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Evaluación de tres cepas de levadura comercial en la producción de Etanol a


partir de Melaza Evaluation of three strains of yeast commercial in ethanol
production of molasses

Article · June 2014

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5 authors, including:

Efrain Lugo Jesús Ortega-García


Universidad de Sonora (Unison) Universidad de Sonora (Unison)
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INVURNUS
“En busca del conocimiento”

Volumen 9 No. 2 (Julio-Diciembre 2014): 31-36


Universidad de Sonora
ANÁLISIS
Unidad Regional Norte

Evaluación de tres cepas de levadura comercial en la producción de Etanol


a partir de Melaza

De La Vara Morales Iván1, Espinoza Ojeda Eligio2, Lugo-Sepulveda Ramón Efraín2,


Valencia-Rivera Dora Edith2, Ortega-García Jesús*2
1 Alumno del Programa de Químico Biologo Clinico, del Departamento de Ciencias Químico Biológicas y Agropecuarias de la Unidad
Regional Norte de la Universidad de Sonora.
*2 Departamento de Ciencias Químico Biológicas y Agropecuarias de la Unidad Regional Norte de la Universidad de Sonora

Resumen

La producción de alcohol a partir de melazas y los factores involucrados en el rendimiento en una planta productora de alcohol, están
delimitados por: la cepa de levadura, el rendimiento en la producción de etanol y la temperatura de fermentación. Estos factores mejoran
el proceso industrial, el porcentaje de alcohol producido y la reducción de la concentración de los azúcares residuales. El objetivo de
este trabajo es eficientizar el proceso industrial en la planta de producción para que sea redituable, consolidarse y generar una derrama
económica para la región de Caborca, Sonora. En el presente trabajo de investigación se compararon tres cepas de levaduras; Etanol
red, Safdistil plus y FT-858. Se realizaron fermentaciones con melazas de los años 2012 y 2013. En las fermentaciones se cuantifico el
contenido de alcohol mediante densitometría y los azucares reductores con la técnica de Lane-Eynon. La levadura FT-858 obtuvo el
mayor contenido de alcohol a la temperatura optima de 32°C, con tiempos cortos de fermentación y con mayor consumo de azucares.
Los rendimientos de alcohol a 98°GL obtenidos por esta cepa fueron de 251 y 257 y de 309 y 315 litros por tonelada de melaza obtenida
en el año 2012 y 2013, respectivamente.

Palabras clave: melaza, azucares reductores, producción de etanol.

Evaluation of three strains of yeast commercial in ethanol production of molasses


Abstract

The production of alcohol from molasses and performance factors involved in plant alcohol producer, are delimited by the yeast strain,
the yield of ethanol production and the fermentation temperature. These factors improve the manufacturing process, the percentage of
alcohol produced and reducing the concentration of the residual sugar. The aim of this work is make efficient industrial process plant
production to be profitable, consolidate and generate an economic impact for the region of Caborca, Sonora. In the present investigation
three strains of yeast were compared; Ethanol network, plus Safdistil and FT-858. Fermentations were conducted with molasses 2012 and
2013. Fermentation alcohol content was quantified by densitometry and reducing sugars with the technique of Lane-Eynon. The FT-858
yeast had the highest alcohol content at the optimal temperature of 32°C, with short fermentation times and increased consumption of
sugars. Yields of 98°GL alcohol obtained by this strain were 251 and 257 and 309 and 315 liters per ton of molasses obtained in 2012
and 2013, respectively.

Key words: molasses, reducing sugars, ethanol production.

*Autor para envío de correspondencia: Av. Universidad e Irigoyen, s/n. Col. Ortiz. Caborca, Sonora, Mex. C.P. 83621.
E-mail:jortega@guayacan.uson.mx
© 2014 Editorial UNISON — URN. Derechos reservados.
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Introducción

Los conocimientos sobre la fermentación fueron atesorados C6H12O6 + S. cerevisiae → 2C2H5OH + 2CO2
desde la antigüedad por importantes civilizaciones como la
Egipcia y la Asiática quienes la emplearon para la producción Los microorganismo responsables de esta transformación
de bebidas alcohólicas, de igual manera la civilización son principalmente levaduras como Saccharomyces
Azteca y China la utilizaron para obtención de productos cerevisiae, siendo la más utilizada en el mercado dado al
alimenticios tales como las salsas fermentadas. El proceso gran porcentaje de viabilidad que presenta al ser sometida
de fermentación se mejoró a partir de la identificación de al proceso de liofilización (Alarcon, 2010).
cultivos microbianos y al control de las condiciones de los
procesos; así, se industrializó la fermentación y dio origen Sin embargo, existen diversos estudios donde se ha
a grandes industrias como la alimentaria donde se destacan comprobado una mayor o igual eficiencia en la producción
la panificadora, la de bebidas alcohólicas, la industria de alcohol por otras cepas de levaduras. También pueden
farmacéutica en el campo de las vacunas y medicamentos, utilizarse bacterias como Zymomonas mobilis, para la cual
la industria química donde producen ácidos, aldehídos, etc. su uso industrial es mínimo debido a sus condiciones de
(Piergallini, 2008). crecimiento, ya que la mayoría de las bacterias no toleran
un pH ácido por lo cual se deben mantener a un pH
La fermentación a nivel industrial tiene como objetivo, ligeramente alcalino, condiciones óptimas para el desarrollo
aumentar la eficiencia del proceso con el fin de obtener no solo de esta bacteria sino para cualquier otra, teniendo
mejores resultados en la producción de productos, por medio así un gran riesgo de contaminación en las fermentaciones
del control de variables de operación y la aplicación de las (Alarcon, 2010).
teorías, en ciertas variables que determinan la eficiencia del
proceso como lo son: temperatura, pH, niveles de alcohol, Aparentemente esta reacción es muy sencilla, pero la
concentraciones del sustrato y biomasa entre algunas otras secuencia de transformaciones para degradar la glucosa hasta
no tan importantes (Amador, 2007). dos moléculas de alcohol y dos de anhídrido carbónico es
un proceso muy complejo, puesto que al mismo tiempo la
La fermentación alcohólica comprende toda una serie levadura debe utilizar glucosa y otros nutrientes adicionales
de reacciones bioquímicas a través de las cuales algunos para poder reproducirse. El rendimiento teórico para la
microorganismos, por medio de un conjunto de enzimas transformación de glucosa en etanol es de 0.511g de etanol
producidas por ellos mismos o añadidas artificialmente, y 0.489 g de anhídrido carbónico por gramo de glucosa
realizan una transformación de azúcares para convertirlos (Cholata, 2010).
en etanol, dióxido de carbono y energía exotérmica la cual
libera moléculas de Adenosin trifosfato (ATP), las cuales Al llevar a la práctica este nivel estequiométrico es difícil
son necesarias para el funcionamiento metabólico de las obtener el rendimiento anteriormente mencionado por que
levaduras (CONAE, 2008). la levadura utiliza la glucosa para producir otros metabolitos
indispensables para su crecimiento y desarrollo. A nivel
Una fermentación puede llevarse a cabo en un rango de experimental varía entre 90 y 95% del teórico mientras que
temperaturas de 25 a 35°C, esta variable juega un papel en la industria la variación es de 87 al 93% (Vázquez, 2007).
muy importante en la reproducción de las levaduras y de
las bacterias. Este parametro influye en la composición En la búsqueda de mejorar el rendimiento en la producción
de los ácidos grasos de las membranas plasmáticas y en el de etanol, en el presente trabajo de investigación se
proceso para degradar los azúcares por los microorganismos compararon tres cepas de levadura de diferentes casas
utilizados en las fermentaciones (Concepción, et. al. 2005). comerciales; Etanol red (FERMENTIS), Safdistil plus
(FERMENTIS) y FT-858 (LNF).
Existen muchas clases de fermentaciones, dependiendo del
tipo de microorganismo que la produce, del substrato o Las pruebas de fermentación se realizaron utilizando dos
incluso de las condiciones establecidas, como son el pH o el tipos de melazas una adquirida el año 2012 y la segunda
oxígeno (Garzón, 2009). el año 2013. Para cuantificar la producción de etanol se
utilizó la técnica de densitometría en unidades Gay-Lussac
Una de las fermentaciones más importantes y mejor (Secretaria de Comercio y Fomento Industrial. 1991.
conocidas es la alcohólica, la cual es una biorreacción NMX-F-277-1991) y para la cuantificación de azucares
que permite degradar la glucosa en alcohol y anhídrido reductores se utilizó la técnica de Lane-Eynon (Compendium
carbónico mediante la siguiente reacción química: of International Analysis of Methods-OIV. 2009. Method
OIV-MA-AS312-01B).
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Materiales y métodos clarificadas utilizando carbón activado y posteriormente


filtrado con vacío.
Material biológico
Medio de cultivo
Se evaluaron tres híbridos de la cepa Saccharomyces
cerevisiae liofilizada, fabricadas para su comercialización Las fermentaciones fueron llevadas a cabo realizando
por diferentes casas comerciales. diluciones melaza-agua hasta llevarla de 85°B hasta 25°B,
con ayuda de un refractómetro digital marca ATAGO modelo
1. Etanol red (FERMENTIS MÉXICO) DBX-55A, se pesó 1.12 Kg de melaza adicionando 2.7 Kg de
2. Safdistil plus (FERMENTIS FRANCIA) agua para poder obtener 3.48 L de melaza diluida a 25°B.
3. FT-858 (LNF BRASIL) De cada melaza se tomaron tres muestras de un Litro y se
colocaron en botellas de plástico de dos Litros y se adicionó
2 g/L de difosfato de amonio (DAP) como nutriente único
Etanol Red para tener una concentración de nitrógeno de 350 ppm. El
pH fue ajustado a 4.5 con ácido fosfórico al 85% utilizando
Es una cepa especialmente seleccionada que se ha un potenciómetro digital marca HANNA modelo HI 99161.
desarrollado para la industria del etanol, es una cepa que
crece rápidamente y mantiene una mayor viabilidad celular, Las temperaturas de fermentación probadas fueron de 30,
está diseñada para la producción de alcohol a temperaturas 31, 32, 33, 34 y 35°C, esto después de realizar estudios
elevadas. Etanol red es capaz de maximizar los rendimientos de fermentación preliminares a diferentes temperaturas con
de alcohol bajo una gama definida de temperaturas. diferentes sustratos. La temperatura fue controlada con un
baño maría eléctrico con regulador de temperatura marca
Safdistil plus MAPSA modelo BMT-8, con ayuda de un termómetro marca
BRANNAN de -20° a 110°C.
Es una levadura hibrida seleccionada por Lesaffre
Internacional de R&D (Francia), por su cinética de Inoculación con levaduras
fermentación superior, resistencia a la temperatura y
tolerancia al alcohol, es recomendada para fermentación Los medios de cultivo fueron inoculados con 0.5g de
tanto de azúcar, jugos espesos de varias composiciones y levadura previamente hidratada en un matraz Erlenmeyer
sustratos de grano. de 250 mL, con 30 mL de agua a 30°C durante 10 minutos.
Se prepararon dos replicas por cada levadura.
FT-858
Determinación de azúcares reductores
Esta levadura en particular es diseñada y distribuida
únicamente desde Brasil. Es una cepa aislada que se destaca Esta prueba se llevó a cabo por el método de Lane-Eynon
especialmente en fermentaciones con melazas y por algunas y fue el método utilizado para la cuantificación de los
características que son esenciales para la fermentación ART tanto en melazas de 85°B como en las diluciones de
como: fermentación de alto rendimiento, baja formación melaza a 25°B y en el mosto fermentado para determinar
de espuma, altas tasas de multiplicación en el arranque, no los azúcares residuales (AR). Previamente al análisis las
floculante, alto grado de implantación y supervivencia y la muestras fueron clarificadas, primero con carbón activado
tolerancia al estrés de la fermentación. al momento del enfriamiento posterior a la inversión de los
azúcares, y después se centrifugaron usando una centrifuga
marca PREMIERE modelo XC-2000 a 2500 rpm durante un
Materia prima
minuto para posteriormente titular con estas muestras las
soluciones Fehling.
Las melazas con las cual se trabajó se recibieron
de un ingenio ubicado en los Mochis, Sinaloa,
Determinación de alcohol (grados Gay-Lussac)
“Compañía Azucarera de los Mochis S.A. de C.V.”
Las melazas fueron compradas en el mes de Enero de los
años 2012 y 2013, y fueron almacenadas en contenedores Los niveles de alcohol fueron determinados por densitometría
de acero inoxidable con capacidad de 700,000 litros, ambas con alcoholímetros Dujardin-Salleron certificados (con rango
melazas presentaron diferente contenido de azúcares de 0-20°GL realizando una destilación previa de los mostos
reductores (AR) pero igual porcentaje de sólidos 85°B al terminar la fermentación como se indica a continuación.
(grados Brix). Antes de ser utilizadas ambas melazas se llevó
acabo un proceso de acondicionamiento en el cual fueron Se colocaron 200 mL de la muestra fermentada más 200

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mL de agua y se colocaron en un matraz de bola fondo En las fermentaciones con las temperaturas de 30, 31 y
plano cuello largo de un litro, se adicionó perlas de vidrio. 33°C solo presentaron como inconveniente un incremento
El matraz bola fue conectado a un condensador en espiral de tiempo en los ciclos de fermentación a medida que
de 30 cm de largo, y se procedió a calentar la muestra hasta descendió la temperatura, pero este parámetro no afectó la
ebullición utilizando una placa eléctrica marca CIMAREC producción de alcohol de las tres levaduras.
modelo SP131325, se recolectaron 200 mL del destilado.
La densitometría se llevó a cabo en una probeta de vidrio de Efectuando un análisis de sólidos contra tiempo con un
250 mL en donde fue sumergido el alcoholímetro con 200 refractómetro digital se logró observar el consumo de
mL del destilado. azúcar, midiendo su concentración en °B y los tiempos
de fermentación en las tres levaduras para ambas melazas
Debido a que los niveles de la densitometría son afectados (Figura 1 y 2). Con la melaza obtenida en el año 2012 se
por la temperatura se realizó un ajuste en las lecturas del
alcoholímetro considerando la temperatura de las muestras
destiladas para ajustar el grado alcohólico obtenido en las
lecturas, por medio de interpolación donde se reportan la
variación de alcohol con la variación de temperatura o bien
realizando una lectura a temperatura de 20°C en la cual no
se manifiesta efecto alguno en la graduación (Compendium
of International Analysis of Methods-OIV. 2009. Method
OIV-MA-AS312-01B).

Resultados y discusión

Los resultados mostrados a continuación representan al


menos cinco experimentos independientes, en cada uno de
los casos correspondientes.

Azúcares reductores totales (ART)


Figura 1. Fermentaciones llevadas a cabo por las levaduras
Se determinó el contenido de ART en ambas melazas de 85°B LNF FT858, Etanol Red y Safdistil Plus, utilizando como
con las que se trabajó, Obteniendo como resultado: Melaza sustrato la melaza adquirida en el año 2012. (Nota: los
utilizada el 2012 a 85°B, 390 g/kg ART, representando el valores son graficados en esas escalas para una mejor
44%, en relación al peso total de melaza; Melaza utilizada representación de la información).
el 2013 a 85°B, 497 g/kg ART, representando el 58%, en
relación al peso total de melaza. Posteriormente se realizaron
diluciones agua-melaza para llevarlas de 85°B hasta 25°B
obteniendo como resultado: Melaza utilizada el 2012 a
25°B, 126 g/L ART. en relación al peso total de melaza.
Melaza utilizada el 2013 a 25°B, 161 g/L ART. en relación
al peso total de melaza. Este tratamiento es necesario para
proceder a la fermentación. El suelo y el clima, la variedad y
la madurez de la caña, y las condiciones de procesamiento
en la fábrica, tienen influencia sobre la composición de
la melaza. En consecuencia, una considerable variación se
puede encontrar en el contenido de nutrientes, sabor, color,
y la viscosidad de la melaza. Pero, en general, la sacarosa es
el principal azúcar presente (El-Gendy, et. al. 2013; Chen,
2003).

Temperatura y tiempo de fermentación


Figura 2. Fermentaciones llevadas a cabo por las levaduras
La temperatura optima de fermentación fue a los 32°C, LNF FT858, Etanol Red y Safdistil Plus, utilizando como
debido a que en las temperaturas de 34 y 35°C se observó sustrato la melaza adquirida en el año 2013. (Nota: los
una disminución de 0.2°GL en todas las fermentaciones. valores son graficados en esas escalas para una mejor
representación de la información).
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obtuvieron las fermentaciones más rápidas en relación a la la Tabla 1, donde se observa que se obtuvo un rendimiento
melaza obtenida en el año 2013. La levadura FT-858 tuvo para Etanol red y Safdistil plus de 251 L de etanol a 96°GL
un tiempo de fermentación de 28 h, después la levadura por tonelada de melaza y de 257 L para FT-858, iniciando
Safdistil plus con 32 horas y al final la levadura Etanol Red, las fermentaciones a 25°B deteniéndose a 15.5°B en las
teniendo el mayor tiempo de fermentación con 36 hrs de tres levaduras. Los niveles de alcohol resultantes, para
duración (Klomklieng, 2012). las fermentaciones en la melaza del año 2013 con 58%
ART, son mostrados en la Tabla 1, donde se observa que
Debido a la mayor cantidad de azúcares reductores se obtuvo un rendimiento de 309 L de Etanol a 96°GL
determinados en la melaza del año 2013, se observó un por tonelada de melaza para Etanol red y Safdistil plus y
mayor tiempo de fermentación. Los tiempos de fermentación aumentó nuevamente para FT-858 a 315 L/Ton, iniciando
obtenidos en la levadura FT-858 fue de 32 horas, después la las fermentaciones a 25°B y deteniéndose a 13.5°B en las
levadura Safdistil Plus tuvo un total de 41 horas y al final la 3 levaduras. Los resultados favorecieron nuevamente a la
levadura Etanol red tuvo 47 horas. levadura FT-858 la cual produjo 0.2°GL más en las dos
melazas, esto debido a que es una levadura específica
Azúcares residuales (AR) para melazas creada en Brasil para esta finalidad y que
fue proporcionada para probarse en melazas obtenidas en
México.
Una vez terminadas las fermentaciones se determinaron
los azúcares residuales (azúcares quedan al finalizar la
fermentación) para conocer la cantidad de azúcar que no Conclusiones
fue consumido por las levaduras como resultado de las
fermentaciones con las melazas correspondientes a los años De los resultados obtenidos se pudo concluir que la
2012 y 2013 como se muestra en la Tabla 1. La levadura temperatura óptima para obtener un mayor rendimiento en
FT-858 fue la que presentó el menor contenido de azúcares la producción de etanol para las tres levaduras fue 32°C,
residuales de las tres levaduras en las fermentaciones en reduciendo con esto los costos de producción. Asimismo
las que se utilizó melazas como sustratos de los años 2012 los tiempos de fermentación dependieron de la levadura
y 2013 que se probaron presentando una diferencia de utilizada como también de la cantidad de ART presentes
1 g/L y 0.5 g/L menos en comparación con las otras dos en las diluciones y del control de la temperatura en la
levaduras respectivamente. De igual manera se realizó el fermentación. La levadura FT-858 diseñada en Brasil realizó
análisis de AR para las fermentaciones en la melaza del año una fermentación más rápida y mostró un mayor consumo
2013, observándose nuevamente en la levadura FT-858 de azucares, presento el menor contenido de azúcares
una disminución de los azúcares residuales, en casi 0.5 residuales y fue la que produjo una mayor concentración
g/L en comparación con las levaduras Etanol red y Safdistil de alcohol, debido a que esta levadura es específica para la
plus. La levadura FT-858 presentó un menor porcentaje de realización de fermentaciones con melaza.
azúcar residual logrando consumir un mayor porcentaje
de azúcares en las dos diferentes muestras de melazas. Bibliografía
Los resultados obtenidos están por debajo de lo reportado
por Guarnizo-Franco, et. al. 2012, lo cual indica que la Alarcón E. A. V. 2010. Producción de Bioetanol con
fermentación se realizó de manera más eficiente para la Zimomonas mobilis. Tesis de Maestría. Instituto
obtención de alcohol. Politécnico Nacional. México, D.F. p. 1-71.
Amador V. O. A. 2007. Biocombustibles, Economía UNAM,
Determinación de alcohol (°GL) México. D.F. 311(27).
Chen J. C. and Chou, C. C. 2003. Cane Sugar Handbook:
Los niveles de alcohol resultantes, para las fermentaciones en A Manual for Cane Sugar Manufacturers and Their
la melaza del año 2012 con 44% de ART son mostrados en Chemists, John Wiley & Sons, New Jersey, NJ, USA.
Tabla 1. Concentración de azúcar residual y concentración de alcohol obtenidos al final de la fermentación
utilizando melazas de los años 2012 y 2013, a 32°C.
Azúcar residual (g/L) Concentración de alcohol (ºGL)
Levadura Melaza del año Melaza del año Melaza del año Melaza del año
2012 2013 2012 2013
FT-858 8.75 7.44 8.0 8.0
Safdistil plus 9.53 7.95 7.8 7.8
Etanol red 9.67 8.06 7.8 7.8
°GL: Grados Gay Lussac.

De la Vara Morales y col., Evaluación de tres cepas de levadura comercial en la producción de Etanol
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