“Año del buen servicio al ciudadano”

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONÍA PERUANA

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

PROYECTO DE BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR

TÍTULO
“SEÑALES CELULARES EN LA INFECCION PRIMARIA POR
MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS DURANTE LA APOPTOSIS”

DOCENTE: Dra. MARTHA E. RENGIFO PINEDO

ASIGNATURA: BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR

NIVEL: “II”

CICLO: “III”

INTEGRANTES:

 BERNUY SANTANA, RUBY

 PANDURO ANDRADE, JANE
 SANTANA LIAO, AURORA
 TORRES TELLO, ANGIE MARJORIE
 VILLALTA MAGALLANES, MARÍA

IQUITOS – PERÚ
2017
1. PROBLEMÁTICA DE LA TUBERCULOSIS
La Tuberculosis (TBC) es una enfermedad infecciosa causada por una bacteria
(Mycobacterium tuberculosis) que puede diseminarse a cualquier parte del
organismo desde las primeras fases de su agresión. Por ello, la TBC puede afectar
cualquier órgano o tejido, aunque la localización más frecuente es la pulmonar, la
que representa del 80 al 85% de los casos. La forma de transmisión es de una persona
enferma a un sujeto sano a través de gotitas generadas en el aparato respiratorio de
pacientes con enfermedad pulmonar activa. Se estima que en 2015 desarrollaron
tuberculosis multidrogorresistente (TBC-MDR) unas 480 000 personas a nivel
mundial (0MS, 2015).

Sin embargo, en el Perú una comprensión cabal de la situación de la epidemia de la

tuberculosis, permite aplicar eficazmente las herramientas disponibles para su
control, incrementando la eficiencia de las intervenciones habiéndose logrado
considerables progresos en prevención y control de la tuberculosis. Así, en el año
1992 se notificaron en total más de 55 mil casos, mientras que en el año 2007 se ha
logrado reducir esta cifra en 32,7 %. La meta al año 2011 es disminuir el número de
casos en un 50%. También se ha mejorado e incrementado la capacidad diagnóstica
de TBC MDR Y TBC XDR. No obstante, tanto la TBC MDR, TBC XDR, la
comorbilidad TBC/VIH-SIDA, el estigma, la discriminación y lo complicado de las
intervenciones técnicas, socioeconómicas y culturales, significan un reto para el
mejoramiento (MINSA-2008).

En la región Loreto generalmente se presentan los casos de tuberculosis en el distrito

de Iquitos, que ocupa el primer lugar en la región, seguido por Belén, San Juan y
Punchana. Además, están las provincias de Contamana y Requena. “Esta enfermedad
mayormente es más urbana que rural. En el año 2010 hemos tenido 1118 pacientes
atendidos en toda la región Loreto por tuberculosis; lo que queremos es que baje esa
cifra” (Max Themme, 2011).
2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

¿EXISTEN SEÑALES CELULARES EN LA INFECCION PRIMARIA POR

MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS DURANTE LA APOPTOSIS?
3. ANTECEDENTES

1. BRIKEN V, BESRA G, KREMER T, PORCELLI A (2004). El

lipoarabinomanano, componente de la pared celular (ManLAM) a partir
de Mycobacterium tuberculosis está implicado en la inhibición de la maduración
fagosoma, apoptosis e interferón (IFN) -γ señalización en macrófagos y la
interleucina (IL)-12 secreción de citoquinas de las células dendríticas (DC). Todos
está procesos son importantes para el anfitrión para montar una respuesta inmune
eficaz. A la inversa, LAM aislado a partir de micobacterias no patógenas (PILAM)
tener el effect contrario, mediante la inducción de una respuesta proinflamatoria
potente en los macrófagos y las DC. LAM de diversas especies de micobacterias
difieren en la modificación de sus residuos de arabinosa terminal. La fuerte
respuesta proinflamatoria inducida por PILAM se correlaciona con la presencia de
fosfo-myo-inositol en la arabinosa terminal. Curiosamente, el trabajo reciente
indica que el precursor biosintético de LAM, lipomannan (LM), que también está
presente en la pared celular, muestra fuertes efectos proinflamatorios,
independientemente de qué especies micobacterianas se hayan aislado. Los
resultados de ensayos in vitro y los ratones knock-out sugieren que LM, como
PILAM, media su actividad biológica a través de Toll-like receptor 2. Se postula
que la relación de LAM / LM podría ser un factor crucial en la determinación de
la virulencia de una especie micobacteriana y el resultado de la infección. El
reciente progreso en la identificación de genes implicados en la biosíntesis de LAM
se discute, en particular con respecto al hecho de que las enzimas que controla el
equilibrio LAM / LM podrían representar Dianas Para nuevos fármacos
antituberculosos. Además, la inactivación de estos genes puede dar Lugar a cepas
atenuadas de M. tuberculosis Para el desarrollo de nuevas vacunas. (1)

2. CHINNAIYAN M. , DUAN HANGJUN, FROELIC C, ORTH K , POIRIER M,

WEI-WU ÉL, (1996). Los miembros de la familia de genes de ICE / ced-3 son
componentes efectores probables de la maquinaria de muerte celular. Este sentido,
caracterizar un nuevo miembro de esta familia designada ICE-LAP6. Por el análisis
filogenético, ICE-LAP6 se clasifica en la subfamilia Ced-3 que incluye Ced-3,
Yama / CPP32 /apopain, Mch2, e ICE-LAP3 / Mch3 / CMH-1. Curiosamente, el
ICELAP6 contiene un sitio activo QACG pentapéptido, en lugar del
QAC pentapéptido G compartida por otros miembros de la familia. La
sobreexpresión de ICE-LAP6 induce la apoptosis en células de carcinoma de mama
MCF-7. Más importante aún, ICE-LAP6 se procesa proteolíticamente en una
cisteína proteasa activa por granzima B, un componente importante de T citotóxicos
apoptosis mediada por células. Una vez activado, ICE-LAP6 es capaz de escindir
el sustrato poli muerte (ADP-ribosa) polimerasa en fragmentos apoptóticos de la
firma (2).
3. CHANG S, CHANG J, DÍAZ J, HORNE W,WANG Y (1996). Bad, un inductor de
la muerte celular programada, ha sido recientemente aislado de una cDNA de
ratón por su capacidad para unirse a la proteína anti-apoptóticos BCL-2. El
análisis de secuencias sugiere que Bad era un miembro de la familia BCL -2 gen
que codifica ambos inductores e inhibidores de la muerte celular programada. Para
analizar más a fondo el papel de BAD en la red de homo- y heterodímeros formado
por la familia Bcl-2, clonaron el homólogo humano de BAD y evaluaron la
actividad biológica y de sus interacciones con los de tipo salvaje y proteínas de la
familia Bcl-2 mutantes. Sus resultados indican que la proteína BAD humano, al
igual que su homólogo de ratón, es capaz de inducir apoptosis cuando se transfecta
en células de mamífero. Además, en la levadura de dos ensayos de híbridos, así
como cuantitativos in vitro ensayos de interacción, Bad humano interactuó con
BCL-2 y Bcl-X L. Los alineamientos de secuencias de Bad humano revelaron la
presencia de un dominio de homología BH-3 como se ve en otras proteínas BCL-
2 de la familia. Los péptidos derivados de este dominio eran capaces de inhibir
completamente la dimerización de BAD con BCL-X L. Por lo tanto, como se
muestra anteriormente para BAX, BAK, BCL-2, y BCL-X L, se requiere el
dominio BH3 para su dimerización con otras proteínas BCL-2 de la familia. BAD
se analizó adicionalmente por su capacidad de unirse a diversos mutantes de Bcl-
2 y Bcl-X L que han perdido la capacidad de unirse BAX y BAK, algunos de los
cuales retienen la actividad biológica y algunos otros no lo hacen. Sorprendentemente,
todos los mutantes BCL-2 y Bcl-X L proteínas analizadas fuertemente interactuado con
BAD humano. Así, sus datos indican que las mutaciones en BCL-2 y Bcl-X L pueden
afectar diferencialmente la unión heterodímero de diferentes proteínas que promueven la
muerte y tienen implicaciones sobre la relación entre la heterodimerización y la actividad
biológica. (3)

4. BS CHANG , CB THOMPSON, JE HARLAN, SW FESIK, UN KELEKAR (1997)

La proteína relacionada con Bcl-2 Bad es un promotor de la apoptosis y se ha
demostrado para dimerizar con las proteínas anti-apoptóticos Bcl-2 y Bcl-XL. La
sobreexpresión de Bad en células FL5.12 murino demostró que la proteína no sólo
podría derogar la capacidad protectora de coexpressed Bcl-XL, pero podría
acelerar la respuesta apoptóticos a una señal de muerte cuando se expresa en la
ausencia de exógeno Bcl-XL. Utilizando el análisis de deleción, identificaron el
dominio mínimo en la proteína Bad murino que puede dimerizar con Bcl-xL. Un
péptido de 26-aminoácidos dentro de este dominio, mostró una homología
significativa a los dominios BH3-alfa helicoidal de proteínas apoptóticos
relacionados, como Bak y Bax, encontrando que era necesaria y suficiente para
unirse a Bcl-xL. Para determinar el papel de la dimerización en la regulación de
la actividad de la muerte de promoción de Bad y la actividad de la muerte de
inhibición de Bcl-xL, las mutaciones dentro del hidrófobo bolsillo BH3 de unión
en Bcl-xL que eliminó la capacidad de Bcl-xL para formar un heterodímero con
mal se ensayaron para determinar la capacidad de promover la supervivencia
celular en presencia de Bad. Varios de estos mutantes retuvieron la capacidad de
impartir protección contra la muerte celular sin importar el nivel de proteína Bad
co-expresada. Estos resultados sugieren que BH3-que contienen proteínas como
Bad promueven la muerte celular mediante la unión a los miembros anti-
apoptóticos de la familia Bcl-2 y por lo tanto la inhibición de su promotora de la
supervivencia funciones. (4)
 5. BHARTI A. DEEPAK R, REHAN J, PRAMOD P, SURENDER K (2004). La
activación del iniciador de la caspasa-9 es esencial para la inducción de la
apoptosis por señales de desarrollo, la transformación oncogénica, y el estrés
genotóxico. La tirosina quinasa c-Abl también está implicada en la respuesta
apoptóticos al daño del ADN. Los presentes resultados demuestran que la c-Abl
se une directamente a la caspasa-9. Se demuestra que c-Abl fosforila la caspasa-9
en Tyr-153 in vitro y en células tratadas con agentes que dañan el ADN. Por otra
parte, la inhibición de c-Abl con STI571 bloqueado daña el ADN inducida auto
procesamiento de la caspasa-9 a la subunidad p35 y la activación de la caspasa-
3. La caspasa-9 (Y153F) de ADN también atenuado procesamiento daño inducido
de la caspasa-9 a p35, la activación de la caspasa-3, y la apoptosis. Estos hallazgos
indican que la caspasa-9 auto procesamiento está regulada por c-Abl en la
respuesta apoptóticos al estrés genotóxico. (5)

6. BRENTNALL M, CEPERO E, LADRÓN DE GUEVARA R, LAWRENCE

B, RODRÍGUEZ-MENOCAL L (2013) Demuestran varias funciones únicas
para cada una de estas caspasas durante la muerte celular. La inhibición específica
de la caspasa-9 permite la liberación eficiente de citocromo c, pero bloquea
cambios en la morfología mitocondrial y la producción de ROS. Se demuestra que
la caspasa-9 puede escindir de la subasta en tBid en el aminoácido 59 y que se
requiere esta escisión de la subasta para la producción de ROS después de la
retirada de suero. También demuestran que MEFs caspasa-3-deficientes son
menos sensibles a la estimulación de la muerte celular intrínseca, sin embargo,
tienen una mayor producción de ROS. En contraste, los MEFs caspasa-7
deficientes no son la resistencia a la muerte celular intrínseca, pero permanecer
unidos a la ECM. (6)
4. JUSTIFICACIÓN

El presente trabajo de investigación es importante para conocer el proceso

de infección primaria por Mycobacterium tuberculosis en las señales
celulares para la apoptosis. Nos aporta conocimiento sobre el tema tratado.

La tuberculosis además de ser un problema de salud pública a nivel

mundial, nacional y local, debido al número de pacientes que produce años
tras año, afecta la salud y deteriora la calidad de vida del paciente con
tuberculosis y su entorno familiar. Por ello, esta investigación busca
profundizar el rol importante que cumple el profesional de salud.

Para conocer de qué manera actúan las proteínas y las destrucciones de las
bacterias en el organismo.
5. Objetivos

5.1. OBJETIVO GENERAL:

 Describir el proceso de infección primaria por Mycobacterium tuberculosis en las

señales celulares para la apoptosis.

5.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

 Identificar los mecanismos de las rutas metabólicas del proceso de infección

primaria del Mycobacterium tuberculosis.
 Establecer señales celulares en la infección primaria por Mycobacterium
tuberculosis durante la apoptosis.
6. Marco Teórico

La tuberculosis (TB) continúa siendo un importante problema de salud global, según las
últimas estimaciones de la Organización Mundial de la Salud (OMS) la TB en el año 2014
afectó a 9.6 millones de personas y fue responsable de la muerte de 1,5 millones de
personas a nivel mundial. En nuestro país la tuberculosis es una importante causa de
morbilidad en el grupo de jóvenes y adultos, se reportan casos en todos los departamentos
del país, pero la enfermedad se concentra principalmente en los departamentos de la costa
central y la selva.

Es un problema emergente que ha complicado de cierta manera el control de la

enfermedad, en nuestro país se ha observado un incremento de casos de TBC.

En los últimos 10 años las estrategias para detener la TB a nivel mundial, estaban
amparadas en el marco de los Objetivos de Desarrollo del Milenio (ODM) y la Estrategia
STOP TBC. El año 2015 fue un año de transición: pasando de los ODM a una nueva etapa
de Objetivos de Desarrollo Sostenible (ODS) y, de la estrategia “STOP TBC” a la
estrategia “Fin de la Epidemia de TBC” con nuevos objetivos y metas.

Análisis de la Situación Epidemiológica de la tuberculosis en el Perú - 2015, es un

esfuerzo del Ministerio de Salud (MINSA), a través de la Dirección General de
Epidemiologia (DGE) por consolidar información de diversas fuentes primarias y
secundarias, con la finalidad de generar una herramienta que contribuya en la toma de
decisiones y permita diseñar mejores estrategias e intervenciones en prevención y control,
para hacer frente a la epidemia de TBC en nuestro país.
7. Variables

7.1. Variable dependiente

 Proceso de infección primaria por Mycobacterium tuberculosis.

7.2. Variable independiente

 Conocer de qué manera actúan las proteínas y las destrucciones de las
bacterias en el organismo.

8. Hipótesis

LA APOPTOSIS COMO UN MECANISMO FACILITADOR

EN LA PRESENTACIÓN DE ANTÍGENOS
MICOBACTERIANOS EN LA TUBERCULOSIS
9. MATERIALES Y MÉTODOS

Ratones

Los ratones fueron generados originalmente por recombinación homóloga

en células madre embrionarias como se describió previamente.

Todos los ratones fueron mantenidos en condiciones libres de patógenos

específicos en una Asociación para la Evaluación y Acreditación de la
instalación para animales acreditado por Cuidado de Animales de
Laboratorio en el NIAID (National Institutes of Health, Bethesda, MD). Se
han usado tanto en ratones macho y hembra de entre 8 y 12 semanas de edad.

Método descriptivo:

El objeto de la investigación consiste en evaluar ciertas características de las

rutas metabólicas. En esta investigación se analizan los datos reunidos para
descubrir todo lo relacionado con Mycobacterium tuberculosis.
10. CRONOGRAMA

Nº 2017

ORDEN ACTIVIDAD (13de junio – 06de julio)

Días

13 26 28 06

01 Elaboración del X X
Anteproyecto

02 Revisión del X
avance
anteproyecto
03 Presentación del X
avance del
anteproyecto
04 Presentación y
sustentación del X
proyecto
11. PRESUPUESTO

Autofinanciado
12. BIBLIOGRAFÍA

1) Briken V, Porcelli S, Besra G, Kremer L. Mycobacterial lipoarabinomannan and

related lipoglycans: from biogenesis to modulation of the immune response. Biología
Molecular. Junio 2004; 53(2): 391-403.
2) Duan H, Orth K, Chinnaiyan A, Poireir G, Froelich C, y otros.
ICE-LAP6, un nuevo miembro de la familia de genes ICE / Ced-3, es activado por la
proteasa de células T citotóxicas Granzyme B. JBC. Abril 1996.
3) Raina D, Pandey P, Ahmad R, Bharti A, Ren J, y otros. C-Abl Tyrosine quinasa regula
caspase-9 Autocleavage en la respuesta apoptótica al daño del ADN. JBC. Diciembre
2004.
4) Otillie S, Diaz J-L, Horne W, Chang J, Wang Y, y otros. Propiedades de Dimerización
de la IDENTIFICACIÓN BÁSICA HUMANA DE UN DOMINIO BH-3 Y ANÁLISIS
DE SU VINCULACIÓN A LAS PROTEÍNAS MUTANTES BCL-2 Y BCL-XL. Julio
1997.
5) Kelekar A, Chang B S, Harlan J E, Fesik S W, Thompson C B. Es malo una proteína
que contiene dominio BH3 que forma un dímero inactivador con Bcl-XL. American and
Cellular Biology ,mm.
ANEXOS