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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas


Unidad Zacatenco
Químico Farmacéutico Industrial

FISIOLOGÍA CELULAR

PRÁCTICA 7. MODULACIÓN DE UNA FUNCIÓN CELULAR POR SEÑALES QUÍMICAS

Integrantes
Bonilla Cruz Miriam
Díaz Pérez Daniel
Gonzáles Correas Sandra
Peña Legorreta Eduardo
Rodríguez Márquez Daniela
Sánchez Gonzáles Diego Elías
Profesores:
Sonia Guzmán Velázquez
Oriana Hidalgo Alegría
Luz Adriana Pichardo Macías
Abraham Miranda
Grupo 3FV2 – Equipo No. 6

Ciclo escolar: Enero 2018 – Junio 2018


Fecha: 16 de mayo de 2018

Fisiología Celular
INTRODUCCIÓN

Las células individuales, al igual que los organismos pluricelulares tienen la necesidad de conocer su entorno y
en medida que este cambie o no, deben tener la capacidad de responder al mismo; desde funciones básicas
como la permeabilidad a los iones hasta localizar nutrientes la célula debe estar comunicada con otras células.
Las células llevan a cabo estas interacciones mediante un fenómeno conocido como emisión de señales
celulares, en el cual se pasa información a través de la membrana plasmática al interior de la célula y con
frecuencia al núcleo celular. En la mayor parte de los sistemas las señales celulares incluyen:

Una comunicación celular donde las señales pueden actuar a distancias largas o cortas
La célula señalizadora produce un tipo especial de molécula señalizadora que es detectada por una célula
diana (célula blanco)
La célula diana tienen proteínas receptoras que reconocen y responden en forma especifica a la molécula
señalizadora.
La transducción de la señal comienza cuando la proteína receptora de la célula diana recibe una señal
celular y la convierte en señales intracelulares que modificaran el comportamiento celular.

Las células de los organismos pluricelulares cuentan con centenares de tipos de moléculas extracelulares en el
envió de señales como proteínas, péptidos, nucleótidos, esteroides, entre otros, pero estas moléculas solo
tienen estilos básicos de comunicación que trasmiten el mensaje, siendo:

Autocrina: La célula que produce el mensajero expresa receptores en su superficie los cuales pueden responder
a ese mensaje. En consecuencia, las células que liberan el mensaje se estimularán o inhibirán a sí mismas.

Paracrina: Las moléculas mensajeras viajan sólo cortas distancias por el espacio extracelular hasta células en
estrecha proximidad con la célula que genera el mensaje. Las moléculas mensajeras paracrinas suelen estar
limitadas en su capacidad de viajar por el cuerpo porque son inherentemente inestables, o son degradadas por
enzimas, o se unen a la matriz extracelular.

Endocrina: Las moléculas mensajeras llegan a sus células blanco a través del torrente sanguíneo. Los mensajeros
endocrinos también se llaman hormonas.

De igual manera los tipos de receptores y moléculas señal se dividen en:

Receptores intracelulares (hidrofóbicos): Hormonas, esteroides, óxido nítrico y monóxido de carbono.

Receptores extracelulares: Neurotransmisores, hormonas peptídicas y factores de crecimiento.

Dentro de esta practica nos centraremos en las intracelulares (hormonas) familias a la que pertenece el
estradiol, que es una hormona esteroide sexual femenina por lo tanto secretada por el colesterol.

Una de las funciones fundamentales del colesterol es la síntesis de Hormonas Esteroideas. Éstas son una familia
de hormonas con una estructura común: el anillo de esterano o ciclopentano-perhidro-fenantreno característico
del propio colesterol.
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El estradiol es producido en ovarios, teniendo como funciones la maduración de órganos sexuales, aumento en
cantidad de receptores de oxitocina, y el aumento en la vascularización y síntesis de grasa.

Son cinco las familias de hormonas esteroideas: progestágenos, estrógenos, andrógenos, mineralocorticoides y
glucocorticoides. Los precursores de la vitamina D también se incluyen por provenir del colesterol, aunque su
estructura difiere del anillo de esterano.

A diferencia de otros tipos de hormonas, las esteroideas se acumulan en cantidades muy pequeñas en la célula
en espera de la señal para ser liberadas al torrente sanguíneo. Por lo tanto, cuando éstas son necesarias, deben
ponerse en marcha los mecanismos celulares de síntesis.

Vía de señalización del estradiol

Mecanismo molecular mediante el cual el receptor de estrógenos (RE) regula la expresión de los genes.
Estradiol-17b se liga al RE y sufriendo un cambio conformacional de modo que se une al dímero estrógeno-
elemento de respuesta (ERE) y recluta las proteínas co-activadoras (Co-Act), lo que permite la estimulación de
la expresión génica.

Figura 1 Cascada de señalización de estradiol

Oxitocina/ Vía de señalización

También conocida como la hormona del amor, hormona péptida especialmente conocida por su función en el parto
y la lactancia. La glándula pituitaria del cuerpo libera grandes cantidades de ella durante el parto, provocando
contracciones en el útero para facilitar el parto.

Los receptores de oxitocina se encuentran en: el útero, glándula mamaria, cerebro, riñón, corazón, hueso,
células endoteliales y tejido ovárico. median las contracciones, secreción de leche e inducen un comportamiento
materno específico.

La activación del receptor de oxitocina (receptores específicos de oxitocina) conduce a tres mecanismos
diferentes de unión a las proteínas GTP. El mecanismo principal está mediado por el camino de ida
Gq/PLC/InsP3.

Fisiología Celular
Cuando la oxitocina se une a receptores específicos de oxitocina, se activa Gαq/11 y luego fosfolipasa C (PLC),
que induce la escisión de PIP2 a inositotrifosfato (InsP3) y diacilglicerol (DAG). InsP3 induce la liberación de

Ca2+ de los depósitos de Ca2+ a través de InsP3R y, en algunas células, a causa del Ca2+ induce la liberación de

Ca2+ (CICR ) a través del receptor de rianodina (RyR). La activación de Gq también provoca la despolarización
de la membrana*, que, a su vez, activa canales de calcio (VGCCs) y luego da la entrada a Ca2+ a través VGCCs.

Así, el aumento de Ca2+ citosólico ([Ca2+]i) estimula CaMK después de la unión a la proteína de unión de Ca2+

Calmodulina. El complejo Ca2+/CaM activa entonces CaMK y provoca diversas respuestas celulares, tales como
las contracciones del músculo liso, o induce la activación de varios tipos de enzimas, tales como NOS o de

PI3K. DAG causa la activación de la proteína cinasa C (PKC) y también diversas respuestas celulares.

Figura 2 Cascada de señalización de receptores oxitocina

OBJETIVOS

 Determinar el porciento de efecto en la contracción de los cuernos uterinos en ratas prepúberes


 Determinar el efecto en la contracción al tratar una con estradiol y otra con aceite vegetal
 Determinar el efecto en la contracción al suministrarles concentraciones crecientes de oxitocina.

FUNDAMENTO

Se utilizaron ratas prepúberes ya que sus órganos sexuales aún no están completamente desarrollados, por lo
tanto, su concentración de estradiol es baja y de igual manera su producción de estrógenos no está establecida
del todo, por lo que se podrá evaluar los efectos del estradiol administrado. La rata utilizada fue hembra, ya que
la oxitocina tiene efectos sobre la glándula mamaria y sobre el útero. El control prepuberal de la secreción de
gonadotrofinas por parte del sistema GABAérgico es cualitativamente diferente que en el animal peripuberal o

Fisiología Celular
adulto. En el estadio prepuberal el GABA ejerce un efecto predominantemente estimulante de la secreción de
gonadotrofinas.

Al momento del sacrificio de la rata el uso de anestésicos se descartó, ya que estos disminuyen la excitabilidad
produciendo un efecto negativo en la contractibilidad de las células excitables.

El estradiol es una molécula señal o primer mensajero capaz de atravesar la membrana plasmática de las células,
por lo que, sus receptores se encuentran en el citosol y en el núcleo celular. Los receptores para estradiol (RE)
son de dos tipos, los receptores α y β, los cuales están implicados en factores de transcripción del DNA.

La vía de señalización para el estradiol es la siguiente: Como primera instancia el estradiol se une a sus
receptores α y/o β, que se pueden encontrar tanto en el citosol como en el núcleo celular. Si el estradiol se une
a sus receptores en el citosol, la vía de señalización prosigue de la siguiente manera; el estradiol se une a cada
uno de los receptores en el sitio E, dichos receptores se encuentran como monómeros, al unirse el estradiol se
desprenden las proteínas de choque térmico o chaperonas, los monómeros se unen formando dímeros, estos
dímeros translocan al núcleo celular. En el núcleo celular el dímero se une al elemento de respuesta de dicho
ligando, el cual es una secuencia de nucleótidos específica del DNA, al mismo tiempo en el promotor basal,
también conocido como caja TATA, es una secuencia especifica de nucleótidos del DNA, en este punto se inicia
la transcripción. La RNA polimerasa se une a una de las hélices del DNA para comenzar la transcripción, al
sintetizar bases nitrogenadas complementarias a las de hélice del DNA, la transcripción finaliza en el promotor
distal. Este RNA sintetizado, es llamado RNA mensajero el cual, será trasladado al citosol con el fin de sintetizar
nuevas proteínas. Con base en esto, decimos que el estradiol es el responsable de la síntesis de proteínas, como
son; la síntesis de receptores de oxitocina, así como la síntesis de cadenas de miosina, que participan durante
la contracción muscular.

La oxitocina al ser un péptido no puede atravesar la membrana celular, por lo que, sus receptores se encuentran
en la superficie celular. Los receptores para oxitocina están acoplados a proteínas Gq. Por lo que, su vía de
señalización se da de la siguiente manera:

La oxitocina se une al receptor metabotrópico, generando un cambio conformacional en el asa número tres
intracelular del receptor, dicho cambio de conformación provoca una interacción entre la subunidad αq de la
proteína G con el asa número 3 intracelular del receptor metabotrópico, de tal interacción la subunidad αq es
capaz de intercambiar la molécula de GDP que tenía unida previamente, por una molécula de GTP y de esta
manera, es activada la subunidad αq. Al activarse la subunidad αq de la proteína G, dicha subunidad pierde
afinidad por las subunidades β-γq de la proteína G. La subunidad αq de la proteína G activa a la fosfolipasa Cβ
(PLCβ). La PLCβ hidroliza al fosfatidil inositol trifosfato de la membrana plasmática en inositol trifosfato (IP3) y
en diacilglicerol (DAG). Dos moléculas de IP3 se unen a sus receptores, ubicados en el retículo endoplásmico,
los cuales permiten la salida de calcio al citosol, sin embargo, dicho calcio se une a la calmodulina, formando el
complejo calcio-calmodulina. El complejo calcio-calmodulina provoca la contracción del musculo liso. El útero
es un órgano reproductor femenino, está formado por células excitables, que son células del musculo liso.

La administración del estradiol se realizó una semana antes del sacrificio de la rata, por el proceso de
transcripción de genes, el cual requiere de varios días para que se lleve a cabo.

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El proceso de transcripción de genes era necesario para el aumento de síntesis de proteínas, dicho aumento
propicia una mejor expresión de receptores, el aumento en cantidad de grasa y un aumento en la
vascularización. Las cantidades de estradiol que se administraron fueron suficientes para asegurarnos que su
efecto se llevara a cabo, ya que el estradiol, al ser una sustancia lipofílica, podría salirse por los poros.

La solución García de Jalón presenta las siguientes características: es hipocálcica y fisiológica, es un medio iónico
y enérgico, es decir, con presencia de glucosa; las propiedades anteriores se asemejan al medio donde se
encuentra el útero. La temperatura de esta solución al igual que su característica hipocálcica con el fin de evitar
contracciones espontáneas.

Mantener cierta temperatura es muy importante, ya que en el caso de que presente variaciones repercutirá en
la actividad contráctil, evitando una buena interpretación del efecto de la oxitocina sobre dicha actividad.

El proceso de aireación es importante al momento de mantener la viabilidad del músculo para la producción del
ATP. Los lavados que se realizaban antes de iniciar la lectura de las contracciones se hicieron con la finalidad de
evitar la saturación en los receptores.

Respecto a la tensión del hilo, fue necesaria para simular el tono natural de la rata.

El cuerno uterino se amarró a un hilo con el fin de detectar la actividad contráctil. Al amarrar ambos cuernos
evita ocluir la luz gracias a una de las capas que presenta el útero, la de músculo longitudinal, de esta manera
detecta la contracción.

El orden de aplicación de las diferentes concentraciones de oxitocina debe ser de manera ascendente para evitar
una saturación en el receptor, ya que, al hacerse de forma descendente hay una mayor probabilidad de que el
receptor se sature evitando que haya un registro de las concentraciones menores.

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METODOLOGÍA
Primera parte: Segunda parte: Efecto de II. Montaje de la III. Determinaciones
Tratamiento previo con oxitocina sobre preparación de cuerno prácticas.
estrógenos (estradiol contractilidad uterina de uterino aislado de rata
estrona) rata control y tratada con
estrógenos
I. Montaje del equipo y del
sistema de registro.

Distribuya aleatoriamente Calibre el baño con Personal capacitado Realice un registro basal
6 ratas en 6 equipos recirculador a 31 °C y sacrificará a las ratas por de 5 minutos, si se
mantener constante esta dislocación cervical presenta actividad
T durante todo el contráctil espontánea, si
experimento no existe tal actividad,
Marcar la rata con ác. Abra el abdomen de la haga un registro basal de
Pícrico de acuerdo al rata, desplazando 1 minuto
cuadro siguiente. intestinos, localizar
Colocar la cámara de
cuernos uterinos.
órgano aislado en el Sin parar el registro,
Pesar las ratas y interior del baño, llenar adicione 0.2 mL de la
administrar por VSC con solución de García de solución 50 nM de
Observar: cantidad de
volumen correspondiente Jalón oxitocina a la cámara del
grasa presente,
a la milésima parte del órgano aislado y continúe
vascularización, tamaño,
peso del animal registrando durante 5 o
Colocar una piceta llena grosor y color de los
10 minutos. Detenga el
con sol. García de J. cuernos.
registro.
dentro del baño de
Colocar cada grupo de
recirculación
ratas en una caja Lave la preparación
Disecar los cuernos y
debidamente rotulada: abriendo el desagüe de la
transferirlos a una caja de
Profesor, Grupo, Práctica, cámara y llenando la
Petri con sol. García de J
tratamiento, Peso de las Colocar módulo MP36 en cámara con solución
aireada.
ratas, Dosis administrada la parte superior de la García de J
y Fechas de mesa de lab, conéctelo a simultáneamente. La
administración la corriente y a la solución debe tomarse de
Limpiar el tejido graso de
computadora con el cable la piceta que se ha
los cuernos y separarlos.
USB mantenido en el baño a
Atar un hilo a cada
Administrar a los grupos extremo del cuerno 31 ° C
de ratas durante una uterino, evitar ocluir la luz.
semana y media Conectar el transductor
de fuerza montado en el Repita el mismo
soporte universal al canal procedimiento con todas
Amarre uno de los hilos al
1 del módulo e insertar las soluciones de oxitocina
soporte inferior del
ganchito “S” en el orificio en orden de creciente
alambre en “L” e
de 50 g del transductor de concentración
introduzca en la cámara
fuerza.
del órgano aislado. Ate el
otro hilo al ganchito “S”

Encender la computadora
y el MP36. Calibrar Deje estabilizar la
equipo. (Ver apéndice preparación de 15 a 20
página 50) minutos.

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RESULTADOS

Fuerza y duración de contracción de cuernos uterinos de rata control (EQUIPO 5)

OXITOCINA 50 nM

OXITOCINA 100 nM

OXITOCINA 200

Fisiología Celular
OXITOCINA 500 Nm

OXITOCINA 1000 Nm

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Fuerza y duracion de contraccion de cuernos uterinos de rata control (EQUIPO 5)

OXITOCINA 50 n M

OXITOCINA 100 Nm

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OXITOCINA 200 (nM)

OXITOCINA 500 (nM)

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OXITOCINA 1000 (nM)

Fuerzas de contracción
Oxitocina (nM) Cuerno uterino Porcentaje Cuerno uterino Porcentaje
de rata control de rata tratada
50 0.85 55.92 1.07 70
100 0.92 60.52 ---- ----
200 0.58 38.16 1.17 76.97
500 0.45 29.61 1.52 100
1000 0.20 13.16 1.25 82.24

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70

60 R² = 0.9664
% de fuerza de contraccion

50

40

30

20

10

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
-10
Log [Oxitocina] (nM)

Grafica I. logaritmo de la concentración vs % de fuerza de contracción en ratas con cuerno uterino de rata control

120

100
% de fuerza de contraccion

80

60

40 R² = 0.9646

20

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Log [Oxitocina] (nM)

Grafica II. logaritmo de la concentración vs % de fuerza de contracción en ratas con cuerno uterino de rata
administradas con estradiol durante 1 semana

Duración de contracción

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Oxitocina nM Cuerno uterino Porcentaje Cuerno uterino Porcentaje
de rata control de rata tratada
50 56.5 100 28.58 50.58
100 54.5 96.96 ------
200 51.1 90.4 27.33 40.40
500 39.94 70.69 34.35 56.44
1000 17.04 30.16 38.8 68.67

120
% de duración de contracción

100

80

60

40
R² = 0.9955
20

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Log [Oxitocina] (nM)

Grafica III. logaritmo de la concentración vs % de duración de contracción en ratas con cuerno uterino de rata control

80

70 R² = 0.9885
% de duración de contracción

60

50

40

30

20

10

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Log [Oxitocina] (nM)

Grafica IV. logaritmo de la concentración vs % de duración de contracción en ratas con cuerno uterino de rata
administradas con estradiol durante 1 semana

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DISCUCIONES

CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFÍA

 Tresguerres, J. A. F, “Fisiología Humana”, Mc Graw Hill, (2005).


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pp. 1133-43. 1997.
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 Revista Medicina (1987) Efecto del estradiol-progesterona sobre el contenido de neurotransmisores
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https://books.google.com.mx/books?id=ZirK4is3OvUC&pg=PA658&lpg=PA658&dq=ratas+prepuberes&source=b
l&ots=ml--3ekzHP&sig=nF9rqhiygNQqTX6E8Z6yjsoiYoY&hl=es-
419&sa=X&ved=0ahUKEwj50eSw54jbAhVHgK0KHWdHDY4Q6AEIXTAL#v=onepage&q=ratas%20prepuberes&f=fa
lse
 Anales de la Real Academia Nacional de Medicina (1994) Participación del sistema GABAérgico en la maduración
sexual y el desarrollo puberal de la hembra. [Página web] Fecha de consulta: 15/05/2018 URL:
https://books.google.com.mx/books?id=q86Q6m5d7SEC&pg=PA680&lpg=PA680&dq=produccion+de+estrogen
o+en+ratas+hembras+prepuberes&source=bl&ots=ehTC0GvsZV&sig=fv3gYu0ZyIs30_BwLVr35OJ4ono&hl=es-
419&sa=X&ved=0ahUKEwjf2PD794jbAhVCbK0KHe7_DloQ6AEITDAK#v=onepage&q&f=false

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