UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO

PRACTICA Nro. …. CULTIVO DE VIRUS EN

HUEVO EMBRIONADO
MICROBIOLOGIA E INMUNOLOGIA II

ANTECEDENTES
En la década del 50, el hospedador estándar para
par a
cultivo de muchos virus fue el huevo embrionado de
gallina.
A pesar que actualmente esta técnica ha sido
sustituida por cultivos celulares, continua usándose
para aislamiento y producción de vacunas
 SISTEMAS VIVOS
Cultivo celular
Huevos embrionados
Animales
-EFECTOS
Efecto citopatico ECP
Enfermedad/muerte
Hemoaglutinacion
 Métodos de propagación
Huevos embrionados
• Este sistema se usa para propagación viral con
fines diagnósticos y de investigación.
• Para fines diagnósticos la inoculación de
animales es un medio para detectar virus en
muestras clínicas, como el virus de la rabia en
ratones lactantes.
• Actualmente el uso de animales experimentales
como hospederos para propagación viral está
limitado por razones éticas.
• La membrana coreoalantoidea y el saco
amniotico son sustratos adecuados y
sensibles para el crecimiento de muchos
poxvirus, virus de la influenza.
• El alantoides permite obtener
rendimientos elevados del virus de la
influenza y newcastle.
 ALGUNOS EJEMPLOS DE CULTIVO DE VIRUS
EN HUEVOS EMBRIONADOS
VIA DE INOCULACION VIRUS SIGNOS DE
CRECIMIENTO

Saco vitelino Virus de la bronquitis Enanismo del embrión

V. de la encefalomielitis Encefalitis
Membrana Ortopoxvirus Pústulas
coreoalantoidea

Amniotica Virus influenza Hemoaglutinación

Alantoidea Virus influenza Hemoaglutinación

V. Del Newcastle
Intravenosa V. De la lengua azul Muerte del embrión
OBJETIVOS
Familiarizar al estudiante con las técnicas de inoculación de
agentes virales en huevos embrionados

MATERIALES:
• Huevos embrionados de 6 a 11 días
• Jeringa de tuberculina.
• Estufa.
• Incubadora
• Algodón.
• Cera o parafina
• Muestras de virus en dilución
• Mechero bunzen
• Ovoscopio casero
 METODO DE INOCULACION DE LOS VIRUS
• Seleccione los huevos embrionados de 6 a 11 días
de incubación (verificar por transluminación)
• Ordene los huevos en el soporte, con la cámara de
aire hacia arriba, rotular.
• Con algodón embebido de alcohol desinfectar
• Perfore con un punzón al centro de la cámara de
aire.
• Con una jeringa de 1 ml. Cargue el material a
inocular de la dilución preparada.
• Con el huevo sobre la lampara, inserte la aguja en
dirección del objetivo.
• Retire la aguja del huevo y selle el orificio con
parafina u otro materia no toxico.
• Incube los huevos inoculados a 33 ºC por tres días.
1.-Seleccione los huevos embrionados de 6 a 11 días de
incubación (verificar por transluminación)
2.- Ordene los huevos en el soporte, con la cámara de aire
hacia arriba, rotular.
Con algodón embebido de alcohol desinfectar
Perfore con un punzón al centro de la cámara de aire .
- Con una jeringa de 1 ml. Cargue el material a
inocular de la dilución preparada.
- Con el huevo sobre la lampara, inserte la aguja
en dirección del objetivo.
7.1.- Miraje durante la incubación:
1. Ninguna señal de desarrollo = huevo no fértil.
2. Fértil con vasos sanguíneos.
3. Mancha roja o negra = muerto precozmente.
4. Embrión con anillo rojo = muerto precozmente.
5. Embrión vivo con el pico en la cámara de aire = eclosión dentro
de 48 horas.
6. Evolución normal de la cámara de aire en función de los días
de incubación