IDENTIFICACION DE LA TEMPERATURA OPTIMA PARA LA VIABILIDAD Y

DESARROLLO LARVARIO DE HUEVOS DE Toxocora canis

Mayra Quispe1, Nelly Pizarro 1, Vanessa Romero1 & Gloria Sanz

1Laboratorio de Parasitología. Facultad de Ciencias Naturales y Matemática (FCNNM). Universidad
Nacional Federico Villarreal (UNFV). El Agustino, Lima, Perú.

RESUMEN

La toxocariasis es una enfermedad zoonótica transmitida por contacto con el

suelo contaminado y causada principalmente por la ingestión de huevos larvados
de Toxocara canis. El objetivo del presente ensayo fue estudiar e identificar la
temperatura adecuada en la cual existe mayor viabilidad y desarrollo larvario de
huevos T. canis en cultivo, caracterizar los huevos no viables y las secuencias
de las mudas larvarias, y comparar el desarrollo embrionario de los huevos en
las etapas tempranas de división y al alcanzar la maduración completa. Se
trabajó con tres temperaturas diferentes (18°C, 27°C Y 31°C).Los estadios de
desarrollo identificados fueron: huevos con una célula, con dos células, con tres
células y con cuatro células; mórula, blástula, gástrula, prelarva, y estado
larvario. Los huevos no viables tenían el citoplasma degradado, cubierta exterior
delgada o colapsada, y su larva no se movía al exponerla a la luz. La
recuperación de larvas fue positiva durante toda la experiencia (36 días) en los
preparados para las temperaturas de 27 °C y 31 °C. Sin embrago en este ensayo
se demostró que para un adecuado desarrollo de los huevos T. canis hasta
alcanzar su estadio infectivo la temperatura de 31 °C fue la óptima obteniéndose
un 36% de efectividad, mientras que en la temperatura ambiental que oscilo en
un promedio de 18 °C durante todo el periodo de observación no logró completar
su desarrollo embrionario

Los embriones en desarrollo en el medio ambiente pueden considerarse como

un riesgo potencial para la salud pública. La identificación precisa de los estadios
de desarrollo y la clara diferenciación de huevos viables y no viables, pueden
ayudar a determinar con exactitud una tasa basal de desarrollo, la cual sería útil
en el estudio de compuestos ovicidas.

Palabras clave: Toxocara canis; toxocariasis; zoonosis; estructuras

embrionarias; larva.
SUMMARY

Toxocariasis is a zoonotic disease transmitted by contact with contaminated soil

and caused mainly by the ingestion of larval eggs of Toxocara canis. The
objective of the present study was to study and identify the adequate temperature
in which there is greater viability and larval development of T. canis eggs in
culture, to characterize the nonviable eggs and the sequences of the larval molts,
and to compare the embryonic development of the eggs in the early stages of
division and reaching full maturation. We worked with three different
temperatures (18 ° C, 27 ° C and 31 ° C). The stages of development identified
were: eggs with one cell, with two cells, with three cells and with four cells; morula,
blastula, gastrula, prelarva, and larval stage. The non-viable eggs had degraded
cytoplasm, thin or collapsed outer cover, and their larva did not move when
exposed to light. The recovery of larvae was positive throughout the experience
(36 days) in the preparations for the temperatures of 27 ° C and 31 ° C. However,
in this trial it was demonstrated that for an adequate development of the T. canis
eggs until reaching its infective stage, the temperature of 31 ° C was the optimum,
obtaining a 36% effectiveness, while in the environmental temperature I oscillate
in an average of 18 ° C during the entire observation period failed to complete its
embryonic development
Embryos developing in the environment can be considered as a potential risk to
public health. Accurate identification of developmental stages and clear
differentiation of viable and nonviable eggs can help to accurately determine a
basal rate of development, which would be useful in the study of ovicidal
compounds.

Keywords: Toxocara canis; toxocariasis; zoonoses; embryonic structures; larva.

 INTRODUCCION
Toxocara canis es un nemato
parásito de vertebrados
perteneciente al orden Ascaridida,
geohelminto y es el agente causal de
la toxocarosis, una enfermedad
común en los perros (Anderson,
2000). Es uno de los nematodos más
estudiados llevados a cabo en perros
de zonas urbanas de países como
Perú (1, 2), Argentina (3, 4) y México
Un hecho común y significativo en la
cultura de los seres humanos es la
posesión de animales como
mascotas, de los cuales predominan
por lo general, perros y gatos.
Particularmente en los
asentamientos urbanos, el hombre
acostumbra guiar a sus mascotas
hacia los parques y plazas públicas,
donde estos animales, incluyendo
los que no tienen dueño, eliminan
rutinariamente sus heces (Cazorla et
al., 2007)(10). En el Perú el 32% de
los perros estaban infectados en
diferentes distritos de Lima,
principalmente los animales
menores de 8 meses; 28% de perros
del distrito de Lurigancho, provincia
de Chosica, 47% en Chincha Alta; el
45% en Cusco y 80% en Huánuco.
(Maguiña, Ciro 2010) (5)
La toxocarosis es una de las
zoonosis más prevalentes a nivel
mundial (Maguiña, 2010; Sariego et
al., 2012) causada principalmente
por Toxocara canis, debido a la
ingesta de huevos que contienen en
su interior larvas que se liberan de
sus envolturas en el intestino
delgado proximal y penetran la
mucosa, posteriormente llegan al
hígado por vía porta, continúan por el
sistema venoso hasta llegar a los
pulmones y desde ahí, por la
circulación sistémica se alojan en
otros órganos, incluidos cerebro,
corazón y tejido muscular, siendo
esta una condición clínica conocida
como larva migrans visceral (LMV)
(Beaver y cols., 1952, Beaver, 1969),
también conocida como toxocarosis
sistemática; además, se consideran
otras formas de presentación como
larva migrans ocular (LMO) o
toxocarosis ocular, toxocarosis
cerebroespinal o neurológica y
toxocarosis encubierta o
asintomática(6).
La toxocarosis comprende cuatro
mecanismos de transmisión:
ingestión de huevos embrionados,
transmamaria, transplacentaria y por
ingestión de hospederos paraténicos
en donde se alojan larvas
enquistadas en sus tejidos. Los
cachorros menores a tres meses de
edad son los hospederos definitivos
en donde los adultos de este parásito
se alojan en el intestino de los canes.
El comportamiento migratorio es
similar al que desarrollan otros
ascáridos.
Además de perros, T. canis es capaz
de infectar a una gran variedad de
hospederos paraténicos como
roedores (ratas, ratones, cobayos),
conejos, rumiantes, aves de crianza
(pollos y palomas), animales
silvestres como zorras (Alopex
logopus y Vulpes vulpes), coyotes
(Canis latrans), lobos (Canis lupus),
lombrices, insectos como las
cucarachas (Periplaneta sp., Blatella
sp.), cerdos y el hombre (Dunn,
1983; Soulsby, 1987; Quiroz, 1997;
Alba, 1999).
El cambio de temperatura y
condiciones ambientales como
humedad, exposición a la luz, etc.,
son de gran importancia para el
desarrollo de huevos de toxocora
canis así como de otros
geohelmintos, para así poder
obtener huevos en estados larvales
L-II, los cuales son la forma
infectante de estos parásitos (atias,).
De estos factores influyentes en el
desarrollo de los parásitos, el que
cabe de resaltar más es la
temperatura, ya que esta genera un
efecto en el medio ambiente del
parasito, promoviendo así la
expansión de los tipos más
virulentos, resistente y adaptados al
fenómeno de cambio climático, es
por eso que el siguiente trabajo tiene
como finalidad identificar la
temperatura optima de la
embriogénesis y estadio de huevos
de Toxocora canis.
METODOLOGIA
Obtención de los parásitos
adultos. Se obtuvieron vermes
adultos de Toxocora canis, de ocho
perros cachorros parasitados,
mediante un diagnóstico de heces
por el método de sedimentación
espontanea (o método de Lutz), de
huevos característicos en las
muestras de heces evaluadas.(7) Se
les suministro Albendazol de 50mg
en una sola toma a cada cachorro
para la posterior eliminación de los
vermes, siendo estos recolectados
en un recipiente de boca ancha para
su posterior lavado con suero
fisiológico al 0,85 y separación de las
hembras.
Como carácter diferencial del género
para su identificación, se evidencio
en la parte lateral del cuerpo 2
aletas.
Se utilizaron características
morfológicas como tamaño y parte
posterior del verme para la
separación de las hembras de los
machos, en donde las hembras
presentaban mayor tamaño (10 – 18
cm) y enrollamiento en la parte
posterior del cuerpo a diferencia de
los machos que presentaban menor
tamaño (9 – 13 cm) y dos espículas
en la parte posterior.
Obtención de los huevos. Para la
recolección de los huevos
fecundados, se realizó una disección
longitudinal de las hembras de T.
canis y se identificó el útero, como el
conducto blanquecino más
protuberante, obteniéndose el
contenido en placas Petri con agua
destilada, todo el proceso se realizó
con ayuda de estereoscopio.
Los huevos obtenidos se separaron
en 3 tubos cónicos de 20 ml, los
cuales se lavaron con agua
destilada por tres veces a 2000 rpm
x 5 minutos, al finalizar se obtuvo un
sedimento de 0.5 ml que se
suspendió hasta un volumen de 20
ml y se separaron en placa Petri de
60 x15 mm de vidrio de 20 ml de
capacidad, obteniéndose así 6
placas Petri con un volumen de 10 ml
de suspensión de huevos cada una.
La cantidad de huevos por placas fue
calculada por cámara de New Bauer
con la siguiente formula:
concentración= células contadas x
10 000 /número de cuadros, donde el
resultado final se multiplico por el
factor de dilución 40, obteniéndose
así la cantidad de huevos por mililitro
en cada placa.
Embriogénesis de huevos. Se
formaron 3 tratamiento con 2
repeticiones por tratamiento, siendo
los tratamiento sometidos a 3
temperaturas de incubación por 31
días; Tratamiento 1: 18 °C
tratamiento 2: 26 – 27 °C y
tratamiento 3: 30 – 31 °C, los cuales
se evaluaron para los 7, 15, 21 y 31
días la observación del desarrollo
larval (L-II) y el porcentaje de huevos
embrionados.
#
T°C Medio
Embrionacion/ #
huevos
tiempo huevos
(36 días)
18°C No 0 0
27°C
agua
Si, en 9 días 2 14
estéril
31°C Si, en 9 días 5 36
La cantidad de huevos embrionados
para los días de evaluación (7, 15, 21
y 31 días) se realizó mediante el
conteo en portaobjeto con un
volumen de muestra de 50µl
obtenida de forma homogénea,
contándose 200 células y siendo
estas llevadas al porcentaje.
Durante el tiempo de incubación
cada repetición de tratamiento se
oxigenó con la finalidad de
suspender los huevos de la placa.
Los datos obtenidos se evaluaron en
el programa estadístico PAST.
RESULTADOS
Los estadios de desarrollo
identificados fueron: huevos con una
célula, con dos células, con tres
células y con cuatro células; mórula
temprana, mórula tardía, blástula,
gástrula, pre-larva, primer, segundo
y tercer estado larvario.
Los resultados se presentan en la
tabla N°1. La recuperación de larvas
fue positiva durante toda la
experiencia en los preparados para
las temperaturas de 27 °C y 31 °C.
DISCUSIONES
Los embriones en desarrollo en el
medio ambiente pueden
considerarse como un riesgo
potencial para la salud pública. En
este ensayo se demostró que para
un adecuado desarrollo de los
huevos T. canis hasta alcanzar su
estadio infectivo fue la temperatura
de 31 grados obteniéndose un 36%
de efectividad. Sin embargo, en la
temperatura ambiental que oscilo en
un promedio de 18 °C durante todo
el periodo de observación no logró
completar su desarrollo embrionario.
Según indica Despommier (2003),
en bajas temperaturas el desarrollo
embrionario puede tomar largos
periodos de tiempo. Además, se
sabe que el pH no es una variable
significativa asociada al desarrollo
de T. canis ya que se mantuvo en un
mismo medio a los tres tratamientos
(Pierangel et al., 2003) (8); por otro
lado, si consideramos las
condiciones en las que se realizó el
cultivo, especulamos que factores de
contaminación, pese a los cuidados
realizados, pudieron influir en el
desarrollo del cultivo.
La identificación precisa de los
estadios de desarrollo y la clara
diferenciación de huevos viables y
no viables, pueden ayudar a
determinar con exactitud una tasa
basal de desarrollo, la cual sería útil
en el estudio de compuestos
ovicidas.
La utilización de agua destilada
como medio de embriogénesis se
decidió al analizar el estudio de Lara,
et al. en el que utilizaron diferentes
medios para la embriogénesis de los
huevos de Ascaris lumbricoides.
El agua no contribuye en procesos
fisiológicos ni evita la utilización de
protocolos para la limpieza de los
huevos para la posterior obtención
de células embrionarias, como sí
ocurre cuando se utiliza formol como
medio de cultivo; en éste, después
de desarrollarse el embrión, los
huevos deben lavarse, ya que los
restos son tóxicos para las células y
las larvas.
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 ANEXOS

FI FII FIII

FIV FV FVI

Fig.1. Grados para la cuantificación del desarrollo de los huevos de Toxocara

canis. Fase I: Célula huevo sin dividir. Fase II: con dos blastómeros. Fase III:
Con mórula. Fase IV: Con esbozo de la forma embrionaria. Fase V: Huevo
embrionado con larva móvil en el interior. Fase VI: Huevo degradado.