7, Obeervactén 1a observactén de los cortes en el microscopio electrénico 1a empesanoe con sumentos Dajos. Ge heralnente lee conclusiones se hacen sobre {ots Braffas, por lo tanto, se tonan alcrogratias de les dreae Interesantes para tucstro estudio, — posterioraente los negatives se inprinen con —— lina amplificacién que facilive les fotografiag efinitivas eapleando un papel fotogrétice de — alte calidad, Hay que utilizar papel fotografi co de alto contreste (F-5 duro) pues a los nega tives gonorainente les falta contraste. Para = a impresiGn debenos deatinar el tienpo y el — cuidado necesario pare conseguir un trabajo —— TV. METODOS DE_PREPARACION DE LAS NUESTRAS EN YICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARKEDO [A pesar del poco tiempo que tiene de utilizarse — fel microscopio electrénico de barrido (NEB) mucho (88 1o que ha eportado como herranienta de investi gacién, siendo beneficiado gracias los, prosre S08 realizados con anterioridad en la metodelogia Pid slectrénica de trananiaisn . Sin embergo su utilizscién e biologie no «my ge neralizada, debido prineipaimente al alto costo S det apnrat®, aunado a las dificultades para mane Jar tejidos bandos Aidratados.” Pare superar ee te aitino inconventente es indiapensable ta adqui sictén de equipo adictonal que permite aanejar Tt uestra adecuadanente y obtener na imagen Geil, Gon una estrecha relacién con la realidee, MaLtiples son los procedimientos que nos permiten conecer en una imagen tridimensional las estructy Pas do los seree vivos, En esta oportunidad nen clonarenos 10s née comnes en ls mayoria de los ~ Iaboratorios de investigacsén. MATERIAL FRESCO 1a observacién de material fresco al MEB es tan — antigua cono el aparato aisso ya que no se requ Fe de fijacién. Loe objetos duros cono dienten, hnuesos, lulas, senillas, polen, ete., después de’ Ja linpieza necesaria pueden Sbeervarse ein mayo- es complicaciones algunas veces sin necesidad de ranbign resiste las condiciones del MEB e) mate— ial fresco de origen vegetal, previo recumbri. ‘hiento y observacién con voltaJe de acelerecién —gual ue para microscopfa electrénica de tranems oién existe una gran variedad de fijadores expled dos en el trataatento de las micstrar dostinads fl sicroscopio electrénico de barrido. Los nda ~ Comunee gon el giutaraldeh{do, el tetrabxide de — onic, una mexcin de glutaraldehido y una combina Gién de glutaraldeh{do-tetradxido de osmio. EL fijedor ale enpleado os ol glutaraldenido en — concentraciones del 1-5 q 6X » disuelto en el — snortiguedor de fosfato sbdico 6 cacedilato de ao Gio, OS Ma LOM. (pH 7.2 8 7.4). especinen a estudiar pues las eélulas individuates ‘ono las sanguineas, protozoarios, Svulos, caper Ts canolaridad del fijador, sufriendo defernacio— ee cuando estén innersas en soluciones hipaténs cas 0 hiperténicas que ee manifiestan al mowento ein observactén. * Para cada mostra biolégica existe diferente tien po de fijacién: Normalsente se aplican tratanien tos de 3-6 horas. Perfodoa largos de fijacién= fen glutaraldehfdo eventualmente provocen endurect Itento de los tejidos que favorecen 1a obserwcidl 1 HEB, sncontréndose oso Genventase In posible Benefictoso es también el empleo de 1a fijacién - or tienpos prolongedoe, pues ex garantia de 1a — Penetracién del reactivo en el tejido, que es nor fhalmente lenta, ya que en Ia nicroscopfa electrt hniea de barrido "generainente se enplean muestras de considerable volunen. En estos casce om mene ter realizar dor canbios dela solucién fi jason yonantener Ine muestras an refrigeractén. Cuando se hacen observaciones de material fresco fal NEB, el agua contenida en los tejidos tiende a fevaporarse produciendo gases contaminantes, conge fleie por el dao de haz de electrones, provoca do une imagen Final con “ruidos" que imposibilitan tina imagen clara del objeto. Esto se manifiesta con claridad al wonento de le impresién de 1a micrografia. Cuando eato oourre ee preferible ~~ trabajar con el condeneador abierto y un voltase Ge aceleracién de 10 kilovoltios 0 menos: El eatudio de aaterisies frescos, principalnente Vegetales, en aie factible en micstras reeién a Sectades y con buen recabriniento, noténdose una Geshiaratacién on las estructuras las 24 hora el montaje, Objetos duro como conchae, roces, ceracoles, etc. son de fécil cbservactén despues e un trataniento de Linpieza a base de cloralex ‘L1utdo, auxilidndose con wn pincel de pelo de ca SSECADO AL ATR Una de Ins crfticas mks frecuentes pare 104 micros copistas esta relacionadas con ta sbeervacioa arts? Tectual. “Eaten cr{tican van orfentasce principal smonte a sefialar ton errorea, que se presentan et dar por real 1a imagen de une eetructure Que ha = futrido canbioe por efecto de las condicience a= no.se a tn trataniento’ eae gree ea meetin cere eeCuando se requiere hacer una doble fiJacién se en plea glutarsldeh{do 2-38, seguido de un lavado en el anortiguador donde se disolvié el reactivo Ytinalmente 1a postfijacién con tetradxido de os Mio 1 6 2%. Loa tlenpos on variables segin el = DDESHIDRATACION Posterior al método spropiado de fijacién, las uestras se suelen deshidrater en etapas de dis— Cintas grciecicnes con alcohol © aeetona por ej. 30k, 40k, 80%, 60%, 70%, 85%, SEX durante S a 10 minutos cada wna después con etanol sbsoluto © — Sectona durante 202 20 minutos con varios caxbios. tos fragnenton grandes s¢ deshidratan en un tubo fe ensaye 0 vial y los orgentanos pequefios requie- fen de centrifugacion durante el proceso para que fhe se pierdan o Bien colocéndolos’ en un portacbje Cono nencionanos anteriormente a algunos organis~ tm soportan el eecads l'aire sin eufrir deforma [ions ai final. do la deehidratacion o durante 18 Soecrvecton, "EL procediniento de eccado is cou { eeconendndo ex el metodo dei punto erftice, uti Titaneo aoniae de earbono 1fquido 0 gna freon 1b. "deneralnenve So ileve la.muentcn eat soe favo deapute Ge alcohol absoluto 0 acetone. En — Simos casos se lieve el tejigo a acetata de 190 nile antes del secade por punto orftico. ‘SEcADO DE PUNTO CRITICO Rata téenica introducida por Anderson en —~ 2951, para aleroscopia electrénice de barrido, - ‘provecha el hecho de que en su punto eritico, tin flute pasa imperceptiblenente de Lfquido a - aes sin’ Linites visibien y sin fuereas de distor resin, un Tluido se comporta como dos feses, = Siecretas separadoe (1iquido y vapor estén en eqiilibric).” Por eliminacién de tensiones super Fleiales en punto eritico ae evitan los cambios superficiales de las estructuras biolégices, du ante 1s desecacién ofrectendo finalmente el. mic eroscopto eleeteénico de barrido una imagen real fe Ine niseae, Aigunos autores mencionan procedimientos — simples y précticos para 1a técnica de descee-— eién. Sin embargo dado lo delicado de lon cape cfnenes es preferible enplear el equipo especial Feconendado pars estos catos. Generalmente se enplea née el gas carbinico — on excelentes resultados y ae prefiere por su — Facil y barata adquisicién. Loe més sodernos. la boratorios poseen equipos de desccacién a base = de freon 13 considersndose 1 gaa mda adecuado — Dara los expecinenes ads sensibles, scan estas — enbriones, hongos, ete, [RECUBRIMTENTO DR LAS MUESTRAS. la saisiéo de electrones es uns de las formas bisicas Gol HEB pare proporetonar uns snagen tri dimensional de las estructuras: ‘Biolégieas: = cierto nimero de electrones secundarios de tal — Forma que origina una sefel mmionto que se le dé a la muestra biolégice epliz 6 reducir el efecto de carga eldctrica, que oce~ ‘stona el haz de electrones sobre esa muestra,res que sfectan a uniformidad de in capa Tina fe el tipo de material vsado en el recubrinient los netales nis emplesdon sin el of, patadio, = de uso més generalizado debido a su fécil adgul- slctén on forma pure o cosinada, ea fbclinente evaporado desde tn filenento de tungsteno y tiene tin alto costiciente de enision de electronee ae- (OBSERVACION DK MITOSIS. ¥ CROMOSONAS 1. mwnopuceron los avances tecnolégicos on Ins diversas ra mas do 1a ciencia han permitido ir diferenciands os conplicados problemas biolégicos, factliten doen nuestros fas ina vieidn més precisa de 1a ‘Sonplejidad de low organisnos y particularnente de In célule, Este os el caso de 1a citogensti— fea, Ta cual se ha convertide en aisciplina con — tun 'papel uy importante en el conocimients bio Légico de los recursos Vegetales deede el punto evista taxonémico, de hibridacién de cultivoe 4 ingenteria genética o en la deteceién de loe ‘efectos de contaminacién ambiental. la eitogenstica requiere del conocimiento — e 1a Torna, ninero y asoctacién de los cromono- Ines, importantes por ser los responsables de loe Caractéres hereditarion en cada organiano, sei ~ como el proceso cariocinético. Durante, tal pro- ‘cee0 son eldeticos y de consistencia gelatines pudiendo ser teAidon con factlidad por los cole- Fenton Désicos eon reaultedo de contener une — levada proporcién de DNA y protefnas. Un método utilizedo rectentenente para ob-— server cromosoaas oa el "Squash". Dicha técnica — permite seperer las células individualeente fs Exlitando Le obeervacién de los cronosonne por — fu eapeciantento en el citoplasma durante Ia — 2. UREVE DESCREPCION DE LA MITOSIS La divietén celular ee obviasente 1a primera ‘etapa en el crecimiento y diferenciacién. “La —~ Formacién de nuevos tejidoe no puede produciree se multiplicaré tanto el niicleo cono el citoplas