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Fluorimetría

De todas las técnicas luminiscentes la más importante sin duda es la fluorimetría, en


esta se excitan especies moleculares por irradiación con luz visible o ultravioleta. Con
determinados compuestos, después de la absorción se produce una emisión de radiaciones
características de longitud de onda mayor que la de excitación. Al excitar una molécula son
posibles muy diversas transiciones energéticas de los electrones.
Los focos más empleados para excitar la fluorescencia son tubos especiales, lámparas
de vapor de mercurio y lámparas de arco de xénon. Por medio de filtros o de un
monocromador se aíslan bandas específicas de la radiación del foco las cuales se hacen
incidir sobre la muestra. La radiación fluorescente procedente de la muestra se aísla luego
con filtros o con un segundo monocromador, y su intensidad se mide mediante un fototubo
sensible. En la figura ¿1? Se muestra el esquema de un fluorímetro.
La selección de la longitud de onda más adecuada para la excitación se rige por las
siguientes consideraciones: Tiene que sr emitida muy intensamente por el foco, y también
intensamente absorbida por la muestra; tiene que ser separable fácilmente de la radiación de
fluorescencia, por ejemplo mediante filtros.

Fig.¿1?. Esquema de un fluorímetro 1. Foco de radiación. 2. Filtro o monocromador de la


radiación de excitación. 3. Obturadores. 4. Diafragma de apertura variable. 5. Muestra. 6.
Filtro o monocromador de la radiación de fluorescencia. 7. Fototubo y sistema detector. 8.
Registrador o medidor
Una vez fijada la naturaleza del foco de excitación, la elección de la longitud de onda
mas adecuada para la medición de la intensidad de la fluorescencia, se hace simplemente
observando esta intensidad de emisión en función de la longitud de onda.
En cada serie de determinaciones fluorimétricas, es muy aconsejable realizar un
ensayo en blanco; La principal ventaja de los métodos de fluorescencia reside en su alta
sensibilidad que permite detectar concentraciones muy pequeñas de la sustancia fluorescente.
La aplicación analítica de esta técnica es limitada, pues solo presentan fluorescencia definida
un reducido número de compuestos y elementos [Ref]

Ref
https://books.google.com.mx/books?id=ZF9jSBZCghAC&pg=PA120&dq=fluorimetria&hl
=es-
419&sa=X&ved=0CC0Q6AEwBGoVChMI0eel0IjmxwIV1hSSCh0UXQPp#v=onepage&q
=fluorimetria&f=false paginas 120-122