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ACTIVIDAD PRÁCTICA Nº 3:

SIEMBRA DE MICROORGANISMOS

Para obtener cultivos bacterianos en el laboratorio, las bacterias deben depositarse en medios de cultivo;
técnica denominada “siembra”

1.- DEFINICIONES:

1.1.- Siembra: inoculación de un microorganismo en forma aséptica en un medio de cultivo.

2.- TIPOS DE SIEMBRA:

2.1.- Siembra en Estría: usa asa de loop y se realiza sobre medio sólido (tubo de agar inclinado o placa de
petri)

2.2.- Siembra Homogénea: usa asa de Drigalsky y se realiza sobre placas de agar

2.3.- Siembra en Picadura: usa asa recta y se realiza en tubos de agar recto

2.4.- Siembra en líquido: usa asa de loop o pipetas y se realiza en tubos con medio de cultivo líquido

NOTA: El inóculo inicial puede provenir de un cultivo sólido o líquido.

3.- PROTOCOLOS DE SIEMBRA:

3.1.- Siembra en Estría:

1. Lavarse las manos y desinfectar el mesón con alcohol


2. Esterilizar el asa de loop al rojo
3. Abrir el tubo o placa de donde se va a tomar el inóculo
4. Flamear boca del tubo
5. Introducir el asa enfriándola en las paredes del tubo o tapa de la placa
6. Tomar la muestra con el asa estéril y fría
7. Flamear boca del tubo
8. Tapar el tubo o cerrar placa.
9. Abrir el tubo o placa en el que se sembrará.
10. Flamear boca del tubo
11. Sembrar según corresponda.
12. Flamear boca del tubo
13. Tapar el tubo o cerrar placa recién sembrada.
14. Esterilizar SIEMPRE el asa que se ha usado.
Se toma el asa con la muestra y se procede a hacer una estría en zig–zag desde un extremo a otro de la placa.
Sin esterilizar el asa, se puede repetir la misma operación en una segunda o tercera placa para llegar a obtener
colonias aisladas.

3.2.- Siembra Homogénea:

1. Lavarse las manos y desinfectar el mesón con alcohol


2. Abrir pipetero y flamear boca
3. Extraer pipeta en forma aséptica
4. Flamear boca de pipetero y cerrar. Siempre con pipeta en la mano.
5. Abrir el tubo de donde se va a tomar el inóculo
6. Flamear boca del tubo
7. Introducir la pipeta y tomar inóculo correspondiente
8. Flamear boca del tubo
9. Tapar el tubo y cerrar.
10. Abrir la placa en el que se sembrará.
11. Depositar inóculo en el centro de la placa
12. Dejar pipeta sucia en cementerio
13. Esterilizar asa de Drigalsky por flameado
14. Enfriar en la tapa de la placa (por dentro)
15. Realizar siembra
16. Cerrar placa y depositar el asa en frasco con alcohol

3.3.- Siembra en Picadura:

1. Lavarse las manos y desinfectar el mesón con alcohol


2. Esterilizar el asa recta al rojo
3. Abrir el tubo o placa de donde se va a tomar el inóculo
4. Flamear boca del tubo
5. Introducir el asa enfriándola en las paredes del tubo o tapa de la placa
6. Tomar la muestra con el asa estéril y fría
7. Flamear boca del tubo
8. Tapar el tubo o cerrar placa.
9. Abrir el tubo de agar recto en el que se sembrará.
10. Flamear boca del tubo
11. Sembrar según corresponda.
12. Flamear boca del tubo
13. Tapar el tubo recién sembrado.
14. Esterilizar SIEMPRE el asa que se ha usado.

3.4a.- Siembra en Líquido con asa:

1. Lavarse las manos y desinfectar el mesón con alcohol


2. Esterilizar el asa de loop al rojo
3. Abrir el tubo o placa de donde se va a tomar el inóculo
4. Flamear boca del tubo
5. Introducir el asa enfriándola en las paredes del tubo o tapa de la placa
6. Tomar la muestra con el asa estéril y fría
7. Flamear boca del tubo
8. Tapar el tubo o cerrar placa.
9. Abrir el tubo de caldo en el que se sembrará.
10. Flamear boca del tubo
11. Introducir asa hasta el líquido y agitar para desprender inóculo.
12. Flamear boca del tubo
13. Tapar el tubo recién sembrado.
14. Esterilizar SIEMPRE el asa que se ha usado.

3.4b.- Siembra en Líquido con pipeta:

1. Abrir pipetero y flamear boca


2. Extraer pipeta en forma aséptica
3. Flamear boca de pipetero y cerrar. Siempre con pipeta en la mano.
4. Abrir el tubo de donde se va a tomar el inóculo
5. Flamear boca del tubo
6. Introducir la pipeta y tomar inóculo correspondiente
7. Flamear boca del tubo
8. Tapar el tubo y cerrar.
9. Abrir el tubo de caldo en el que se sembrará.
10. Flamear boca del tubo
11. Introducir la pipeta y dejar caer el inóculo.
12. Dejar pipeta en cementerio
13. Flamear boca del tubo
14. Tapar el tubo recién sembrado.