.4,
virando de amarillo a azul-verdoso en el rango especificado. Su uso específico es como un
indicador de pH y como un colorante de seguimiento para la electroforesis en gel de agarosa de
ADN. Se puede implementar en su forma de ácido libre (sólido marrón claro), o como una sal de
sodio (sólido de color verde oscuro). También es un inhibidor de la proteína de transporte de la
prostaglandina.
En solución acuosa, ioniza para dar la forma monoamónico (amarillo), que desprotona a pH
elevado para dar forma dianiónica (azul), que se estabiliza por resonancia. Al participar en un
equilibrio ácido-base se generan dos especies, una ácida Hln y una básica ln-. Las
concentraciones de Hln y de ln- se definen fijando el pH, mediante medidas espectrofotométricas
se puede determinar las concentraciones porque absorben diferentes longitudes de onda.
La determinación se realiza a un pH tal que ambas formas se encuentren en concentraciones
apreciables, esto es, a un pH próximo al pka de una sustancia o, lo que es lo mismo, grado de
disociación cercano al 50%. El resultado espectroscópico mostrará un punto isosbéstico.
Determinando las concentraciones de la forma asociada y disociada y midiendo el pH se puede
calcular el pka.
Desarrollo experimental:
-Obtención del espectro de absorción de la forma ácida y básica del verde de bromocresol.

700

Obtención del pKa del verde de bromocresol.

e
.5

1 15
Resultados:
Tabla 1.1 Espectro de absorción de la forma ácida del verde de bromocresol- (pH 1.3)

Longitud de Absorbancia Longitud de Absorbancia


onda (nm) onda (nm)
400 0.403 553 0.024
403 0.424 556 0.019
406 0.444 559 0.014
409 0.467 562 0.01
412 0.488 565 0.006
415 0.511 568 0.004
418 0.531 571 0.001
421 0.547 574 -0.002
424 0.562 577 -0.004
427 0.577 580 -0.005
430 0.592 583 -0.007
433 0.603 586 -0.007
436 0.612 589 -0.009
439 0.618 592 -0.01
442 0.62 595 -0.01
445 0.621 598 -0.011
448 0.618 601 -0.011
451 0.613 604 -0.012
454 0.605 607 -0.012
457 0.593 610 -0.013
460 0.581 613 -0.013
463 0.566 616 -0.013
466 0.547 619 -0.013
469 0.528 622 -0.013
472 0.507 625 -0.013
475 0.486 628 -0.014
478 0.46 631 -0.013
481 0.434 634 -0.014
484 0.411 637 -0.014
487 0.389 640 -0.015
490 0.363 643 -0.015
493 0.339 646 -0.014
496 0.313 649 -0.015
499 0.289 652 -0.015
502 0.264 655 -0.015
505 0.241 658 -0.014
508 0.219 661 -0.014
511 0.198 664 -0.014
514 0.178 667 -0.014
517 0.158 670 -0.014
520 0.142 673 -0.014
523 0.125 676 -0.014
526 0.109 679 -0.015
529 0.097 682 -0.016
532 0.085 685 -0.016
535 0.073 688 -0.016
538 0.063 691 -0.016
541 0.053 694 -0.016
544 0.045 697 -0.015
547 0.037 700 -0.015
550 0.03
Tabla 1.2 Espectro de absorción del verde de bromocresol- (pH 2.95)

Longitud de Absorbancia Longitud de Absorbancia


onda (nm) onda (nm)
400 0.429 553 0.084
403 0.448 556 0.079
406 0.465 559 0.077
409 0.484 562 0.074
412 0.502 565 0.073
415 0.521 568 0.071
418 0.538 571 0.07
421 0.552 574 0.07
424 0.566 577 0.069
427 0.579 580 0.069
430 0.59 583 0.07
433 0.6 586 0.07
436 0.607 589 0.071
439 0.612 592 0.072
442 0.615 595 0.074
445 0.615 598 0.075
448 0.613 601 0.075
451 0.608 604 0.078
454 0.6 607 0.077
457 0.588 610 0.079
460 0.579 613 0.079
463 0.564 616 0.079
466 0.547 619 0.078
469 0.529 622 0.078
472 0.509 625 0.076
475 0.488 628 0.073
478 0.466 631 0.07
481 0.439 634 0.068
484 0.424 637 0.064
487 0.403 640 0.061
490 0.38 643 0.058
493 0.358 646 0.055
496 0.334 649 0.05
499 0.313 652 0.048
502 0.29 655 0.044
505 0.269 658 0.043
508 0.25 661 0.04
511 0.231 664 0.038
514 0.212 667 0.036
517 0.196 670 0.035
520 0.182 673 0.033
523 0.165 676 0.033
526 0.152 679 0.032
529 0.144 682 0.032
532 0.132 685 0.032
535 0.123 688 0.031
538 0.112 691 0.03
541 0.106 694 0.028
544 0.1 697 0.027
547 0.094 700 0.027
550 0.088
Tabla 1.3 Espectro de absorción del verde de bromocresol- (pH 3.52)

Longitud de Absorbancia Longitud de Absorbancia


onda (nm) onda (nm)
400 0.399 553 0.111
403 0.415 556 0.11
406 0.43 559 0.111
409 0.446 562 0.113
412 0.461 565 0.115
415 0.477 568 0.117
418 0.49 571 0.12
421 0.502 574 0.124
424 0.513 577 0.127
427 0.522 580 0.131
430 0.531 583 0.136
433 0.538 586 0.14
436 0.543 589 0.146
439 0.547 592 0.151
442 0.549 595 0.157
445 0.548 598 0.162
448 0.545 601 0.168
451 0.541 604 0.174
454 0.533 607 0.177
457 0.524 610 0.181
460 0.514 613 0.183
463 0.501 616 0.184
466 0.486 619 0.183
469 0.47 622 0.18
472 0.454 625 0.174
475 0.435 628 0.168
478 0.416 631 0.159
481 0.393 634 0.148
484 0.378 637 0.137
487 0.361 640 0.125
490 0.339 643 0.114
493 0.322 646 0.103
496 0.301 649 0.091
499 0.283 652 0.081
502 0.263 655 0.07
505 0.245 658 0.061
508 0.229 661 0.052
511 0.213 664 0.046
514 0.199 667 0.038
517 0.185 670 0.034
520 0.174 673 0.03
523 0.16 676 0.026
526 0.15 679 0.023
529 0.144 682 0.021
532 0.136 685 0.019
535 0.13 688 0.016
538 0.123 691 0.016
541 0.119 694 0.013
544 0.116 697 0.012
547 0.114 700 0.012
550 0.111
Tabla 1.4 Espectro de absorción del verde de bromocresol- (pH 4.04)

Longitud de Absorbancia Longitud de Absorbancia


onda (nm) onda (nm)
400 0.356 553 0.203
403 0.369 556 0.211
406 0.381 559 0.22
409 0.393 562 0.23
412 0.403 565 0.24
415 0.413 568 0.251
418 0.42 571 0.262
421 0.426 574 0.274
424 0.431 577 0.285
427 0.435 580 0.298
430 0.439 583 0.312
433 0.44 586 0.327
436 0.442 589 0.341
439 0.442 592 0.357
442 0.441 595 0.374
445 0.439 598 0.388
448 0.436 601 0.404
451 0.431 604 0.418
454 0.426 607 0.429
457 0.418 610 0.438
460 0.411 613 0.444
463 0.401 616 0.446
466 0.391 619 0.444
469 0.379 622 0.436
472 0.368 625 0.423
475 0.354 628 0.406
478 0.341 631 0.383
481 0.325 634 0.357
484 0.314 637 0.329
487 0.302 640 0.299
490 0.288 643 0.27
493 0.276 646 0.239
496 0.263 649 0.21
499 0.251 652 0.183
502 0.239 655 0.157
505 0.228 658 0.132
508 0.218 661 0.113
511 0.209 664 0.095
514 0.201 667 0.079
517 0.194 670 0.066
520 0.189 673 0.055
523 0.184 676 0.046
526 0.18 679 0.038
529 0.179 682 0.032
532 0.178 685 0.026
535 0.179 688 0.021
538 0.18 691 0.017
541 0.182 694 0.014
544 0.186 697 0.011
547 0.191 700 0.011
550 0.196
Tabla 1.5 Espectro de absorción del verde de bromocresol- (pH 4.46)

Longitud de Absorbancia Longitud de Absorbancia


onda (nm) onda (nm)
400 0.349 553 0.266
403 0.357 556 0.279
406 0.363 559 0.293
409 0.368 562 0.306
412 0.372 565 0.321
415 0.375 568 0.335
418 0.376 571 0.352
421 0.377 574 0.367
424 0.377 577 0.382
427 0.376 580 0.4
430 0.375 583 0.419
433 0.373 586 0.438
436 0.371 589 0.458
439 0.369 592 0.479
442 0.366 595 0.501
445 0.364 598 0.519
448 0.36 601 0.541
451 0.356 604 0.559
454 0.351 607 0.573
457 0.345 610 0.585
460 0.34 613 0.592
463 0.333 616 0.595
466 0.326 619 0.591
469 0.318 622 0.58
472 0.309 625 0.56
475 0.3 628 0.539
478 0.291 631 0.51
481 0.28 634 0.478
484 0.275 637 0.441
487 0.267 640 0.403
490 0.257 643 0.363
493 0.25 646 0.324
496 0.242 649 0.286
499 0.235 652 0.25
502 0.228 655 0.217
505 0.222 658 0.186
508 0.217 661 0.16
511 0.212 664 0.136
514 0.208 667 0.111
517 0.204 670 0.091
520 0.202 673 0.079
523 0.2 676 0.069
526 0.2 679 0.06
529 0.203 682 0.051
532 0.205 685 0.045
535 0.211 688 0.037
538 0.216 691 0.029
541 0.225 694 0.021
544 0.233 697 0.021
547 0.243 700 0.021
550 0.254
Tabla 1.6 Espectro de absorción del verde de bromocresol- (pH 5.05)

Longitud de Absorbancia Longitud de Absorbancia


onda (nm) onda (nm)
400 0.308 553 0.417
403 0.31 556 0.441
406 0.31 559 0.468
409 0.308 562 0.495
412 0.304 565 0.522
415 0.298 568 0.55
418 0.289 571 0.579
421 0.28 574 0.608
424 0.272 577 0.635
427 0.262 580 0.668
430 0.252 583 0.701
433 0.243 586 0.735
436 0.234 589 0.77
439 0.226 592 0.808
442 0.221 595 0.846
445 0.215 598 0.878
448 0.211 601 0.916
451 0.207 604 0.947
454 0.204 607 0.973
457 0.2 610 0.994
460 0.199 613 1.007
463 0.197 616 1.012
466 0.196 619 1.006
469 0.194 622 0.989
472 0.193 625 0.958
475 0.192 628 0.918
478 0.191 631 0.867
481 0.189 634 0.808
484 0.19 637 0.744
487 0.191 640 0.676
490 0.191 643 0.608
493 0.193 646 0.54
496 0.194 649 0.475
499 0.197 652 0.413
502 0.201 655 0.354
505 0.204 658 0.299
508 0.209 661 0.255
511 0.215 664 0.213
514 0.223 667 0.177
517 0.23 670 0.148
520 0.239 673 0.124
523 0.25 676 0.103
526 0.261 679 0.084
529 0.273 682 0.07
532 0.285 685 0.057
535 0.3 688 0.046
538 0.317 691 0.037
541 0.334 694 0.03
544 0.35 697 0.024
547 0.371 700 0.021
550 0.394
Tabla 1.7 Espectro de absorción del verde de bromocresol- (pH 5.5)

Longitud de Absorbancia Longitud de Absorbancia


onda (nm) onda (nm)
400 0.285 553 0.471
403 0.283 556 0.502
406 0.279 559 0.535
409 0.272 562 0.568
412 0.263 565 0.601
415 0.251 568 0.635
418 0.239 571 0.671
421 0.225 574 0.704
424 0.21 577 0.739
427 0.197 580 0.779
430 0.183 583 0.819
433 0.169 586 0.86
436 0.157 589 0.903
439 0.147 592 0.948
442 0.139 595 0.994
445 0.132 598 1.031
448 0.127 601 1.079
451 0.123 604 1.115
454 0.121 607 1.147
457 0.121 610 1.171
460 0.119 613 1.188
463 0.12 616 1.193
466 0.121 619 1.186
469 0.122 622 1.167
472 0.125 625 1.129
475 0.128 628 1.08
478 0.13 631 1.019
481 0.136 634 0.947
484 0.136 637 0.87
487 0.14 640 0.788
490 0.145 643 0.706
493 0.149 646 0.623
496 0.157 649 0.546
499 0.163 652 0.47
502 0.172 655 0.401
505 0.18 658 0.333
508 0.19 661 0.28
511 0.201 664 0.23
514 0.213 667 0.188
517 0.225 670 0.152
520 0.238 673 0.123
523 0.256 676 0.097
526 0.273 679 0.073
529 0.284 682 0.055
532 0.303 685 0.04
535 0.322 688 0.027
538 0.346 691 0.017
541 0.367 694 0.009
544 0.387 697 0.002
547 0.414 700 -0.003
550 0.443
Tabla 1.8 Espectro de absorción del verde de bromocresol- (pH 5.97)

Longitud de Absorbancia Longitud de Absorbancia


onda (nm) onda (nm)
400 0.268 553 0.528
403 0.266 556 0.562
406 0.262 559 0.596
409 0.255 562 0.63
412 0.244 565 0.666
415 0.232 568 0.703
418 0.218 571 0.739
421 0.203 574 0.774
424 0.188 577 0.815
427 0.173 580 0.856
430 0.158 583 0.899
433 0.145 586 0.943
436 0.132 589 0.99
439 0.121 592 1.037
442 0.113 595 1.076
445 0.107 598 1.125
448 0.101 601 1.162
451 0.098 604 1.195
454 0.096 607 1.22
457 0.096 610 1.236
460 0.097 613 1.243
463 0.098 616 1.235
466 0.1 619 1.215
469 0.103 622 1.176
472 0.107 625 1.126
475 0.11 628 1.064
478 0.115 631 0.99
481 0.122 634 0.909
484 0.125 637 0.825
487 0.131 640 0.742
490 0.137 643 0.656
493 0.144 646 0.577
496 0.153 649 0.5
499 0.161 652 0.429
502 0.172 655 0.36
505 0.182 658 0.304
508 0.193 661 0.253
511 0.206 664 0.209
514 0.219 667 0.173
517 0.234 670 0.143
520 0.247 673 0.117
523 0.266 676 0.093
526 0.285 679 0.075
529 0.299 682 0.059
532 0.319 685 0.045
535 0.339 688 0.035
538 0.364 691 0.027
541 0.387 694 0.02
544 0.408 697 0.015
547 0.436 700 0.528
550 0.466
1.4
λmax=616 nm
Básico
1.2 Ácido

0.8
Absorbancia (A)

λmax=442 nm
0.6 Punto isosbéstico:
510 nm
0.4

0.2

0
400 410 420 430 440 450 460 470 480 490 500 510 520 530 540 550 560 570 580 590 600 610 620 630 640 650 660 670 680 690 700

-0.2
Longitud de onda (λ) - nm

Figura 1.1 Espectro de absorción de la forma ácida y básica del verde de bromocresol

1.4

1.2

1
Absorbancia (A)

0.8

0.6

0.4

0.2

0
400410420430440450460470480490500510520530540550560570580590600610620630640650660670680690700

-0.2
Longitud de onda (λ) - nm

Básico - 5.97 5.5 5.05 4.46 4.04 3.52 2.95 Ácido

Figura 1.2 Espectro de absorción de una disolución de 20 ppm de verde de bromocresol


a diferentes valores de pH
Tabla 2.1 Absorbancias experimentales para una serie de disoluciones de verde de
bromocresol a diferentes valores de pH

pH Aλ=442 nm Aλ=616 nm

Ácido - 1.3 0.62 -0.0013

2.95 0.615 0.079

3.52 0.549 0.184

4.04 0.441 0.446

4.46 0.366 0.545

5.05 0.221 1.012

5.5 0.139 1.193

Básico – 5.97 0.113 1.243

1.4

1.2

0.8
Absorbancia (A)

0.6

0.4

0.2

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5

-0.2
pH

Figura 2.1 Absorbancia de la forma ácida y la forma básica del verde de bromocresol en
función del pH
En el punto donde se intersectan las gráficas las concentraciones de la forma básica [𝑙𝑛− ] y de la
forma ácida [𝐻𝑙𝑛] son iguales, esto es:

[𝑙𝑛− ]
𝑝𝐻 = 𝑝𝐾𝑎 + 𝑙𝑜𝑔
[𝐻𝑙𝑛]

𝑝𝐻 = 𝑝𝐾𝑎 + log⁡(1)

𝒑𝑯 = 𝒑𝑲𝒂

4.04=pka

Ahora calculamos la Ka del verde de bromocresol:

𝑝𝐾𝑎 = −𝑙𝑜𝑔𝐾𝑎

10−𝑝𝐾𝑎 = 𝐾𝑎

10−4.04 = 𝐾𝑎

Ka=9.1201x10-05

Estudio logarítmico para el cálculo del pKa:

Tabla 3.1 estudio logarítmico para la determinación del


pKa del verde de bromocresol

pH 𝝀=𝟒𝟒𝟐
𝑨á𝒄𝒊𝒅𝒐 𝝀=𝟒𝟒𝟐 − 𝑨𝒎
𝒍𝒐𝒈
𝑨𝒎 𝝀=𝟒𝟒𝟐 − 𝑨𝒃á𝒔𝒊𝒄𝒐 𝝀=𝟒𝟒𝟐

Ácido - 1.3 --------------

2.95 -2.001733713

3.52 -0.788228141

4.04 -0.263020813

4.46 0.001713195

5.05 0.56754914

5.5 1.267171728

Básico – 5.97 -------------


7

pH 4

3
y = -0.7942x + 4.5956
R² = 0.9486
2

0 𝝀=𝟒𝟒𝟐
𝑨á𝒄𝒊𝒅𝒐 𝝀=𝟒𝟒𝟐 − 𝑨𝒎
-2.5 -2 -1.5 -1 -0.5 0 0.5 1 1.5 𝒍𝒐𝒈
𝑨𝒎 𝝀=𝟒𝟒𝟐 − 𝑨𝒃á𝒔𝒊𝒄𝒐 𝝀=𝟒𝟒𝟐

𝝀=𝟒𝟒𝟐
𝑨á𝒄𝒊𝒅𝒐 𝝀=𝟒𝟒𝟐 − 𝑨𝒎
Figura 3.1 Gráfica de pH en función de 𝒍𝒐𝒈 𝝀=𝟒𝟒𝟐
𝑨𝒎 − 𝑨𝒃á𝒔𝒊𝒄𝒐 𝝀=𝟒𝟒𝟐

Podemos relacionar la ecuación de una recta con la siguiente ecuación:

[𝑙𝑛− ]
𝑝𝐻 = 𝑝𝐾𝑎 + 𝑙𝑜𝑔
[𝐻𝑙𝑛]

𝑦 = 𝑏 + 𝑚𝑥

Por lo tanto cuando el segundo término sea 0, el pH es igual al pKa. Con la ecuación de la
recta graficada obtenemos el pKa:

y = -0.7942x + 4.5956

pKa=4.5956

Calculamos el Ka:

𝐾𝑎 = 10−4.5956

𝐾𝑎 = 2.5375𝑥10−05

Calculo del porcentaje de error:

Valor teórico del Ka del verde de bromocresol: 1.6x10-05

1.9953𝑥10−05 −2.5375𝑥10−05
𝑥100 = 27.1738% Por estudio logarítmico
1.9953𝑥10−05

1.9953𝑥10−05 −9.1201x10−05
𝑥100 = 361.6854% Por absorbancia contra pH
1.9953𝑥10−05
Análisis de resultados:

 El error obtenido mediante el estudio logarítmico (58.59%) es menor que el obtenido


mediante la gráfica de la absorción contra el pH (470%) por lo que puede decirse que
es un método más exacto para la determinación del pKa y el Ka.

Conclusiones:

 Se trazó el espectro de absorción de la forma ácida y de la forma básica del verde de


bromocresol.

 Se determinó que la longitud de onda máxima de la forma ácida del verde de


bromocresol es 442 nm, experimentalmente.

 Se determinó que la longitud de onda máxima de la forma ácida del verde de


bromocresol es 616 nm, experimentalmente.

 Se observó que el cambio de color del indicador verde de bromocresol es de amarillo


(pH ácidos) a azul (pH básicos) pasando por el verde.

 Se calculó experimentalmente la constante de acidez del verde de bromocresol


mediante dos métodos.

Bibliografías y referencias:

● Chemistry 111 Lab. (2005). “Spectophotometry: Absorption Measurements & their Application
to Quantitative Analysis”. 12 de Octubre 2018. Oneonta, The State University of New York. Sitio
web: http://employees.oneonta.edu/kotzjc/LAB/Spec_intro.pdf

● As.Dr.Ing. Adrian Eugen Cioabla. (2013). “Spectophotometry Principle and Applications”. 12 de


Octubre 2018, de Envirobanat Sitio web:
http://envirobanat.ro/documents/workshop2013/WorkshopZrenanin2013-pres entationCioabla.pdf

También podría gustarte