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CUESTIONARIO 1

1:

La tinción simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para que se vean las
formas y lasestructuras celulares básicas. En las tinciones simples se usa un único reactivo, que
preferentemente es de tipo básico y contiene un cromógeno (compuesto que da color al tinte)
con carga positiva, ya que la pared celular de las bacterias posee componentes con carga
negativa que atraen y enlazan el cromógeno. Se utilizansolamente para incrementar el
contraste; todas las células absorberán el colorante y quedarán teñidas delmismo color. Por
tanto, la tinción simple mejora la observación de la célula completa. Se fija el espécimen,
seañade el colorante y se deja el tiempo adecuado para que se absorba, se retira el exceso de
colorante y la preparación ya está lista para ser observada. Si se utiliza un mordiente (sustancia
química utilizada par intensificar la coloración), hay que añadirlo justo antes del colorante.

Técnica:

Las tinciones simples se realizan sobre preparaciones previamente secadas. Sobre un


portaobjetos con unasuspensión de microorganismos previamente secada y fijada a la llama,
se vierte una solución diluida de uncolorante y se mantiene durante uno o dos minutos; a
continuación se lava varias veces con agua y se seca.Debido a que las células son muy
pequeñas, este tipo de preparación suele observarse con aceite de inmersiónen la lente
objetivo.

Colorantes:

En la tinción simple se utilizan tintes como safranina, azul de metileno, cristal violeta y
carbolfuesina.
2:

3;
4:

Son las que emplean un solo colorante y tiñen todos los elementos por igual.‡

Técnica: fijar, cubrir, lavar y observar ‡

Ventajas: Observ. Rápida y sencilla de la morfología bacteriana.‡

Desventajas: no es posible diferenciar si la muestra es monoespecífica o mixta.

CUESTIONARIO 2

1:

1- Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor


aumento en posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de
la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.

2- Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo


cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes.Si no se
va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un
armario para protegerlo del polvo.

3- Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian,
limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de
óptica.

4- No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está


utilizando el microscopio.

5- Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite


que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de
filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasará el papel por la lente
en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse
en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o
xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos
disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción

2:

Algunos microscopios compuestos a menudo presentan objetivos que sólo pueden ser utilizados con
aceite de inmersión. Estos objetivos se identifican por tener grabada la palabra oil (aceite, en inglés)
en un lado, cerca del número que indica el aumento del objetivo. Estos objetivos no pueden ser
utilizados sin el aceite de inmersión. Los otros objetivos no deben ser usados con aceite de
inmersión ya que se pueden dañar si son inmersos en este aceite. El uso de lentes de inmersión es
esencial cuando se observan estructuras menores de 10 µm de tamaño. Por ejemplo, este aumento
se requiere cuando se requiere determinar la forma de una célula bacteriana. El aceite de inmersión
no incrementa el aumento de los lentes, pero mejora la resolución y la nitidez de la imagen
producida por dicho objetivo. Cuando la luz pasa a través de un material a otro, por ejemplo del
vidrio al aire, la luz se refracta o distorsiona. La luz de diferentes longitudes de onda se inclina a
diferentes ángulos. Estas refracciones dan como resultado una distorsión la cual se manifiesta más
a medida que el aumento del lente es mayor. Al colocar una gota de aceite de inmersión, el cual
tiene el mismo índice de refracción que el vidrio, entre el objetivo de 100X y el portaobjetos (placa)
se reduce significativamente la dispersión de la luz que ocurriría sino se utiliza el aceite de
inmersión. Por ello, se incrementa la resolución de la imagen.

3:

 Pureza del colorante.- a mayor grado


de impurezasa mayor error y menor calidad
de tincion.
 Concentracion del colorante.- a mayor
concentracion mayor error en la tincion; igual
que a menor concentracion.
 El pH del colorante.- este es un factor
fundamental ya que depende de las
estructuras que se desee observar para elegir
el pH adecuado.
 Conservacion del colorante .- se debe
conservarse en lugares frescos, secos, y
obscuros ; envasados y etiquetados.
 Tecnica Empleada.- se debera seguir
rigurosamente paso a paso cada tecnica de
tincion.
 Temperatura.- en la moyoria de los
casos se utiliza la temperatura ambiental pero
si existe algunas tecnicas que requieran de
temperatura adecuada.
 Cantidad de la muestra.- ebera ser
representativa y homogenea pero no muy
grande.
 Realizar corresctamente el frotis.- se
debe fijarse bien para que cuando se les
añada los colorantes mordientes y
decolorantes no arrastren a los
microorganismos que se desee observar.
 Soluciones mordientes.- en ciertos
casos son necesarios ya que actuan como
fijadores y ayudan a la fijacion del colorante a
las correspondientes estructuras .
 Tiempos de Tincion.- es necesario que
todas las sustancias se mantengan en la
preparcion un tiempo preciso y variable segun
la tincion.