Funcionamiento hepático

Anatomia hepatica
 Ubicación:
-Cuadrante superior derecho.
-debajo del diafragma
 Peso: 1200-1600 g
 Vascularizado: 1500 mL de sangre/min.
-Vena porta (80%) del volumen sanguíneo total, aporta 40% oxígeno.
- Arteria hepática (20%) mayor sangre oxigenada, aporta 60% de oxígeno
 Sistema recolector: venas hepáticas, cava inferior

Anatomia excretora hepatica

Sistema recolector : CANALÍCULOS BILIARES (CB)
CONDUCTO HEPÁTICO DERECHO CONDUCTO HEPÁTICO IZQUIERDO

CONDUCTO HEPÁTICO COMÚN COLÉDOCO

CONDUCTO CÍSTICO (VESÍCULA)
DUODENO

Lobulo hepatico: Es la unidad funcional y fundamental. Funciones metabolicas y

excretoras.

Componentes subcelulares
 Aparato de Golgi: Lipoproteínas, glicoproteínas, deposito de albúmina y
bilirrubina.
 Lisosomas: Enzimas hidrolíticas (digieren): Lipoproteinas, ferritina Catabolizan:
hierro, Cu+2 y pigmentos biliares.
 Peroxisomas: Respiración, metabolismo de lípidos y purinas, gluconeogénesis,,
desintoxicación de alcohol.
 Mitocondrias: Fuente de energía, fosforilación oxidativa, oxidación de ácidos
grasos.
 Retículo endoplásmico: Síntesis: Albúmina, factores de coagulación, colesterol,
ác. Biliares. Metabolismo: fármacos y esteroides.

FUNCIONES DEL HÍGADO

Metabolismo Carbohidratos -Síntesis, almacenamiento de glucosa,

Lípidos y lipoproteínas
Aminoácidos y proteínas
Bilirrubina
Hormonas
gluconeogenésis.
-acetil-CoA: fosfolípidos, colesterol y
triglicéridos
- Hormonas corticales suprarrenales
- albúmina, globulinas (α,β, γ)
Hematológicas Producción de factores deI, II, V, VII, IX, X.
coagulación:
Producción de eritrocitos en
el feto
Excreción Ácidos biliares, colesterol,Conductos biliares: BILIS (ác. Biliares,
bilirrubina fosfolípidos, colesterol, pigmentos biliares,
proteínas, electrólitos, hormonas, agua)
-favorece la digestión: absorción intestinal
de lípidos, y vitaminas solubles.
Desintoxicación Bilirrubina, amoníaco,-Hidrólisis, hidroxilación, oxidación,
alcohol, fármacos reducción, carboxilación y desmetilación:
Más solubilidad
Citocromo P450 (glicina, glutatión, ác.
Sulfúrico, acetato, ác. Glucúronico)
Úrea (amoníaco), deshidrogenasa alcohólica,
oxidación del etanoly la catalasa (alcohol).
Almacenamiento Glucógeno (7%), lípidos,Vit. A, D, E, K y B12.
aminoácidos y proteínas,Bilirrubina proteína del citosol
hierro (ferritina, 10%), cobre yÁc. Grasos (tejido adiposo)
vitaminas.
Inmunológicas Fagocitosis. Las proteínas son sintetizadas por el higado
menos las Ig.

Pruebas de laboratorio para evaluar el funcionamiento hepático.

 Pruebas químicas rutinarias: Proteínas totales y fraccionadas, Bilirrubina total y

fraccionadas, ASAT, ALAT, gammaglutamiltranferasa, leucinaminopéptidasa, 5
´nucleotidasa.
 Pruebas químicas especiales: Fetoproteína alfa, amoníaco, ceruloplasmina,
Hierro y ferritina, ácidos biliares, prueba BSP.
 Pruebas químicas orina: Urobilinógeno y bilirrubina.
 Pruebas inmunológicas: Ac. IgM e IgG (hepatitis A, D), Ag de superficie
(hepatitis B), Ac. Mitocondriales.
 Pruebas hematológicas: Recuento sanguíneo completo, recuento de
reticulocitos, tiempo de protrombina, estudios de factores coagulación,
anormalidades de Hb.

Procedimientos analíticos
 Diagnosticar enfermedad hepática ya existente.
 Diferenciar entre las diversas enfermedades hepáticas.
 Determinar la extensión y gravedad de la enfermedad.

Las proteínas
CARACTERÍSTICAS GENERALES
 La palabra proteína deriva del griego “proteios”: PRIMORDIAL
 Son polímeros complejos de aminoácidos que se producen en las células
vivas.
 Están formadas solo por 20 aminoácidos.
 Constituidas: C, O, H, N, S.
 Contenido de N (16%) diferencia las proteínas de carbohidratos y de lípidos.
 Energéticamente, las proteínas aportan al organismo 4 Kcal de energía por
cada gramo que se ingiere.
 Clasifican:
o Estructura: Primaria, Secundaria, Terciaria y cuaternaria.
o Forma: Fibrosa y globulares
o Solubilidad, Composición (Simples y conjugadas)
o Movilidad electroforética

Funciones de las proteínas

 Movimiento: la contracción muscular de dos filamentos proteicos; la propulsión
de la esperma por su flagelo.
 Soporte mecánico: la elasticidad de la piel es debido a la presencia de colágeno,
una proteína fibrosa.
 Protección inmunológica: todos los anticuerpos son proteínas. Ellos juegan un
rol vital en distinguir lo que es del cuerpo y lo que no.
 Catálisis enzimática: Todas las enzimas son proteínas.
 Transporte: Hemoglobina, mioglobina, transferrina.
 Acumulación: ferritina acumula el hierro en el hígado.
 Generación y transmisión del impulso nervioso
 Control del crecimiento y diferenciación celular

Proteinas totales
Albúmina y Globulinas α,β,γ: Mantener la Presión osmótica del plasma.
Contenido de proteínas depende de:
 Estado nutricional
 Funcionamiento hepático
 Funcionamiento renal
 Errores metabólicos

Métodos de determinación de proteínas

El metodo va a depender de la cantidad de proteinas que se vayan a medir y eso le va a
dar la especificidad del metodo.

Método de Kjedahl
FUNDAMENTO:
En la transformación del nitrógeno contenido en la muestra en sulfato de amonio
mediante la digestión con ácido sulfúrico en presencia de un catalizador (Hg, Cu, Se,
Ti). El ión amonio obtenido se transforma en medio básico en amoníaco que se destila
y valora con una solución de ácido patrón. Muy laborioso y se puede degradar la
proteínas, depende del nitrogeno.
ETAPAS:
1. Digestión de la muestra,
2. Destilación con arrastre de vapor del amoniaco producido y
3. Valoración ácido base de este amoniaco.
APLICABILIDAD:
 En el procesamiento de alimentos: proteína, NBVT (Nitrógeno Básico Volátil
Total), dióxido de azufre
 En laboratorios agrícolas: amoníaco, nitrato, nitrógeno total
 En las industrias farmacéutica y química: nitrógeno orgánico, amoniaco
 En el análisis de bebidas: proteína, alcohol, ácidos volátiles, dióxido de azufre
 Para aplicaciones medioambientales: amoniaco, TKN, fenol, DQO, Devarda

Método de Biuret
FUNDAMENTO:
En la reacción que tiene lugar entre los iones de cobre del reactivo de Biuret y los
átomos de nitrógeno de los enlaces peptídicos de las proteínas. Se produce un
complejo de color azul que absorbe entre 540 y 550 nm. La intensidad de coloración es
directamente proporcional a la cantidad de proteínas (enlaces peptídicos) y la reacción
es bastante específica. Detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros
compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición
desconocida. Depende de los enlaces pepetidicos. La estabilidad es de 12 horas. Punto
final colorimétrico (diferencia con el Kjedahl) Muestra: Suero, plasma (EDTA, heparina),
LCR.
VENTAJAS:
 Bastante específico, Presenta poca interferencia, Económico
DESVENTAJAS:
 Poca sensibilidad: 1000-10000 μg
Valores de Referencia: 6,1-7,9 g/dL (Proti2,Wiener lab)

Método de Lowry
Dependen de la concentración de tirosina y triptófano de la muestra.
Consiste en dos reacciones:
1. Reacción de Biuret
2. Reacción de Folin: característica de los grupos –OH reductores de los aminoácidos
tirosina y triptófano que, junto con los complejos Cu+2,reducen el reactivo de Folin-
Ciocalteu generando un color azul. Mayor sensibilidad que el biuret. Depende de la
catidad de aminoácidos aromaticos.

Ventajas:
Tiene bastante sensibilidad (5 μg/ mL-100 μg/ mL)
Desventajas:
 No todas las proteínas reaccionan igual
 Presenta interferencias con detergentes no iónicos, sulfato amónico, Tris, EDTA,
Hepes y Pipe.
 Desnaturaliza irreversiblemente a las proteínas

Método de Bradford
 Se basa en la unión de un colorante, Comassie Blue G-250 (también Serva Blue
G Dye) a las proteínas en condiciones ácidas, absorbe a 595 nm.
 Método sensible (1-15 μg), simple, rápido (10 min), barato y pocas sustancias
interfieren en su determinación. Entre las sustancias que interfieren están los
detergentes y las soluciones básicas.
 Varía con la cantidad de aminoácidos básico (lisina y arginina).

Métodos de Ácido Bicinconínico (BCA)

 Similar al método de Lowry (fundamento) en que depende de la conversión de
Cu+2 a Cu+, bajo alcalinidad.
 El Cu+ reacciona con el BCA dando un color purpura que absorbe a 562 nm.
 Sencillo, rápido, muy sensible (mas que el biuret, lowry y bradford).
 Rango de sensibilidad: 0,5-10 μg/mL
 Desnaturaliza irreversiblemente a las proteínas.

Método de Absorción UV
Métodos de Absorción Rango de sensibilidad (μg)
A280 100-3000
A205 3-100
A280 - A260 100-3000
A235 - A280 25-700
A224 - A236 5-180
A215 - A225 2-45
Ventajas:
Método rápido y No destructivo
Desventajas:
 Depende de la cantidad de aa aromáticos Tyr, Phe, Trp
 Interferencia fuerte con ácidos nucleícos
 Este ensayo es adecuado para mezclas de proteínas crudas

Método de turbidimetría
FUNDAMENTO: Mide la disminución de la luz transmitida a través de una suspensión
de partículas utilizando para ello un espectrofotómetro (detector en la misma dirección
del haz de luz, se mide A o T). Se suele utilizar para soluciones concentradas (para que
haya una buena disminución de la luz transmitida)
ej. Determinación de proteínas totales en suero, LCR u orina (haciendo que las
proteínas precipiten con TCA o ácido sulfosalicílico).

Método de Nefelometría
FUNDAMENTO:
Mide la luz dispersada en dirección distinta a la luz emitida (generalmente con ángulos
que oscilan entre 15 y 90º).Utiliza como instrumento el nefelómetro (en el que el
detector se ubica con un ángulo que oscila entre 15 y 90º ej. a 90º). Se suele utilizar
para concentraciones más diluidas.

Electroforesis SDS-PAGE

DTT: Rompe enlaces disulfuro.

SDS: Pone carga negativa a todo.

ALBÚMINA
 Proteína sintetizada en las células del parénquima hepático (66,3 kDa).
  Tasa de síntesis depende:
Presión osmótica coloidal
Ingesta de proteínas.
 Catabolismo: Pinocitosis
 T ½: 15-19 días.

FUNCIONES:
 Transporte : ácidos grasos, bilirrubina, hormonas, calcio, metales, fármacos y
vitamina
 Fuente de aminoácidos
 La unión glicoproteínas asociadas a la membrana incrementa la permeabilidad
a prot. De bajo PM necesarias en el espacio extravascular
 Es un reactante de fase aguda negativo: INHIBE PRODUCCIÓN DE
LEUCOTRIENOS Y DE ACTINA (plaquetas y neutrófilos)

Muestra:
 Suero libre de hemolisis (PREFERIBLEMENTE)
 No se observan interferencias (HEMOLISIS MODERADA , bilirrubina hasta 200
mg/dL, Lipemia hasta 20 g/L)
 Las globulinas no interfieren (DESPROTEINIZACIÓN)
Métodos de determinación:
 Enlace con tintes (BCG (verde de bromocresil), BCP (purpura de bromocresil),
BCF); Electroforesis, inmunoelecteroforesis, ELISA turbidimetría
 Valor de referencia: 3,5-4,8 g/dL (método de enlace con tinte)

Significancia clínica
HIPOALBUMINEMIA:
 Reducción en producción (afección hepática)
 Incremento de la pérdida (Glomerulonefritis o nefrosis, quemaduras)
 Mala absorción (afecciones gastrointestinales)
 Disminución en síntesis (analbuminemia (enfermedad genetica), procesos
inflamatorios)
HIPERALBUMINEMIA:
 Deshidratación aguda

REPORTAR
Valor de referencia

Proteínas Totales 6,1-7,9 g/dL

Albúminas: 3,5-4,8 g/dL

R A/G 1,2-2,2

Globulinas: (Proteínas Totales- Albúmina )

Método: Proti2 (Wiener lab)

 Métodos de
Proteínas Características Funciones
determinación
-Transportar tiroxina y
PREALBUMINA PM: 54 kDa Inmunodifusión radial
triyodotironina
(enlazante de Vida media: 48 h Electroinmunodifusión
-Indicador estado
tiroxina) Rango: 20-40 mg/dL Nefelometría
nutricional
PM: 21kDa
Proteína Nefelometría
Vida media: 12 h Transporte de vitamina A
enlazante a retinol Radioinmunoensayo
Rango: 20-40 mg/dL
Inhibe elastasa, tripsina,
PM:54 kDa colagenasa (neutrófilos),
Inmunodifusión radial
α1-antitripsina Vida media: 4 días trombina, plasmina
inmunonefelometría
(AAT) Rango: 90-200 Reactante de fase aguda
mg/dL positivo (se activa en los
procesos infecciosos)
Inactiva progesterona
Enlaza con drogas básicas
Reactante de fase aguda
(Incrementa: inflamación,
PM:40 kDa
AR, LES, tumor,
Glucoproteína Vida media: 5 días Inmunodifusión radial
traumatismo y
ácidaα-1 Rango: 50-120 inmunonefelometría
quemaduras)
mg/dL
(Disminuye: mala
nutrición, anticonceptivos,
daños hepáticos, otras)

Inhibe tripsina,
quimiotripsina, trombina,
elastasa, calicreína y
PM: 800 kDa
plasmina
Vida media: 5 días
Macroglobulinaα- NO ES REACTANTE DE FASE Inmunodifusión radial
Rango: 130-300
2 AGUDA Nefelometría
mg/dL
Disminuye: AR, mieloma
múltiple.
Incrementa: DM, afección
hepática.
Se une a Hb.
PM: 85 kDa Disminuye:
Vida media: 2 días Anemias hemolíticas, Inmunidfusión radial
Haptoglobina
Rango: 130-300 defectos congénitos de Hb, nefelometría
mg/dL REACTANTE DE FASE
AGUDA
Ceruloplasmina PM: 160 kDa Transporta cobre Inmunidfusión radial
Vida media: 4,5 días Incremente: Cirrosis, nefelometría
Rango: 20-60 mg/dL leucemias aguda, AR,
embarazo, anticonceptivos
 orales.
Disminuye: Enf. Wilson,
desnutrición, hepatitis
crónica
REACTANTE DE FASE
ELISA,
PM: 120 kDa AGUDA (la haptoglobina
Proteína C Inmunohistoquímica
Rango: 6,8-820 es mas sensible que la
reactiva (PCR) Aglutinación con látex
μg/dL proteina c reactiva en
Nefelometría
procesos inflamatorios)
método de Clauss
(coagulométrico);
Disminuye:
método turbidimétrico
Coagulación intravascular
cinético (con veneno de
PM: 340 kDa diseminada,
víbora Bothrops atrox),
Vida media: 4-5 días afibrinogenemias
Fibrinógeno Determinación de
Rango: 150-350 hereditarias, afecciones
Ratnoff-Menzie (es el
mg/dL hepáticas
método de referencia);
REACTANTE DE FASE
inmunodifusión radial;
AGUDA
inmunonefelometría;
inmunoturbidimetría

Inmunoglobulinas (gamma-globulinas)
 No son producidas en el hígado.
 Derivan linfocitos B
 IgG, IgA, IgM, IgD, IgE
 Incremento de las Ig: Monoclonales o Policlonales
 Hipergammaglobulinemia: enfermedades infecciosas, enf. Hepáticas, LES y
otras.
 Nefelometría, inmunodifusión radial, ELISA.

Bilirrubina
 Es un pigmento amarillo-anaranjado que proviene de glóbulos rojos
senesciente.
  Esta extraída y biotransformada en el hígado y excretada en la bilis y en la orina.

METABOLISMO DE LA BILIRRUBINA (Hígado):

Eritrocitos (anormales o destruyen

Liberación de Hb de GR (120 días).
prematuramente), citocromo,
Degradación de la Hb
mioglobina y peroxidasa

80% 20%

250-300 mg
(bilirrubina)

Sistema reticuloendotelial
del hígado, bazo o de la MO

Bilirrubina
Porción de Hb Hierro
(reserva de (transferrina)
aminoácidos) Transportado- Reductasa de biliverdina,
reciclado a Hb citosólica (dependiemte
NADPH)

Porfirina Oxigenasa del

heme microsomal
(producto
de desecho) Biliverdina

Hepatocito

Ligandina o
Proteína Y
Bilirrubina/albúmina
(reversible)
Bilirrubina Conjugación
Disocian
Bilirrubina no conjugada de bilirrubina
(1-4 mg diario
por la orina)

(BNC)o indirecta
Renal

Microsoma
Bilirrubina + 2
moléculas ácido
PROPIEDAD QUÍMICA:
glucurónico
(Transferasa UDP
Insoluble en agua glucurónilo)

Mixta polar-no polar

5% no se une a Albúmina
Soluble en agua
Afinidad por el tejido
cerebral y nervioso Bilirrubina conjugada o
directa
BC
TÓXICA
Canalículos biliares
Urobilinógeno (50-250
Reabsorbida
PLASMA por el hígado
mg/diarios en Heces)

MÉTODOS EMPLEADOS PARA EL ANÁLISIS

OBJETIVO: Diagnóstico de ictericia y enfermedades hepáticas
Método Tipo de análisis Comentario

• Colorimétrico Es más sensible y preciso a bajas

Jendrassik-Grof
• Punto final concentraciones bilirrubina.

• Colorimétrico Metanol (acelerador)

Malloy y Evelyn
• Punto final INTERFIERE: Hb (precipita)

Cromatografía líquida de
Separación cromatográfíca Método de referencia
alta resolución (HPLC).

El metanol y el etanol precipitan las proteinas por eso no se utiliza el 2do metodo.

Método de Jendrassik-Grof
Calibración (Wiener lab)
Estándar de Bilirrubina = 10mg/dl.

REACTIVO CONCENTRACIÓN
TUBO ESTÁNDAR DESARROLLADOR AGUA DIAZORREACTIVO
SULFANILICO (ml/dL)
1 50 ul 2,6 ml - 0,2 ml - 2,5

B1 50 ul - 2,6 ml - 0,2 ml -

2 100 ul 2,6 ml - 0,2 ml - 5,0

B2 100 ul - 2,6 ml - 0,2 ml -

3 200 ul 2,5 ml - 0,2 ml - 10,0

B3 200 ul - - 0,2 ml -
2,5 ml

Al agregar diazo mezclar e incubar por 5 min y leer 530 nm . Llevar a Cero con agua
destilada.

Como obtener la concentración de los patrones:

 10 mg/bili ------100 ml sol
0,005 mg/bili = x ------ 0,05 ml sol/patrón
P1 2,5 mg/dl
0,005 mg/bili ------ 0,2 ml muestra
2,5 mg/bili = x ------ 100 sol/bili

10 mg/bili ------ 100 ml sol

0,01 mg/bili = x ------ 0,1 sol/patron
P2 5 mg/dl
O,01 mg/bili ------ 0,2 ml muestra
5 mg/bili = x ------ 100 sol/bili
10 mg/bili ------ 100 ml sol
O,02 mg/bili = x ------ 0,2 sol/patron
P3 10 mg/dl
O,02 mg/bili ------ 0,2 ml muestra
10 mg/bili = x ------ 100 sol/bili

VALORES REFERENCIALES
PROMEDIO NORMAL DE BILIRRUBINA EN ADULTOS:
 BILIRRUBINA TOTAL: 0,3 a 1 mg/dl.
 BILIRRUBINA CONJUGADA: 0,1 a 0,15 mg/dl.
 BILIRRUBINA NO CONJUGADA: 0,2 a 0,8 mg/dl.

CAUSAS DE ERROR
 La hemolisis (inhibe la reaccion de la bilirrubina conjugada)reduce la reacción
de bilirrubina con el reactivo diazo: Concentraciones falsamente bajas.
 La lipemia provoca error en la determinación espectofotométrica.
 La bilirrubina es sensible a la luz: Exposición por 30 min reduce los valores de
bilirrubina en un 10%.
 PROTEGER LA MUESTRA DE LA LUZ ANTES Y DURANTE EL ANÁLISIS.
 La muestra se conserva en un refrigerador a oscuras hasta una semana o un
congelador durante tres meses
 Si es plasma no usar citrato sino heparina porque produce menos turbidez.

ICTERICIA
 Afección caracterizada por decoloración amarillenta de la piel, las escleras y las
membranas mucosas.
 Con frecuencia: incremento de bilirrubina. Puede ocasionarla también:
carotenos o ciertos fármaco.
 La BC más ictericia que la BNC.
 La ictericia: Bilirrubina es superior a 2 mg/dL.
 La ictericia decolora la piel, escleras y membranas (ajuro las 3).
 La BNC solo esta en compuestos no liposolubles por eso da menos ictericia.
 El acido glucoronico de la BC hace que sea soluble.
 ICTERICIA

POST-HEPÁTICA
PRE-HEPÁTICA HEPÁTICA
(ictericia obstructiva)

Ictericia por retención:

Incremento en la
producción de BR
1.- Destrucción extensa de los
eritrocitos
2.- Eritropoyesis ineficaz
3.- Incremento en el recambio
de compuestos heme no
hemoglobinícos en el hígado y
otros órganos.
4.- Descomposición fagocitaria
de eritrocitos extravasados
Defecto en transporte Bloqueo de flujo de
bilis
Ictericia por regurgitación:
Defecto excreción del -Cálculos en el colédoco
hepatocito - Neoplasias: páncreas u otro
órgano cercano a los
Ictericia por retención (BNC) conductos biliares.
-Síndrome de Gilbert
-Síndrome de Criggler Najjar
Ictericia por regurgitación
(BC)
Síndrome de Dubbin-Johnson
Síndrome de rotor

BT > 2mg/dL Hiperbilirrubinemia BNC o BC

CAUSAS DE LA ICTERICIA PRE-HEPÁTICA

Procesos hemolíticos hereditarios Esferocitosis hereditaria
Deficiencia de G-6-PD
Enfermedad de células falciformes
Talasemia
Enfermedad de Hb C
Procesos hemolíticos adquiridos Enf. Hemolítica del RN
Reacciones hemolíticas por transfusión
Anemia hemolítica producidas por fármacos
Anemia hemolítica autoinmunitaria
Eritropoyesis ineficaz Anemias megaloblásticas
Eritroleucemias
Envenenamiento por plomo
Ictericia fisiológica del recién nacido Inmadurez hepática
Afecciones del suministro de BR al ICC
hígado

Hay hemólisis y BNC se satura la ligandina de los hepatocitos a nivel del citosol,
. produccion y conjugacion.
 CAUSAS DE LA ICTERICIA HEPÁTICA
Ictericia por retención Ictericia fisiológica del RN
(incremento de la BNC) (Bilirrubina Total 10-15 mg/dL)
Síndrome de Criggler-Najjar y Síndrome de Gilbert
(deficiencia de la Transferasa UDP glucuronilo)
Ictericia por regurgitación Sindrome de Dubbin –Johnson
(incremento de la BC) Síndrome de Rotor
Colestasis intrahepática
Cirrosis
Hepatitis viral
Enf. Hepática por alcoholismo
Ictericia postoperatoria
Cáncer hepatocelular

Retencion a nivel de tranporte, la UDP glucoronico transferasa hace que pase de BNC a
BC por eso BNC.

Regurgitación BC daño a nivel de los caniliculos biliares por lo tanto se reabsorbe la

BC.

CAUSAS DE LA ICTERICIA POST-HEPÁTICA

(incrementa la BC)AA
Cálculo en el conducto biliar común
Cáncer de los conductos biliares, del páncreas o de la ampolla de Vater
Constricción o estenosis del conducto biliar
Colangitis esclerosante
Atresia biliar en lactantes

Del hepatocito, forma conducto hepatico comun, conducto hepatico cistico, va al

coledoco y luego al duodeno, ya la bilirrubina esta conjugada. Si hay una obstrucción
en el coledoco la BC se reabsorve para que pase al plasma, BC y urobilinógeno.

INDICADORES DE DESINTOXICACIÓN Y EXCRECIÓN HEPÁTICA

AMONÍACO EN PLASMA
 Producto de la digestión bacteriana (proteasas, ureasas, amino-oxidasas) y de
la hidrólisis de glutamina sobre el contenido del conducto digestivo.
 La vena porta transporta el amoníaco a el hígado (ciclo de la urea de krebs-
Henseleit) para sintetizar urea (excreción renal).
 A diferencia de otros compuestos NNP su concentración en plasma no
depende de la función renal .
 pH fisiológico el NH3 (amoniaco) existe como ión NH4+ (amonio).
 Concentraciones altas de NH3 son neurotóxicas y se relacionan con
encefalopatía.
MÉTODOS EMPLEADOS PARA EL ANÁLISIS
Método Tipo de análisis Comentario

Cinético
2- Oxoglutarato + NH+4 +
Enzimático NADPH Exacto, preciso, requiere poco
(deshidrogenasa) GLDH volumen de muestra, más usado.
Glutamato +NADP + H2O
(NADP a 340 nm)
Proporciona información limitada no
considera: FLUJO DE SANGRE AL
HÍGADO, CAPACIDAD DE
La capacidad del hígado
ALMACENAMIENTO.
Prueba con tintes exógeno para transportar sustancias
ERROR: Inyección incompleta de la
(BSP E INDOCIANINA) exógenas, metabolizarla por
dosis
conjugación
Paciente con fiebre o con tto. Con
fármacos reducen la velocidad de
depuración
Electrodo selectivo de
Específico, no es de uso común
amonio
MUESTRA
 Recolectar la muestra de sangre con EDTA, heparina u oxalato de potasio:
MUESTRA DE SUERO PRESENTA CONCENTRACIONES MÁS ELEVADAS DE
AMONIO.
 Muestras hemolizadas: INACEPTABLES, los eritrocitos >2,5 veces que el plasma.
 Recolectar las muestra en tubos al vacio y colocarlos de inmediato en hielo para
evitar que se efectúe el metabolismo de otros compuestos nitrogenados a
amoníaco.

FUENTE DE CONTAMINACIÓN DE AMONIO

 HÁBITOS TABAQUICOS: Paciente o acompañantes (humo cigarrillo). FUENTE DE
CONTAMINACIÓN DE AMONIO.
 ATMOSFERA DEL LABORATORIO: por el tipo de muestra y los métodos de
ensayo. El material de vidrio: sol. Hipoclorito 52,5 g/L y lavado con agua
desionizada antes de su uso.
 METABOLISMO DE CONSTITUYENTES NITRÓGENADOS: Desaminación de
aminoácidos: glutamina
VALORES DE REFERENCIA: 15-45 μg/mL (11-32 μmol/L)

Interpretación clínica
 Deficiencia de las enzimas que actúan en el ciclo de la urea (Infantes): carbamil-
fosfato-sintetasa, ornitín-transcarbamilasa, ácido argininsuccídico-sintetasa.
Argininsuccinasa y arginasa, y pueden producir un aumento de amoníaco en
plasma.
 Falla hepáticas y renales avanzadas: Hepatitis fulminante, cirrosis (encefalopatia
hepática), síndrome de Reye.
Acidos biliares
 Se forman exclusivamente en el hígado.
  Son los productos finales de metabolismos del colesterol (Facilitando su
eliminación por la bilis)
 Ayudan a controlar la composición de la bilis: Bilirrubina, colesterol, lecitina y
agua.

METODOS DE ANÁLISIS

Metodología Extrae

Cromatografía gas-líquido Estéres de metilos

Cromatografía líquida de alta presión Ácidos biliares conjugados

Actividad enzimática Ácidos biliares –3-hidroxilados

Radioinmunoanálisis Ácidos biliares conjugados

Enzimoinmunoanálisis Ácidos biliares primarios

MUESTRA: La muestra de elección es suero en ayunas.

VALORES DE REFERENCIAS:
Suero 200-2000 ng/ml

Bilis 15-30 mg/dl

Orina 100-400 ug/24 h

Heces 5-10 mg/gr

INTERPRETACIÓN CLINICA
 En condiciones normales la producción de ácidos biliares en ayunas es muy baja
(6 umol/L).
 Los ácidos biliares están elevados en todas las hepatopatías difusas, siendo su
mayor aumento en los períodos postpandriales las elevaciones más marcadas
se alcanzan en los síndromes colestásicos.
 La valoración de los ácidos biliares es útil en la evolución de las hepatitis
crónica, se ha indicado que la determinación de este analito tiene
aproximadamente un 90% de valor predictivo para la presencia de
enfermedades hepáticas especialmente obstructivas.

UROBILINOGENO FECAL Y URINARIO

  Urobilinógeno producto final incoloro del metabolismo de la bilirrubina
conjugada, las bacterias intestinales lo oxidan para convertirlo en urobilina,
pigmento de color café.
 El urobilinógeno se excreta aproximadamente 50-250 mg/24 h, menos del 2%
del urobilinógeno que se forma se excreta en orina.
 Se observa valor disminuido en afecciones hepáticas y obstrucciones intra y
extrahepáticas.
 Se determina bajo reacción de Erlich, en la que se emplea el ácido p-
dimetilaminobenzaldehído, dando un color rojo, se agrega hidróxido ferroso
para reducir la urobilina a Urobilinógeno y el acetato de sodio reduce las
interferencias de otros cromógenos (indol) que pueden reaccionar con el
reactivo de Erlich.
 Es importante emplear muestras frescas, ya que la oxidación transforma el
urobilinógeno a urobilina cuando la muestra reposa

INTERPRETACIÓN CLÍNICA
 NIVELES AUMENTADOS :
o ANEMIAS HEMOLÍTICAS.
o FUNCIÓN CELULAR DEFECTUOSA: HEPATITIS

 NIVELES DISMINUIDOS :
o OBSTRUCCIÓN BILIAR COMPLETA.
o ENFERMEDAD HEPATOCELULAR.

Pancreas exocrino
Fisiología e Histología del Páncreas
Porción Exocrina (tejido secretor exocrino)
Células elipsoidales (Acinos) Gránulos de zimógeno (pre enzima, inactiva)
Enzimas pancreáticas

Estimulacion de la secrecion pancreatica

REGULACION DE LA SECRECION PANCREATICA
ESTIMULACION:
NERVIOSA Vía Vagal Secreción
CCK Enzimática
HORMONAL Secretina Secreción H2O y HCO3

INHIBICION:
Péptido Y, Polipéptido Pancreático, Histamina

SECRECION PANCREATICA

La secrecion pancreatica es alcalina (ph de 7 u 8) contiene agua y bicarbonato.

La fosfolipasa A se secreta activa de una vez, cuando la tripsina actua se activa y pasan
a ser proteasas.

PRUEBAS DE EXPLORACION DE LA FUNCION PANCREATICA

PRUEBA DE LA SECRETINA: Se basa en el Principio fisiológico de que la rx secretora
pancreática es directamente proporcional a la masa funcional de tejido pancreático.
La secretina ayuda la secrecion del jugo pancreatico. Si los volúmenes estan diminuidos
no esta respondiendo bien para la secrecion de jugo pancreatico, el jugo pancreatico
secretado no produce mucha amilasa.

Consiste en:
 Administrar al paciente por vía endovenosa 1U/Kg de peso, de secretina
 Se toman 3 muestras del contenido duodenal cada 10 min.
 A cada muestra se le determina: Volumen
[HCO3]
Amilasa
VALORES REFERENCIALES
 Volumen del jugo pancreático: >2 ml/Kg
 [HCO3] > 80 mmol/L
 Amilasa >6 U/Kg

UTILIDAD CLINICA
Destrucción del Conducto pancreático y destrucción extensa de la glándula: Necrosis
aguda, carcinoma y fibrosis del páncreas. Volumen, [HCO3] y amilasa

AMILASA
Degrada polisacáridos (amilosa, glucógeno, amilopectina) y monosacáridos (dextrina,
glucosa, maltosa). Necesita de calcio como cofactor (para poder degradar los
carbohidratos). Se perfiere amilasa serica que urinaria. No se puede usar citrato u
oxalato (usar haparina) da falso negativo por inhibir el calcio. Almido sustrato de la
amilasa. No se eleva muy rapido cuando hay pancratitis.

Fuentes Tisulares: Glándulas salivales, Páncreas, higado, Pulmón, riñón, mucosa de

cuello uterino, tejido mamario (lactancia)

Funciones:
ALMIDON
DIGESTION
GLUCÓGENO

MUESTRA: Suero, plasma, Líquido pleural, Líquido Ascítico, Liquido duodenal y Orina

Métodos de Determinación:
 SACAROGÉNICO: Poder reductor de la amilasa sobre el sustrato, se revela
con la determinación de glucosa o reducción de cobre

Almidón Amilasa Maltotriosa + Dextrina + Maltosa

Glucosa + Maltosa

 CROMOGÉNICO:
Almidón coloreado Amilasa Sustancias
cromógenas

 AMILOCLÁSTICO:
Almidón Amilasa Maltosa +Maltotriosa+Dextrina

Yodo
Mide disminución color azul=proporcional a la concentración
de amilasa en la muestra. Es el mas usado, se determina directamente la actividad de
la enzima, no hay que hacer 2 reacciones.
  POLARIZACION DE FLUORESCENCIA:
Amilosa+fluoresceina Amilasa Despolarización
(moléc. más pequeñas)
Despolarizacion = Amilasa

 METODO DE ACOPLAMIENTO ENZIMATICO:

Reducción del NADH por aumento de Abs a 340 nm

VALORES DE REFERENCIA:
M. Amiloclástico: 60-160 U/dl
M. Enzimático: 25-125 U/L

CAUSAS DE ERROR:
 Uso de anticoagulantes: Citrato; EDTA, oxalato
 Pipetear con la boca
 Sueros lipémicos
 Medicamentos: Morfina
 Piruvato y otros alfa-ácidos

METODOS DE DETERMINACIÓN ISOENZIMAS AMILASA

• Electroforesis
• Cromatografía de Intercambio Iónico
• Enfoque Isoeléctrico
• Inhibición enzimática

RELACION AMILASA/CREATININA
Amilasa Urinaria X Creatinina sérica X100
Amilasa Sérica Creatinina urinaria

VR: 1-4% Macroamilasemia ‹1% Pancreatitis Aguda > 7%

SIGNIFICADO CLINICO
Hiperamilasemia:
 Pancreatitis Aguda y Crónica
 Ulceras gástricas
 Obstrucción de Conductos biliares e intestinales
 Carcinoma de cabeza de Páncreas
 Hipertiroidismo
 Macroamilasemia
Hipoamilasemia: (Destrucción masiva del Páncreas)
 Pancreatitis Crónica
 Fibrosis quística avanzada
 Pancreatitis aguda fulminante
 Carcinoma Pancreático
 Quemaduras graves
 Toxemia del embarazo
TRIPSINA
Endoproteinasa con alta especificidad por los enlaces peptídicos del extremo carboxílo
de los aminoácidos arginina y lisina. Es la mas eficaz de todas las enzimas, tiene mayor
sensibilidad. Es mejor metodo enzimatico porque como es muy pequeña su
concentración mg/mL no varia mucho los cambios de color por Berthelot.

 Proteínas Tripsina péptidos + aa

 Ca++
 Mg++ pH alcalino

 Se han identificado 2 isoenzimas Tripsina 1 y 2

 Fuentes Tisulares: Páncreas (específica)
 Método de determinación: RIA

Muestra:
Suero, plasma heparinizado, Orina, Heces, Líquido duodenal.

Método de Determinación:
Método de Berthelot
Enzimáticos

Valores de referencia:
Suero: 100-400 ng/ml
Orina: 35-160 % de la sérica

Interferencias:
 Uso de anticoagulantes: EDTA, fluoruros, citrato.
 Compuestos organofosforados

Significado Clínico:
Pancreatitis crónica, fibrosis quística

Pancreatitis Aguda, Carcinoma de Páncreas, ERC, Cirrosis Hepática

ELASTASA
• Elastina Elastasa Aminoácidos neutros
• Tipos: Elastasa 1
Elastasa 2

Muestra: Heces

Utilidad clínica:
 Pancreatitis Aguda, Pancreatitis Crónica, carcinoma de cabeza de Páncreas pero
sus valores permanecen elevados por mayor tiempo.
 Más específica para Pancreatitis que la amilasa y mayor relación con el curso
clínico.
LIPASA
  Glucoproteína, bajo peso molecular 45000 daltons
 Fuentes tisulares: Células acinares del Páncreas, mucosa intestinal,
 estómago, leucocitos, corazón tejido adiposo, hígado.
 Triglicéridos (micelar) LIPASA Ac. Grasos +monoglicéridos
pH 8
 Actúa en presencia de sales biliares y colipasa
 Útil en el diagnóstico de Pancreatitis aguda (permanece elevada 7-10 días)

Muestra: Suero

Métodos de determinación:
Titulación de ácidos grasos liberados (colorimétricos)
Depuración de emulsión (turbidimétricos – Nefelométricos)
Colorimétricos: Uso de peroxidasa o glicerol quinasa

Valores de referencia: 0 – 1 U/ml

CAUSAS DE ERROR
• Sueros lipémicos, ictéricos o bemolizados
• Fármacos opiáceos: actividad de la lipasa
• Congelación del sustrato actividad de la lipasa

SIGNIFICADO CLÍNICO
Aumento:
 Pancreatitis Aguda
 Pancreatitis Crónica
 Cáncer de Cabeza de Páncreas
 Afecciones Hepáticas: Cirrosis, Ictericias Hepáticas
 IRC
 Apendicitis Aguda

Disminución:
 Tercer trimestre del embarazo
 Tuberculosis
 Pancreatitis Crónica
 Diabetes
 Insuficiencia Pancreática

PANCREATITIS AGUDA
Inflamación repentina del Páncreas por infiltración parenquimatosa de las enzimas
proteolíticas activadas que causan autodigestión. Obstruccion del conducto a
cualquier nivel. En el reflujo hay un cambio de pH. La prueba utilizada es
determinación de amilasa. Valores >160UI. No se eleva mas la amilasa cuando el
paciente esta mas grave. Clinica: Dolor a nivel abdominal tipo cinturón, obstrucción
biliar.

CAUSAS:
 • Litiasis Biliar y alcohol (80% )
• Hipertrigliceridemia, diábetes, trastornos post operatorios, carcinomas,
intoxicación por fármacos, idiopáticas.

PATOGENIA DE LA PANCREATITIS AGUDA

• Obstrucción del conducto Pancreático.
• Reflujo de contenido duodenal hacia el conducto pancreático.
• Aumento de la permeabilidad de la membrana celular de los acinos
pancreáticos
• Alteración en el transporte activo de las vacuolas en las células acinares.

DIAGNOSTICO CLINICO
 AMILASA SERICA: 85 % de los ptes.
 24 Horas del proceso
 Se mantiene de 1-3 días
 Se normaliza de 3-5 días
Otros procesos por su ubicación
La amilasa sérica puede Producida por tumores

No existe una relación clara entre la elevación de amilasa sérica y la gravedad de la

pancreatitis.

Manifestaciones clínicas
• Vómitos, náuseas dolor abdominal en forma de cinturón, fiebre en algunos
pacientes, Hipotensión, taquicardia, Ictericia.

Laboratorio:
• Amilasa y Lipasa
• Tripsina y/o tripsinógeno
• Relación Amilasa/Creatinina
• Hipocalcemia
• Leucocitos > 15000 cels/mm3

PANCREATITIS CRÓNICA
• Cambios irreversibles histológicos y macróscopicos de la glándula
• La causa principal es el alcoholismo crónico, otras como hipertrigliceridemia,
hiperparatiroidismo.
• Manifestaciones clínicas: Igual a la Pancreatitis aguda además de: Pérdida de
peso, Ictericia, esteatorrea (grasa en la sangre), diábetes, hipoproteinemia.
• No hay profusion a mejoria. Puede haber edema por liberacion de agua.
• Valores > 160UI o valores muy disminuidos.

CRITERIOS DE RANSON
Indicativos del grado de severidad de la pancreatitis

Al ingreso:
Edad >50 años
Leucocitos >20000/cm3
LDH > 350U/L
ASAT > 250 U/dl

Primeras 48 horas:
Hto > 10% pO2 < 60 mm Hg
BUN > 50 mg/dl Base
Calcio Sérico <8 mg/dl

OTRAS PRUEBAS
 Proteína C reactiva › 120 mg/l, 2 a 3 días después de la admisión
 Péptido activador del tripsinógeno
 lnterleucina 6
 Elastasa neutrofílica.

CALCULO DEL FACTOR PARA AMILASA

1 Unidad amiloclástica (UA): Es la cantidad de enzima contenida en 100 ml de suero

capaz de hidrolizar 10 mg de almidón en 30 minutos.

Condiciones de reacción: Suero 10 ul

Sustrato: 0.5 ml
Tiempo de reacción 7.5 min
Concentración sustrato (sol. almidón) 0.05 g/dl

50 mg almidón 100 ml de sol. Sustrato

X 0.5 ml del sustrato
X= 0.25 mg almidón

Luego: 0.25 mg de almidón 0.01 ml suero

X 100 ml de suero
X= 2500 mg/dl

2500 mg de almidón 7.5 min

X 30 min
X= 10000 mg

Finalmente:
1 UA 10 mg almidón
X 10000 mg almidón
X= 1000 UA
Enzimas
• Son macromoléculas de alto peso molecular de Origen proteíco
• Catalalizadores que funcionan aumentando la velocidad de las reacciones
bioquímicas 109 a 1020 veces en comparación con las reacciones no
catalizadas.

PROPIEDADES:
 No se alteran ni se consumen durante la reacción.
 Cada Enzima actúa sobre un sustrato específico en función de su estructura
tridimensional característica.
 Se requieren de pequeñas cantidades de ellas.
 Aceleran la velocidad a la cual la reacción química alcanza el equilibrio
 El ambiente celular determina un control de dos tipos:
• Control genético de su síntesis.
• Control sobre el paso de su forma activa a inactiva o viceversa
 La actividad de la enzima es proporcional a la concentración de sustrato (primer
orden).
 La actividad de la enzima no es proporcional a la cocentracion de sustrato, es lo
mas utilizado en el lab (orden cero).
 Las enzimas no cumple la ley de Beer, no se mide la concentración sino su
actividad. Su actividad va aumentando hasta que luego se queda en un punto.

Estructura de una enzima

 Son Proteínas pero algunas necesitan de un cofactor.
 APOENZIMA + COFACTOR = HOLOENZIMA (activo)
 APOENZIMA:
 Parte proteica con alto PM
 Inactivo por separado
 COFACTOR: Parte no proteica que sí se transforma en la reacción. Puede ser:
 Ión metálico: Fe, Cu, Mg, Mn, Zn, Ca, Co.
 COENZIMA: Molécula orgánica no proteica. Muchos derivan de vitaminas (CoA,
NAD, NADP, FMN, FAD, entre otras)
Clasificación de las enzimas

Reacciones de las enzimas

COMO SE DETERMINA LA ACTIVIDAD DE UNA ENZIMA ?

Generalmente se determina en la parte de la curva de orden cero
1- midiendo el aumento del producto formado a lo largo del tiempo de reacción
2-. Midiendo la disminución del sustrato a lo largo del tiempo de reacción
Espectrofotometricamente
METODOS 1-.Métodos cinéticos colorimétricos
2-.Métodos cinéticos con NADH O NADPH

Factores que afectan la velocidad de reacción de las enzimas (influyen en la

actividad)
• Concentración de enzima
• Temperatura (aumento de la temperatura se produce desnaturalizacion, su
sitio activo queda desprotegido y disminuye su actividad.)
• pH (Los H* se unen al sitio activo de la enzima y cuando se agrega el sustrato
disminuye su actividad)
• Concentración de sustrato
• Inhibidores (el cloruro y el citrato inhiben la enzima, la enzima depende de
cofactores si no estan disminuye la actividad)

CONDICIONES GENERALES DE LA MUESTRA PARA LA DETERMINACIÓN DE ENZIMAS

 No usar muestras que han sido congeladas y descongeladas
 El material de vidrio debe estar libre de detergentes
  Separar inmediatamente el suero del paquete globular, porque enzimas
como LDH y fosfatasa ácida son componentes de los trombocitos , y se liberan
al medio si se produce destrucción de los mismos.
 No utilizar muestras hemolizadas, (aumentan falsamente a las enzimas
LDH y AST)
 Evitar el estasis venosa prolongada durante la extracción, porque esta produce
hipoxia y un aumento de la permeabilidad de las células sanguíneas
 Evitar el envejecimiento de las muestras, sobre todo para la determinación
de CK, fosfatasa alcalina y colinesterasa.

ENZIMAS HEPÁTICAS
Aspartato aminotransferasa (AST)
Afección y necrosis hepatocelular
Alanin aminotrasferasa (ALT)

Deshidrogenasa Láctica (LD5)

Leucinaminopeptidasa (LAP)

Fosfatasa alcalina (ALP) Colestasis u obstrucción biliar

5’ nucleotidasa (5’NT)

Glutamato deshidrogenasa (GDIH)

Necrosis y colestasis
Gamma- glutamil transferasa (GGT)

Colinesterasa (Che) Síntesis

Perfil hepatico: Proteinas totales y fraccionadas, bilirrubina, transferasas, fosfatasa

alcalina y si hay gammacetoglutarato.

TRANSAMINASA (ASAT– ALAT)

• Transferasas: Catalizan la transferencia de un grupo amino a un oxiácido
• Los aminoácidos van al ciclo de la urea, las transferasas ayudan en el
metabolismo de los aminoácidos.
• Determinan la formación de piruvato o de oxalacetato. Es sensible para la
enfermedad hepatica porque se produce mayormente ahí, pero no es especifica
porque tambien se produce en riñones y musculos.
• Permite detectar necrosis hepatica porque cuando hay necrosis se detruyen las
celulas y ahí esta la ASAT, mientras que para procesos agudos es mejor ALAT
porque se encuentra en el citoplasma.
• No es proporcional el daño hepatico con la actividad de la enzima.
Fuentes
tisulares
ASAT:
 Citoplasma hepático, músculo de miocardio y esquelético y el riñón.
 Menor actividad: páncreas, bazo, pulmones y eritriocitos.
 Forma mitocondrial PRINCIPALMENTE EN EL HÍGADO.

ALAT:
 Citoplasma del tejido hepático.
 Menor grado en el músculo esquelético, riñón, corazón, páncreas, pulmones,
bazo y eritrocitos.
 ENZIMA ESPECÍFICA PRINCIPALMENTE DEL HÍGADO

ASAT y ALAT: plasma, bilis, LCR y saliva de personas normales.

Vida media
ASAT: Citoplasmática: 17 ± 3 horas
Mitocondrial: 87 horas
ALAT: 42 ±11 horas

MUESTRA
 Suero muestra de elección.
 Oxalato, heparina, citrato de sodio: NO INHIBEN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA.
Causan turbidez.
 Evitarse muestra hemolizadas: Elevada actividad de AST en eritrocitos.
 ALAT: Es inestable durante 3 días a T.A o una semana a 4 °C.
 ASAT: Pérdida mínima de la actividad 0-4 °C en 1-3 días.
 No se recomienda la orina para analizar estas enzimas

MÉTODOS DE DETERMINACIÓN PARA ALAT

Método Tipo de Principio Comentario
análisis
Reacción acoplada a Cuantitativo -Suero
DNPH. -Uso poco frecuente
COLORIMÉTRICO.
Reitman y Frankel
Enzimático (UV). Cuantitativo L- alanina + cetoglutarato ALT -Suero.
Wrobelwski y la Due Piruvato + L-glutamato -Uso muy frecuente.
-V.R. 6 – 37 U/L
Piruvato + NADH + H+ LD
Lactato + NAD+

Medición del consumo del NADH a

340 nm.
Enzimático Cuantitativo Medición del consumo del NADH -Suero.
(Fluorescencia). por fluorescencia -Muy poco usado.
-Alta sensibilidad.
El mas usado es el cinetico colorimétrico de Rietman y el mas especifico es el de UV.

MÉTODOS DE DETERMINACIÓN PARA ASAT

Método Tipo de análisis Principio Comentario
Reacción acoplada de Cuantitativo -Suero
oxalacetato a DNPH. -Uso poco frecuente
COLORIMÉTRICO. -ácido acetoacético e
Reitman y Frankel hidroxibutiríco: falsa
elevación
Enzimático (UV). Cuantitativo -Suero.
Karmen -Uso muy frecuente.
V.R. 5-30 U/L
- Método de Referencia

Utilidad clinica
 Lesión hepatocelular: Hasta 10 veces o más el valor normal
 Ictericia extrahepática: ALAT 10 veces el valor normal y ASAT en un grado
equivalente o menor
 Carcinoma Hepático: Incremento de ALAT de aprox. 5 veces y ASAT 7-10 veces
 Cirrosis biliar primaria: Incremento ALAT de 5 veces y ASAT aprox. Igual.
 Hepatitis alcoholica: Incremento ALAT de 3 veces su valor y ASAT de 5-6 veces
 Cirrosis alcohólica: Incremento leve de ambas: ALAT de 1-2 veces y ASAT 3-4
veces.
 COCIENTE DE RITIS:
ASAT/ ALAT
> 2 proceso crónico
< 2 proceso agudo
 ASAT/ALAT > 2
Cirrosis alcohólica y alteraciones musculares severas
 KATAL: Cantidad de enzima que es capaz de hidrolizar un sustrato por segundo.
 Para reporta se utiliza UI/Ml
 TGO y TGP ahora son ASAT y ALAT

DESHIDROGENASA LÁCTICA (LD)

CARACTERÍSTICAS:
  Oxidorreductasa: Reacción reversible del piruvato a lactato (Embden-Meyerhof
GLUCOLÍSIS).
 Enzima citoplasmática: cerebro, eritrocitos, leucocitos, riñón, hígado, pulmón,
ganglios linfáticos, miocardio, plaquetas y músculo esquelético (MAYOR
ACTIVIDAD).
 Elevación en suero de esta enzima se considera INESPECÍFICA para cualquier
enfermedad o afección.
 Existen 5 isoenzimas: LD1, LD2, LD3, LD4, LD5.
 Valores de referencias:
(L P): 100-225 U/L
(P L): 90-320 U/L

Utilidad clínica
 La LD total es un indicador general de necrosis hepática.
 El diagnóstico diferencial de enfermedad hepática mejora al determinar la LD5.
 Se observan elevaciones de la LD total en: hepatitis viral, hepatitis tóxicas,
mononucleosis infecciosa, icetricias obstructivas y en cirrosis.
 En enfermedad hepáticas primarias y en metástasis hepática: INCREMENTO DE
LD5

Muestra
• Muestra de elección: SUERO. El plasma heparinizado puede utilizarse.
• El oxalato, el ácido ascórbico y el citrato de sodio inhiben la actividad de la LD.
• Muestras hemolizadas deben rechazarse: LD1 y LD2 se encuentran en
eritrocitos.
• La LD4 y LD5 son lábiles a bajas temperaturas.

Metodo de analisis
 Cuantificación de LD total:
 Punto final o cinéticas por espectofotometría:
Miden la interconversión de NAD y NADH a 340 nm.
Depende: pH y temperatura.
 Cuantificación de isoenzimas LD:
HPLC, inmunoprecipitación, SDS-PAGE, Cromatografía de intercambio
iónico.

LEUCINAMINOPEPTIDASA (LAP)
CARACTERÍSTICAS:
Es una hidrolasa que separa el a.a terminal de los péptidos durante la digestión de las
proteínas.
L- Leucinamida + H2O LAP Leucina + NH3

FUENTE TISULARES: Hígado, riñon, intestino delgado.

Valor de Referencia: 11 – 30 U/L (37 °C)

Utilidad Clínica
  Detección de afecciones hepatobiliares del conducto biliar. Su actividad es
similar a ALP, GGT, 5´NT.
 La determinación de LAP es poco recurrente.

MUESTRA
 El suero es la muestra de elección.
 La activida de LAP se mantiene por 3 semanas a 4°C.

MÉTODO DE ANÁLISIS
Leucín-p-nitroanilina p-nitroanilina
(espectrofotometría a 405 nm)

FOSFATASA ALCALINA
CARACTERÍSTICAS:
 Hidrolasa: Catalizan la rotura hidrolítica de compuestos.
 Presenta su máxima actividad en un rango de pH= 9,0 a 10, 5.
 Función: Libera fósforo inorgánico para formar un éster fosfatado con
producción simultánea de un alcohol.
ALP
 H2O + R – O – P-O - R – OH + H2PO4
OH pH 10,2

 Requiere de iones Mg+2 y Zn+2 para su estabilidad y máxima actividad.

 Inhibida: Calcio y fosfato inórganico

Fuentes tisulares
 Hígado, hueso, placenta, intestino, bazo y riñón.
 Carga neta, inhibición frente a fenilalanina o urea y estabilidad frente a calor
 Su actividad se confina a los osteoblastos
 El ritmo rápido del crecimiento óseo infantil, corre paralelo con las dosis
elevadas relativamente, que se observan en los niños.
 Si el crecimiento se bloquea, la concentración baja a cifras similares a las del
adulto.
 Transporte de membrana: Membrana celular que une el borde sinoidal de las
células del parénquima a los canalículos biliares

Muestra
 Muestra de elección es el suero, el plasma heparinizado da resultados similares.
 Los demás anticoagulantes interfieren con el cofactor Mg+2
 La muestra de sangre debe ser extraída después de un ayuno de 8 horas.
 La hemolisis leve es tolerable, pero se debe evitar la hemolisis fuerte (ALP
membrana del GR)
 La actividad de la ALP incrementa (5-10%) a T.A. o en refrigerador por varias
horas.

Vida Media: 3 a 7 días

Valores de referencia:
Niños hasta 12 años 56 – 156 U/L
Adultos: 13 – 43 U/L

Metodo de analisis
Método Tipo de análisis Principio Uso Comentario
Bowers y Espectofotométrico P-nitrofenol fosfato se Manual o Vigilancia continúa
Mc cinético o de punto hidroliza en presencia automatizado Coeficiente de
Comb final de ALP y produce un absortividad del p-
color amarillo (405 nitrofenol a 405 nm
nm) Método de referencia

King y Espectofotométrico Actividad de de la Manual o - No requiere

King y de punto final ALP se relaciona con automatizado desproteinización de la
la velocidad de muestra
liberación de fenol de
4-aminoantipireno y
el color resultante se
mide a 500 nm
Cornish Fluorescente Se hidroliza el Automatizado -Muy sensible.
y col. sustrato 4-metil-
umbeliferón (360 nm)

Niveles aumentado de ALP

• ALCOHOLISMO, ANEMIA
• CÁNCER EN HUESOS, CÁNCER EN PRÓSTATA
• COLESTASIS (OBSTRUCCIÓN DE VÍA BILIAR)
• CURACIÓN DE FRACTURA ÓSEAS, ENFERMEDAD DE LOS HUESOS
• ENFERMEDAD DEL HÍGADO, ENFERMEDADES RENALES
• ENFERMEDAD DE PAGET (ENFERMEDAD ÓSEA DEFORMANTE)
• HEPATITIS, HIPERPARATIROIDISMO
• LEUCEMIA, OSTEOMALACIA (RAQUITISMO POR DEF.DE VIT. D)
• PROSTATITIS

Niveles disminuidos de ALP

 MALNUTRICIÓN
 DEFICIENCIA DE PROTEÍNAS

Utilidad clínica:
 Enfermedad hepática colestásica u obstrucción hepatobiliar > 10 a 15 veces del
V.R
 Hepatitis aumenta de 2 a 3 veces
 Tiene verdadero interés clínico en las ICTERICIAS para confirmar su naturaleza
Obstructivas.
  En el absceso hepático sus cifras se encuentran aumentadas y sin cambios
ictéricos
 Cuando hay deficiencia de vitamina D , raquitismo, enfermedad de paget
(enf.ósea deformante), hiperparatiroidismo, fracturas en consolidación y en
metástasis óseas, sus niveles aumentan.

5´ NUCLEOTIDASA
CARACTERÍSTICAS:
FOSFATASA: Cataliza la hidrolisis de la mayoría de los 5´-monofosfatos de
ribonucleósidos y los 5´-monofosfatos de dexosinucleósidos a los nucleósidos
correspondientes.
5’ monofosfato de adenosina + H2O 5`’N.T Adenosina + H3PO4

FUENTES TISULARES: A nivel hepático (membranas canalicular y plasmática), SNC,

pulmones y testículos.

VALORES DE REFERENCIA: 2,0-9,5 U/L

MUESTRA
 El suero o el plasma son muestras adecuadas.
 Almacenar en temperatura de refrigeración por 3 días: sin pérdida de la
actividad.

MÉTODO DE ANÁLISIS
Determinación de los productos de la reacción de la adenosina y el fosfato inorgánico.

5’ monofosfato de adenosina + H2O 5`’N.T Adenosina + H3PO4

Adenosina + H2O adenosin desaminasa Inosina + NH3

Esta enzima se inhibe en presencia de iones níquel

UTILIDAD CLÍNICA:
 La actividad de esta enzima es paralela a al ALP y GGT en afecciones
hepatobiliares
 Se eleva principalmente en trastornos de los conductos biliares: Sales biliares
favorecen que se libere la enzima de las céls. Hepáticas.
 Es util: Diferenciar si la elevación de la ALP se debe a problemas óseas o
hepáticas.
 En general no se efectúan análisis rutinarios de está enzima en el laboratorio
clínico.
 5’ y Fosfatasa aumentadas: procesos hepáticos.
 5’ elevado y fosfatasa normal procesos oseo.

GLUTAMATO DESHIDROGENASA (GIDH)

Es una deshidrogenasa mitocondrial exclusivamente hepática
FUENTE TISULAR: Hígado

MÉTODO DE ANÁLISIS: Pruebas enzimática con UV no se realiza por ser muy costoso

MUESTRA: Suero
Valores de Referencia: 3 – 4 U/L
UTILIDAD CLÍNICA:
 más de 10 a 30 veces del V.R en Obstrucción Hepática
 útil para determinar El índice de Schmidt = ALT + AST
GIDH
I.Schmidt < 20 Ictericia colestásica extrahepática GIDH > ALT y AST
 >30 Obstrucción hepática
 > 50 Ictericia hepatocelular >>> AST y ALT

Gamma Glutamiltransferansa (GGT)

CARACTERÍSTICAS
 Transferasa: Cataliza la transferencia de un grupo gamma-glutamil a
aminoácidos libres o péptidos para formar gammaglutamilo-aminoácidos y la
cisteinilglicina.
 Glicoproteína que regula el transporte de aminoácidos a través de las
membranas celulares (alta capacidad de secreción o absorción).

FUENTES TISULARES Hígado (conductos biliares y canalículos hepáticos), riñón (túbulo

proximal), vesícula seminal, páncreas e instestino delgado.

VIDA MEDIA: 3 – 4 días.

VALORES DE REFERENCIA: Hombres: 6 –45 U/l
Mujeres: 5 – 30 U/l

MUESTRA
 El suero es la muestra de elección.
 El EDTA y la heparina no interfieren en el análisis.
 Fluoruro, citrato u oxalatos inhiben GGT (15%).
 Hemólisis moderada, icterica, lipemia dan resultados falsamente elevados.
 La enzima es estable en durante 5 días en refrigeración y hasta 5 meses en
congelación.

MÉTODO ANALÍTICO
 Cinético: Utiliza como sustrato la g glutamil- p-nitroanilina para formar p-
nitroanilina en presencia de la GGT y en medio alcalino.
 La velocidad de reacción se vigila por el aumento de la absorbancia a 405 nm a
medida que se produce p-nitroanilina.

Utilidad clínica
 5 veces el V.R en afecciones del conducto Biliar (colestasis intrahepática, cirrosis
biliar, obstrucción biliar extrahepática)
 2 – 5 veces el V.R en disfunción hepatocelular (hepatitis viral, cirrosis activa)
  en alcoholismo y es persistente cuando se vuelve crónico el caso.

COLINESTERASA: (Che)
Pertenece al grupo de las enzimas hidrolasas.

FUNCIÓN
Cataliza la hidrólisis de los ésteres de colina para formar colina y ac. Acético.

ACETILCOLINA + H2O AchE COLINA + Ac. ACÉTICO

FUENTE TISULAR
 Acetil colinesterasa (AchE): SNC y G.R
 Seudo colinesterasa (ChE) : Hígado principalmente y en la materia blanca del
cerebro.

VALORES DE REFERENCIA: 4,7 – 11,8 U/ml (37ºC)

UTILIDAD CLÍNICA
 Exposición a órgano fosforado
 Hepatitis crónica, Cirrosis avanzada, Cáncer metástasico hepático

MUESTRA
 El suero y el plasma heparinizados son muestras adecuadas.
 Otros anticoagulantes pueden actuar como inhibidores.
 La hemólisis leve no interfiere en la determinación.
 Es estable a temperatura de refrigeración o de congelación

MÉTODO DE ANÁLISIS
Butiriltiocolina Che Tiocolina + Ac. Butírico
Ac. Tiocolina + 5, 5´-ditiobis-(-2-nitrobenzoico) ácido 5-tio-nitrobenzoico
Nota:
 ASAT> ALAT> Fosfatasa> LD (orden de especificidad)
 La mas sensible es la ALAT ya que como esta mas afuera (citoplasma) aumenta
mas rapido cuando el daño es poco.
 La ASAT esta en la mitocondria, se libera ya cuando hay necrosis.
 La Fosfatasa alcalina es especifica en procesos obstructivos ya que se libera en
los canaliculos biliares pero no es tan especifica porque esta en otros organos.
 Menos especifica es el lactato porque esta en todas las celulas.
 La GGT es mas especifica que la lactato.
 No hay aumento de albumina en casos hepaticos.