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Análisis de resultados Al Realizar la prueba de inhibición se obtuvo que aproximadamente se tenia 22,68 UT en

la solución de tripsina y al hacer reaccionar esta solución con 3 extractos diluidos de frijol,

arverja y garbanzo, actuaron los inhibidores presentes en estos, reduciendo las UT . El ensayo arrojo que el extracto de Garbanzo tiene un inhibidor de tripsina muy efectivo,

obteniendo un 94% de inhibición de la tripsina por lo cual fue el utilizado en el estudio de la cinetica enzimática y la determinación del tipo de inhibición que se presentara. Al realizar el estudio cinético de tripsina en ausencia de inhibidor se obtuvieron los datos reportados en la tabla 2 del informe, al realizar la curva de velocidad contra concentración de sustrato se observa como a bajas concentraciones del sustrato la tendencia no es lineal

y esto se puede debe tanto a factores cinéticos debido a esas bajas concentraciones,

factores de error instrumental debido a que a bajas absorbancias es cuando se presenta en mayor magnitud este error electrónico (Twyman-Lothian) y por último errores del experimentador en la preparación de las muestras (específicamente, el tubo marcado como

1).

Al comparar las gráficas de velocidad contra concentración de sustrato de las pruebas con inhibidor y sin inhibidor se observa que para la prueba con inhibidor la velocidad máxima no es alcanzada. Es decir, este tipo de cinética química sigue una tendencia de tipo exponencial (y=1-exp(-x)) en donde a medida que se aumenta la cantidad de sustrato se alcanza un estado estacionario que es conocido como la velocidad máxima debido a que la cantidad del complejo enzima-sustrato que se forma tiene como reactivo limitante la enzima.

A los datos de la tripsina en ausencia de inhibidor (tabla 2) se le hizo la transformación lineal

por medio lineweaver burk obteniendo un valor de Vmax de 0,0706 y Km de 0,1231, se procedio de igual forma en los datos reportados en la tabla 3 que son del estudio cinético en presencia de inhibidor en el cual se evidencio el aumento de la velocidad de reacción, se obtuvo que Vmax tiene un valor de 0,117 y Km de 0,245. se comparo los valores del km, en ambos casos se evidencia que el km de la tripsina inhibida es mucho mayor a la tripsina, lo que indica que en la inhibición hubo menos avidez en la unión de Tripsina y BAPNA ( el cual fue el sustrato usado) ; es decir , la tripsina y el BAPNA prefieren estar en su forma libre que en la forma complejo ES, lo cual era lo

esperado, que la tripsina no interactuara en gran cantidad con el BAPNA. La inhibicion de tripsina segun reportado en la literatura es no competitiva, pero al observar los datos obtenidos en el Km se esperaria entonces que es competitiva siempre y cuando su vmax se mantenga constante. Ahora si analizamos los datos de Vmax observamos que

el valor es mayor en en la presencia de inhibicion que en la ausencia de este lo que lleva

pensar que el BAPNA tiene mas centros activos en presencia del inhibidor que sin el y esto

se puede deber a que el inhibidor escogido no tendria una capacidad considerable de unirse tanto a la Tripsina libre como al complejo Tripsina-BAPNA. Se obtuvo entonces que en la prueba con presencia de inhibidor la Km y Vmax aumentaron en conjunto, pero ésta relacion no corresponde a ninguna clase de inhibicion enzimatica (Competitiva, No competitiva, acompetitiva, mixta). el fenomeno podria explicarse de las siguientes formas:

Al parecer la reaccion transcurria bajo una inhibicion competitiva pero al parecer quizas por preparacion inadecuada del sustrato o del buffer del sustrato incentivo a una inhibicion por

retroalimentacion, la cual ocurre cuando el producto de una reacción enzimática, ya sea al final o en una bifurcación de una vía determinada, actúa como efector alostérico, inhibiendo temporalmente la actividad de una enzima, esto consiste en que el inhibidor se une a un segundo sitio de unión activo que es diferente del unido al reactivo inicial, haciendo que la enzima se reorganice espacialmente para que ya no pueda unirse al reactivo inicial y no puede catalizar la reacción más provocando el aumento de Vmax.

Alternativamente podria haber ocurrido que en la medida en que para ambas pruebas no se usó el mismo espectrofotómetro,las mediciones no son absolutamente comparables. Así mismo pudo deberse a errores en la preparación de las muestras o manipulacion del equipo al registrar la absorbancia. No es posible decir que se debió a cambios en la estructura del inhibidor entre una prueba y otra debido a que como se ve en los resultados, después de calentar la enzima por una hora la actividad de este no se ve afectada y es muy estable incluso a condiciones de alta presión.

Conclusiones. Km para las pruebas con inhibición es 0,245 M. La estabilidad térmica del inhibidor que presentó mayor porcentaje de inhibición es alta.