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NEUROIMAGEN J. I. Arellano Cabornero
MICROSCÓPICA
INTRODUCCIÓN
La neuroimagen microscópica consiste en la observa-
ción del tejido nervioso a través de sistemas ópticos o
electrónicos que permiten obtener imágenes a gran au-
mento para el estudio de su microestructura y organiza-
ción. Con este fin se emplean microscopios de campo
claro, de fluorescencia, confocal y multifotón, que em-
plean luz para la obtención de imágenes y que permiten
una aproximación a la estructura tisular y celular del sis-
tema nervioso. El microscopio electrónico resuelve los
problemas de resolución que origina el uso de luz y utili-
za radiación electrónica para obtener grandes magnifi-
caciones y resolución a nivel molecular para desvelar la
organización subcelular. Estos sistemas de microscopia
necesitan un procesamiento previo del tejido, y se apo-
yan en el empleo de técnicas de tinción y marcaje selecti-
© Elsevier. Es una publicación MASSON. Fotocopiar sin autorización es un delito.
vo de las muestras a estudiar, que permiten diferenciar
los distintos componentes del tejido nervioso y estudiar
su distribución, sus características morfológicas y bioquí-
micas, sus interacciones sinápticas y su fisiología.
En las últimas décadas, el desarrollo de marcadores
fluorescentes compatibles con la fisiología celular, ha
permitido la observación del tejido vivo, tanto in vivo1
como in vitro,2 empleando sistemas de microscopia de
fluorescencia, particularmente el microscopio confocal
y multifotón. Esta aproximación permite visualizar la di-
námica de muchos procesos biológicos como la res-
puesta fisiológica celular en tiempo real, la migración
1 In vivo: término latino que se emplea en biología para describir los experi-
mentos u observaciones realizados en un animal vivo.
2 In vitro: término latino que se utiliza para describir los experimentos u ob-
servaciones realizados en tejido biológico que ha sido aislado del organismo
y mantenido vivo en un sustrato adecuado.
neuronal o la sinaptogénesis durante el desarrollo cere-
bral, y de esta forma obtener una información mucho
más completa acerca del funcionamiento del sistema
nervioso. En este capítulo se sintetizan los fundamentos
de los distintos sistemas de microscopia, sus capacida-
des y limitaciones, y se describen también las princi-
pales técnicas empleadas en neurobiología para iden-
tificar selectivamente los diferentes componentes del
sistema nervioso y estudiar su estructura, organización,
y fisiología.
PREPARACIÓN DEL TEJIDO
PARA MICROSCOPIA
El estudio microscópico del tejido nervioso implica una
preparación de las muestras que incluye los pasos descri-
tos a continuación.
FIJACIÓN
Procedimiento que impide que se produzcan fenóme-
nos de degeneración post mortem, y permite, a su vez, que
la estructura del tejido se mantenga de forma muy simi-
lar a como es en vivo. La fijación se consigue con la in-
mersión o perfusión del tejido con aldehídos como el
formaldehído, paraformaldehído y glutaraldehído, que
establecen puentes moleculares entre las proteínas es-
tructurales y solubles del tejido, insolubilizándolas e in-
activando las enzimas que darían lugar a la autólisis celu-
lar, con lo que se preserva la estructura del tejido. Se
emplean distintos fijadores en función de las técnicas
que se quiera emplear en el tejido, de modo que una fija-
ción suave preservará gran parte de la actividad enzimá-
tica (v. «Técnicas histoquímicas»), mientras que una fi-
jación normal (4% paraformaldehído) puede inactivar
algunas enzimas pero conserva la mayoría de la antigeni-