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NUMERACIÓN DE BACTERIAS COLIFORMES POR EL MÉTODO DE RECUENTO EN PLACA

I. MATERIALES:

1. Los requisitos necesarios para la preparación y dilución de la muestra.

2. Incubadora a 45-37°C.

3. Pipetas bacteriológicas de 1m1.

4. Baño de agua regulada a 44- 46°C, para temperar el agar.

5. Agar Violeta Cristal Rojo Negro Bilis (VRBA)

II. PROCEDIMIENTO

1. Prepara la muestra por el procedimiento recomendado para la preparación de dilución de


muestra.

2. Transferir 1 ml de cada dilución de la muestra a una placa de Petri estéril.

3. Adicionar a cada placa de Petri, 10-15m1 de agar violeta cristal rojo bilis temperado a 44-
46°C.

4. Mezclar el contenido de las placas mediante movimientos de vaivén y rotación de cada


placa. Dejar solidificar la mezcla 5 a 10 minutos, luego distribuir un adicional de 10m1 de
medio de plaqueado como doble capa, cubriendo completamente la superficie de medio
solidificado e que inhibirá la formación de colonias en la superficie.

5. Invertir e incubar las placas durante 24 horas a 35-37°C. únicamente las Icolonias rojo
oscuro que midan 0.5mm o más de diámetro en la placa, que tengan entre 20 y 200 colonias,
se consideran bacterias coliformes. Si es posible seleccionar para el recuento solamente
aquellas placas no con más de 150 colonias de estas colonias. Multiplicar el número de
colonias por dilución para obtener el número de bacterias coliformes por gramo o ml de
muestra.
DILUCION DILUCION DILUCION NMP por 99 % 95 %
g.
0 1 0 3 1 23 1 17
1 0 0 4 1 28 1 21
1 0 1 7 1 35 2 27
1 1 0 7 1 36 2 38
1 2 0 11 2 44 4 35
2 0 0 9 1 80 2 38
2 0 1 14 3 82 3 48
2 1 0 15 3 85 5 50
2 1 1 20 0 77 8 61
2 2 0 21 5 80 8 63
3 0 0 23 4 177 7 129
3 0 1 40 10 230 10 180
3 1 0 40 10 290 20 210
3 1 1 70 20 370 20 280
3 2 0 90 20 520 30 390
3 2 1 150 30 660 50 610
3 2 2 210 50 820 80 640
3 3 0 200 <100 1900 200 1400
3 3 1 500 100 3300 200 2400
3 3 2 >1100 200 6400 100 1800

a) Calculados a partir de los datos de Man (1975)

b) En cada nivel de dilución, inocular 1m1 en cada uno de tres tubos de medio.

Para calcular en NMP de las diluciones mayores que las que se señalan, multiplicar el NMP por
el factor de dilución apropiado de 10,100, 1000, etc. Por ejemplo, si se han seleccionado tubos
provenientes de las diluciones 10-2,10-3, 10-4, multiplicar por 10, si de las diluciones 10-3, 10-
4, 105 multiplicar por 100.

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