IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS POR OSAZONAS

Juan Luis Timaná Lanfranco (20152627K), Gustavo Javier Pérez Contreras (20152646E)
Laboratorio de Química Orgánica II, PQ-322, FIPP
juanluistblull@gmail.com, gperezc152@gmail.com

Realizado: Junio 11, 2018

Presentado: Junio 18, 2018

RESUMEN

En el presente informe de laboratorio se desarrolla un método de caracterización de diferentes

carbohidratos por formación de osazona. Estas reacciones características de los carbohidratos se
presentan al formarse las osazonas cuando los azucares reductores reaccionan con fenilhidrazina en
una mezcla con ácido acético glacial y agua. El experimento concluye con la identificación de los
carbohidratos mediante la determinación del punto de fusión de los precipitados obtenidos,
obteniéndose la caracterización de la glucosa y fructosa por evidencia de los cristales obtenidos.

Palabras clave: Osazonas, carbohidratos reductores, fenilhidrazina.

1. INTRODUCCIÓN

Formación de osazonas

Antes de la espectroscopia, una de las mejores maneras de identificar cetonas y aldehídos era la
conversión a hidrazonas cristalinas, especialmente fenilhidrazonas y 2,4-dinitrofenilhidrazonas. En su
trabajo exploratorio sobre las estructuras de los azúcares, Emil Fischer formó y usó derivados de
fenilhidrazona. De hecho, el uso constante de la fenilhidrazina provocó finalmente la muerte de
Fischer en 1919 por envenenamiento crónico con fenilhidrazina.

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 Esquema 1. Síntesis de la fenilhidrazona

Sin embargo, los azúcares no forman los derivados de fenilhidrazona sencillos que podríamos
esperar. Dos moléculas de fenilhidrazina se condensan con cada molécula del azúcar para formar una
osazona, en la que los compuestos se han convierten en fenilhidrazonas. El término osazona se deriva
del sufijo -osa de un azúcar y la última mitad de la palabra hidrazona. La mayoría de las osazonas se
cristalizan con facilidad, con puntos de fusión bien definidos. Los puntos de fusión de los derivados de
osazona proveen pistas valiosas para la identificación y comparación de azúcares.

Esquema 1. Formación de las osazonas en aldosas y cetosas.

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En la formación de una osazona, el C1 y el C2 se convierten a fenilhidrazonas. Por tanto, una cetosa
forma la misma osazona que su aldosa relacionada. También observe que la estereoquímica en el C2
se pierde en la fenilhidrazona. Por tanto, los epímeros C2 forman la misma osazona.

Fischer descubrió también que la formación de osazonas no solo era útil para la identificación de
carbohidratos, sino también para la determinación de sus configuraciones, lo que es mucho más
importante. Un par de aldosas diastereomeras que solo difieren en configuración en torno al C-2 se
denominan epímeros Un modo de identificar un par de aldosas como epímeros, es por medio de la
formación de una misma osazona.

La hipótesis de trabajo es:

“La identificación de los carbohidratos por osazonas nos permitirá poner en práctica la teoría adquirida
sobre carbohidratos y sus reacciones en la clase de Química Orgánica II”.

Asimismo, los objetivos de la práctica son:

Objetivo general: Evaluar las competencias procedimentales adquiridas teóricamente por los alumnos
en la asignatura de Química Orgánica.

Objetivos Específicos:

 Lograr experimentalmente la identificación de los carbohidratos reductores.

 Determinar el punto de fusión de los productos obtenidos.

2. DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN

En un vaso de precipitado se mezcla la solución de fenilhidrazina con ácido acético glacial y agua. Por
otro lado, en tubos de ensayo se preparan los carbohidratos orgánicos a identificar mezclando los
siguientes compuestos: glucosa, fructosa, maltosa, sacarosa y lactosa. Se añade agua
independientemente a cada uno de los tubos de ensayo y se colocan en baño maría mezclándolos
previamente con la mezcla preparada de fenilhidrazina simultáneamente. Se comenzó a calcular el
tiempo. Pasada la media hora de calentamiento en ebullición se extrajeron los tubos de ensayo y se
dejó enfriar. Luego se separó el precipitado usando un equipo de filtración al vacío, con la finalidad de
tomar las muestras de los productos obtenidos y calcular el punto de fusión con el software vernier en
Logger Pro.

3. PARTE EXPERIMENTAL

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En un matraz Erlenmeyer de 125 mL se cargó con 1.25 g de NaOH, 12.5 mL de agua y 10 mL de etanol.
Posteriormente se agregó poco a poco y agitando 1.25 mL de benzaldehído y luego 0.5 mL de acetona,
la mezcla se agitó por unos 20 minutos aproximadamente con la ayuda de una bagueta, además se
controló la temperatura mediante baños de agua fría, en un rango de 20 – 25°C (figura1). Se observó
una coloración naranja que indicó la naturaleza de una solución alcalina. Seguidamente se pasó a añadir
50 gotas aproximadamente de HCl diluido hasta notar una coloración notablemente amarilla. Luego se
pasó a filtrar el precipitado mediante una filtración al vacío, mediante un lavado de agua (figura2).
Después se pasó a hacer la recristalización del precipitado en etanol a ebullición (figura3), se dejó
enfriar por unos minutos a temperatura ambiente hasta que se observó los cristales de color amarillo
(figura4). Seguidamente se volvió a filtrar por vacío para obtener un precipitado de color amarillo como
producto final que luego fue llevado al
horno para el secado por uno 5 minutos
aproximadamente; se tomó nota de la
masa del precipitado para el cálculo del
rendimiento de la reacción
correspondiente. Finalmente se calculó el
punto de fusión del precipitado para
determinar y analizar su pureza (figura7).

Figura 1. Agitación de la mezcla.

Figura 2. Equipo para la

filtración al vacío.

Figura 3. Etapa de la
recristalización.

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 Figura 4. Cristales amarillos obtenidos por recristalización.

Figura 5. Filtración al vacío de los cristales.

Figura 6. Equipo para hallar el rango de temperatura de fusión.

Diagrama de Flujo del experimento

A continuación, el Diagrama 1 muestra las principales operaciones realizadas durante el

procedimiento experimental.

0.5gr glucosa 0.5gr sacarosa

Hervir 300mL de H2O
6mL H2O 6mL H2O

RF
3mL fenilhidrazina
3mL CH3COOH glacial
6mL H2O

0.5gr maltosa 0.5gr fructosa 0.5gr lactosa

6mL H2O 6mL H2O 6mL H2O

0.5gr glucosa 0.5gr sacarosa

6mL H2O 6mL H2O
3mL RF 3mL RF

0.5gr maltosa 0.5gr fructosa 0.5gr fructosa

6mL H2O 6mL H2O 6mL H2O Calentamiento por 30
3mL RF 3mL RF 3mL RF min aproximadamente

Filtración al vacío de
cada osazona

Diagrama 1. Diagrama mostrando la formación de las osazonas para cada azúcar.

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4. RESULTADOS

Finalizada la obtención de las osazonas de cada azúcar, se procedió a la medición del rango
de fusión de cada una.
Tabla . Puntos de fusión de las osazonas de cada azúcar.
Compuesto Rango de fusión
Osazona de glucosa 216.6 °C – 217.8 °C
Osazona de maltosa 206.1 °C – 207.2 °C
Osazona de lactosa 199.4 °C – 200.7 °C
Osazona de fructosa 216.3 °C – 217.6 °C
Osazona de sacarosa 216.5 °C – 217.5 °C

5. DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Observando y comparando los rangos de fusión obtenidos para cada azúcar, se puede apreciar un
alto grado de similitud entre los rangos de fusión de la glucosa, la fructosa y la sacarosa.

Era de esperarse que la glucosa y la fructosa tengan puntos de fusión similares, debido a que ambos
compuestos son hexosas, una cetosa (fructosa) y una aldosa (glucosa), las cuales al reaccionar con la
fenilhidrazina dan la misma osazona.

En cambio, para el caso de la sacarosa, esta se hidroliza y se produce una mezcla de α-D-glucosa y
β-D-fructosa (azúcar invertida). Al momento de darse la formación de la osazona, esta parte ya sea de
la glucosa o de la fructosa, obteniéndose una misma osazona puesto que son hexosas.

6. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

 Se logró sintetizar experimentalmente la dibenzalacetona demostrando la capacidad de

análisis y síntesis adquirida teóricamente, así como las técnicas procedimentales, resultando
un RENDIMIENTO bajo por diversas condiciones como la calidad de los reactivos y la formación
de otros compuestos.
 Fue posible realizar una condensación cruzada, a partir de un aldehído aromático y una
cetona alifática, en presencia de NaOH la cual atrapa al protón ácido de la acetona, actuando
como nucleófilo en el carbono del aldehído, de esta forma se llevó a cabo la reacción de
Condensación de Claisen-Schmidt. Sé analizó cual es la diferencia entre una condensación
aldólica y una condensación cruzada.
 Así la síntesis de la dibenzalacetona se da por una reacción de condensación aldólica cruzada,
en la cual se utilizó una base y disolventes en proporciones específicas para dirigir la reacción,

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 generando iones enolatos de forma regioselectiva. En este caso el producto es inevitablemente
la dibenzalacetona debido a que se utilizó una cetona simétrica.
 Se utilizaron diferentes técnicas de laboratorio, y a su vez, un equipo de software Vernier con
la finalidad de calcular el punto de fusión del compuesto sintetizado.
 Por el lado de las recomendaciones, es importante trabajar con reactivos de la mejor calidad,
lo cual no fue el caso en el experimento desarrollado. De la misma manera realizar un correcto
uso de los instrumentos de laboratorio al momento de manipularlos y realizar las técnicas en
cada uno de los procesos involucrados tales como disolver los reactivos, la correcta posición
del papel de filtro en el equipo de vacío y una buena lectura en el equipo vernier.

7. CUESTIONARIO

1. Escriba la reacción de cada una de las pruebas efectuadas

Esquema . Formación de osazonas.

Nota: Solamente se realizó la formación de osazonas.

2. ¿Por qué la osazona de la fructosa y la glucosa presentan el mismo punto de fusión?

Porque la fructosa y la glucosa son hexosas (monosacáridos de 6 carbonos) cetosa y aldosa

respectivamente. En la formación de una osazona, el C1 y el C2 se convierten a fenilhidrazonas. Por
tanto, una cetosa forma la misma osazona que su aldosa relacionada.

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 Esquema . Formación de la osazona de la D-glucosa

Esquema . Formación de la osazona de la D-fructosa

3. Describa otros ensayos que permitan conocer si un azúcar es reductor

Reacción de Benedict

Se basa en la reducción de Cu2+ a Cu+ en medio básico débil. Aunque es similar a la reacción de
Fehling, el medio básico débil (HNaCO3) y el estabilizante (citrato sódico) usados hacen que este test
sea más sensible y estable.
Procedimiento:
1. Pipetear en un tubo de ensayo 5mL del reactivo de Benedict.
2. Calentar a ebullición.
3. Añadir 1mL de la solución de azúcar, mezclar bien y volver a calentar a ebullición
Resultado:
Si la reacción da positiva aparece un precipitado rojizo, aunque si la cantidad de azúcar es pequeña
puede dar color anaranjado o rojizo.

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Reacción de Braun

Los azúcares reductores en medio alcalino pueden reducir el picrato, de color amarillo, a picramato,
de color rojo en medio alcalino (Na2CO3)

3 3 OH- 3 RCOO- 2 H2O

Esquema . Reacción de Braun.

Procedimiento:
1. Añadir en un tubo de ensayo: 4mL de solución de azúcar, 2mL de ácido pícrico saturado, 2mL
de solución de Na2CO3 1M.
2. Calentar a punto de ebullición.
Resultado:
Si el test es positivo, el color amarillo pasa a rojo.

Prueba de Barfoed

En medio ácido, tan sólo los monosacáridos son capaces de reducir el Cu2+ a Cu+. El Cu+ producido
reduce al ácido fosfomolíbdico a un complejo de intenso color azul oscuro.

Procedimiento:
1. Pipetear en un tubo de ensayo: 1mL de solución de azúcar, 1mL de solución ácida de cobre.
2. Calentar a ebullición durante 3 minutos.
3. Enfriar en agua durante 2 minutos.
4. Añadir 1mL del reactivo de fosfomolibdato.
Resultado:
Si la prueba es positiva aparece un color azul oscuro muy intenso.

Prueba del espejo de plata

Los monosacáridos son capaces de reducir, en medio amoniacal, el ion Ag+ a Ag0 (plata metálica), que
se deposita en las paredes del tubo.

Ag + + 2NH3 → Ag(NH3 )2 + + R − CHO → Ag 0 + R − COONH4

Procedimiento:

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 1. Añadir en un tubo de ensayo: 1mL de AgNO3 al 1%, 1mL de NH3 al 30%, 1mL de solución de
azúcar.
2. Mezclar bien y calentar durante 2 minutos.
3. Dejar reposar.
Resultado:
Si el ensayo da positivo, la plata metálica se va depositando en la pared del tubo formando un espejo
(“espejo de plata”).

4. ¿Cuál de los siguientes azúcares dan positivo la prueba de Tollens o Fehlling? Explique
brevemente

8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1] L. Wade, Química Orgánica Volumen 2, Séptima edición, México: Pearson Educación, 2011.

[2] R. N. B. R. T. Morrison, QUÍMICA ORGÁNICA Quinta edición, México: Addison Wesley Longman,
1998.

[3] C. Timaná de La Flor, Química Orgánica II - Guía de Laboratorio, Lima: UNI-FIP-Timaná, 2001.

La prueba se basa en que los azúcares reductores se condensan con reactivos como la fenilhidracina
en frío formando una fenilhidrazona. A 100 ªC y en presencia de un exceso de fenihidracina se lleva a
cabo otro tipo de reacción en donde participan los átomos de carbono número 1 en las cetosas,
dando lugar a la formación de osazonas.

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