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3.

DISEÑO DEL ESTUDIO

El estudio es de naturaleza prospectiva, descriptiva y observacional.

4. MATERIALES E INSTRUMENTOS:

Los materiales y equipos que se utilizaron en el estudio fueron los siguientes:

 Equipo
Refrigerador(4°C)
Incubadora(37°C)
Microscopio óptico

 Reactivos
Medio Diamond

 Material fungible
Cubreobjetos
Hisopos de dacrón o de rayón con mango de plástico
Portaobjetos de vidrio
 1 gradilla
 50 tubos de vidrio 12 x 75
 1 centrifuga
 1 caja de guantes

Además, se utilizó:

 Solución salina Fisiológica 0.9%


 Solución de Hipoclorito de Sodio
5. MÉTODOS

A) Ficha de identificación y datos clínicos anexo 03)

La ficha se divide en tres partes: Datos generales, antecedentes y


manifestaciones clínicas.
Los datos se recolectan antes de la toma de muestra y en el consultorio
respectivo; luego que la paciente firma el consentimiento de participación en el
estudio.
Los datos generales son: edad, ocupación, grado de instrucción, distrito de
procedencia, semana de gestación, control, etc.
En relación a los antecedentes se pregunta sobre el uso de métodos
anticonceptivos, si mantiene aún relaciones sexuales, si tiene más de una
pareja, etc.
El último ítem se refiere a las manifestaciones clínicas, donde se enfatiza en
preguntas como como presencia o no de flujo vaginal, olor desagradable,
escozor y molestias en la pareja.

B) Hoja de Consentimiento informado (anexo 04)

Se solicita a todas las pacientes la lectura de la hoja de consentimiento y al


mismo tiempo se les explica acerca del procedimiento, tipo de muestra a tomar,
riesgos y beneficios de participar en el estudio y la opción de abstenerse.

Esto para satisfacción de los derechos del paciente, como instrumento


favorecedor el correcto uso de los procedimientos diagnósticos y terapéuticos.

C) Toma de Muestra de Secreción Vaginal

Las muestras se obtienen de gestantes que cumplen con los criterios de


inclusión decir estar dentro del primer trimestre de embarazo, no haber
realizado baños o duchas vaginales previo al examen, además de no haber
recibido tratamiento previo a Trichomonas Vaginalis
La muestra es tomada por el Gineco-obstetra mediante el uso de un especulo
no lubricado, que expone la cavidad vaginal. Se toma muestra del fondo de
saco posterior de la vagina en gestantes que presentan o no flujo vaginal
abundante. Se procede inmediatamente a colocar la muestra en el medio de
cultivo, así como también, una parte de la misma en un tubo que contenía
solución salina fisiológica para hacer el examen directo, colocándose las
muestras en la incubadora a 37°C

D) Medio de Transporte de la Muestra:

Medio de Transporte AMIES medio se obtuvo de una modificación del medio


Stuart al cual se le reemplazó el glicerofosfato por un buffer inorgánico
superior, la adición de carbón permitió el crecimiento de patógenos tratados
con antibioterapia y mejorar el desarrollo de fastidiosos en comparación con el
Stuart. Se le omitió el azul de metileno. Este medio así modificado permitió
recuperar un número mayor de patógenos que en el Medio de Stuart.
Básicamente, cambia el glicerofosfato por un fosfato inorgánico y el azul de
metileno por carbón vegetal neutro farmacéutico. Además, añade iones Calcio
y Magnesio, que ayudan a conservar la permeabilidad de la célula
bacteriana.(1)

Medio destinado a la recolección, transporte y conservación de muestras


clínicas aptas para exámenes bacteriológicos. Es útil para mantener la
viabilidad de gonococos y de otros microorganismos de difícil
desarrollo.(garganta, vagina, heridas y piel)(2)

E) Procesamiento de la Muestra

Las muestras de Secreción vaginal serán procesadas en el Laboratorio de


Microbiología de la Facultad de Medicina Humana de la Universidad Privada
Antenor Orrego, pues presenta los medios y equipos necesarios para el
estudio Las muestras se incubaron a 37°C una vez depositadas en el medio de
cultivo, para evitar que el cambio de temperatura pueda afectar la viabilidad de
la Trichomona, al final de cada jornada de recogida de muestra, se realizaran
las lecturas respectivas
A las bolsas de medio de cultivo con las muestras se les realizó una lectura
inicial y se anotó los resultados en una hoja de reporte, que se lleva de cada
muestra. Estas fueron centrifugadas por 3 minutos a 2400 rpm para obtener el
sedimento, siendo luego colocadas en una lámina portaobjetos y cubiertas con
una laminilla para ser observada microscopio
F) Observación del Parasito

Esta determinación se realiza de forma tradicional, es decir la observación


microscópica del parasito a partir de la secreción vaginal, de la lámina
portaobjetos y se determina al microscopio si es que existe Trichomoniasis
cuando se observa al parásito con sus movimientos característicos en la lámina
portaobjetos.

G) Población Muestra

Gestantes en su embarazo que acuden al centro materno El Milagro.

Se utiliza para determinar la población

Donde:

Pe: proporción estimada

E: error absoluto o precisión 5%(0.05)

Z: Coeficiente de confiabilidad =95%= 1.6

Donde:

N: Tamaño proporcional
REFERENCIAS:

1. Laboratorios Linsan S.A. manual microdiagnostica tercera parte toma de


muestras, medios de transporte, medios de cultivo, y pruebas
diferenciales[Internet].2013
http://www.lablinsan.cl/manual/MANUAL_PARTE_3.pdf
2. Laboratorios. Unemo A, Magnus N. Ballard, R. .Ison, C. Lewis,D. Ndowa,
F. Peeling, R. Diagnóstico de laboratorio de las infecciones de
transmisión sexual, incluida la infección por el virus de la
inmunodeficiencia humana Organización Mundial de la Salud. [Internet].
2013
http://www.paho.org/hq/index.php?option=com_docman&task=doc_view&Ite
mid=270&gid=28913&lang=es
OTROS EJEMPLOS DE MEDIO DE TRANSPORTE DE LA MUESTRA

El Medio de Transporte de Stuart es utilizado para la recolección, transporte


y preservación de muestras microbiológicas , y permite mantener la viabilidad
de los microorganismos presentes en la muestra sin que exista un crecimiento
significativo.

Actualmente este medio es recomendado para exudados faríngeos, vaginales y


muestras de heridas. En este medio el cloruro de calcio proporciona iones
esenciales para mantener el balance osmótico. El tioglicolato de sodio evita los
cambios oxidativos y provee una atmósfera reducida. El glicerofosfato de sodio
actúa como buffer. El azul de metileno es un colorante indicador del estado de
óxido-reducción.
El medio de STUART modificado permite la conservación y el transporte de un
gran número de microorganismos patógenos, como Neisseria gonorrhoeae,
Heamophilus influenzae, Corynebacterium diphteriae, Trichomonas vaginalis,
Streptococcus sp., Salmonella sp., Shigellas sp., etc.

Se utiliza también para el transporte de muestras de secreciones oculares,


óticas, faríngeas, vaginales, uretrales, heridas y abscesos. Los
microorganismos permanacen viables de 6 días a 8 semanas.
Medio de Transporte AMIES sin/con carbón activado Este medio se obtuvo
de una modificación del medio Stuart al cual se le reemplazó el glicerofosfato
por un buffer inorgánico superior, la adición de carbón permitió el crecimiento
de patógenos tratados con antibioterapia y mejorar el desarrollo de fastidiosos
en comparación con el Stuart. Se le omitió el azul de metileno. Este medio así
modificado permitió recuperar un número mayor de patógenos que en el Medio
de Stuart. Básicamente, cambia el glicerofosfato por un fosfato inorgánico y el
azul de metileno por carbón vegetal neutro farmacéutico. Además, añade iones
Calcio y Magnesio, que ayudan a conservar la permeabilidad de la célula
bacteriana.
El Medio Amies es recomendado para secreciones de garganta, vagina,
heridas y urogenital causadas por flora fastidiosa o dificil de mantener viable
como son: Neisserias, Streptococcus, Haemophilus, Listerias ; manteniéndolos
en optimas condiciones para el cultivo hasta despues de 48 hrs ,

Medio Amies con carbón activado se utiliza para secreciones de heridas y


urogenital , para el cultivo y aislamiento de gérmenes fastidiosos , tratados o en
tratamiento con antimicrobianos y/o expuestos a metabolitos tóxicos para su
desarrollo, la presencia del carbón tiene afinidad por compuestos orgánicos ,
descompone las formas reducidas de oxigeno y secuestra los radicales libres.