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UNIVERSIDAD CIENTÍFICA DEL SUR

FACULTAD​: CIENCIAS DE LA SALUD

LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR

CURSO​: BIOLOGÍA CELULAR

INFORME DE PRÁCTICA

PRÁCTICA ​N°: 3 Y 4

TÍTULO​: ​PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA CITOPLASMÁTICA (OSMOSIS, DIFUSIÓN Y


DIÁLISIS)

INTEGRANTES​:
Ø SILVA MISPIRETA, ANDREA LUCIA
Ø VELARDE RUIZ, RENATA
Ø VELIZ LIENDO, GIRETH

HORARIO DE PRÁCTICAS

HORA​: 11:00-13:00

DÍA​: JUEVES

FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA:​ 17/09/18

FECHA DE ENTREGA DEL INFORME:​ 20/09/18


INTRODUCCIÓN

La membrana citoplasmática, como la mayoría de las membranas celulares, es una


cubierta molecular asimétrica que delimita externamente a todas las ​células​. ​Su
estructura básica es una bicapa lipídica a la que se asocian proteínas, con una
disposición irregular, y en ocasiones carbohidratos; esta disposición de las
moléculas en la membrana es móvil y les permite ser reordenadas en dependencia
de su desempeño.
La membrana citoplasmática está formada por una capa biomolecular de lípidos,
con proteínas embebidas en esta y carbohidratos asociados a los lípidos y proteínas
Presentan poros funcionales los cuales se abren o cierran según los requerimientos
de las células. Tiene forma asimétrica y es muy dinámica.
La función de esta membrana es ser una barrera, selectivamente permeable, entre
la célula y su ambiente, para ello presenta una diferenciación en su composición
química interna y externa, lo que provoca que su interior esté cargado
negativamente con respecto al exterior que se carga positivamente, este contraste
crea el llamado potencial de membrana que, como se analizará en estudios
posteriores, juega un papel fundamental en la actividad celular. El intercambio a
través de la membrana citoplasmática con el medio puede llevarse a cabo por
simple difusión (transporte pasivo) a favor del gradiente de concentración o en
contra de este, selectivamente, con gasto de energía celular (transporte activo).
Este intercambio implica movimiento molecular, es decir entrada de sustancias
necesarias a la célula para realizar sus funciones vitales y salidas de otras
indeseables. También, esta membrana puede incorporar porciones del medio
externo a través de partes de ella, capaces de envolverlas, proceso conocido como
endocitosis y, después de ser digeridas en el interior celular, por unos organelos
conocidos como lisosomas, expulsar los restos al exterior por un proceso inverso,
conocido como exocitosis. En la cara exterior de la membrana se presentan sitios
específicos, asociados a las proteínas, conocidos como receptores moleculares que
son responsables, entre otros, del reconocimiento hormonal y la respuesta
inmunológica del organismo. La membrana también desempeña funciones
importantes en la relación con las células que la rodean.
MARCO TEÓRICO

La permeabilidad de las membranas es la facilidad de las moléculas para


atravesarla. Esto depende principalmente de la carga eléctrica y, en menor medida,
de la masa molar de la molécula. Pequeñas moléculas y moléculas con cargas
neutra pasan la membrana más fácilmente que elementos cargados eléctricamente
y moléculas grandes. La membrana es selectiva lo que significa que permite la
entrada de unas moléculas y restringe la de otras. La permeabilidad de la
membrana depende de los siguientes factores:
· Solubilidad en los lípidos: Las sustancias que se disuelven en los lípidos
(moléculas hidrófobas, no polares) penetran con facilidad en la membrana dado
que está compuesta en su mayor parte por fosfolípidos.
· Tamaño: La mayor parte de las moléculas de gran tamaño no pasan a través
de la membrana. Sólo un pequeño número de moléculas no polares de pequeño
tamaño pueden atravesar la capa de fosfolípidos.
· Carga: Las moléculas cargadas y los iones no pueden pasar, en condiciones
normales, a través de la membrana. Algunas sustancias cargadas pueden pasar
los canales los canales proteicos o con la ayuda de una proteína transportadora.

OSMOSIS

El componente principal de la célula es el agua, que actúa como solvente de solutos


orgánicos e inorgánicos. El movimiento de moléculas de agua de una zona de
mayor concentración a una zona de menor concentración de agua a través de una
membrana semipermeable (es decir, el agua se mueve de un lugar donde hay
mucha agua a un lugar donde hay poca agua). El proceso de ósmosis involucra
necesariamente la presencia de una membrana semipermeable que separa dos
zonas con concentraciones diferentes.

DIÁLISIS

Cuando la membrana que separa dos disoluciones deja pasar, además de agua, los
solutos de menor tamaño, se produce el fenómeno denominado diálisis. Las
moléculas de bajo peso molecular pasan desde la disolución en la que se
encuentran en mayor concentración hacia la disolución en la que se encuentran en
menor concentración.

DIFUSIÓN

Es el movimiento de moléculas de una región de alta concentración a otra de menor


concentración producido por la energía cinética de las moléculas. Todas las
moléculas de gases y líquidos tienden a moverse o difundirse en todas direcciones
hasta que se encuentran distribuidas regularmente por todo el espacio disponible.
La difusión no requiere gasto de energía por parte de la célula y por lo tanto es un
movimiento pasivo. La velocidad de difusión depende del tamaño de las moléculas y
de la temperatura, la causa de la difusión es el movimiento térmico de las
moléculas. Con el crecimiento de la temperatura de la solución, la velocidad de
difusión, por lo común, aumenta​.

OBJETIVOS

● Identificar los tipos de transporte en la membrana celular.


● Diferenciar adecuadamente los fenómenos producidos por las células
expuestas a diferentes medios.
● Identificar y establecer diferencias en la Difusión entre los tre tipos de
temperaturas utilizados​.
● Desarrollar habilidades en el trabajo de trabajo.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

EXPERIMENTO N°1 ​(osmosis elodea)


Materiales usados:
● goteros
● 100 ml de solución NaCl 0.2% (0.015M)
● 100 ml de solución NaCl 0.8% (0.15M)
● 100 ml de solución NaCl 5% (0.3M)
● láminas portaobjetos
● lámina cubreobjetos
● 1 rama de Elodea sp
● 1 plumón marcador

Procedimiento:

1. Se colocaron tres hoja de Elodea sp sobre tres láminas portaobjetos,


diferentes.
2. Luego se puso una gota de solución salina al 0.2% en una hoja, otra solución
de 0.8% en otra hoja y en la última hoja se colocó la solución de 5%.
3. Se rotulan las láminas con el marcador y cubrir la muestra con una laminilla
cubreobjetos.
4. Observar al microscopio a 40X, 100X y 400X. Esquematice sus
observaciones a 400X.

EXPERIMENTO N°2 ​(osmosis papa)

Materiales usados:
● goteros
● 100 ml de solución NaCl 0.2% (0.015M)
● 100 ml de solución NaCl 0.8% (0.15M)
● 100 ml de solución NaCl 5% (0.3M)
● 3 beaker de 100 ml
● sacabocados
● balanza

Procedimiento:
1. Preparar 3 beakers de 40 mL rotulados para cada solución.
2. Usar un sacabocados para sacar 9 cilindros de la papa.
3. Separarlas en tres grupos y pesar cada grupo por separado y tocar la textura
inicial. Anotar los datos.
4. Transferir a los beakers rotulados con las soluciones de NaCl 0.8%, 0.2% y
5% y anotar el tiempo en que se inicia Incubar por 30 minutos a temperatura
ambiente.
5. Retirar cada grupo de rueditas de las soluciones en que están sumergidas a
una hoja de papel secante.
6. Anotar si hubo cambios en textura y pesarlas nuevamente.
7. Analizar y discutir los resultados.

EXPERIMENTO N°3​ (osmosis glóbulos rojos)

Materiales usados:
● goteros
● 100 ml de solución NaCl 0.2% (0.015M)
● 100 ml de solución NaCl 0.9%
● 100 ml de solución NaCl 5% (0.3M)
● 4 lancetas
● 1 frasco de 100 ml de Alcohol Yodado
● 1 paquete de torundas de algodón
● 1 caja de laminas portaobjetos
● 1 caja de laminas cubreobjetos
Procedimiento:
1. Limpiar y desinfectar con alcohol la pulpa del dedo anular.
2. Punzar con la lanceta estéril y colocar en cada lámina portaobjeto una gota
de sangre.
3. A cada lámina agregar 1 gota de solución de NaCl: a la primera NaCl 0.9%; a
la segunda, NaCl 0.2% y a la tercera, NaCl 5%.
4. Marcar cada uno de los preparados.
5. Observar al microscopio y esquematizar a 400X.

EXPERIMENTO N°4​ (Difusión-factor temperatura)

Materiales usados:

● 40 ml de agua helada
● 40 ml de agua caliente
● 50 ml de azul de metileno
● 3 Beaker de 100 ml
● 40 ml de agua a temperatura ambiente

Procedimiento:

1. Coloqué en un Beaker,40 ml de agua a temperatura ambiente; en otro, 40 ml


de agua helada y en un tercero, 40 ml de agua caliente.
2. Añadí simultáneamente a cada uno de ellos una gota de colorante azul d
metileno sin mover el aguua.
EXPERIMENTO N°5 (​Diálisis de afuera hacia adentro)

Materiales usados:

● agua destilada
● 1L solución de Lugol
● 2 beaker de 500 ml
● pabilo
● 1 buche limpio de pollo
● 40 ml de solución de almidón al 1%
● palo de anticucho
● embudo

Procedimiento:
1. Primero sea ata con un pedazo de pabilo un extremo del buche, mientras que
por el otro extremo con ayuda de un embudo se añaden 40 ml de solución de
almidón al 1%.
2. Luego se procede a cerrar el orificio con un pedazo de pabilo, atándolo a un
palo de anticucho para que este se encuentre colgando en el beaker.
3. En dicho beaker colocar 150 ml de agua con algunas gotas de lugol hasta
que este se torne de un color dorado.
4. Dejar reposar durante 30 minutos

EXPERIMENTO N°3​ (Diálisis de adentro hacia fuera)

Materiales usados:

● agua destilada
● 100 ml de nitrato de plata
● 2 beaker de 500 ml
● 2 tubos de ensayo
● pabilo
● 1 buche limpio de pollo
● 40 ml de solución de NaCl
● 1 huevo
● 100 ml de reactivo Biuret
● 1 embudo
● 2 palitos de anticucho

Procedimiento:

1. Empecé con un pabilo atando un extremo del buche y por el otro fui
agregando 40 ml de solución de cloruro de sodio al 30% y los 40 ml de
solución de albúmina al 0.5%.
2. En un Beaker de 100 ml, eché 10 ml de clara de huevo y los 90 ml restantes
de agua, luego mezclé con la ayuda de un palito. Cerré con el pabilo el
extremo que quedó abierto y dejé un asa de pabilo para más adelante
sujetarlo. Luego en el Beaker de 500 ml eché 300ml de agua destilada, luego
sumergí el buche apoyándolo con el palo de anticucho, dejé reposar por 30
min
3. Pasados los 30 min extraje 6 ml de la mezcla contenida en el buche y del
Beaker para colocarlos en dos tubos de ensayo rotulados para diferenciarlos.
Finalmente, agregué 4 gotas de reactivo de Biuret y 5 gotas de solución de
Nitrato de Plata, respectivamente.
RESULTADOS
EXPERIMENTO N° 1 ​(elodea)
SOLUCIÓN ISOTÓNICA
ESPECIE: EUCARIOTA VEGETAL, ELODEA SP
AUMENTO: 400X
SOLUCIÓN: NaCl 0.2%
OBSERVACIÓN: En esta imagen se puede ver como las concentraciones del soluto
son iguales en ambos lados de la membrana, en donde el movimiento neto es cero
haciendo que la célula se mantenga en su estado normal.

SOLUCIÓN HIPERTÓNICA
ESPECIE: ECUARIOTA VEGETAL, ELODEA SP
AUMENTO: 400x
SOLUCIÓN: NaCl 0.8%
OBSERVACIÓN: En esta imagen se puede apreciar como la célula pierde agua y
sufre el fenómeno denominado plasmólisis al separarse la membrana celular de la
pared celular.
SOLUCIÓN HIPOTÓNICA
ESPECIE: EUCARIOTA VEGETAL, ELODEA SP
AUMENTO: 400x
SOLUCIÓN: NaCl 5%
OBSERVACIÓN: En esta imagen se puede ver como el agua entro a la célula
causando que se expanda, en donde la vacuola se llena de agua ocurriendo un
fenómeno llamado turgencia.

EXPERIMENTO N°2 (​Papa)

• Se observará cómo los diferentes tipos de soluciones afectan el equilibrio y el


funcionamiento de las células vegetales.
• La osmolaridad se expresa como moles de soluto por litro de solución. mientras
NaCl 0.2 %
1.60g. 1.80g
NaCl 0.8 %
1.95g. 2.05g
NaCl 5 %
1.30g 1.10g
Más alta es la osmolaridad, mayor es la concentración de soluto
Textura inicial : húmeda, porosa, media lisa
NaCl 0.2%: poroso, con textura, medio rugoso
NaCl 0.8%: rugoso
NaCl 5%: lisa, esponjosa, flexible

EXPERIMENTO N°3 (​Glóbulos rojos)

I. En esta tabla se relaciona el tipo de fenómeno con el tipo de solución a la que


está expuesta la célula

tipo de solución NaCl 0.2% NaCl 0.9% NaCl 5%


medio hipotónico medio isotónico medio hipertónico

fenómeno Lisis comportamiento Crenación


normal

EXPERIMENTO N°4​ (​ ​Difusión- factor temperatura)

Luego de observar el procedimiento realizado por el profesor, obtuvimos los


siguientes resultados:
I. Esta tabla grafica la velocidad de difusión del Azul de metileno en agua a
diferentes temperaturas.

AGUA A AGUA A 22°C AGUA A 80°C


4°C

VELOCIDAD DE Lento Normal Rápido


DIFUSIÓN

EXPERIMENTO N°5 ​(Dialisis de adentro hacia afuera)

Después de haber realizado el procedimiento descrito y haber hecho las


correspondientes observaciones, obtuvimos los siguientes resultados:
I. Tabla de color de almidón antes y después de la aplicación del lugol

COLOR INICIAL COLOR FINAL

ALMIDÓN AL 1% Blanquesino Blanquesino

EXPERIMENTO N°6​ ​(Diálisis de adentro hacia afuera)

Después de haber realizado el procedimiento descrito y haber hecho las


correspondientes observaciones, obtuvimos los siguientes resultados:

I. Tabla del color de la albúmina antes y después de la aplicación del Biuret


(​C2H5N3O2)​.

COLOR INICIAL COLOR FINAL

ALBÚMINA AL Transparente Violeta


0.5%

II. Tabla de la apariencia del agua destilada en la cual se encontraba sumergido


el buche de pollo antes y después de haber agregado el nitrato de plata.

APARIENCIA APARIENCIA
INICIAL FINAL

AGUA Transparente Turbio


DESTILADA
ANÁLISIS DE DISCUSIÓN

EXPERIMENTO N°1 (elodea)

Se observó los fenómenos (Isotónico, hipotónico e hipertónico) que sufrieron


las 3 hojas de elodea que fueron expuestas a una solución de NaCl. ​Una
solución hipotónica (0.2%) contiene menos soluto (por lo tanto, más agua)
que el citoplasma de las células. Por lo tanto, al colocar las células
cremonadas de Elodea en una solución hipotónica (100% de agua), se
produce un movimiento del agua hacia las células que produce el
hinchamiento de las células. El movimiento del agua hacia las células
plasmolizadas produce un aumento en la presión de la turgencia y las células
se expanden y fuerzan a la membrana plasmática contra las paredes
celulares. Las celdas no se romperán porque su presión de turgencia no es lo
suficientemente fuerte como para romper las paredes.Una solución
hipertónica (5%) es una solución que contiene más (hiper) solutos que el
citoplasma de la célula. Por lo tanto, una solución hipertónica tiene menos
agua que la célula y el agua se mueve (se difunde) fuera de la célula. A
medida que el agua sale de las celdas, se pierde la presión de la turgencia y
las membranas del plasma se desprenden de las paredes de las células a
medida que las mismas se encogen. mientras que en una solucion isotonica
(0.9%) su comportamiento y tamaño es normal.

EXPERIMENTO N°2 (papa)

Se observó en la Solanum tuberosum la ósmosis, en los tres medios que fue


expuesta. Según la concentración de NaCl de 0.2 %, 0.5 % y 0.8%; las
células de la ​Solanum tuberosum​ pueden fijar o desalojar agua de su medio.
En el medio hipotónico (0.2%) se observó que la papa gano peso (0.20g) ya
que el agua fue absorbida por las células de la papa aumentando su peso,por
lo cual su textura es porosa y media rugosa, ya que al ganar peso e
hincharse la verdadera textura de la papa será más notoria..
En el medio isotónico (0.8%) se observó que la papa gano peso, lo cual no
debe ocurrir ya que siendo un medio isotónico el peso se debió mantener
estable en relación al peso inicial siendo 1.95 y el peso final 2.05, ganando de
esta manera 0.10g de peso lo cual se puede deber a una mala rotulación o
pesada de la papa, por lo cual su textura es rugosa ya que igual ganara peso
como en el medio hipotónico. En el medio hipertónico (5%), se observó un
pérdida de masa de 0.20g lo cual se debe a la deshidratación de las celulas
de la papa, por lo cual su textura se convierte en lisa, esponjosa ya que el
agua va a salir.

EXPERIMENTO N°3 (glóbulos rojos)


Los glóbulos rojos normales (glóbulos rojos o eritrocitos) son anucleados y
aparecen como pequeños discos bicóncavos. Contienen principalmente
hemoglobina que les da una coloración rojiza. Las membranas plasmáticas
de los glóbulos rojos son extremadamente frágiles y hacen que las células
sean ideales para el estudio de los efectos de la ósmosis. El manejo de
sangre humana no filtrada en el laboratorio requiere estrictos requisitos de
seguridad y no se recomienda. Las soluciones que contienen la misma
concentración de solutos que el citoplasma se llaman soluciones isotónicas (o
solución salina normal). Dado que la solución que rodea las células y el
citoplasma contiene la misma concentración de solutos, contienen las
mismas concentraciones de agua y no hay movimiento neto de agua dentro o
fuera de la célula. Por lo tanto, las células mantienen su forma normal. Una
solución hipertónica contiene más soluto (por lo tanto, menos agua) que el
citoplasma de las células. Por lo tanto, la colocación de glóbulos rojos
normales en una solución hipertónica provoca el movimiento del agua fuera
de las células, dando como resultado la formación de crena. Los glóbulos
rojos crematizados se caracterizan por tener membranas festoneadas
(surcadas). Cuando un RBC pierde agua, su membrana plasmática se pliega
sobre sí misma y da como resultado una apariencia "arrugada", "festoneada"
o "arrugada" llamada "crenada". Una solución hipotónica contiene menos
soluto (por lo tanto, más agua) que el citoplasma de las células. Por lo tanto,
la colocación de glóbulos rojos normales en una solución hipotónica (100%
de agua) provoca el movimiento del agua hacia las células, lo que provoca la
hinchazón y la lisis de las células. A medida que los glóbulos rojos se
hinchan, el aumento de la turgencia (presión) produce la formación de
pequeños desgarros (lisis) en las membranas plasmáticas. Las lágrimas
permiten que la hemoglobina comience a lavarse fuera de las células, dando
como resultado una pérdida de densidad y color, o "células fantasmas". Las
células se vuelven totalmente transparentes y producen una solución
transparente de hemoglobina, membranas plasmáticas y agua de color rojo.
Para un efecto más dramático, en lugar de utilizar glóbulos rojos normales,
las siguientes fotografías y videos muestran células crenadas expuestas a
una solución hipotónica.
EXPERIMENTO N°4: La velocidad de difusión aumentó a medida que la
temperatura aumentó y esto se debió probablemente a un incremento en la
actividad de las moléculas. Parecería ser que los incrementos de temperatura
dados causan incrementos constantes en la velocidad de difusión.

EXPERIMENTO N°5
I. Tabla de color de almidón antes y después de la aplicación del lugol

COLOR INICIAL COLOR FINAL

ALMIDÓN AL 1% Blanquesino Blanquesino

Los resultados obtenidos en este experimento no fueron los esperados, ya


que como se observa en la tabla elaborada el lugol no ingresa al buche, lo
cual se demuestra ya que este no toma el color dorado característico del
lugol. este resultado erróneo se puede deber a la falta de limpieza del buche
teniendo gran presencia de grasa,evitando así el paso del lugol por la
membrana de las células del buche.

EXPERIMENTO N°6
I. Tabla del color de la albúmina antes y después de la aplicación del Biuret
(​C2H5N3O2)​.

COLOR INICIAL COLOR FINAL

ALBÚMINA AL 0.5% Transparente Violeta

Esta primera tabla de resultados del experimento 2 indica un cambio de color


drástico al agregar unas gotas de Biuret. Con este experimento se espera
que la proteína, siendo una macromolécula, no se difunda a través de la
membrana ya que la Diálisis es solo de moléculas de bajo peso molecular
incluyendo iones. El Biuret es un indicador de presencia de proteínas. Ya que
las proteínas no pasaron a través del buche de pollo hacia el agua destilada
que se encuentra al exterior de esta, el tubo de ensayo contiene la proteína y
se comprueba cuando el color del Biuret cambia de un color celeste a un
violeta.
II. Tabla de la apariencia del agua destilada en la cual se encontraba
sumergido el buche de pollo antes y después de haber agregado el nitrato de
plata.

APARIENCIA INICIAL APARIENCIA FINAL

AGUA DESTILADA Transparente Turbio

El agua destilada se obtiene a partir de la Destilación, técnica de Purificación


para separar mezclas homogéneas, es decir solo es H​2​O, sin presencia de
iones ni sales. El nitrato de Plata es un indicador de iones. Sin embargo,
cuando agregamos las gotas de AgNO​3 al Agua destilada, esta muestra un
precipitado de un tono lechoso que nos da a entender que el NaCl se difundió
desde el buche de pollo al agua destilada por ser moléculas de bajo peso
molecular.

Reacción Química:
AgNO​3​ +NaCl = NaNO​3​ + AgCl

*En el producto de la Reacción muestra una que el AgNO​3 afinidad por los
iones.
CONCLUSIÓN

Experimento 1 (elodea )

● solución 0.2% : la vacuola se hinchó considerablemente


● solución 0.8% : no hubo cambio alguno en la célula
● solución 5% : la célula se encogio

Experimento 2 ( eritrocitos )

● solución 0.2%: la célula se hincho hasta el punto de romperse


● solución 0.9%: la célula no tuvo cambio
● solución 5%: la célula se deshidrato

Experimento 3 (papa)

● solución 0.015%: la papa se volvió más áspera y por ende aumentó su peso
● solución 0.15%: la papa aumentó un poco de peso
● solución 0.30%: la papa se volvio mas blanda y pesaba menos

Experimento 4( temperatura)

● la difusión es mas rapida dependiendo a las temperaturas altas


● la difusión se ve afectada con temperatura fria esta hace que sea mas lenta

Experimento 5 ( buche )

● el buche no fue correctamente limpiado de la capa de grasa que contiene por ende
no llegó a colorar.
Bibliografía

● Alberts Bruce, Johnson Alexander, Lewis Julian, Raff Martin, Roberts Keith, Walter
peter.Biología molecular de la celula.España.Editorial Ediciones omega S.A,2010

● Bibliografía: Herrera Rivera Shirley, M., Herrera Rivera Shirley, M. and perfil, V.
(2018). PERMEABILIDAD. [online] Membranascelulares.blogspot.pe. Available at:
http://membranascelulares.blogspot.pe/2011/04/permeabilidad.html [Accessed 25
Apr. 2018]

● Botanica.cnba.uba.ar. (2018). Transporte de Membrana. [online] Available at:


http://www.botanica.cnba.uba.ar/Pakete/3er/LaCelula/TransportedeMembrana.htm
[Accessed 25 Apr. 2018].