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Cromatografía en Columna

Identificación de los componentes de una mezcla

[Mauricio Esteban Tapia]1 , [Nicolas David Torres Rico]2 Grupo 6

2 de Octubre de 2018

Resumen

La cromatografía es un método de separación que se basa en diferencia de velocidades con que los componentes de una mezcla viajan por una fase estacionaria bajo la influencia de una fase móvil, en un proceso de adsorción-desorción. Existen varios tipos de cromatografía, entre estos, la cromatografía en columna, en la cual se hace pasar el eluyente por acción de la gravedad por una columna vertical de la fase estacionaria. Para acelerar un poco el proceso se puede impulsar el eluyente con aire de una bomba.

Se realizó la separación de una mezcla de rojo de metilo y sudán III por el método de la separación de cromatografía en columna, para lo que se usó diclorometano y acetona como eluyentes. Palabras clave:​[].

Introducción 1 2

La cromatografía en columna es un tipo de cromatografía, que se destaca entre las demás, ya que permite separar grandes cantidades de material. Este método separa los componentes de una mezcla con base en la afinidad que tengan estos por la fase móvil o por la fase estacionaria.

El tipo de revelado en la cromatografía en columna es descendente, es decir, que, el líquido desciende por acción de la gravedad a lo largo de toda la columna y es recogido al final del recorrido.

Al igual que en la cromatografía de capa delgada, también se debe elegir adecuadamente la fase estacionaria y la fase móvil. Respectivamente, en la primera es importante el tipo de adsorbente a emplear, su solubilidad, reactividad y acidez, por ejemplo, la sílica gel es una sustancia inerte y un buen adsorbente para sustancias polares; en la segunda, los componentes de la mezcla no deben ser solubles en el eluyente, además se debe comparar su polaridad con el eluyente para obtener mejores resultados en la separación.

Como se mencionó anteriormente, el líquido desciende por la columna gracias a la gravedad,

1 Estudiante de Ingeniería Química, Universidad Nacional de ​Colombia, Facultad de Ingeniería, Dpto. Ingeniería Química y Ambiental.

Colombia. E-mail: metapiaa@unal.edu.co.
2

Estudiante de Ingeniería Química, Universidad Nacional de ​Colombia. Facultad de Ingeniería, Dpto. Ingeniería Química y Ambiental. Colombia. E-mail: nidtorresri@unal.edu.co.

pero este proceso puede ser bastante demorado, por lo que en ocasiones se usa una bomba de aire para impulsar el eluyente y que la separación de los componentes se dé en menor tiempo. En caso de ser utilizada la bomba se debe tener cuidado de no hacerlo a una tasa muy alta, ya que el aire podría llegar hasta el adsorbente y secarlo, lo que causaría errores en la experimentación.

Materiales y Método

Método

Para la cromatografía en columna se realizó el procedimiento descrito en el diagrama de flujo a continuación (Diagrama de flujo 1).

el diagrama de flujo a continuación (Diagrama de flujo 1). Diagrama de flujo 1. D ​

Diagrama de flujo 1. Diagrama de flujo cromatografía en columna​.

Durante la práctica se usaron dos eluyentes diferentes por lo que era necesario hacer el cambio de vaso recolector, además de ser necesario el cambio para recoger los componentes de la mezcla, para el cambio de vaso únicamente se debe cerrar la llave de la columna y cambiarlo.

Materiales y Reactivos

De la evaluación de la mezcla por capa fina se conocía que los componentes de la mezcla eran rojo de metilo y sudán III, por lo que utilizaron diclorometano y acetona como eluyentes. La fase estacionaria utilizada fue silica gel.

El montaje usado para la práctica se muestra en seguida en la Figura 1.

para la práctica se muestra en seguida en la Figura 1. Figura 1​ . Montaje cromatografía

Figura 1​. Montaje cromatografía en columna ​[6]

Resultados

Para la cromatografía primero se agregó diclorometano y luego acetona como eluyente, para separar los dos componentes de la mezcla.

Al realizar la comprobación por medio de una cromatografía en capa delgada de los colorantes obtenidos en la parte inferior de la columna se encontró lo siguiente:

En la figura 2. ‘Muestra’ se refiere a la cromatografía de la solución problema inicial, ‘Patrón’ a una solución patrón del colorante y, ‘columna’ a la cromatografía de los componentes obtenidos en la cromatografía en columna.

los componentes obtenidos en la cromatografía en columna. Figura 2. R ​ esultados cromatografía en columna.

Figura 2. Resultados cromatografía en columna.

El punto a 1.2 cm que se ve en la comprobación del colorante sudan III, es rojo de metilo, componente de la muestra problema inicial.

Análisis y Discusión

En la cromatografía de columna se procedió a introducir la muestra número 6, la cual mediante experimentos previos se conocía era una mezcla de Rojo de metilo y Sudán III, así se dispuso a utilizar Diclorometano (DiClmet) como primer eluyente de la mezcla, lo observado fue el desplazamiento sobre toda la columna de un tono anaranjado mientras una sustancia de tono rojo se retenía en la superficie de la columna de sílica, se esperaba que la sustancia desplazada por el DiClmet fuera el Sudan III debido a que tienen índices de polaridad cercanos (3,4) y se retuviera el rojo de metilo por su polaridad superior (5,0).

Para generar el movimiento del segundo componente se realizó el cambio de eluyente de DiClmet a Acetona (Acet) el cual arrastró con facilidad la muestra debido a su buena afinidad según la serie eluotrópica.

Las sustancias obtenidas se concentraron y fueron sometidas a una comparación por cromatografía de capa fina obteniendo los resultados mostrados en la Figura 2 de la sección de resultados, donde se comparar con lo obtenido al utilizar los mismos solventes en la muestra inicial y en una solución patrón de cada una de las substancias obtenidas

Mediante los datos obtenidos posterior a la cromatografía de columna y de capa fina podemos encontrar los valores de Rf y h Rf reportados en la Tabla 1.

los valores de Rf y h R f reportados en la Tabla 1. Tabla 1.​ Valores

Tabla 1.​Valores experimentales de Rf y h

Rf

.

Con estos valores para cada uno de los solventes podemos decir que en el DiClmet el primer punto no corresponde a sudán III, corresponde al otro componente Rojo de metilo, este permanece en el punto de aplicación debido a que la afinidad no es la suficiente para arrastrarlo, efecto evidenciado igualmente en la cromatografía de columna; el segundo valor obtenido evidentemente por la igualdad en los valores se hace evidente que se trata de Sudán III.

Para el caso de la acetona se presenta un valor distinto en cuanto a lo obtenido por la muestra y el patrón, esto puede deberse a que la cantidad obtenida después de la cromatografía de columna disminuye o podía contener trazas de un contaminante lo que causaría la disminución del desplazamiento, a pesar de esto mediante el color presente evidenciado en el laboratorio se podía asegurar que se trataba de Rojo de metilo, el primer punto que fue arrastrado en su totalidad por el eluyente se trata de Sudán III.

Así con estos valores podemos decir que la identificación y corroboración de lo obtenido en la practica de cromatografia de capa fina son consistentes y por lo tanto similares a nivel comparativo, permitiéndonos reafirmar la determinación de la composición de la muestra 6, la cual es Sudán III y Rojo de metilo.

Cuestionario

i. Un colorante desconocido se piensa que puede ser azul de metileno, ¿Cómo se podría comprobar esta suposición utilizando un procedimiento basado en una técnica cromatográfica?

Gracias a que se sospecha de una sustancia en particular se podría utilizar la cromatografía en columna para separarlo, utilizando como

eluyente una sustancia con la cual el Rf del azul de metileno sea alto, es decir, que la arrastre facil, posterior a eso realizar una cromatografía de capa fina utilizando como patrón una solución de azul de metileno y como eluyente el mismo de la cromatografía de columna, comparando si lo obtenido es o no lo esperado.

ii. ¿​Qué debe hacerse para encontrar el eluyente adecuado para una sustancia en una cromatografía en columna?

Se debe estudiar la polaridad y solubilidad de las sustancias que se van a someter al procedimiento, ya que el arrastre, además de darse por gravedad, se da por el mismo efecto de la polaridad en la cromatografía de capa fina.

iii. ​La recuperación cuantitativa del producto principal de la práctica, sería más completa si se recogieran fracciones mayores o menores de 8 mL.¿Por qué?

La recuperación cuantitativa del producto principal de la práctica sería más completa si se recogieran fracciones inferiores a 6 mL. Esto permite dos cosas: la primera de ellas es que al realizar el seguimiento de la separación por cromatografía en columna por cromatografías sucesivas en capa fina sepamos con mayor precisión en qué fracciones se encuentran las partes mayoritarias de sustancia y así recuperar la mayor parte posible.

La segunda es que al juntar las fracciones para realizar la destilación y obtener la sustancia como sólido puro tengamos menor cantidad de eluyente, lo que permite la realización más rápida y más eficiente del producto.

iv. ​Indique algunas de las aplicaciones de la cromatografía de adsorción en columna y capa fina.

En la identificación de sustancias en la industria farmacéutica se utiliza. En la separación de colorantes. Separación de componentes de una síntesis orgánica.

plantas

1.

Separaciones

de

componentes

de

medicinales.

2. Separación de componentes de una síntesis orgánica.

3. Separación de colorantes.

4. Separación e identificación de hioscina y de

morfina.

5. Separación de ácido acético, alcohol etílico y

metil-etil cetona.

6. Separación e identificación de los compuestos

intermedios de una síntesis orgánica, por ejemplo en la síntesis del naftaleno, identificación de ácido ftálico, anhídrido ftálico, benceno.

7. En la producción sintética de acetaminofén,

identificación de la amina de la N-acetil benzoquinona.

8. Identificación de levo-alfa-ácido aminoadípico, durante la biosíntesis de penicilina.

9. Identificación de 8-nitroisoquinolina, durante

la síntesis de Ciprofloxacina, un antibiótico.

v. ​Escriba una lista de eluyentes utilizados en

cromatografía en columna en orden de polaridad decreciente (anote su bibliografía).

en orden de polaridad decreciente (anote su bibliografía). Fieser, L. F., & Williamson, K. L. (1979).

Fieser, L. F., & Williamson, K. L. (1979). ​Organic experiments​. DC Heath.

vi. ​¿Cuál es la diferencia entre la cromatografía

en capa fina y la cromatografía en papel?

Igual que la realizada en papel, la cromatografía en capa fina se basa en la distribución en dos fases, la estacionaria, compuesta por una capa de hidratación y la móvil, que se trata de un solvente orgánico. La única novedad radica en el soporte, ya que no es una hoja de papel, sino una capa de 0,1 a 1 mm de óxido de silícico o celulosa, apoyada en un subsoporte de cristal.La capa se aplica manualmente mediante un aparato que deja una ranura regable por la que sale la pasta denominada Silicagel, este aparato la vamos deslizando por la placa a velocidad constante para

conseguir la textura deseada, no hay que decir que a mayor velocidad menor grosor de la capa. Siempre se realiza de forma ascendente, principalmente porque el soporte es rígido. La cromatografía en capa fina aguanta tratamientos de visualización mucho más potentes debido al sub soporte y que es más rápida, pudiendo terminar la corrida en una media hora.

vii. ​Indique la toxicidad de las sustancias que utilizó y cómo se podrían desechar.

Rojo de Metilo:

que utilizó y cómo se podrían desechar. Rojo de Metilo: Toxicidad:​ 10 µmol/L, no se presentan

Toxicidad:​10 µmol/L, no se presentan pruebas en humanos, no clasificado como cancerígeno.

Desecho: ​Dejar los productos en los recipientes originales, no mezclar residuos, recipientes sucios como el propio producto, residuos eliminados de acuerdo a las normas locales.

Sudán III:

eliminados de acuerdo a las normas locales. Sudán III: Toxicidad:​ Puede causar irritación en ojos, piel,

Toxicidad:​Puede causar irritación en ojos, piel, vías respiratorias y por ingestión.

Desecho:​Dejar los productos en los recipientes originales, no mezclar residuos, recipientes sucios como el propio producto, residuos eliminados de acuerdo a las normas locales.

Diclorometano

residuos, recipientes sucios como el propio producto, residuos eliminados de acuerdo a las normas locales. Diclorometano

Toxicidad: Sospechoso cancerígeno, 60,14 mg/l por inhalación.

Desecho: Dejar los productos en los recipientes originales, no mezclar residuos, recipientes sucios como el propio producto, residuos eliminados de acuerdo a las normas locales.

Acetona

residuos eliminados de acuerdo a las normas locales. Acetona Toxicidad: mg/kg cutaneo. Desecho: NO tirara a

Toxicidad:

mg/kg cutaneo.

Desecho: NO tirara a la alcantarilla, dejar los productos en los recipientes originales, no mezclar residuos, recipientes sucios como el propio producto, residuos eliminados de acuerdo a las normas locales.

viii. ​¿Qué fenómenos físico-químicos intervienen en una separación cromatográfica?.

En una separación cromatográfica se presenta como fenómeno físico las fuerzas de gravedad ( columna) atracción, arrastre y solubilidad, en cuanto a los fenómenos químicos se identifica los intercambios y arrastres iónicos, el efecto del pH.

ix. ​¿Qué es una serie eluotrópica?, ¿qué utilidad

tienen en cromatografía en columna?.

La serie eluotrópica se caracteriza por se una marcha donde se identifica el mejor eluyente para la cromatografía que se desea realizar, esta ordena por poder eluotropico a las sustancias que está relacionado con la polaridad.

Su importancia en la cromatografía de columna radica en que el solvente que se debe utilizar es el que mejor Rf obtenga en la marcha de la serie eluotrópica

x. ​Realice un cuadro comparativo entre la

cromatografía en columna y la de capa delgada.

20.000

76

mg/l

por

inhalación,

Cromatografía de columna.

Cromatografía de capa fina.

identificación

Identificación

individual

de

los

simultánea

de

los

componentes

en

la

componentes,

mezcla.

comparando

con

patrón.

Fase estacionaria en suspensión con el solvente

Fase estacionaria completamente seca y activada hasta el contacto con el solvente

Cambio rápido y fácil de eluyente para arrastre de la muestra

Prueba siempre individual de muestra-eluyente, mayor requerimiento de muestra.

Múltiples extracciones sobre la misma columna si esta se mantiene en buen estado

 

Uso único siempre, por cada ensayo se gasta una placa

Identificación más espaciada y detenida de las sustancias pertinentes

 

Complejidad del método por la cantidad de muestra debida a utilizar

Conclusiones

la

cromatografía de capa fina sobre la

muestra

principalmente mezcla de dos sustancias, Rojo de metilo y Sudán III.

es

Se

reafirma

6,

lo

su

obtenido

en

composición

Referencias

[1] Guerrero,C et Polania, W. 2015. Guías de laboratorio para un curso introductorio de química orgánica. Colombia .pp 39-44. [2]Truter, E. V., Morris, L. J., Criddle, W. J., Halpaap, H., & Shellard, E. J. (1965). Thin-layer chromatography. Proceedings of the Society for Analytical Chemistry, 2(7), 113-116. [3]Valcarcel Cases, M. (1988). TECNICAS ANALITICAS DE SEPARACION. Barcelona : Reverte S.A. [4]Stahl, E., & Chromatography, T. L. (1969). A Laboratory Handbook. Thin-layer chromatography,

p-669.

[5]H. H. Strain "Chromatographic Adsorption Analysis", Interscience Publ., Inc., New York (1942) [6]Cromatografía en columna, montaje. tomado

de:https://triplenlace.com/2012/08/24/cromatografí

a-en-capa-fina-casera-de-tinta-de-rotuladores-y-obt

ención-del-correspondiente-cromatograma-de-picos