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Determinación de punto Resultados y discusión de resultados.

isoeléctrico de proteínas Salting-out


Introducción
Todas las macromoléculas de la naturaleza,
adquieren una carga al disociarse en agua.
En el caso de los péptidos y de las proteínas,
la carga total, depende enteramente del pH
del medio.
Tubo de filtrado positivo en Biuret con NaOH; Tubo
Cualquier proteína tendrá una carga de filtrado positivo en Biuret con (NH4)2SO4
positiva si se encuentra disuelta en un medio
ácido, esto debido a que los grupos
carboxilo (-COO-), se encontrarán en su En el primer experimento, se llevó acabo la
forma neutra (COOH), mientras que los precipitación de las proteínas de la clara de
grupos amino, estarán protonados (-NH3+). huevo, empleando el método de Salting out,
el cual consiste en aumentar la
De igual manera, si la proteína se
concentración de iones progresivamente,
encuentra en un medio básico, esta se
haciendo que estos interactúen con las
encontrará con una carga negativa como
moléculas de agua que rodean la proteína
resultado de la presencia de los grupos
para que estas se unan entre sí y, de esta
carboxilo desprotonados (-COO-) y los
manera, dejar a la proteína sin interactuar
grupos amino tendrán una carga neutra (-
con el disolvente que, en este caso es agua.
NH2). Con esta información, se puede saber
Para que de esta manera pueda precipitar la
que hay un pH específico en el cual, la carga
proteína.
de las proteínas es igual a cero, este se
denomina pI o punto isoeléctrico. Precipitación por efecto de solventes.
En este punto, al tener un equilibrio
en las cargas tanto positivas como
negativas, la proteína deja de interaccionar
con el medio en el que se encuentra y, por
ende, se encuentra en su máxima
posibilidad de ser precipitada.
Precipitación por efecto de solventes. Tubo 1 HCl,
casi no precipita; Tubo 2 NaOH, se disolvió; Tubo 3
Regulador de acetatos, precipitó mucho.
Objetivos
● Se analizó el efecto que produce la
modificación de factores fisicoquímicos En el segundo experimento, se precipitaron
sobre la solubilidad de las proteínas. las proteínas afectando la solubilidad de la
misma por medio del disolvente en el que se
● Se determinó el punto isoeléctrico de
encontraba el cual, era agua, al añadir
la insulina, basándose en sus propiedades
etanol al 96%, de esta manera, se disminuyó
de solubilidad a diferentes valores de pH.
la polaridad del disolvente y se aumenta la medio en el que se encuentra y de esta
miscibilidad con etanol o acetona se manera, precipita.
disminuye el grado de hidratación tanto de
Conclusión
los grupos amino como de los grupos
carboxilo de la proteína y, de esta manera, Hay diferentes métodos para poder llevar a
precipitan. cabo la precipitación de proteínas debido a
las diversas propiedades que tienen estas
moléculas, entre las cuales, podemos
Precipitación por metales pesados remarcar la constante dieléctrica, sus
grupos funcionales, y la manera en que se
disocian en agua.
Bibliografía
Clar 2° 3° 1° 4° No se 5°
a de torna precipit precipit precipita solubili precipit
huev turbio a pero a a ligeramen za a poco Macarulla, J. & Goñi, F. (2002).
o y deja nivel te
blanc pasar de no Biomoléculas: lecciones de bioquímica
o luz dejar
luz estructural. Barcelona: Editorial Reverte. p.
115
Se observó una precipitación en la clara de Teijon, J. M. (2011). Bioquímica estructural:
huevo en el momento en el cual se agregó conceptos y test. Madrid: Editorial Tébar. p.
la solución que contenía metales pesado. 87
Cuando la proteína se encuentra con
Rodríguez, V. (2008). Bases de la
valores de pH superiores al punto
alimentación humana. España: Editorial
isoeléctrico está se disocia en una proteína
Gesbiblo. p. 79
negativa la cual se combina con el ion metal
positivo para un enlace entre el metal Lehninger, A. L. (1984). Bioquímica: Las
pesado que tiene la posibilidad de crear bases moleculares de la estructura y función
hasta cuatro enlaces con otros aminoácidos, celular. Barcelona: Ediciones Omega, S.A. p
volviendo esta molécula insoluble en agua. 165-166
De igual manera, los iones negativos se
combinan con las proteínas en forma
positiva para formar sales de proteína.
Determinación del punto isoeléctrico de
la insulina
En la determinación del punto isoeléctrico de
la insulina se concluyó que su valor de pH
donde muestra su mínimo de solubilidad es
igual a 2.7, con a lo que se reporta en
literatura, este resultado el punto donde la
molécula no posee carga eléctrica. En este
punto, la proteína deja de interactuar con el