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Cadena Respiratoria

INTRODUCCIÓN

La creatina es un químico producido por el cuerpo y que se utiliza para


proporcionarle energía principalmente a los músculos. Este examen se realiza para
ver qué tan bien funcionan los riñones. Si la función renal es anormal, los niveles
de creatinina se incrementan en la sangre, debido a que se elimina menos
creatinina a través de la orina. La bilirrubina es un pigmento amarillento que se
encuentra en la bilis, un líquido producido por el hígado. Las grandes cantidades de
bilirrubina en la sangre pueden llevar a que se presente ictericia, una coloración
amarilla en la piel, las membranas mucosas o los ojos.

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PRÁCTICA DE LABORATORIO N°10:


CREATININA Y BILIRRUBINA

I. OBJETIVOS

 Aprender el fundamento y proceso bioquímico para una adecuada determinación de


creatinina y bilirrubina.

 Empoderarnos de conocimiento sobre factores de riesgo que influyen en los niveles


elevados de Bilirrubina.

II. DETERMINACIÓN DE CREATININA

2.1. Marco Teórico:

La creatinina es un derivado cíclico formado


espontáneamente de la creatina.
La creatinina es filtrada principalmente de la sangre por los
riñones, aunque una cantidad pequeña es activamente
secretada por los riñones en la orina. Hay poco o nada de la
reabsorción tubular de la creatinina. Si el filtrado del riñón
es deficiente, la sangre se elevan los niveles. Por lo tanto,
los niveles de creatinina en sangre y orina pueden ser
utilizados para calcular el aclaramiento de creatinina
(CrCl), que refleja la tasa de filtración glomerular (TFG). El TFG es clínicamente
importante porque es una medida de la función renal. Sin embargo, en los casos de
disfunción renal grave, el aclaramiento de creatinina se "sobrestimado", porque la secreción
activa de la creatinina explicará una fracción más grande de la creatinina total deforestada.
Cetoácidos, cimetidina y la trimetoprima reducir la secreción tubular de la creatinina y por
lo tanto aumentar la precisión de la estimación de la TFG, en particular en la disfunción
renal grave. (En ausencia de la secreción de creatinina se comporta como la inulina.)

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Una estimación más completa de la función renal se puede hacer en la interpretación de la


sangre (plasma) la concentración de creatinina, junto con la de la urea. BUN-a-creatinina (la
proporción de urea y creatinina) puede indicar otros problemas además de los intrínsecos al
riñón, por ejemplo, un nivel de aumento de la urea fuera de proporción a la creatinina puede
indicar un problema pre-renal, tales como la depleción de volumen.

Los hombres tienden a tener niveles más altos de creatinina porque suelen tener más masa
muscular esquelética que las mujeres. Los vegetarianos han demostrado tener niveles más
bajos de creatinina.
La creatinina, compuesto sumamente difusible, se elimina del organismo casi
exclusivamente por filtración renal. Su determinación en suero, así como el clearance de
creatinina endógena constituyen parámetros importantes para el diagnóstico de diversas
afecciones renales. Sin embargo, debido a los problemas prácticos inherentes a la
determinación del clea-rance (recolección de orina en niños, etc.), la determinación de
creatinina sérica es más utilizada como índice de funcionalismo renal.

2.2. Fundamento del Método:

La creatinina y otros compuestos de la muestra reaccionan con el ácido pícrico en


medio alcalino dando un complejo color rojo que se cuantifica mediante lectura
fotométrica.

2.3. Materiales:

- Tubos de ensayo
- Gradilla
- Pipetas y micropipetas

2.4. Equipos:

- Centrífuga
- Baño María
- Espectrofotómetro

2.5. Reactivos:

- Standard : Solución de creatinina 20mg/l


- Ácido pícrico : Solución de ácido pícrico 41,4 mmol/l
- Buffer/Ple : Solución de polioxietilen laurel éter (PLE) DANS
15mmol/l en buffer glicina/NaOH

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- Stopper : Ácido acético al 20%


- REACTIVO DE TRABAJO: Mezclar en frasco plástico cantidades de ácido pícrico
y Buffer/PLE.

2.6. Procedimiento:

En tres tubos de ensayo, colocar:

B S D
Agua destilada 0.3ml - -
Standard 0.3ml -
Muestra - 0,3ml
Reactivo de trabajo 3ml 3ml 3ml

Mezclar, incubar 10 minutos en baño María a 37°C. Leer en espectofotómetro a 510 NM,
llevando a cero con el blanco.

Luego agregar:

STOPPER 150 ul - 150 ul

Mezclar, dejar los tubos a temperatura ambiente y volver a leer el desconocido, llevando a
cero con el blanco.

2.7. Cálculo de resultados:

Creatinina en suero mg/l = (D1 – D2) X Factor


F = 2/0.25
F=8

Mg% = (0.45 – 0.25)*8


=1.6mg% = 16mg/l

2.8. Valores Normales:

Suero: 8 – 14 mg/l

III. DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA TOTALES

3.1. Fundamento teórico

La bilirrubina es un pigmento biliar de color amarillo


anaranjado que resulta de la degradación de la
hemoglobina de los glóbulos rojos reciclados. Dicha

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degradación se produce en el bazo para luego (la bilirrubina) conjugarse en el


hígado. Estos pigmentos se almacenan en la vesícula biliar formando parte de la
bilis (es excretada hacia el duodeno, lo que da el color a las heces).

La bilirrubina es un producto de descomposición de la hemoglobina, presente en los


glóbulos rojos. Cuando termina la vida útil de estos la hemoglobina contenida en
ellos se descompone en globina y grupo hemo. El grupo hemo se transforma en
biliverdina, que pasa a bilirrubina. Esta bilirrubina se correspondería a la indirecta
(no conjugada). Después pasa por el hígado y se une al ácido glucurónico y se
transforma en la bilirrubina directa (conjugada).

La bilirrubina reacciona específicamente con el ácido sulfanílico diazotado


produciendo un pigmento color rojo violáceo (azobilirrubina) Que se mide
fotocolorimétricamente a 530 nm.

Si bien la bilirrubina conjugada (directa) reacciona con el diazoreactivo, la


bilirrubina no conjugada (indirecta) requiere la presencia de un desarrollador-
acuoso que posibilite su reacción. De forma tal que, para que reaccione la
Bilirrubina total (conjugada y no conjugada) presente en la muestra, debe agregarse
benzoato de cafeína al medio de reacción.

3.2. Materiales:

- Tubos de ensayo
- Gradilla
- Pipetas de 2ml
- Pipetas de 5ml

3.3. Equipos:

- Centrífuga
- Baño María
- Espectrofotómetro

3.4. Reactivos:

- Desarrollador: Solución acuosa de benzoato de cafeína, tamponada y estabilizada.


- Nitrito de sodio: Solución de nitrito de sodio 0,07 mol/l
- Reactivo sulfanílico: Solución de ácido sulfanílico 29 mmol/l y ácido clorhídrico
0,17 mol/l
- Diazoreactivo: Mezclar 1 parte de Nitrito de sodio con 21 partes de Reactivo
sulfanílico.

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3.5. Procedimiento:

En tres tubos de ensayo, colocar:

B D T
Suero 200 ul 200ul 200ul
Agua destilada 2,5ml 2,5ml -
Desarrollador - - 2.5ml
Reactivo sulfanílico 200ul - -
Diazorreactivo - 200ul 200ul

Mezclar de inmediato cada tubo por inversión. Luego de 5 minutos leer en el


espectrofotómetro a 530nm, llevando el aparato a cero con agua destilada. Las lecturas
pueden efectuarse entre 4 y 15 minutos, excepto la bilirrubina directa que debe leerse a los 5
minutos exactos.
Si se lee antes habrá subvaloración de los resultados por reacción incompleta. Si se lee
después habrá sobrevaloración porque comienza a reaccionar la bilirrubina libre.

3.6. Cálculo de resultados:

Bilirrubina Total (mg/l) : (T-B) x F


= (0.18 – 0.02)*21.67
=3.45mg% Abs B=0.02
Abs D=0.06
Abs T=0.18
Bilirrubina Directa (mg/l) : (D-B) x F F=21.67
= (0.06 – 0.02)*21.67
= 0.86mg%

Bilirrubina Libre (indirecta) : B. Total- B. Directa


= 3.45 – 0.86
= 2.59mg%

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3.7. Valores normales:

Adultos Recién Nacidos

Directa : Hasta 2mg/l Hasta las 24 horas : 60mg/l

Total : Hasta 10mg/l Hasta las 48 horas : 75mg/l

Del 3 al 5 día : 120mg/

CUESTIONARIO

1. Señale los factores de riesgo para influenciar los niveles elevados de


Bilirrubina.

La bilirrubina se produce principalmente en su forma no conjugada por el recambio


de eritrocitos. Es transportada por el transportador aniónico orgánico 2 (OATP 2) y
luego es conjugada con ácido glucurónico mediante la reacción con la UDP-
glucuronosil transferasa 1A1 (UGT1A1) antes de ser excretada por la bilis. Las
concentraciones de bilirrubina en los neonatos son mucho más altas que en los
adultos porque el lapso de vida de los eritrocitos es relativamente corto y la
capacidad para la eliminación de bilirrubina es menor en comparación con los
adultos.
De los siete factores de riesgo obtenidos de las historias clínicas, el más prevalente
fue la lactancia materna, seguido por incompatibilidad ABO, prematurez, infección,
cefalohematoma, asfixia y deficiencia de G6PD.
Los estudios demuestran que los niveles de bilirrubina disminuyen generalmente
luego de la luminoterapia, parece razonable no desalentar la lactancia materna
solamente sobre la base de hiperbilirrubinemia grave temporaria con respuesta a la
luminoterapia. El segundo factor de riesgo más frecuente es la variación en el gen
UGT1A1. Hay 1 599 nucleótidos en el gen UGT1A1, el cual se localiza en el
cromosoma 2q37. En un estudio de expresión in vitro, la actividad enzimática de
UGT1A1 en la variante de G a A en el nucleótido 211 en los estados heterocigota y
homocigota disminuyó a 60.2% y 32.2% de lo normal.
En conclusión, los neonatos que portan las variantes en los nucleótidos 211 y 388
de los genes UGT1A1 y OATP 2, respectivamente, así como aquellos
amamantados, tienen alto riesgo de presentar hiperbilirrubinemia grave.

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Se recomienda la investigación de los genes UGT1A1 y OATP 2 en los casos de


hiperbilirrubinemia no conjugada en recién nacidos, tanto desde el punto de vista
clínico como epidemiológico.
Los factores de riesgo conocidos de hiperbilirrubinemia neonatal:

 Lactancia materna exclusiva


 Incompatibilidad ABO
 Prematurez (< 38 semanas de edad gestacional)
 Infección
 Cefalohematoma
 Asfixia (puntaje de Apgar de 6 o menor)
 Deficiencia de glucosa 6 fosfato deshidrogenasa (G6PD)
 Portación de variantes del gen UGT1A1 y un factor sospechado, portación de
variantes del gen OATP 2.

2. Señale dietas especiales para controlar los niveles de Bilirrubina.

Se recomienda que la persona se ponga a dieta de purificación dos días


consecutivos comiendo una fruta, ya sea piña, naranja o uvas (escoger sólo
una).
La alimentación más frecuente (hasta 12 veces al día) incrementará los
niveles de líquidos en el bebé y puede hacer que el nivel de bilirrubina baje.
Si el nivel de bilirrubina es mayor a 20 mg/dL, hay disponibilidad de opciones
de tratamiento diferentes. La madre puede interrumpir la lactancia entre 24 y
48 horas, lo que va a ocasionar una rápida disminución del nivel de
bilirrubina. Durante ese tiempo, la madre puede extraer la leche o
succionarla de las mamas con un extractor para conservar su bienestar y
mantener el flujo de leche, mientras alimenta al bebé con leche maternizada.
En la mayoría de los casos, cuando se reanude la lactancia, la bilirrubina no
retornará a sus niveles previos.

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 Se debe procurar una dieta basada en vegetales frescos, cereales


integrales y leches y aceites vegetales.
 Beber dos litros de agua al día es básico para empezar un proceso de
depuración de toxinas y grasas nocivas.
 Las tisanas y tés no deben faltar en tu dieta. El té o infusión de
alcachofa es excelente para depurar y fortalecer el hígado, así como
el té de cardo mariano, diente de león, verbena, etc.
 Evita consumir alcohol, y procura no comer a la hora de la comida
con ninguna bebida dulce ni mezclar las frutas a la hora de la comida.
Esto es muy importante, ya que si mezclas frutas o comida azucarada
con los alimentos, estos fermentarán y producirán alcohol, así que
aunque no tomes alcohol, es como si lo hicieras.
 Bebe un vaso de jugo de vegetales al día. El mejor es el de aloe con
zanahoria, o el de tomate con alfalfa o apio.
 Empieza el día bebiendo en ayunas un té de diente de león con el
jugo de un limón exprimido. Bébelo caliente e inmediatamente
después de que hayas exprimido el limón.

Conclusión
La bilirrubina es un pigmento amarillento que se encuentra en la bilis, un
líquido producido por el hígado, Los niveles altos de bilirrubina en la sangre
trae enfermedades. La creatinina es un compuesto orgánico generado a partir
de la degradación de la creatina (que es un nutriente útil para los músculos

Recomendaciones:
Recomendaciones, al entrar al laboratorio, tener la vestimenta adecuada,
tener cuidado con los instrumentos de laboratorio utilizados, no manipular los
instrumentos a menos que este acompañado de un profesional.
Recomendaciones acerca del tema, Las grandes cantidades de bilirrubina en la
sangre pueden llevar a que se presente ictericia, una coloración amarilla en la
piel, las membranas mucosas o los ojos. Por ello se recomienda realizarse el
examen de bilirrubina en la sangre.

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BIOGRAFIA

 Harper bioquímica ilustrada 29° edición.


 http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003479.htm
 http://www.med.ufro.cl/clases_apuntes/medicina-
interna/gastroenterologia/docs/16-ictericias.pdf

 http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003475.htm
 http://quimicoclinico.wordpress.com/2008/01/16/bilirrubina-directa-
indirecta-tgpfalggtfa/

 http://www.natursan.net/como-bajar-la-bilirrubina-alta/

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