Microscopio Optico Compuesto:

• Definiciones de:
– Microscopio y microscopía
• Definición de Microscopio
– Amplificación de la imagen
electrónico:
– Poder de resolución
– Longitudes de onda útiles para la microscopía de luz – Formación de la imagen
– Importancia de la microscopía en la biología – Poder de resolución
– Microscopía de luz y Microscopio electrónico – Tipos de microscopio electrónico
• Microscopio óptico compuesto (MOC): y sus aplicaciones:
– Localización y función de las partes del MOC
• Ópticas
• De barrido
• Mecánicas • De transmisión.
• Manejo y mantenimiento del microscopio óptico • PREPARACIONES TERMPORALES Y
compuesto
PERMANENTES
– Formación de la imagen
• a. Real y Virtual – Tinciones
– Poder de resolución (magnificación) – Medios de montaje
– Tipos de microscopio óptico y sus aplicaciones: – Elaboración de informes de
• Campo claro
laboratorio
• Contraste de fases
• Fluorescente
• Luz polarizada
• Campo oscuro
• Confocal
• Videomicroscopía digital
 Microscopio, del griego: "mikro" = pequeño y
"scopeõ" = mirar (para mirar cosas pequeñas)

se clasifican en:

MICROSCOPÍA MICROSCOPÍA
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
DE LUZ

De acuerdo con la radiación que

utilizan
 La naturaleza de la luz
• Puede ser descrita mediante dos modelos:
– Por su forma de propagación, naturaleza ondulatoria (James
Clerk Maxwell)
– Por su forma de interactuar con la materia, naturaleza
corpuscular ó fotónica (Albert Einstein)
• Forma parte del espectro electromagnético
• Luz blanca está constituida por varios colores diferentes (Isaac
Newton)

Espectro electromagnético
 Luz visible
 Forma parte de una estrecha franja que va
desde longitudes de onda de 400 nm (violeta)
hasta los 700 nm (rojo). (0.4 – 0.7 mm)
ESPECTRO
ELECTROMAGNÉTICO
ESPECTRO VISIBLE
 El espectro de luz visible puede ser percibido
por el ojo humano y su frecuencia determina su
color.
Medidas Microscópicas
• Milímetro: milésima parte del metro (mm)
• Micrómetro: milésima parte del milímetro (mm)
• Nanómetro: milésima parte del micrómetro (nm)
• Angstrom: décima parte del nanómetro (Aº)
 Las Lentes
• Objetos que concentran o
divergen los rayos de luz

• Existen dos tipos principales

de lentes:
 Convergentes: forman
Lentes convergentes
imágenes reales
 Divergentes: forman
imágenes virtuales

Lentes divergentes
Conceptos en microscopía Ocular 10x
Objetivo 10x
 Amplificación: Aumento del tamaño de Aumento Total 100x
la imagen.
Amplificación total: Dado por el producto
de la lente ocular por el objetivo.

 Amplificación Vacía:
Incremento de la imagen sin que pueda
percibirse mayores detalles.

Poder de Resolución: capacidad para

ver puntos vecinos como entidades
diferentes.
El límite de resolución del microscopio
de luz es de 0.2 micrómetros (0.22 μm) ó
200nm.
Microscopio
compuesto
fabricado en
1751 por
Magny.
 El microscopio compuesto
• Instrumento óptico que se usa para
aumentar o amplificar las imágenes
de objetos y organismos no visibles
a simple vista.
• Se utiliza para examinar objetos
transparentes o cortados en
láminas tan finas que se
transparentan

• Está conformado por tres sistemas:

1. Iluminación
2. Óptico
3. Mecánico
Formación de la imagen
FUENTE DE LUZ

Imprescindible para que funcione el microscopio

CONDENSADOR

Concentra los rayos dispersos e ilumina solo la muestra

LENTE OBJETIVO

Amplifica la imagen y forma: IMAGEN REAL E INVERTIDA

LENTE OCULAR

Amplifica la imagen anterior y forma una IMAGEN VIRTUAL

LENTE INTRAOCULAR

Genera la imagen sobre la retina que es la que el cerebro interpreta

 1. Campo claro, brillante o luminoso:
La luz proveniente de la fuente converge sobre la
muestra se forma un campo brillante alrededor
de la imagen de la muestra.
• El contraste lo provee la tinción
de las muestras

Imágenes con
microscopio de
campo claro
MICROSCOPIOS DE CAMPO CLARO, BRILLANTE Ó LUMINOSO

Microscopio óptico Microscopio óptico convencional con doble

convencional óptica para aprendizaje
TEMPORALES Muestra +Colorante +
Medio de Montaje
Muestra + Fijadores +
PERMANENTES Tinción + Medio de
Montaje

Cubreobjeto

Portaobjeto
2. Contraste de Fases:
Detecta diferencias en el
índice de refracción y de
grosor.

Permite observar muestras vivas, o carentes de color sin usar

colorantes
3. Fluorescencia:
Utiliza moléculas fluorescentes que al iluminarlas con
radiación invisible, emiten radiación visible.
Utiliza luz de longitud de onda corta (UV) para activar
los electrones de la muestra.

Bacillus subtilis
esporulando teñidos Fibroblastos teñidos con el
con FITC, DAPI y fluorocromo FITC
βgalactosidasa.
La muestra se “tiñe” con una sustancia fluorescente (fluorocromos) que
absorbe la energía de las ondas cortas de la luz y emite la luz de
longitudes de ondas más largas (verde).
 4. DE LUZ POLARIZADA:
Se basa en la birrefringencia (emite
. •
brillantez) de los objetos.
• Utiliza luz polarizada plana.
• Las muestras se colocan entre dos
láminas polaroid que tienen sus
direcciones de vibración
perpendiculares

Cristales de ácido urico observados con

microscopio de luz polarizada
 5. MICROSCOPIO
DE CAMPO OSCURO
• Dispositivo que permite transmitir la luz de
forma circular, dejando el centro oscuro.
• Con esto conseguimos que el fondo de la
muestra aparezca negro y los especímenes
brillantes.
• El objeto iluminado dispersa la luz y se hace
así visible contra el fondo oscuro que tiene
detrás, como las partículas de polvo
iluminadas por un rayo de sol que se cuela en
una habitación cerrada.
• Las porciones transparentes del
espécimen quedan oscuras,
mientras que las superficies y
partículas se ven brillantes, por la
luz que reciben y dispersan en
todas las direcciones
• Se utiliza para analizar elementos
biológicos transparentes y sin
pigmentar, invisibles con
iluminación normal, sin fijar la
muestra, es decir, sin matarla.
6. Confocal: Combina la microscopía fluorescente con el
análisis electrónico de la imagen para obtener imágenes
tridimensionales.

Utiliza muestras
de cortes seriados
teñidas con
fluorescencia, para
reconstruir una
imagen
tridimensional
Microscopio
confocal
 CAMPO CLARO Requiere tinciones

Permite diferenciar
CONTRASTE DE FASES densidades, no
tinciones

Utiliza luz UV, usa

FLUORESCENCIA fluorocromos
MICROSCOPIA
OPTICA
DE LUZ POLARIZADA Produce birrefringencia

Permite ver muestras

CAMPO OSCURO
vivas, no tinciones

CONFOCAL Forma imágenes 3D

 CÁMARA AL VACÍO

LENTES: ELECTROIMANES

MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO

IMAGEN: EN UNA PANTALLA

• El factor limitante del poder de resolución del
microscopio compuesto, es la longitud de onda de
la luz

Imagen en microscopio
compuesto Imagen en microscopio
electrónico
Debido a que el microscopio electrónico
utiliza electrones y los electrones tienen
una longitud de onda de 0.004 nm
(100,000 más corta que la de la luz),
pueden mostrar estructuras mucho más
pequeñas, por lo que presentan alto poder
de resolución.
Hay dos tipos básicos de Microscopios Electrónicos,
en ambos

• El de transmisión (Transmission Electron

Microscope, TEM)

• El de barrido (Scanning Electron Microscope,

SEM).
Microscopía de transmisión: Los electrones pasan
a través de la muestra, la cual debe cortarse
en finas capas. Límite de Resolución de 1 a 2 nm
Microscopía de Barrido o tridimensional:
Los electrones chocan (barren) con la muestra,
En lugar de atravesarla. Produce imágenes
Tridimensionales de la superficie del objeto.
Límite de Resolución de 10 nm

Óvulo de hámster sin zona

pelúcida con espermatozoides

Criofractura de epitelio gástrico vista por

microscopia de barrido
 Microscopio Electrónico
de Barrido
SS-550

Imagen de electrones secundarios en

una muestra de cerámica:
Ampliación: 10.000x
Aceleración: 15.0 kV
 Permite ver el
DE
interior de las
TRANSMISION
estructuras

MICROSCOPIA
ELECTRONICA

Permite ver la
DE BARRIDO superficie de las
estructuras