ÍNDICE

I. FUNDAMENTO DEL METODO DE ANÁLISIS ........................................................... 2

II. DESCRIPCION DE LA TECNICA EMPLEADA ........................................................... 4
III. REACCIONES QUIMICAS IMPORTANTES ................................................................ 6
IV. DESCRIPCION DETALLADA DE LOS INSTRUMENTOS O APARATOS
USADOS ............................................................................................................................... 6
V. CÁLCULOS DETALLADOS, TABLA DE RESULTADOS Y TRATAMIENTO
ESTADÍSTICO .................................................................................................................... 8
VI. GRÁFICOS DE LOS EXPERIMENTOS ....................................................................... 11
VII. DISCUSIÓN DEL METODO EMPLEADO .................................................................. 12
VIII. DISCUSIÓN DE RESULTADOS OBTENIDOS ................................................... 12
IX. CONCLUSIONES ............................................................................................................. 12
X. RECOMENDACIONES ................................................................................................... 12
XI. BIBLIOGRAFÍA ............................................................................................................... 13
XII. ANEXOS ............................................................................................................................ 13

1
I. FUNDAMENTO DEL METODO DE ANÁLISIS

Los nitratos son iones formados por tres átomos de oxígeno, uno de nitrógeno y con una

carga negativa (NO3-), no tienen color ni sabor y se encuentran en la naturaleza disueltos

en el agua. Su presencia natural en las aguas superficiales o subterráneas es consecuencia

del ciclo natural del nitrógeno, sin embargo, en determinadas zonas ha habido una

alteración de este ciclo en el sentido de que se ha producido un aumento en la

concentración de nitratos, debido fundamentalmente a un excesivo uso de abonos

nitrogenados y a su posterior arrastre por las aguas de lluvia o riegos. Los nitratos pueden

ser producidos tanto por fuentes naturales como antropogénicas, siendo estas últimas las

responsables del importante aumento en su concentración observado en los últimos años.

Así, los residuos industriales constituyen una fuente importante de nitratos en las aguas,

siendo las industrias más contaminantes los mataderos, destilerías, azucareras, industrias

de levadura, de almidón, textiles y fertilizantes. Sin embargo, estas emisiones suelen estar

bastante controladas y son muy puntuales. Más preocupante es, en la actualidad, la

contaminación por nitratos provenientes de la agricultura y ganadería intensiva. En las

zonas donde se practica una agricultura intensiva se utilizan enormes cantidades de

abonos químicos, a los que se suman los abonos naturales que provienen de los

excrementos animales. Estos abonos suelen contener una cantidad importante de

compuestos nitrogenados, como los nitratos, que en proporciones adecuadas mejoran el

crecimiento de las plantaciones y aumentan su rendimiento. Sin embargo, cuando estos

compuestos se encuentran en cantidades demasiado altas para que sean absorbidos por

las plantas, se infiltran a través del suelo y alcanzan las aguas subterráneas, contaminando

pozos y acuíferos. Los nitratos constituyen la especie nitrogenada más abundante y de

mayor interés en todos los cuerpos de aguas naturales. Los nitratos suelen hallarse en

2
aguas naturales en concentraciones traza, mientras que en aguas residuales domésticas y

agrícolas pueden alcanzar niveles relativamente altos.

La determinación de los nitratos en el agua de consumo humano es importante porque

cuando estos se encuentran en concentraciones que sobrepasan los 10 ppm, pueden causar

una enfermedad infantil conocida como “metahemoglobinemia”, que se caracteriza por

la dificultad de la sangre para absorber oxígeno. Por otra parte, los nitratos, así como los

fosfatos, constituyen parte de los nutrientes esenciales para muchos organismos

autótrofos o fotosintéticos y en este sentido, su presencia en el agua, puede ocasionar

fenómenos de eutroficación en ríos y lagos.

Los nitratos, así como el amonio, constituyen indicadores apropiados de aguas residuales

domésticas. El primero, es típico de las aguas residuales domesticas frescas y es muy

móvil y estable en condiciones aeróbicas. El segundo también típico de aguas residuales

frescas, pero se evapora con facilidad y/o se absorbe fácilmente en el subsuelo.

Este método es aplicable a muestras limpias con bajo contenido de materia orgánica, tales

como las provenientes de plantas suministro y/o aguas subterráneas. Las mediciones se

realizan utilizando un fotómetro a 220 nm, para concentraciones inferiores a 10 mg/l,

rango para el cual se cumple la Ley de Beer.

Teniendo en cuenta que tanto la materia orgánica como el ion nitrato absorben energía

radiante a una longitud de onda de 220 nm y que la materia orgánica mas no el nitrato,

absorbe también a 275 nm, el método analítico realiza las mediciones a estas dos

longitudes de onda, con el objeto de corregir las primeras mediciones por la interferencia

que haya podido ocasionar la materia orgánica presente en la muestra. El grado de esta

corrección empírica se reacciona con la naturaleza y concentración de la materia orgánica

3
y puede variar a partir de un agua a otra. El método fotométrico es muy bueno para

muestras limpias y puede adaptarse bien para muestras con materia orgánica, siempre que

esta permanezca estable y constante. La filtración de la muestra se piensa para quitar

interferencia posible de partículas suspendidas.

II. DESCRIPCION DE LA TECNICA EMPLEADA

La técnica empleada mide directamente la absorbancia del analito o después de

que ha reaccionado con un reactivo y se forma un producto capaz de absorber la

radiación. La técnica tiene más restricciones, en particular con muestras complejas

porque pocas veces se puede encontrar una longitud de onda en la que solo se

absorba el analito. En ocasiones, las separaciones previas ayudan a eliminar las

especies que puedan absorber e interferir con la determinación

espectrofotométrica del analito. En otros casos, las interferencias se pueden

corregir con una segunda medición de absorbancia. Un ejemplo de este segundo

enfoque es la determinación de nitrato en muestras de aguas naturales. El ion

nitrato absorbe a 220 nm, y la materia orgánica disuelta también puede absorber a

esta longitud de onda. Para corregir las interferencias debidas a la materia

orgánica, se toma una segunda lectura de absorbancia a 270 nm, donde no absorbe

el nitrato. Aunque tome más tiempo a veces es preferible hacer una separación

previa para eliminar las especies que interfieren. También es frecuente tratar la

muestra con un reactivo selectivo, de modo que en la reacción se forme una

especie que absorba una región donde no haya interferencias.

a) Determinación del λmax del NO3-

4
  Se coloca en el compartimiento de muestra, la celda con patrón

intermedio, para posteriormente realizar el barrido en el programa, sin

manipular el equipo.

b) Determinar la λmax en la curva

 En el programa se graficará la curva del λmax, se debe seleccionar el punto

mas alto para tomar en cuenta este dato y luego seguir con los siguientes

pasos.

c) Grafica de la curva de calibración

 En este paso se seleccionará el modo, método utilizando el λmax que se

obtuvo, posteriormente se completo los datos para realizar la medición.

 Se coloca en el compartimiento de muestra, en la parte de adelante el

Blanco, registrando los valores en los casilleros del programa, y seguir con

los siguientes pasos.

 Finalmente colorar el patrón en el compartimiento de adelante, realizando

las lecturas con el programa para cada muestra y con todos los datos ya

obtenido se pasará a realizar la gráfica de absorbancia vs concentración

del patrón y la curva de calibración.

5
III. REACCIONES QUIMICAS IMPORTANTES

IV. DESCRIPCION DETALLADA DE LOS INSTRUMENTOS O APARATOS

USADOS

Espectrofotómetro UV – visible, Shimadzu 1700.

Podría decirse que las aplicaciones basadas en espectroscopia se dividen en dos

grandes categorías: Determinaciones analíticas y control de calidad rutinario de

preparaciones de muestras. El espectrofotómetro Shimadzu UV-1700 es adecuado

para ambos usos, ya que integra precisión, simplicidad y larga duración entre sus

características.

Probablemente el principal activo del

espectrofotómetro Shimadzu UV-1700 es

su resolución de 1 nm para el ancho de

banda espectral en el modo de exploración

(que puede ser un orden de magnitud menor

en un ajuste de longitud de onda fija). Dicha

precisión de longitud de onda da como

resultado una resolución más alta y una lectura más clara de los espectros de

absorbancia con respecto a otros instrumentos en la misma categoría. El amplio

rango de longitud de onda (190 a 1100 nm) y el rango fotométrico (Abs -0.5 a

+3.0) hacen que este espectrofotómetro sea bueno para muchos tipos diferentes de

ensayos que requieren excitación UV / VIS. La confiabilidad del

espectrofotómetro UV-1700 proviene también de una buena precisión fotométrica

y repetibilidad (± 0.002 y ± 0.001, respectivamente, en 0.5 ABS declarada por

6
Shimadzu). Vale la pena mencionar que la óptica de doble haz está vinculada a

los titulares de doble cubeta; esto permite la substracción de fondo en tiempo

real. Alternativamente, la línea de base se puede sustraer en base a una

computadora. Todo lo anterior en un espectrofotómetro que mide 550 x 470 x 380

mm y pesa 17 kg. El espectrofotómetro Shimadzu UV-1700 es compatible con

PC, pero no está controlado por computadora y tiene su propia pantalla LCD y

teclas de función.

Celdas de cuarzo.

Tienen dos ventanas claras y pulidas con grosor de la pared de 1.2mm.

Disponibles en vidrio óptico o cuarzo UV Spectrosil™. Todas las celdas incluyen

tapa de Teflón.

La base de las celdas con paso de luz de 1mm, 2m y 5mm es rectangular por lo

que existe la posibilidad que no queden fijas y posicionadas dentro del soporte de

celdas interno de su espectrofotómetro.

Balanza analítica.

Son balanzas diseñada para medir pequeñas masas, en un principio de un rango

menor del miligramo.

Pipeta volumétrica.

Son recipientes tubulares de vidrio, poseen un bulbo y se usan para transferir un

volumen definido del líquido.

7
 Fiolas.

Son recipientes de vidrio de cuello muy largo y angosto.

V. CÁLCULOS Y TABLAS

a) Preparación del patrón primario

14𝑔
𝐶𝑝𝑝𝑚 = 0.1825𝑔𝐾𝑁𝑂3 𝑥 𝑚𝑜𝑙 ∗ 103
101.11𝑔/𝑚𝑜𝑙𝐾𝑁𝑂3

𝐶𝑁𝑂3−𝑁 = 100𝑝𝑝𝑚

b) Preparación de Solución patrón intermedia

100𝑝𝑝𝑚𝑥𝑉 = 5𝑝𝑝𝑚100𝑚𝑙

𝑉 = 5𝑚𝐿

c) Soluciones para la curva de calibración

A partir de la solución patrón 5 ppm :

Diluimos hasta 0.1 ppm

5𝑝𝑝𝑚𝑥𝑉1 = 0.1𝑝𝑝𝑚𝑥50𝑚𝑙

𝑉1 = 1𝑚𝑙

Diluimos 0.2 ppm, 0.3ppm, 0.4ppm y 0.5ppm

d) Concentración NO3- de la muestra 1

De la curva de calibración

𝒀 = 𝟎. 𝟗𝟗𝟖 ∗ 𝑿 − 𝟎. 𝟎𝟓𝟕𝟔

Donde:

8
 X: concentración

Y: Absorbancia

0.024 = 0.988 ∗ (𝑋) − 0.0576

𝑪𝟏 = −𝟎. 𝟎𝟑𝟒𝒑𝒑𝒎

Como solo necesitamos el NO3- usamos un factor gravimétrico

Entonces:

𝐶𝑁𝑂3 = 𝐶𝑁𝑂3−𝑁 ∗ 𝑓𝑔

62𝑔/𝑚𝑜𝑙
𝐶𝑁𝑂3 = −0.034 ∗
14𝑔/𝑚𝑜𝑙

62
𝐶𝑁𝑂3 = −0.034 ∗
14

𝐶𝑁𝑂3 = 0.1505𝑝𝑝𝑚

Concentración NO3- de la muestra 2

0.042 = 0.988 ∗ (𝑋) − 0.0576

𝑪𝟐 = 𝟎. 𝟎𝟏𝟓𝟔𝒑𝒑𝒎

Como solo necesitamos el NO3- usamos un factor gravimétrico

Entonces:

𝐶𝑁𝑂3 = 𝐶𝑁𝑂3−𝑁 ∗ 𝑓𝑔

9
 62𝑔/𝑚𝑜𝑙
𝐶𝑁𝑂3 = 0.0156 ∗
14𝑔/𝑚𝑜𝑙

62
𝐶𝑁𝑂3 = 0.0156 ∗
14

𝐶𝑁𝑂3 = 0.069𝑝𝑝𝑚

Concentración NO3- de la muestra 3

0.185 = 0.988 ∗ (𝑋) − 0.0576

𝑪𝟑 = 𝟎. 𝟏𝟐𝟕𝒑𝒑𝒎

Como solo necesitamos el NO3- usamos un factor gravimétrico

Entonces:

𝐶𝑁𝑂3 = 𝐶𝑁𝑂3−𝑁 ∗ 𝑓𝑔

62𝑔/𝑚𝑜𝑙
𝐶𝑁𝑂3 = 0.127 ∗
14𝑔/𝑚𝑜𝑙

62
𝐶𝑁𝑂3 = 0.127 ∗
14

𝐶𝑁𝑂3 = 0.562𝑝𝑝𝑚

10
VI. GRÁFICOS DE LOS EXPERIMENTOS

11
VII. DISCUSIÓN DEL METODO EMPLEADO

 El método espectrofotométrico ultravioleta, no es un método específico para la

determinación de ion nitrato en agua. Este método presenta la dificultad de no

ser adecuado para el estudio de aguas contaminadas, es decir sólo es válida su

aplicación para muestras de agua con bajo contenido en materia orgánica.

 Entre los métodos que aparecen para la cuantificación de nitratos en aguas, se

pueden citar: Cromatografía iónica, método espectrofotométrico ultravioleta

selectivo, método del electrodo de nitrato, método de reducción de cadmio,

método del cloruro titanoso, método automatizado de reducción de hidracina,

método automático de reducción de cadmio.

 Debido a que el espectrofotómetro UV- Visible, Shimadzu 1700 tuvo fallas en

las lecturas, la experiencia no fue realizada con éxito lo cual influye en las

discusiones de dicho método perjudicando los resultados de la experiencia.

VIII. DISCUSIÓN DE RESULTADOS OBTENIDOS

IX. CONCLUSIONES

X. RECOMENDACIONES

• Debemos de conocer la concentración de nitratos presentes en nuestras

muestras (aguas cielo, vida, san mateo), para así saber la cantidad que se

necesitara para el tratamiento de cada muestra.

• Ser cuidadosos al momento de preparar los patrones y el blanco, para ello

es recomendable rotularlos, esto ayudara a evitar confusiones con los patrones

entre sí.

12
 • Tenemos que limpiar las paredes de las celdas con papel tisú y cogerlas

solo por la parte superior, para así tratar de generar un menor error al momento de

las determinaciones.

• Asegurarse de que el software UV PROBE no se encuentre en diferentes

condiciones y tratar de seguir lo que la guía de laboratorio nos indique, en caso de

que no podamos pedir apoyo a la profesora, esto nos ayudara a poder manejar de

forma correcta el software.

XI. BIBLIOGRAFÍA

• Skoog, West, “Fundamentos de Química Analítica”, octava edición,

Editorial International Thomson S.A., año 2005, Págs.: 779-785

• https://www.lenntech.es/nitratos.htm

• Dario Coletti, PhD, Research Associate, Department of Histology and

Medical Embryology, University of Rome, La Sapienza

XII. ANEXOS

13
14
15
 ABSORBANCIA VS CONCENTRACIÓN Mn
1
0.908
0.9

0.8

0.7

y = 0.0451x
ABSORBANCIA

0.6

0.5 0.462 R² = 0.9997

0.4

0.3
0.176
0.2

0.1

0
0 5 10 15 20 25
CONCENTRACIÓN

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