UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA – ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE

INGENIERIA AMBIENTAL

Docente: Blga. Fiorella Gissella Pérez Flores

Curso: Toxicología Ambiental

1. ENSAYO DE TOXICIDAD AGUDA CON SEMILLAS DE

LECHUGA

Fernández Zafra, Miguel Ángel mesa N°

2. INTRODUCCION:

El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga (Lactuca sativa) es una prueba estática de
toxicidad aguda (120 horas de exposición) en el que se pueden evaluar los efectos fitotóxicos de
compuestos puros o de mezclas complejas en el proceso de germinación de las semillas y en el
desarrollo de las plántulas durante los primeros días de crecimiento. Como puntos finales para la
evaluación de los efectos fitotóxicos, se determina la inhibición en la germinación y la inhibición en
la elongación de la radícula y del hipocotilo. Es importante destacar que durante el período de
germinación y los primeros días de desarrollo de la plántula ocurren numerosos procesos fisiológicos
en los que la presencia de una sustancia tóxica puede interferir alterando la supervivencia y el
desarrollo normal de la planta, siendo por lo tanto una etapa de gran sensibilidad frente a factores
externos adversos. Por otra parte, muchas de las reacciones y procesos involucrados son generales
para la gran mayoría de las semillas, por lo que la respuesta de esta especie y los datos obtenidos a
partir de la aplicación de esta prueba son en gran medida representativos de los efectos en semillas o
plántulas en general. El éxito o aptitud de una plántula para establecerse en un ambiente determinado
es de gran importancia para garantizar la supervivencia de la especie. La evaluación del desarrollo de
la radícula y del hipocotíleo constituyen indicadores representativos para determinar la capacidad de
establecimiento y desarrollo de la planta.
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3. OBJETIVOS:

 Evaluar los efectos fitotoxicos de una solución que contiene un elemento contaminante
en el proceso de germinación de las semillas y en el desarrollo de las plántulas de la
lechuga, durante los primeros días de crecimiento.

4. MARCO TEORICO

El éxito o aptitud de una plántula para establecerse en un ambiente determinado es de gran importancia
para garantizar la supervivencia de la especie. La evaluación del desarrollo de la radícula y el hipocotilo
constituye indicadores representativos para determinar la capacidad de establecimiento y desarrollo de
la planta. A diferencia de la prueba tradicional de germinación de semillas, la evaluación del efecto en
la elongación de la radícula y el hipocotilo de las plántulas, permite observar el efecto tóxico de
compuestos solubles presentes en niveles de concentración tan bajos, que no son suficientes para
inhibir la germinación. Sin embargo, pueden retardar o inhibir completamente los procesos de
elongación de la radícula o el hipocotilo, dependiendo ello del modo y sitio de acción del compuesto.
De esta manera, la inhibición de la elongación en la radícula e hipocotilo, constituyen indicadores
subletales muy sensibles para la evaluación de efectos biológicos en vegetales, aportando información
complementaria a la proporcionada al estudiar el efecto en la germinación. Este ensayo puede ser
aplicado para la evaluación de la toxicidad de compuestos puros solubles, de aguas superficiales (lagos,
ríos), aguas subterráneas, aguas para consumo humano, aguas residuales domésticas e industriales,
además de lixiviados de suelos, sedimentos, lodos u otras matrices sólidas RODRIGUEZ, S. (2010) A
diferencia de otras pruebas en las que se consideran algas o plantas acuáticas sumergidas como
organismo de diagnóstico, el bioensayo con semillas permite evaluar la fitotoxicidad de muestras
coloreadas o con elevada turbiedad de manera directa y sin necesidad de filtración previa, reduciéndose
así las interferencias debidas al pretratamiento y simplificando el procedimiento de prueba. Si bien L.
sativa no es una especie representativa de ecosistemas acuáticos, la información generada a partir de
esta prueba de toxicidad proporciona datos acerca del posible efecto de los contaminantes sobre las
comunidades vegetales cercanas a las márgenes de cuerpos de agua contaminados, siendo también una
especie interesante de considerar por su importancia desde el punto de vista hortícola. Por otra parte,
L. sativa es de fácil y rápida germinación por lo que es posible desarrollar la prueba en pocos días.
RODRIGUEZ, S. (2010)

5. MATERIALES

 Semillas de lechuga
 Cajas Petri
 Matraces de 250 ml
 Pipetas volumétricas de 1, 2, 5 y 10 ml
 Regla
 Pinzas
 Toallas de papel
 Bolsas plásticas
 Papel de 90 mm de diámetro

6. METODOLOGÌA

De acuerdo al esquema de la figura 2, el procedimiento del ensayo de toxicidad que realizaras

deberá seguir los pasos en listado:
 Colocar en cada de 6 cajas Petri numeradas (C1…C6) un disco de papel filtro.
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 Colocar en las cajas 5m L de las siguientes diluciones (evitando que se formen bolsas de aire).
C1. Control negativo1: agua dura reconstituida.
C2. Control negativo 2: agua de crecimiento.
C3. Control positivo: 15 mg/L de CuSO4 o ZnCl2.
C4. Solución problema 1: 2.5 mg/L CuSO4 o ZnCl2.
C5. Solución problema 2: 5 mg/L CuSO4 o ZnCl2
C6. Solución problema 3: 10 mg/L CuSO4 o ZnCl2.
 Etiquetar cada caja con los siguientes datos: soluci0on, fecha y hora de inicio y termino,
materia grupo y equipo.
 Con la ayuda de una pinza colocar 20 semillas en cada caja, uniformemente distribuidas en
toda la caja. Tapar las cajas.
 Colocar las cajas en bolsas de plástico negras, para evitar la pérdida de agua por evaporación
y para no inhibir la germinación, debido a que las semillas son fotoblásticas negativas.
 Incubar a 22 ° C durante 120 horas.
 Realizar 3 repeticiones para cada ensayo.

6. RESULTADOS.

1. Promedio y desviación estándar de la elongación de la radícula y del hipocotílo de las plántulas

de cada repetición.

MUESTRA: C1 – AGUA POTABLE

C1 COTILEDONES HIPOCOTILO RADICULA

SUMA 10.35 30.6 36.2

PROMEDIO 0.25875 0.765 0.905

DESV 0.135347369 0.575816032 0.5514317

MUESTRA: C2 - AGUA

C2 COTILEDONES HIPOCOTILO RADICULA

SUMA 29.1 24.3 6.8

PROMEDIO 1.455 1.215 0.34

DESV 0.41609083 0.25188761 0.0680557

Muestra: C3 CuSO4 15 mg/l

C3 COTILEDONES HIPOCOTILO RADICULA

SUMA 9.7 30.7 48.1

PROMEDIO 0.26216216 0.82972973 1.3

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DESV 0.58435964 0.37679395 0.52103137

Muestra: C4 CuSO4 2.5 mg/l

C4 COTILEDONES HIPOCOTILO RADICULA

SUMA 12.4 41.4 49.8

PROMEDIO 0.31 1.035 1.245

DESV 0.06324555 0.32545826 0.38360637

Muestra: C5 CuSO4 5 mg/l

C5 COTILEDONES HIPOCOTILO RADICULA

SUMA 5.8 18.5 27.4

PROMEDIO 0.01 0.925 1.37

DESV 0.071818485 0.494043467 0.6594255870

Muestra: C6 CuSO4 10 mg/l

C6 COTILEDONES HIPOCOTILO RADICULA

SUMA 7.3 10.6 37.2

PROMEDIO 0.365 0.53 1.86

DESV 0.0875094 0.17198531 0.39121942

2. Porcentaje de inhibición del crecimiento de la radícula y del hipocotíleo con el promedio de

elongación para cada dilución respecto del promedio de elongación del control negativo.
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MUESTRA HIPOCOTILO RADICULA % INHIBICION % INHIBICION

HIPOCOTILO RADICULA

Control 0.99 0.6225

negativo
C3 0.82972973 1.3 16.18% 108.83%
C4 1.035 1.245 4.54% 99.2%
C5 0.925 1.37 6.56% 119.2%
C6 0.53 1.86 46.46% 197.6%

3. Porcentaje de inhibición de la germinación.

MUESTRA HIPOCOTILO RADICULA PORCENTAJE (%)

Control negativo 0.99 0.6225 99%

C3 0.82972973 1.3 82%
C4 0.035 1.245 30%
C5 0.925 1.37 92%
C6 0.53 1.86 53%
TOTAL 434% 639%
% inhibición de 334% 539%
germinación

4. Con los datos anteriores realizar una gráfica dosis-respuesta colocando en el eje de las
ordenadas el porcentaje de inhibición y en el eje de las abscisas la concentración.

Dosis- respuesta
120%

100%
Porcentaje de inhibición

80%

60%

40%

20%

0%
0 mg/l, CuSO4 15 mg/l, CuSO4 2.5 mg/l, CuSO4 5 mg/l, CuSO4 10 mg/l, CuSO4

ConcentraciónSerie 1 CuSO4
en mg/l,
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7. CONCLUSIONES

 Al concluir con la practica podemos afirmar que la Muestra C4 - CuSO4 2.5 mg/l, es el
más toxico ya que solo tiene un 30% de germinación.
 También se concluye que la Muestra: C5 CuSO4 5 mg/l, es el menos toxico ya que en su
porcentaje de germinación tiene un 92%.
 Al final de la practica también pudimos determinar que a la muestra C5, además de ser el
menos toxico también en el promedio de crecimiento de los cotiledones es el de menor
crecimiento, entonces quizá no afecta a la germinación, pero si al crecimiento de los
cotiledones.
 La alteración del tamaño de la radícula y el hipocolito varía de acuerdo a la concentración
del contaminante

8. ANEXOS
1. Desarrollo de los resultados
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9. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

Bowers N., J. R. Pratt, D. Beeson y M. Lewis. 1997. Comparative Evaluation of Soil Toxicity
using Lettuce Seeds and Soil Ciliates. Environmental Toxicolology and Chemistry 16: 207-
213.

Cheung Y.H., M.H Wong. y N.F.Y. Tam. 1989. Root and Shoot Elongation as an Assessment
of Heavy Metal Toxicity and Zn Equivalent Value of Edible Crops. Hydrobiologia 188/189:
377-383.

Dutka B. 1989. Short-Term Root Elongation Toxicity Bioassay. Methods for Toxicological
Analysis of Waters, Wastewaters and Sediments. National Water Research Institute (NWRI).
Environment Canada, Canadá.

Ellis, R. H., T. D. Hong y E. H. Roberts, 1985. Handbook of Seed Technology for Genebanks.
Vol.1 Principles and Methodology. International Board of Plant Genetic Resources, Roma. 210
pp.

Wang W, 1987. Root elongation method for toxicity testing of organic and inorganic pollutant.
Environmental Toxicolology and Chemistry 6: 409-414