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Laboratorio Morfofuncional basado en Evidencias

QUÍMICA SANGUÍNEA Y CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA ORAL (CTGO)

INTRODUCCIÓN
El suero y el plasma de la sangre contienen iones y moléculas en solución que proporcionan datos
acerca del metabolismo y salud del individuo. La química sanguínea es un conjunto de análisis para
conocer estos componentes, un estudio completo comprende veintisiete parámetros, el estudio básico
se compone de seis: glucosa, creatinina, urea, ácido úrico, colesterol y triglicéridos.
Por otra parte, el estudio de curva de tolerancia a la glucosa oral es una técnica que mide la capacidad
que posee el organismo para metabolizar la glucosa, esta habilidad se encuentra disminuida en personas
que padecen de diabetes mellitus tipo 2.
Con respecto a la creatinina, este es un compuesto de desecho del organismo, su concentración en la
sangre indica, con seguridad, el estado de la función renal de un paciente.
En esta sesión examinarás una muestra de sangre para conocer los niveles de glucosa en sangre, así
como de creatinina, además elaborarás una curva de tolerancia a la glucosa oral en un paciente en ayunas.
Estos análisis están directamente relacionados con el metabolismo de carbohidratos y el funcionamiento
renal.
Al principio de la sesión se enfocarán en la determinación de la glucosa durante el ayuno como parte
de la prueba de tolerancia a la glucosa y posteriormente, obtendrán por venopunción una muestra de
sangre para el cálculo de la concentración de glucosa y creatinina.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Analizar e interpretar la trascendencia metabólica de la glicemia y creatinemia.
• Conocer los signos y síntomas del padecimiento del paciente hipotético y relacionarlos con
probables resultados alterados de la Curva de Tolerancia a la Glucosa Oral, concentración de
glucosa y creatinina en sangre.
• Relacionar los resultados con el historial y condiciones clínicas del paciente sano y enfermo.
• Comprender la responsabilidad e importancia del conocimiento y cumplimiento de las reglas de
seguridad en los procedimientos toma de muestras, realización de las técnicas, así como el
manejo y disposición del material empleado.

MATERIALES BÁSICOS
· Paquete de guantes desechables (alumnos)
· Banda elástica
· Torundas con alcohol
· Paquete de jeringas con aguja hipodérmica BD Plastipak negra 22G x 32 mm 5mL (alumnos)
· Tubos de ensayo
· Etiquetas (alumnos)
· Marcador (alumnos)

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ETAPA I
PREPARACIÓN DE LA BITÁCORA, RECOLECCIÓN DE MATERIALES NECESARIOS PARA LA PRÁCTICA,
LAVADO DE MANOS, GUANTES DESECHABLES

ETAPA II
CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA ORAL
Objetivo: Elaborar una curva de tolerancia a la glucosa para conocer la capacidad que tiene el organismo
de metabolizar la glucosa.
Fundamento: Los pacientes con diabetes leve o controlada por la dieta pueden presentar, en ayunas,
niveles de glucosa en sangre que se encuentran dentro del intervalo normal, sin embargo, no poder
producir suficiente insulina para metabolizar rápidamente los carbohidratos ingeridos. Como resultado
de ello, la concentración de glucosa en sangre sube a niveles anormalmente altos y se retrasa el regreso
al valor normal. Así se determina que el paciente tiene menor tolerancia para glucosa. Esta prueba es de
máxima ayuda para establecer un diagnóstico en caso de diabetes.
En una respuesta normal, el nivel de glucosa en sangre en ayunas está dentro de límites normales; la
concentración pico se alcanza hacia los 30 a 60 minutos y no pasa de 170 mg/100mL y el nivel de glucosa
a las dos horas desciende por debajo de 120 mg/mL.

Condiciones para la obtención de la muestra:


En las condiciones ideales para realizar esta prueba, se debe de tener la seguridad de que el paciente
ha ayunado durante al menos 10 horas, pero no más de 16. En las condiciones de horario en las que se
cursa este laboratorio la persona a la que se le va a realizar el estudio NO deberá de haber tomado
alimento, en al menos 6 horas.
El paciente deberá estar sentado y tranquilo y no haber recibido ninguna droga que interfiera con el
metabolismo de los hidratos de carbono o con los métodos de laboratorio que determinan la glucosa.

Muestra: gota de sangre completa

Materiales:
· Medidor de glucosa en sangre Ascensia Contour (glucómetro)
· Lancetas
· Torundas con alcohol
· Bebida preparada con 75 g de sacarosa (azúcar de mesa) en 300 mL de agua
· Gotas de limón para dar sabor

Reactivo: Tiras reactivas


Procedimiento:
Nota importante: A partir de que se inserta la tira solamente se dispone de 2 minutos para realizar
la prueba, de lo contrario, se invalidará.
1. Seleccionar el área de punción, se prefieren los lados de la punta del dedo anular y medio.
2. Desinfectar por medio de torundas el punto donde se realizará la punción.
3. Efectuar la punción, a mayor presión aplicada más profunda será la punción, esperar unos
segundos.
4. Presionar a lo largo del dedo para formar una gota pequeña de sangre. (No oprima alrededor del
área de punción).

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5. Tocar inmediatamente la punta de la tira reactiva con la gota de sangre. No presione la punta
contra la piel o coloque la sangre sobre la superficie de la tira reactiva. A través de la punta de la
tira reactiva, la sangre se absorbe automáticamente.
6. Sostener hasta que el medidor emita un sonido característico. El medidor comenzará una cuenta
regresiva de 15 segundos hasta que la prueba finalice.
7. Mantener la tira reactiva en el medidor hasta que aparezca el resultado en la pantalla.
8. Limpiar la sangre de la piel con una toalla facial y mantener presionada el área de la punción,
hasta que deje de sangrar.
9. Anotar la lectura.
10. Posteriormente, en un lapso no mayor de 5 minutos tomar el contenido completo de la bebida
preparada con sacarosa. Esperar una hora y realizar una segunda determinación.
11. A la segunda hora realizar el último cálculo de la concentración de glucosa.

Resultados:
Graficar los valores obtenidos (Glucosa (mg/dL) versus tiempo (horas) después de la carga de glucosa
oral (Reporte).

Valores de referencia en el adulto obtenidos con esta técnica:

Ayunas (tiempo 0) 60 a 100 mg/dL


1 hora Menos de 200 mg/dL
2 horas Menos de 140 mg/dL
Para determinaciones con valores entre 140 y 200 mg/dL se considera que existe disminución en la
tolerancia a la glucosa y es un grupo de pacientes que está en mayor riesgo de desarrollar diabetes. Un
nivel de glucosa de 200 mg/dL o superior es un signo de diabetes.

PUNCIÓN VENOSA Y OBTENCIÓN DEL SUERO


1. En una bandeja especial colocar, gradilla, torundas, jeringas, torniquete, gasas, tubos etiquetados
con el nombre completo del paciente.
2. Obtener 5 mL de sangre del paciente, retirar la aguja de la jeringa y vaciar directamente al tubo de
ensaye, tapar y esperar aproximadamente 15 minutos para que se retraiga el coágulo.
3. Para balancear la centrífuga, preparar un tubo de ensaye de 13 x 100 con el mismo volumen de agua
y tapar. Nota: Un tubo de ensaye de esta medida tiene un volumen de aproximadamente 7 mL.
4. Colocar ambos tubos en la centrífuga (uno enfrente del otro).
5. Centrifugar a 3,500 rpm/5 minutos. El suero no debe mostrar indicios de hemólisis, ni debe estar
lipémico.

DETERMINACIÓN DE GLUCOSA EN SUERO


Objetivo: Determinar la concentración de glucosa en sangre como parte de los parámetros de la química
sanguínea.
Fundamento: La glucosa se determina después de una oxidación enzimática en presencia de glucosa
oxidasa. El peróxido de hidrógeno formado reacciona, catalizado por la peroxidasa, con fenol y 4-
aminofenazona para formar un indicador de quinoneimina rojo-violeta.

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Reacciones:
GOD
Glucosa + O2 +H2O Ácido Glucónico + H2O2
POD
2H2O2 + 4-aminofenazona + fenol quinona + 4H2O

Muestra: 10 µl de suero del paciente libre de hemólisis (problema)


Materiales:
· Espectrofotómetro · Gasas
· Centrífuga · Guantes
0
· Baño de agua a 37 C · Jeringas con agujas
· Cubetas · Puntas para micropipetas
· Tubos de 13 x 100 mm · Banda elástica
· Torundas con alcohol · Tubos con gel separador
· Micropipetas
· (Pipetas automáticas)

Reactivos: Solución de Reactivo GOD-POD, Estándar de glucosa, Suero control

Condiciones de Reacción:
Longitud de ensayo 505 nm
Cubeta 1 cm de espesor
Temperatura 37o C

Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.


Procedimiento:
1. Etiquetar 4 tubos de ensaye como: Blanco, Estándar (patrón de glucosa), Control (suero control) y
Problema (suero del paciente)
2. Vaciar con micropipeta azul 1000 µl (1 mL) del Reactivo GOD POD directamente en cada uno de los
tubos etiquetados.
3. Introducir (con mucho cuidado) en el suero, aproximadamente .5 cm de la punta de la micropipeta
amarilla para tomar 10 µl de suero problema (muestra) vaciar en el tubo de ensaye y mezclar, agitando
con la puntilla (4 o 5 veces).
4. Proceder de la misma forma para agregar 10 µl del Control y 10 µl del Estándar a los tubos que ya
contienen el reactivo GOD-POD.
5. Las instrucciones mencionadas anteriormente es común que se representen según el siguiente
esquema:

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6. Mezclar e incubar durante 10 minutos a 37oC, vaciar en las cubetas correspondientes.


7. Limpiar las cubetas con gasa y medir la Absorbancia (A), del Estándar, el Control y el Problema (muestra
del paciente) frente al Blanco de reactivo. El color es estable durante 30 minutos.

LINEALIDAD
El ensayo es lineal hasta una concentración de glucosa de 500 mg/dL. Para muestras con valores
superiores a dichas concentraciones, diluir 1/2 con NaCl 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.

Ecuación para calcular la concentración de glucosa en suero


(A) Paciente - (A) Blanco x 100 mg/dL (Conc. Estándar) = mg/dL de glucosa en la muestra del paciente
(A) Estándar) - (A) Blanco

Concentración del Estándar de Glucosa: 100 mg/dL

Factor de Conversión: mg/dL x 0.0555= mmol/L

Realiza los cálculos para obtener las concentraciones de glucosa del Suero Control y del Paciente.

Valores de referencia con esta técnica


Glucosa en ayuno 60 - 110 mg/dL = 3.33 – 6.10 mmol/L
En líquido cefalorraquídeo es del 60 al 80% del valor de glucosa en sangre.

Limpieza de las cubetas


En el área de las tarjas, los productos de reacción de las cubetas se deberán vaciar en el “Recipiente de
Residuos”, posteriormente se deberán de enjuagar 3 veces a chorro de agua de la llave y 3 veces con agua
destilada de las pizetas.

DETERMINACIÓN DE CREATININA EN SUERO


Objetivo: Determinar la concentración de creatinina en suero, sin desproteinización.
Fundamento: La creatinina en solución alcalina reacciona con ácido pícrico para formar un complejo
picrato (amarillo-anaranjado). La cantidad del complejo formado es directamente proporcional a la
concentración de creatinina.
Notas
· El grado de reacción y la absorbancia del producto de la reacción son muy sensibles a la
temperatura. Por lo tanto, la temperatura especificada debe ser mantenida.
· La hemólisis interfiere en la prueba.
· No usar sueros lipémicos.
· El método es susceptible a interferencias por altos niveles de sustancias reductoras.

Materiales:
· Espectrofotómetro · Guantes
· Cubetas · Gradillas

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· Gasas · Micropipetas
o
· Baño de agua 37 C · Puntas
· Tubos de ensaye 13 x 100
Reactivos:
· Reactivo de trabajo: Ácido pícrico (TÓXICO) e Hidróxido de sodio (CÁUSTICO)
· Estándar o patrón de creatinina (2 mg/dL)

Condiciones de Reacción:
· Longitud de onda · 492 nm
· Cubeta · 1 cm de espesor
· Temperatura · temperatura ambiente

Procedimiento
Para realizar con éxito esta técnica es necesario que se coordinen dos personas.

1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente al blanco de reactivo.


2. Utilizar 4 cubetas: Blanco, Estándar, Control y Problema, de acuerdo con el siguiente esquema:

Pipetear en las cubetas Blanco Estándar Control Paciente (Problema)


Reactivo de trabajo 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL
Estándar o Patrón 0.1 mL --- ---
Control --- 0.1 mL
Problema (muestra) --- 0.1 mL

3. Mezclar y poner en marcha el cronómetro.


4. Leer la Absorbancia (A1) al cabo de 30 segundos, y al cabo de 90 segundos (A2) de la adición de la
muestra.
5. Calcular ∆A = A2-A1 de la muestra del paciente y del estándar.

Cálculos:
∆A Muestra - ∆A Blanco X 2 (Concentración del estándar) = mg/dL de creatinina en la muestra
∆A Estándar - ∆A Blanco

Concentración del estándar de creatinina = 2 mg/dL


Factor de conversión: mg/dL x 88.4 µmol/L

Realice los cálculos para obtener las concentraciones de creatinina del suero control y del paciente.

Valores de referencia:
Suero
Hombre 0.7 – 1.4 mg/dL
Mujer 0.6 – 1.1 mg/dL

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Limpieza de las cubetas


En el área de las tarjas, los productos de reacción de las cubetas se deberán vaciar en el “Recipiente de
Residuos”, posteriormente se deberán de enjuagar 3 veces a chorro de agua de la llave y 3 veces con agua
destilada de las pizetas.

FAVOR DE DISPONER LOS MATERIALES EN LA FORMA CORRECTA Y DEJAR LAS MESAS


COMPLETAMENTE LIMPIAS

REPORTE

QUÍMICA SANGUÍNEA Y CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA ORAL (CTGO)


1. Portada
2. Nombre del paciente sano.
3. Elaborar la Curva de Tolerancia a la Glucosa del paciente sano en t= 0s, t= 1 h, t= 2 h
4. Resultado glucosa en sangre GOD-POD (paciente sano) _______________
5. Determinación de creatinina en sangre (paciente sano)________________
6. Nombre del paciente enfermo, edad, ocupación y diagnóstico presuntivo.
7. Elaborar la Curva de Tolerancia a la Glucosa del paciente enfermo en t= 0s, t= 1 h, t= 2 h
8. Resultado glucosa en sangre GOD-POD (paciente enfermo) ____________
9. Determinación de creatinina en sangre (paciente enfermo) _____________
10. Comparar cada uno de los resultados obtenidos con los valores de referencia.
11. Análisis de los datos
12. Explicación de los resultados del paciente sano y enfermo.
13. Conclusión
14. Referencias bibliográficas
15. Llenado de ambas historias clínicas

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