Está en la página 1de 31

Genética molecular bacteriana

Unidad 1. Flujo de información


genética

Sexto semestre

Ciencias de la Salud Biológicas y Ambientales | Ingeniería en Biotecnología


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

Índice

Unidad 1. Fluido de información genética ................................................................. 2


Presentación de la unidad ........................................................................................ 2
Propósitos de la unidad ............................................................................................ 2
Competencia específica............................................................................................ 3
Temario de la
unidad……..............................................................................................3
1.1. De la secuencia de ADN a la generación de proteínas……………………...........3
1.1.1. ADN bacteriano y su replicación……………………………...……………….….10
1.1.2. Transcrición de ARNm .................................................................................. 15
1.1.3. Traducción de proteinas…..…………………..…………………………………...19
1.2.La mutación de ácidos nucléicos conlleva a la variabilidad genética….…….…..22
1.2.1. Definición de mutación……………………………………………………………..22
1.2.2. Tipos de mutaciones……………………………………………………………….23
1.2.3. Descripción de mutagénesis dirigida para la obtención de bacterias
genéticamente modificadas (BGM)………………………………………………………24
Actividades ............................................................................................................. 26
Autorreflexiones ...................................................................................................... 26
Cierre de la unidad ................................................................................................. 26
Para saber más ...................................................................................................... 28
Fuentes de consulta ............................................................................................... 29

Universidad Abierta y a Distancia de México 1


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

Unidad 1. Flujo de información genética

Presentación de la Unidad

Dentro del dominio bacteria se incluye una diversidad de microorganismos que residen en
diferentes ambientes. Entre sus características de sobrevivencia, destaca su plasticidad
adaptativa y la capacidad de responder a condiciones de estrés.

Desde mediados del siglo XX, con el auge de disciplinas como la genética y la tecnología
del ADN recombinante, se inició el estudio de la genética bacteriana como una de las
alternativas para comprender cómo las bacterias responden a estímulos de estrés. Desde
este punto de vista, los trabajos de investigadores como Avery-MacLeod-Mcarty (1944) y
Watson-Crick-Franklin-Wilkins (1953), entre muchos otros, sirvieron como bases de los
paradigmas que se revisarán en la presente Unidad, la cual abarca la replicación del ácido
desoxirribonucleico (ADN) como molécula que porta la información hereditaria, así como
generación y maduración del ARNm y la traducción de proteínas, generando lo que se
conoce como “flujo de información genética”.

Paralelamente al desarrollo de la ciencia básica, a finales del siglo XX y principios del


presente, dichos avances conceptuales han sido los cimientos de lo que se ha
denominado “biotecnología”, referida en la Convención de Diversidad Biológica como la
aplicación tecnológica que utiliza sistemas biológicos y organismos vivos o sus derivados
para la creación o modificación de productos o procesos para usos específicos
(Convention on Biological Diversity; Art 2. ONU. 1992). Posteriormente, el Dr. Xavier
Soberon (1996) enfatizó: “Lo que podemos llamar nueva biotecnología o biotecnología
moderna, es la que se sirve de las técnicas de ADN recombinante para realizar la mejora
de los seres vivos, con miras a su utilización. Se habla hoy, por tanto, de que nos
encontramos en la era de la biotecnología…”. Sin embargo, para poder ahondar en el
área biotecnológica desde un punto de vista ético y académico serio, es indispensable
conocer las bases teóricas de los procesos biotecnológicos que se desarrollan en la
industria.

Propósitos de la Unidad

Describir el flujo de información genética, así como los procesos de mutagénesis


bacteriana, mediante la revisión de temas selectos para poder direccionarlos a la industria
biotecnológica.

Universidad Abierta y a Distancia de México 2


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

Competencia específica

Relacionar los procesos moleculares bacterianos mediante la descripción del flujo de


información genética para definirlos como eventos susceptibles de modificación
biotecnológica.

Temario de la Unidad

1. Flujo de información genética

1.1. De la secuencia de ADN a la generación de proteínas


1.1.1. ADN bacteriano y su replicación
1.1.2. Transcripción de ARNm
1.1.3. Traducción de proteínas

1.2. La mutación de ácidos nucleicos conlleva a la variabilidad genética


1.2.1. Definición de mutación
1.2.2. Tipos de mutaciones
1.2.3. Descripción de mutagénesis dirigida para la obtención de bacterias
genéticamente modificadas (BGM)

1.1. De la secuencia de ADN a la generación de proteínas

Los procariontes (microorganismos unicelulares sin núcleo definido) están conformados


por los dominios Archea y Bacteria, de acuerdo al análisis filogenético de ARN ribosomal
16S (rARN). Particularmente el dominio Bacteria, también llamado eubacteria (“bacterias
verdaderas”), está conformado por una gran diversidad de organismos que incluyen
hipertróficos, anaerobios, así como bacterias grampositivas, gramnegativas,
cianobacterias y proteobacterias.

Su distribución es cosmopolita, y habitan ambientes extremos como agua dulce, salubre,


zonas calientes y frías; pero también se alojan como parásitos en animales o forman
asociaciones mutualistas con otros organismos (Curtis, et al., 2008). Esta capacidad
colonizadora y adaptativa fue una de las inquietudes para estudiar su base genética, es
decir, la organización de su genoma, definido como el conjunto de genes dentro del
organismo, tanto en su cromosoma como en sus elementos genéticos extracromosómicos
(Murray, et al., 2009).

Universidad Abierta y a Distancia de México 3


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

Por otra parte, se recordará que el flujo de información genética está definido como los
procesos involucrados en la generación de un fenotipo a partir de un genotipo. En
términos moleculares, se refiere a la expresión de una proteína a partir de una secuencia
de ADN, cuyos paradigmas generaron el “Dogma Central de la biología molecular” (Fig. 1;
Lodish, et. al., 2005; Alberts, et. al., 2010).

Figura 1. Representación de las investigaciones del siglo XX que generaron el “Dogma Central de
la Biología Molecular”. El ácido desoxirribonucleico (ADN) es la molécula que porta la información
hereditaria (genoma), el cual es replicado durante la proliferación celular. Es reparado cuando hay
daño mínimo (es importante señalar que si el daño es severo, no hay reparación) y hay intercambio
(recombinación) con otras moléculas de ADN. Este ADN es interpretado por complejos proteicos
para generar moléculas de ácido ribonucleico (ARN) a través de la transcripción, generando tres
tipos de ARN: ARN mensajero (ARNm), ARN ribosomal (ARNr), y ARN de transferencia (ARNt).
Particularmente, la secuencia del ARNm es la encargada de portar la información para producir
una cadena polipeptídica (proteína) por medio del proceso denominado traducción (Figura tomada
de Alberts, et al., 2010).

Como se aprecia en la figura anterior, el flujo de información genética involucra la síntesis


de tres moléculas, es decir, ADN, ARN y proteínas. Para comprender la complejidad de
estos procesos es preciso recordar su estructura, por tanto, se abordará de manera
general la composición de las mismas.

Los ácidos nucleicos (ADN y ARN) presentan estructuras primarias similares, es decir,
son polímeros lineales cuyo esqueleto principal es una cadena de azúcar (pentosa) –
fosfato, unido por enlaces fosfodiéster entre el carbono 5’ de una azúcar y el carbono 3’
de la azúcar contigua, por tanto, tienen direccionalidad denominada 5’  3’ (Fig. 2a). La

Universidad Abierta y a Distancia de México 4


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

unidad básica de estas cadenas es denominada nucleótido, y están compuestos por un


azúcar (Desoxirribosa para el ADN, y ribosa para el ARN); una base orgánica unida al
carbono 1’ de la pentosa, y un grupo fosfato unido al carbono 5 del azúcar (Fig. 2b). Se
conocen dos tipos de nucleótidos de acuerdo al tipo de base nitrogenada, es decir,
purinas que contienen dos anillos fusionados (Adenina – A – y Guanina – G –) y las
pirimidinas (Citocina – C –; Timina – T – y Uracilo – U –; Fig 2c.). Estructuralmente, las
diferencias entre ADN y ARN son el azúcar (Desoxirribosa y ribosa, respectivamente) y la
timina contenida en el ADN, reemplazada en el ARN por el uracilo (Lodish, et al., 2010;
Alberts, et al., 2010).

a. b.

c.
Figura 2. Los ácidos nucleicos presentan la misma estructura básica. (a) Esqueleto de
desoxirribosa – fosfato, se denota en enlace fosfodiéster, la direccionalidad 5’  3’ y las base
nitrogenada (C, A y G). (b) Azúcar ribosa (izquierda) que distingue al ARN del ADN que contiene
una desoxirribosa (derecha); la diferencia es el grupo hidroxilo en el carbono 2’ del azúcar. (c)
Bases nitrogenadas unidas al esqueleto azúcar – fosfato. El (*) denota el nitrógeno donde se une la
azúcar a la base (Figura modificada de Lodish, et al., 2010).

El ADN está formado por dos cadenas de polinucleótidos que forman una doble hélice
antiparalela. Su organización involucra el esqueleto exterior de desoxirribosa – fosfato, y
un interior de bases nitrogenadas apareadas, es decir, Adenina genera dos enlaces de
hidrógeno con la Timina (A=T) y la Citosina genera tres puentes de hidrógeno con la

Universidad Abierta y a Distancia de México 5


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

Guanina (C=G; Fig. 3). Esta doble cadena se estabiliza por la interacción de miles de
enlaces de H, así como por las fuerzas hidrofóbicas entre las bases adyacentes de la
hélice (Lodish, et al., 2005). La estructura descrita por Watson y Crick (1953) presenta un
giro a la derecha, con una separación de 0.36 nm entre cada par de bases (pb), por lo
tanto, para un giro completo de la hélice, abarca 3.6 nm, es decir, alrededor de 10 pb. Con
estas características se distingue un surco mayor y un surco menor (Fig. 3; Lodish, et al.,
2005; Alberts, et al., 2010).

Figura 3. Estructura clásica del ADN. (a) Modelo espacial de ADN B, en azul y rojo se denotan los
esqueletos de azúcar – fosfato de los dos polinucleótidos; las flechas denotan la direccionalidad de
los mismos. En el interior se representan las bases nitrogenadas apareadas, así como el surco
mayor y surco menor observado en esta conformación. (b) Esquema que representa los puentes
de hidrógeno durante el apareamiento purinas – pirimidinas dentro de la molécula de ADN (Figura
tomada de Lodish, et al., 2005).

Por su parte, el ARN de procariotas son moléculas de cadena sencilla que, como se
mencionó, constan de un esqueleto de azúcar ribosa – fosfato y las bases nitrogenadas
(A, U, C y G). Debido al grupo –OH de la ribosa en el C 2’, el ARN es más susceptible a
degradación, y pueden formar doble cadena con otras moléculas de RNA o generando un
hélice hibrida con ADN. Sin embargo, es más común encontrarlas como cadena sencilla y
adoptando conformaciones particulares que dependen de la longitud y tipo de ARN; por
ejemplo, estructuras tipo horquilla, formadas por bases separadas entre 5 – 10 nt, y los
llamados tallos – bucle, apareamientos formados entre bases separadas por nucleótidos
(Fig. 4). Este tipo de estructuras son relevantes en moléculas de ARN que presentan

Universidad Abierta y a Distancia de México 6


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

actividad catalítica como los ARN ribosomales o estructural como los ARN de
transferencia, sin embargo, los ARN mensajeros encargados de portar la información
genética también pueden presentar estructuras tipo tallo-asa que intervienen en los
procesos de traducción y regulación de la expresión de la expresión génica (Lodish, et al.,
2005; Alberts, et al., 2010).

Figura 4. Estructuras secundarias adoptadas por ARN de cadena sencilla. En ARNr y ARNt, este
tipo de plegamiento es esencial para funciones específicas de las moléculas (Figura tomada de
Lodish, et al., 2005).

Las otras macromoléculas involucradas en el flujo de información genética son las


proteínas, que, desde el punto de vista molecular, es el fenotipo resultante de la expresión
del genotipo; es decir, son las moléculas operadoras de la célula. Clasificarlas ha sido un
trabajo extenuante y casi imposible, sin embargo, se sabe que presentan diversas
funciones como estructurales, transportadoras, reguladoras, motoras, catalíticas, etc.

Las proteínas son polímeros lineales de longitud variable. Cuentan con un esqueleto
formado por N amido, un carbono α (Cα) y el C carbonilo de cada aminoácido presente en
el polipéptido, pero también presentan polaridad, es decir, en un extremo presentan un
residuo amino libre (N – terminal, representado siempre a la izquierda), y del otro lado,
residuo carboxilo libre (C- terminal, representado a la derecha; Lodish, et al., 2010).

La unidad básica de las proteínas son los aminoácidos, formados por un carbono α (Cα),
un grupo amino (-NH2), un grupo carboxilo (-COOH), un Hidrógeno (-H) y una cadena
lateral variable (-R; Fig. 5). La cadena lateral de los aminoácidos le confiere diversas
propiedades; es decir, por la posición del Cα se generan dos tipos de aminoácidos
posibles, de los cuales sólo los L-aminoácidos están presentes en la naturaleza. Por otra
parte, la cadena –R varía también en tamaño, forma, carga, solubilidad en el agua y
reactividad, por lo que pueden ser clasificados según las propiedades de sus cadenas

Universidad Abierta y a Distancia de México 7


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

laterales en: Polares, No Polares, y aminoácidos con carga (Fig. 5b). Los aminoácidos
están unidos por medio del enlace covalente, es decir, un enlace amido entre el grupo
carboxilo de un aminoácido, y el grupo amino del siguiente, conocido como enlace
peptídico (Fig. 5c).

Figura 5. Estructura básica de los aminoácidos. (a) El Cα de los aminoácidos es asimétrico,


excepto de la Gly, por lo que se pueden formar imágenes especulares designadas D y L, cuyas
funciones biológicas son distintas. (b) Lista de los 20 aminoácidos y su clasificación. (c) Ilustración
del enlace peptídico entre dos amioácidos (Figuras modificadas de Lodish, et al., 2013 y
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/enlace peptidico.html)

Para entender el comportamiento de las proteínas, se han diferenciado niveles de


organización de acuerdo a la complejidad observada en ellas, siendo la estructura
primaria la organización más “simple” y considerada como la secuencia de aminoácidos
sin ninguna alteración. Por otra parte, debido a las características de las cadenas laterales
de los aminoácidos, a la naturaleza rígida del enlace peptídico, y la combinación de

Universidad Abierta y a Distancia de México 8


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

residuos contenidos en la cadena, al menos el 60% de los residuos de aminoácidos


contenidos en la secuencia primaria adquieren diferentes conformaciones básicas,
conocidas como hélices α y hojas β, generando lo que se conoce como estructura
secundaria de la proteína, la cual se estabiliza por puentes de hidrógeno entre las
cadenas laterales de los aminoácidos y se sugiere que son elementos de sostén (Fig. 6a).
El siguiente nivel de organización es la estructura terciaria, y se refiere a la conformación
tridimensional de la proteína, que incluye dominios de estructura secundaria estabilizados
mediante interacciones hidrofóbicas de las cadenas laterales no polares, puentes de
hidrógeno entre residuos polares y enlaces peptídicos (Fig. 6b). Alternativamente, se ha
denominado la interacción entre polímeros plegados como estructura cuaternaria, como
en el caso de la hemoglobina, formada por cuatro monómeros de la proteína (Fig. 6c).

Figura 6. Representaciones de los niveles de organización de las proteínas. (a) Se denotan


diferentes representaciones de hélices α y hojas β. (b) Representaciones de la estructura terciaria
integrada por diferentes dominios estructuras secundarias estabilizadas diferentes tipos de
interacciones. (c) Representación de la estructura de la hemoglobina como modelo de una proteína
estructurada en módulos. Las representaciones denotadas incluyen listones y flechas (más
empleadas), esferas y bastones, trazando sólo la cadena principal (figuras modificadas de Lodish,
et. al., 2005; http://themedicalbiochemistrypage.org/es/protein-structure-sp.php;
http://en.citizendium.org/wiki/Protein_structure:
http://www.cryst.bbk.ac.uk/PPS2/course/section8/ss-960531_5.html).

Universidad Abierta y a Distancia de México 9


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

Se ha revisado la estructura y forma de las macromoléculas involucradas en el flujo de


información genética, sin embargo, es esencial revisar los procesos que originan a los
ácidos nucleídos y proteínas a nivel subcelular para tener un panorama general de los
eventos susceptibles de alteración con metodologías que se revisarán en el presente
curso.

1.1.1. ADN bacteriano y su replicación

Toda la información genética de bacterias se encuentra contenida en una molécula de


ADN de doble cadena y circular; molécula que se conoce como cromosoma bacteriano
(Alberts, et al., 2010).

Sin embargo, la mayoría de las bacterias contienen, además, ADN extra cromosómico
denominado ADN plasmídico, ya que se encuentra contenido en estructuras llamadas
plásmidos. La información genética contenida en ellos codifica para funciones no
esenciales para la bacteria, aunque también puede contener genes que permiten
adaptarse a diversos medios; genes de resistencia a antibióticos, toxicidad, entre otros
que se abordarán en detalle en la Unidad 2.

El ADN circular tiene la capacidad de adquirir una estructura superenrollada que le


permite compactarse en nucleosomas en la bacteria. Las bacterias poseen enzimas
capaces de alterar la estructura del ADN, introduciendo (enzima girasa) o eliminando
(enzima topoisomerasa) vueltas en la estructura superenrollada para permitir la
replicación y transcripción (Fig. 7; Betancor, et. al., 2006).

Figura 7. Diversas estructuras del cromosoma bacteriano. Esquema de la estructura de un


cromosoma bacteriano relajado (ambos extremos) y superenrollado (estructura central) por acción

Universidad Abierta y a Distancia de México 10


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

de las enzimas: topoisomerasa que elimina vueltas en las hebras de ADN, y la enzima girasa que
introduce vueltas en la misma. (Betancor, et. al., 2006).

Replicación

La replicación es el proceso para duplicar el ADN durante la proliferación celular para


conservar la información genética. Este proceso se realiza de forma exacta justo antes de
cada división celular. Además de exacto, este proceso se caracteriza por ser rápido; la
velocidad de replicación del DNA en bacterias es aproximadamente de 500 nucleótidos
por segundo, mientras que en mamíferos es de unos 50 nucleótidos por segundo (Alberts,
et al., 2010).

La unidad que contiene todos los elementos necesarios para duplicar el material genético
es denominada replicón. En bacterias, este proceso se caracteriza por iniciar en un mismo
punto de origen; éste se mueve hasta completar la replicación del cromosoma completo.
El punto inicial constituye la regulación de la replicación, es decir, una vez iniciado el
proceso, se replica el cromosoma completo (Betancor, L., et. al., 2006).

La horquilla de replicación se refiere a la región donde se está duplicando el ADN. Se


denominó como horquilla debido a su forma de “Y”; dependiendo del número de horquillas
que se generen, la replicación puede ser unidireccional o bidireccional, como se muestra
en la figura8. La generación de la estructura de horquilla se debe al desempalme de las
dos cadenas de ADN en la región de replicación.

Figura 8. Imagen y esquema de replicación bidireccional en un cromosoma bacteriano. A la


izquierda, micrografía de un cromosoma bacteriano durante el proceso de replicación bidireccional.
A la derecha, esquema de la micrografía mostrada en la parte izquierda, donde se denotan los
puntos donde se encuentran las horquillas de replicación (del inglés, replication forks; Alberts, et.
al., 2010).

El proceso de replicación sucede al mismo tiempo en ambas hélices de ADN mediante la


acción de un complejo enzimático que contiene al ADN polimerasa. Debido a que las
hélices del ADN son antiparalelas, y que la dirección del proceso de replicación es 5’3’,
es necesaria la síntesis de un fragmento de ADN en la cadena antisentido. Este

Universidad Abierta y a Distancia de México 11


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

fragmento se denomina fragmento de Okasaki, y se sintetiza a partir de un cebador que


permite sintetizar en dirección correcta (5’3’) la cadena antisentido, generando
fragmentos que, posteriormente, serán unidos por la enzima ligasa (Alberts, et al., 2010).

Se puntualiza que la replicación es semiconservativa, es decir, al replicarse la doble


cadena, las cadenas generadas contienen una hebra de la cadena parental y una
recientemente sintetizada (Fig. 9). Las enzimas que catalizan la replicación de ADN se
llaman polimerasas de ADN. Se ha caracterizado tres enzimas polimerasas, la polimerasa
III es la encargada de la mayor parte del proceso de replicación, mientras que la I y II
tienen mayor función en reparación de errores de la replicación. Por su parte, las enzimas
helicasas son las responsables de desenrollar el ADN en la horquilla de replicación
(Betancor, et al., 2006; Alberts, et al., 2010).

Figura 9. Esquema de la característica semiconservativa del ADN en la replicación. Se observa en


el esquema cómo, durante la replicación del ADN, se generan dos dobles hélices completamente
idénticas al constituirse de ambas una nueva cadena (new strand) y la cadena recién sintetizada.
(Betancor, et al., 2006).

A continuación se describen las enzimas involucradas en el proceso de replicación


(Alberts, et al., 2010):

- Helicasa, enzima encargada de abrir la cadena de ADN en dos hélices para su


replicación, permitiendo la unión del complejo enzimático encargado de la adición
de nucleotidos y reparación de las hebras.

Universidad Abierta y a Distancia de México 12


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

- ADN polimerasa I, sintetiza los cebadores, sintetiza en sentido 3’5’, y colabora


con algunos procesos de reparación.

- ADN polimerasa II, esta enzima se involucra en los sistemas de reparación.

- ADN polimerasa III, encargada de la adición de los nucleótidos en la nueva


cadena de ADN que se está sintetizando.

- Toposimerasas, estas enzimas estabilizan las hélices de ADN en el momento en


que se encuentran separadas, manteniendo éstas como cadena sencilla mientras
se realiza la adición de nucleótidos, es decir, la replicación.

- Ligasa, enzimas encargadas de insertar pequeños fragmentos de nucleótidos


complementarios en zonas entre fragmentos en las cadenas; en ocasiones son
utilizadas como un sistema de reparación del ADN.

La replicación se divide en tres fases:

1. Iniciación. A partir del punto de origen, se genera una o dos horquillas de


replicación, debido a la acción de las helicasas que cooperan en la unión del
complejo proteico de replicación. Primeramente, se genera un pequeño fragmento
de ADN (oligonucleótido) conocido como cebador, a partir del cual se adhieren los
nucleótidos correspondientes en la nueva cadena.

2. Elongación. Esta etapa consiste en el avance de la horquilla de replicación,


adicionando las bases complementarias. La adición de las bases es función de la
enzima polimerasa III. La dirección de este proceso es de 5’  3, donde se va
extendiendo la cadena a partir del cebador debido a la adición de nucleótidos.

3. Terminación. Las regiones terminales son fragmentos de ADN que contienen


secuencias que bloquean el avance de las horquillas y desestabilizan el complejo
de replicación.

Esquematización del proceso de replicación con las enzimas descritas en la sección (Fig.
10).

Universidad Abierta y a Distancia de México 13


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

Figura 10. Esquema del proceso de replicación. Descripción del proceso conteniendo las enzimas
involucradas en este proceso (Alberts, et al., 2010).

Sistemas de reparación

Un factor de mucha importancia durante la replicación del ADN es la fidelidad con que se
sintetizan las nuevas cadenas. Debido al elevado recambio de nucleótidos generados
cada vez que se replica el contenido genético, las células contienden contra la
probabilidad de errores en este proceso mediante la implementación de diferentes
procesos de reparación (Alberts, et al., 2010).

Por otro lado, los procesos de reparación se utilizan para responder a los daños
espontáneos generados por factores del medio ambiente (mutaciones por lesiones
químicas, radiaciones, etc.) y evitar que deleciones, adiciones o mutaciones en el material
genético, pasen de generación en generación.

Observa el siguiente video donde se explica la replicación de ADN:


http://www.youtube.com/watch?v=8xnmaj9m87s

Universidad Abierta y a Distancia de México 14


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

1.1.2. Transcripción de ARNm

Para comprender este proceso se tiene que definir el concepto de gen como la "unidad de
ADN que contiene la información para especificar la síntesis de una única cadena
polipeptídica o ácido ribonucleico (ARN) funcional (tal como un ARNr ó ARNt; Lodish et
al., 2005). De manera general, casi todos los genes son codificantes, es decir, contienen
la información para generar proteínas; sin embargo, alguna proporción de ARN no genera
una cadena polipéptidica, pero presenta algunas funciones esenciales para la regulación
de procesos celulares como la traducción: es el caso de los ARN ribosomales (ARNr) y
los ARN de transferencia (ARNt), que se describirán más adelante.

La transcripción está definida como el proceso mediado por un complejo enzimático (ARN
polimerasa) por el que se genera ácido ribonucleico (ARN) de cadena sencilla a partir de
un fragmento de ADN. Se han descrito tres tipos de moléculas de ARN que, en caso de
bacterias, se sintentizan con la misma ARN polimerasa (Alberts, et al., 2010):

1) La función del ARN mensajero (ARNm), como se mencionó anteriormente, es


transportar la información adquirida a partir de una cadena de ADN para la síntesis
de una proteína. En el caso de bacterias, los ARNm pueden ser monocistrónicos
(portan la información de un gen) o policistrónicos (dentro de su secuencia llevan
la información necesaria para obtener dos o más proteínas maduras). Esta entidad
molecular tiene la región central donde se encuentra el marco abierto de lectura
(ORF- del inglés Open Reading Frame) o la región codificante del gen, es decir,
desde el codón de inicio hasta el codón de término de la transcripición. En los
extremos 5’ y 3’ se encuentran regiones no codificantes denominadas Lider y
trailer, que contienen secuencias involucradas para la regulación de la traducción y
en la estabilidad del ARNm. Por su parte, los ARNm policistrónicos presentan
pequeñas regiones espaciadoras (alrededor de diez nucleótidos) que separan a
las diferentes regiones codificantes. Es importante denotar que cada cistrón tiene
su propio ORF. En la figura 11 se esquematiza un ARNm policistrónico con sus
partes principales.

Universidad Abierta y a Distancia de México 15


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

Figura 11. Esquema de un proceso de flujo de información genética del operón de lactosa (Lac).
Se denota que el ARNm contiene más de un gen (policistrónico); en regiones rojo, las regiones no
codificantes de los extremos; en amarillo y verde, los diferentes ORF (imagen obtenida de
http://pendientedemigracion.ucm.es/info/genetica/grupod/Operon/Operon.htm).

2) ARN ribosómico (ARNr) es la forma más abundante de ARN en las células, ya que
constituyen a los ribosomas, que son complejos macromoleculares (constituidos de ARN y
proteínas) donde se realiza el proceso de traducción. Estos ARN se denominan según su
coeficiente de sedimentación (Grados Svedberg: S) y constituyen la subunidad mayor y
subunidad menor de los ribosomas. En procariotas, los ribosomas son de 70S, donde la
subunidad mayor constituye 50S y la menor 30S (Fig. 12). Su función en el proceso de
traducción se desglosará a detalle en la siguiente sección.

Figura 12. Esquema de un ribosoma procariote. Se describe la estructura de un ribosoma


desglosando la subunidad mayor 50S y la menor 30S en sus diferentes contenidos de moléculas
de ARN (Alberts, et al., 2010).

Universidad Abierta y a Distancia de México 16


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

3) ARN de transferencia (ARNt), esta molécula de ARN se constituye de una sola hebra
cuya función radica en su estructura debido a que ésta le permite reconocer secuencias
de ARNm para reclutar y transportar a los aminiácidos requeridos a los ribosomas para la
síntesis de proteínas (Alberts, et al., 2010). Existe una ARNt para cada aminiácido. En la
figura 13 se muestra la estructura funcional de un ARNt. Su función en el proceso de
traducción se desglosará a detalle en la siguiente sección.

Figura 13. Esquema de un ribosoma de transferencia. Esquema de la estructura funcional que


adopta un ARNt para el reconocimiento y transporte de aminoácidos durante la traducción de
proteínas (Alberts, et al., 2010).

Transcripción

La ARN polimerasa de bacterias se encuentra libre y está constituida por múltiples


subunidades. Esta enzima se une de manera aleatoria a distintas regiones del ADN del
procarionte; esta unión generalmente es débil, sin embargo, la enzima reconoce a la
secuencia de inicio o promotor y se une fuertemente. Posteriormente, la cadena de ADN
se abre para permitir la síntesis del ARNm; esta cadena de ARN se extiende, en dirección
5’  3’, hasta el momento en que la ARN polimerasa se encuentra con la secuencia de
terminación. La secuencia nucleotídica del ARNm también es conocido como transcrito,
respecto a la constitución de nucleotidos entre el ARNm y el ADN, la diferencia es que el
nucleótido timina (T) es reemplazado por el nucleótido uracilo (U) en el ARNm (Alberts, et
al., 2010). En la figura 14 se presenta una imagen donde se observa el proceso de
transcripción descrito anteriormente.

Universidad Abierta y a Distancia de México 17


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

Figura 14. Imagen del proceso de transcripción. Se observa la síntesis de la moléculas ARNm a
partir de la una de las hebras del ADN mediante la actividad de la enzima ARN polimerasa (Lodish,
et al., 2005).

En las bacterias, los ARNm no tienen procesamiento post-traduccional debido a que su


genoma no contiene intrones (secuencia de ADN no codificante), por lo tanto, todos los
transcritos se traducen directamente (Alberts, et al., 2010). Otra entidad molecular
bacteriana caracterizada en la decada de los 60 por Jacob F. y col., es el operón, definida
como largas cadenas de ARNm que contienen más de un gen para obtener varias
proteínas. Se sugiere que por medio de operones la bacteria sintetiza mayor cantidad de
proteínas en un menor tiempo, disminuyendo el consumo energético, sobre lo cual se
ahondará en la Unidad 3.

Tanto la transcripción como la traducción son procesos sincronizados, es decir, al iniciar


la formación del ARNm naciente, se acopla a la maquinaria de traducción para la rápida
generación de la proteína. Se sugiere que, con ello, la bacteria es capaz de responder
rápidamente a diferentes estímulos de estrés.

Video explicativo sobre la transcripción:


https://www.youtube.com/watch?v=mFh9L-nu8Hk

Universidad Abierta y a Distancia de México 18


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

1.1.3. Traducción de proteínas

La traducción es la acción de formar una proteína a partir de un ARNm. En este proceso


están involucrados tres componentes esenciales:

a) El ARNm que es transcrito a partir del ADN, que es interpretado en la traducción


en triadas nucleotídicas llamadas codones,
b) Los ARN de transferencia (ARNt), definidos con entidades moleculares de RNA
con estructura secundaria que portan un aminoácido en su extremo 3’. Se conocen
diversos ARNt con diferentes aminoácidos y anticodones (tripletes de nucleótidos
que reconocen codones específicos). Existen 61 combinaciones de codones para
20 diferentes aminoácidos, obteniendo lo que se ha denominado “código genético”
(piedra angular en la tecnología del ADN recombinante; Fig. 5). Es decir, un existe
más de un ARNt para 18 aminoácidos, excepto para: la metionina (Met; M – codón
AUG) y el triptófano (Trp; W – condón UGG); adicionalmente, también es
necesaria una señal de término de la traducción, la cual está dada por tres
codones (UAA, UAG, UGA; Lodish, et al., 2005; Alberts, et al., 2008).
c) El ribosoma es el complejo enzimático encargado de catalizar el proceso de
traducción, guiando la elongación del polipéptido a una velocidad promedio de 20
aminoácidos por segundo en procariontes. Están constituidos en su mayoría por
moléculas de ARN ribosomal (ARNr) que catalizan el proceso de traducción y
complejos proteicos que le dan estabilidad al ribosoma. Estas moléculas están
organizadas en una subunidad mayor (complejo donde se cataliza el enlace
peptídico de la proteína) y subunidad menor (ayuda en el acoplamiento ARNm con
el ARNt). Tienen un sitio para ARNm y sitios donde se unen los ARNt fuertemente
si empalman con el codón correcto, es decir, un Sitio A (Amino-acil ARNt;
reconocimiento de codón), Sitio P (Peptidil-ARNt; formación del enlace peptídico),
y Sitio E (Salida de ARNt. Fig. 15, Lodish, et al., 2005; Alberts, et al., 2008).

Universidad Abierta y a Distancia de México 19


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

Código Código
Aminoácido triada actual
Alanina Ala A
Arginina Arg R
Asparagina Asn N
Ácido
aspártico Asp D
Cisteína Cys C
Glutamina Gln Q
Ácido
glutámico Glu E
Glicina Gly G
Histidina His H
Isoleucina Ile I
Leucina Leu L
Lisina Lys K
Metionina Met M
Fenilalanina Phe F
Prolina Pro P
Serina Ser S
Treonina Thr T
Triptófano Trp W
Tirosina Tyr Y
Valina Val V
Figura 15. A la izquierda se ilustran la combinación de nucleótidos que generan el “codigo
genético” utilizado por los seres vivos para generar proteínas a partir del ARNm. A la derecha está
la lista de los 20 aminoácidos que forman las proteínas y las nomenclaturas utilizadas para
abreviar los nombres (Lodish, et al., 2005; Alberts, et al., 2010).

Universidad Abierta y a Distancia de México 20


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

Sitio Sitio Sitio


E P A

Subunidad
mayor
ribosoma

Subunidad
menor
ribosoma

Sitio de Unión
al ARNm

Figura 15. (A-C) Modelo del ribosoma bacteriano hélices y listones desde distintos ángulos. La
subunidad mayor (verde claro) muestra ARNt en los sitios E (rojo), P (naranja) y A (amarillo). Es
importante mencionar que durante la traducción no están ocupados todos sitios de unión de ARNt.
La subunidad menor se denota en verde oscuro. (D) Representación esquemática del ribosoma y
los sitios de unión de moléculas de ARN (Alberts, et al., 2010).

El proceso de traducción se lleva a cabo el espacio citoplásmatico de las bacterias en


dirección 5´ a 3’. Comienza con la formación de un complejo iniciador que está constituido
por la subunidad menor del ribosomal, la unión del el ARNt de iniciación (ARNfMet –ARN
formil metionina en procariontes) en el sitio P, y otras proteínas (factores de iniciación)
que ayudan en la estabilización del ribosoma con el ARNm y ARNtfMet. Este complejose
une al ARNm en una secuencia denominada Shine-Dalgarno (5'-AGGAGGU-3') que se
encuentra río abajo del codón de inicio AUG y se aparea con el rRNA 16S de la
subunidad menor para ubicar dicho codón en el sitio P del ribosoma. Posteriormente se
une la subunidad mayor y el ARNt del siguiente codón en el sitio A; esta unión es fuerte y
conlleva a la acción de la peptidil-tranferasa con hidrólisis de GTP para formar el enlace
peptídico. Posteriormente, el proceso de elongación de la cadena de aminoácidos
consiste en el movimiento del ribosoma en la cadena del ARNm, por lo tanto, los ARNt se
traslocan al sitio contiguo, es decir, el ARNtfMet pasa del sitio P al sitio E para ser liberado.
El ARNt del siguiente codón pasa al sitio P y queda disponible el sitio A para la unión del
siguiente ARNt del siguiente codón. Así cada aminoácido es agregado en el extremo

Universidad Abierta y a Distancia de México 21


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

carboxilo terminal, colaborando en el crecimiento de la cadena polipeptídica en un ciclo de


tres pasos secuenciales: unión del aminoacil-ARNt, formación del enlace peptídico y
translocación del ribosoma. Cuando el ribosoma llega a un codón de paro, un factor de
liberación se une a dicho codón, terminando la traducción y liberando la proteína completa
del ribosoma. Los ARN bacterianos son comúnmente policistrónicos, es decir, que
codifican múltiples proteínas que son traducidas por separado de la misma molécula de
ARNm (Lodish, et al., 2005; Alberts, et al., 2010).

Videos del proceso de traducción:


http://biomodel.uah.es/biomodel-misc/anim/traduc/traduccion-
procar.html
https://www.youtube.com/watch?v=mFh9L-nu8Hk

Videos representativos de la transcripción:


http://www.youtube.com/watch?v=vAtdvsXVNuc
http://www.youtube.com/watch?v=ChhfCRYtAnY

1.2. La mutación de ácidos nucléicos conlleva a la variabilidad


genética

En esta sección se abordarán los procesos involucrados en la variación fenotípica


bacteriana (cambios en el fenotipo celular de la población), dado que el genoma está
sujeto a modificaciones debido a mutaciones y, por otro lado, el intercambio material
genético es una estrategia de sobrevivencia bacteriana.

A continuación se abordará la mutación como proceso de variabilidad en la obtención de


bacterias genéticamente modificadas.

1.2.1. Definición de mutación

La palabra mutación se deriva del Latín mutatio, del verbo mutare, cuya apelación implica
cambio o movimiento. En el Diccionario de la Real Academia de la Lengua Española se
refiere a una “acción y efecto de mudarse o moverse”, y en sentido biológico, lo refiere
como “alteración producida en la estructura o en el número de los genes o de los
cromosomas de un organismo transmisible por herencia”. Sin embargo, el botánico Hugo
de Vries utilizó por primera vez el término mutación (1901) en un trabajo con plantas del
género Oenothera. En su investigación describió que algunas de las plantas obtenidas de

Universidad Abierta y a Distancia de México 22


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

sus cruzas presentaban variantes fenotípicas ausentes en los progenitores, sugiriendo


que había cambios espontáneos en sus cromosomas (chromos – color, soma - cuerpo) y
que se heredaban a su progenie; a este fenómeno, De Vries lo denominó mutaciones, y a
los organismos con variantes fenotípicas heredables los llamó mutantes (Paap 1996;
Curtis, et al., 2008).

Actualmente una mutación es definida como cambios heredables en la secuencia de ADN


de un organismo. Estos cambios pueden ser considerados “errores” en la replicación (la
DNA polimerasa bacteriana tiene una frecuencia de mutación de alrededor de un error en
109 nucleótidos), que generalmente son corregidos por la maquinaria de reparación, sin
embargo, también se han descrito mutaciones espontáneas, mutaciones inducidas por
agentes mutagénicos (químicos, físicos o biológicos); dichos procesos se han
aprovechado como herramientas en el área de la ingeniería genética. Sin embargo,
debido a la baja frecuencia de mutaciones en bacterias, sólo se pueden observar cuando
presentan tasas de crecimiento altas, tales que sean detectables, y frecuentemente
afectan propiedades reconocibles como requerimientos nutricionales, morfología o
resistencia a drogas (Lodish, et al., 2005; Betancor, et al., 2006; Alberts, et al., 2010).

1.2.2. Tipos de mutaciones

De acuerdo al efecto fenotípico, las mutaciones se clasifican en dos rubros:


mutaciones selectivas, son aquellas modificaciones que le dan “ventajas” a la bacteria
mutante sobre la cepa parental; es decir, este tipo de mutación le daría la capacidad de
responder eficientemente a un estímulo de estrés al que la bacteria progenitora no
sobreviviría, por ejemplo, la resistencia a algún antibiótico. Por otra parte, las mutaciones
no selectivas refieren a los cambios en el genoma, donde no hay ventajas selectivas con
respecto a la cepa bacteriana parental, como la pérdida de pigmento de las colonias de
Serratia marcescens, que se observa al ser cultivadas en agar.

Por otra parte, a nivel molecular se llaman mutaciones puntuales a los cambios en
nucleótidos particulares de la secuencia de ADN que pueden alterar el marco de lectura
de la traducción, es decir, mutación que cambia el marco de lectura de un aminoácido por
otro diferente, por ejemplo, en el codón GGC que codifica para glicina, si sufre un cambio
a GAC, codificaría para el aminoácido asparagina. Las mutaciones silenciosas son
aquellas modificaciones que no implican cambio en el aminoácido codificado, por ejemplo,
CGU, CGC, CGA O CGG; todos ellos codifican para la arginina. Por último, las
mutaciones sin sentido son aquellas que generan un codón de paro, por tanto, durante la
traducción se obtendrá una proteína incompleta (Lodish, et al., 2005; Betancor, et al.,
2006; Alberts, et al., 2010).

Universidad Abierta y a Distancia de México 23


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

Otro fenómeno que se ha descrito son las deleciones y las inserciones que generan
cambios en el tamaño del material genético, ya que se pierden o incorporan fragmentos
de ADN de distinto tamaño en el genoma. Si los fragmentos perdidos o ganados no son
múltiplos de 3 (debido a los codones), se obtienen mutaciones por desplazamiento del
marco de lectura que suelen provocar la pérdida total del fenotipo.

1.2.3. Descripción de mutagénesis dirigida para la obtención de


bacterias genéticamente modificadas (BGM)

El concepto de mutagénesis dirigida fue introducido en la segunda parte del siglo XX


cuando la tecnología del ADN recombinante se convirtió en un concepto económicamente
redituable, y se refiere a modificaciones de genes (secuencias de ADN que codifican para
una proteína) para obtener productos específicos. Para ello, cabe recordar que es habitual
el uso de la clonación para la inserción de un fragmento de ADN en un vector de
clonación (herramienta molecular que consiste, generalmente, en un fragmento circular de
ADN con todos elementos para ser replicado por un microorganismo hospedero), por
tanto, se puede tener infinidad de copias del gen de interés a partir de una muestra
limitada. La estrategia básica para obtención de ADN recombinante es:

Fragmento
de ADN Secuenciación
Ligación Transformación Clona
+
ADN
Recombinante + Cepa
Bacteriana
bacteriana
recombinante
Expresión de proteínas

Vector de Mutaciones, deleciones, inserciones, …


clonación

Esquema representativo de una estrategia de clonación de ADN. El fragmento de ADN que se


desea clonar debe ser obtenido de ADN genómico, ADNc (utilizando técnicas como enzimas de
restricción, PCR o RT-PCR). El vector de clonación será seleccionado de acuerdo a la cepa
bacteriana que se utilice en el proceso de BMG (lo cual se abordará en la siguiente Unidad). Con la
clona que presenta el recombinante, se pueden abordar diferentes líneas de trabajo: por un lado,
secuenciar el fragmento de ADN y verificar si es el fragmento deseado, si tiene mutaciones, etc.;
por otro, expresar la proteína que se genere del ADN clonado, modificarlo para hacer mutaciones
puntuales, deleciones, inserciones, etc.

Las herramientas necesarias para poder obtener ADN recombinante incluyen el uso de
técnicas de biología molecular como:

 Enzimas de restricción. Actualmente existen comercialmente una gran variedad de


endonucleasas que cortan el ADN en regiones específicas llamadas sitio de

Universidad Abierta y a Distancia de México 24


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

restricción. Son utilizadas para obtener fragmentos específicos de ADN a partir de


un genoma e insertarlo en vectores de clonación. Un ejemplo es la enzima Eco RI,
derivada de la bacteria Escherichia coli, que escinde en el ADN cuando encuentra
la secuencia 5’ GAATTC 3’ (Lodish, et al., 2005; Betancor, et al., 2006). Algunas
de estas enzimas tienen la capacidad de dejar extremos cohesivos, es decir,
algunos pares de bases sin aparear con su cadena complementaria, lo que les
permite unirse más fácilmente a otro fragmento de ADN cuando se aparean con su
nucleótido correspondiente. Otro tipo de endonucleasas no dejan pares de bases
sin aparear (Extremos “romos” – al ras -), sin embargo, también se pueden unir
otros fragmentos de ADN (Lodish, et al., 2005).

 La reacción en cadena de la polimerasa (PCR por sus siglas en inglés),


desarrollada en 1987 por Kary Mullis. El objetivo de esta técnica es amplificar el
número de copias de una secuencia de ADN específica a partir de una muestra
templado (Lodish, et al., 2005). Una variante de esta técnica es la reacción en
cadena de la polimerasa con transcriptasa reversa (RT-PCR por sus siglas en
inglés), técnica que tiene como base generar ADN complementario (cADN) a partir
de muestras de ARNm gracias a la acción de la enzima transcriptasa reversa. Esta
técnica permite obtener genes individuales para su manipulación independiente
(en el caso de eucariontes sin intrones; en caso de bacterias, genes individuales a
partir de un policistron; Lodish, et al., 2005).

 Ligasas. Son enzimas que realizan enlace fosfodiester entre dos moléculas de
ADN que están cercanas y son un herramienta esencial en la unión de ADN
extraño (transgenes) en vectores de clonación. Actualmente la ligasa más usada
en la industria del ADN recombinante es la ligasa de ADN T4 derivada del
bacteriófago T4 (virus que infecta a bacterias), y que es producida por métodos
biotecnológicos para su venta.

 Vectores de clonación. Como se mencionó anteriormente, es una molécula de


ADN que contiene todos los elementos necesarios, es decir, un promotor de
transcripción bacteriano, un gen que permita la selección de bacterias
transformadas, secuencia señal de inicio de la traducción, y un sitio múltiple de
clonación (Polylinker) conformado por sitios restricción para diferentes enzimas.
Éstos se han derivado de genomas de virus o bacterianos. Los vectores pueden
clasificarse en: plásmidos, bacteriófagos, cosmidos, fásmidos y cromosomas
artificiales de bacterias (BAC; Gómez, et al., 2006; Lodish, et al., 2008; mismos
que se describirán a detalle en la siguiente Unidad).

 Transformación. Es el proceso por el cual se inserta el ADN recombinante a la


bacteria para que lo integre a su genoma y lo replique con alta eficiencia, lo cual

Universidad Abierta y a Distancia de México 25


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

se abordará a detalle más adelante. Sin embargo, se ha descrito a la


transformación, transducción y conjugación, como mecanismos naturales de
integración de ADN extraño dentro del genoma bacteriano. Por otra parte,
experimentalmente la integración de ADN exógeno dentro de las bacterias se lleva
a cabo generando poros en la pared bacteriana por medio de agentes químicos o
eléctricos.

Actividades

La elaboración de las actividades estará guiada por tu docente en línea, mismo


que te indicará, a través de la Planeación didáctica del docente en línea, la dinámica
que tú y tus compañeros (as) llevarán a cabo, así como los envíos que tendrán que
realizar.

Para el envío de tus trabajos usarás la siguiente nomenclatura: BGMB _U1_A1_XXYZ,


donde BGMB corresponde a las siglas de la asignatura, U1 es la unidad de
conocimiento, A1 es el número de actividad, el cual debes sustituir considerando la
actividad que se realices, XX son las primeras letras de tu nombre, Y la primera letra
de tu apellido paterno y Z la primera letra de tu apellido materno.

Autorreflexiones

Para la parte de autorreflexiones debes responder las Preguntas de


Autorreflexión indicadas por tu docente en línea y enviar tu archivo. Cabe
recordar que esta actividad tiene una ponderación del 10% de tu evaluación.

Para el envío de tu autorreflexión utiliza la siguiente nomenclatura:


BGMB _U1_ATR _XXYZ, donde BGMB corresponde a las siglas de la
asignatura, U1 es la unidad de conocimiento, XX son las primeras letras de tu
nombre, y la primera letra de tu apellido paterno y Z la primera letra de tu
apellido materno

Cierre de la Unidad

En esta primera Unidad se recapitularon los procesos que definen al flujo de información
genética como los eventos necesarios para observar un fenotipo (generación de proteína)

Universidad Abierta y a Distancia de México 26


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

a partir de un genotipo (gen o genes contenidos en el genoma de las bacterias).


Particularmente se revisó la replicación del ADN como la generación de dos hebras de
material genético con base en una doble hélice parental de manera semiconservativa, es
decir, las dobles hélices “hijas” llevan una hebra de ADN parental y una recién sintetizada.
Se enfatizó que la generación de una proteína es un proceso continuo en bacterias, es
decir, la transcripción de ARN mensajero (ARNm) y la traducción de proteínas están
acopladas. La generación de ARN mensajero (ARNm) a partir de una hebra de ADN se
inicia cuando el complejo enzimático conocido como ARN Polimerasa se une a un
promotor; empieza a transcribir con dirección 5’  3’, y termina al encontrar una
secuencia de paro. Una característica de este proceso es la incorporación del nucleótido
uracilo (U) en sustitución a la timina (T). Por otra parte, la traducción de proteínas inicia
cuando la hebra de ARNm naciente es suficientemente grande para que se ensamble el
complejo de inicio que incluye a la unidad menor del ribosoma, el ARNfMet (ARN formil
metionina) en el sitio P y la unión al ARNm en la secuencia conocida como Shine-
Dalgarno para ubicar al codón AUG en el sitio P. Posteriormente se une la subunidad
mayor del ribosoma y el ARNt del siguiente condón en el sitio A, por lo tanto, se forma el
primer enlace peptídico con hidrólisis de GTP. Luego el péptido (secuencia naciente de
aminoácidos) se elonga de acuerdo a la unión secuencial de aminoácidos, según la
secuencia del ARNm y su decodificación con ARNt e hidrólisis de GTP (ver el código
genético). Este proceso termina cuando se encuentra un codón de paro y se libera el
complejo ARNm, ribosoma y proteína.

También se describieron los procesos involucrados en la variación fenotípica bacteriana,


es decir, mutaciones, como una estrategia de sobrevivencia bacteriana. En esta Unidad
se definió el término mutación como “cambios heredables en la secuencia de ADN de un
organismo”, así como las herramientas esenciales en la ingeniería genética como las
mutaciones espontáneas y mutaciones inducidas. Asimismo, se describieron las
mutaciones selectivas (cambios que le dan ventajas adaptativas), mutaciones no
selectivas, y mutaciones puntuales (cambios en nucleótidos individuales en el genoma), y
las pérdidas o ganancias de fragmentos de ADN como deleciones e inserciones,
respectivamente.

La última parte de la Unidad se encaminó a las estrategias utilizadas en la ingeniería


genética para la “manipulación” del flujo de información en la generación de productos de
interés particular. Se te refirió el concepto de clonación como la inserción de un fragmento
de ADN en una herramienta molecular que consiste en un fragmento circular de ADN con
todos elementos para ser replicado por un microorganismo hospedero, denominado
vector de clonación, lo cual se abordará a detalle en la siguiente Unidad. Se ilustró una
estrategia para amplificar un gen de interés a partir de una muestra limitada con técnicas
y herramientas experimentales, tales como la reacción en enzimas de restricción, cadena
de la polimerasa (PCR), reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa reversa
(RT-PCR), unión de fragmentos de ADN con enzimas denominadas ligasas, los vectores

Universidad Abierta y a Distancia de México 27


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

de clonación y la transformación bacteriana, es decir, la introducción del gen de interés en


una cepa bacteriana. Se han descrito, además, diferentes estrategias de transformación
bacteriana que serán revisadas a detalle en la siguiente Unidad, ya que son esenciales en
la genética molecular para el diseño experimental óptimo en la obtención de proteínas en
cantidades industriales.

Felicidades, es momento de iniciar la segunda Unidad de la asignatura: Transferencia de


material genético y selección bacteriana.

Para saber más

Revisión de los capítulos (2 - 4):


- Fundamentos químicos
- Estructura y función de las proteínas
- Mecanismos genéticos moleculares básicos

Del libro de texto:


Lodish, H., Berk, A., Matsudaira, P., Kaiser, C. A., Krieger, M., Scott, M. P., Zipursky, L.,
Darnell, J. (2005). Biología Celular y Molecular. 5ª Edición. Argentina: Ed. Médica
Panamericana.

Así como los capítulos 4 – 6 del libro de texto:


Alberts, B. (2010). Biología Molecular de la Célula. 5ª Edición. España: Ediciones Omega.

- DNA, cromosomas y genomas.


- Replicación reparación y recombinación de DNA.
- Cómo leen las células el genoma: Del DNA a la proteína.

Por su parte, para entender la estructura molecular de los ácidos nucleicos, se


recomienda visitar las páginas:

http://www.genomasur.com/lecturas/Guia02-2.htm
http://www.bioquimica.dogsleep.net/Teoria/archivos/Unidad81.pdf

A su vez, para entender la estructura molecular de las proteínas, se recomienda visitar las
páginas:

http://www.ehu.es/biomoleculas/peptidos/pep2.htm
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/enlace%20peptidico.html
http://themedicalbiochemistrypage.org/es/protein-structure-sp.php

Universidad Abierta y a Distancia de México 28


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

Fuentes de consulta

Bibliografía

Alberts, B. (2010). Biología Molecular de la Célula. 5ª Edición. España: Ediciones Omega.

Betancor, L., Gadea, P., Flores, K. (2006). Genética Bacteriana. Temas de Bacteriología y
virología médica. 2ª Edición. Uruguay: Universidad de la Republica.

Curtis, H., Shnek, A., Massarini, A., Aráoz, J., Behrens, V. (2008). Biología. 7ª Edición.
Argentina: Médica Panamericana.

Gómez, M. y Echenique, V. (2010). Biotecnología y Mejoramiento Vegetal I. Argentina:


Consejo Argentino para la Información y el Desarrollo de la Biotecnología.

Lodish, H., Berk, A, Matsudaira, P., Kaiser, C. A., Krieger, M., Scott, M.P., Zipursky, L.,
Darnell, J. (2005). Biología Celular y Molecular. 5ª Edición. Argentina: Ed. Médica
Panamericana.

Murray, P. R., Rosenthal, K. S., Pfaller, M. A., (2009). Microbiología Médica. 6ª Edición.
España: ElSevier.

Paap, D. (1996). Historia de las Ciencias. 1ª Edición. Chile: Editorial Andrés Bello.

Soberón, M. X. (1996). La ingeniería genética y la nueva biotecnología. México: Fondo de


Cultura Económica.

Videos

Free Sciencie Lectures (diciembre, 2011). Replicación del ADN (en español) [archivo de
video]. Recuperado de: http://www.youtube.com/watch?v=8xnmaj9m87s

Free Sciencie Lectures (abril, 2012). Transcripción de ADN A ARN [archivo de video].
Recuperado de: https://www.youtube.com/watch?v=mFh9L-nu8Hk

Jack, T., Gross, B. (1987). Traducción en procariotas [archivo de video. Traducción del
texto y comentarios añadidos por Angel Herráez]. (Universidad de Alcalá). Hanover, NH,
Dartmouth College. Recuperado de: http://www.dartmouth.edu/ artsci/bio/cbbc/courses/
bio23/bio23-1998/ index-b23-98.html

Universidad Abierta y a Distancia de México 29


Genética molecular bacteriana
Unidad 1. Flujo de información genética

Universidad Abierta y a Distancia de México 30