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UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

Facultad de Ciencias de la Salud


Escuela Profesional de Medicina Humana
Cátedra de Fisiología Humana

GUÍA DE PRÁCTICAS
de
FISIOLOGIA HUMANA
Autores:
Docentes del Curso
Dr. Carlos Ramírez Velasco
Dra. Pedro Núñez Huamaní
Dr. Enrique Ávila Zamora
Dr. Edgar Zárate Sáez

2017-II

LIMA - PERÚ
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE FISIOLOGIA HUMANA
OBTENCION DE MUESTRAS BIOLOGICAS PARA EXPERIMENTACION EN
ANIMALES Y SERES HUMANOS.
MANEJO DE ANIMALES DE
EXPERIMENTACION.

Introducción
Definición de Bioseguridad:
Es el conjunto de normas preventivas para proteger la salud y brindar seguridad al personal que trabaja en
salud frente a los diferentes riesgos producidos por agentes: biológicos, físicos, químicos y mecánicos.

Agentes de riesgo o causantes de daño: agentes biológicos trasmitidos por ingesta, inhalación, inoculación,
y por contacto directo a través de piel y mucosas.

Agentes físicos y mecánicos: Temperaturas extremas, radiaciones ionizantes, contacto y conexiones


eléctricas, defectuosas, vidrios rotos.
Agentes químicos: corrosivos, tóxicos, carcinogénicos, inflamables, explosivos.

La Bioseguridad implica una acción de conjunto: Todos deben cumplir las normas de Bioseguridad: "El
descuido de una persona es el riesgo de todos"

Riesgo Biológico: es la probabilidad de infectarse con un agente patógeno (agente patógeno se llama a toda
aquella noxa que es capaz de producir una enfermedad en la actividad laboral.

Exposición: Es un contacto que implica riesgo con un patógeno capaz de trasmitirse por la vía donde se está
produciendo la exposición.

Propósito de la Bioseguridad:
Promover la salud de los trabajadores de salud mediante la vigilancia de las actividades de cada área de
trabajo en salud para prevenir las exposiciones a fluidos con riesgo biológico y vigilancia del cumplimiento
de las normas de bioseguridad. Además promover, sugerir y establecer políticas que apoyen la educación
continua de los trabajadores de salud.

Debe tenerse un suministro oportuno y continuo de insumos necesarios para la protección.


La disponibilidad de agua potable es primordial.
Disponibilidad de lavamanos cerca del área de atención de pacientes ó Laboratorio de trabajo.

PRACTICAS DE SEGURIDAD

Todo el personal que trabaja en el laboratorio fisiológico o ingresa a él debe seguir reglas de seguridad. Las
normas de seguridad son obligatorias y son esenciales no solamente para la acreditación académica, sino
porque consisten en prácticas que otorgan seguridad y protección al personal, alumnos e investigadores que
trabajan en los laboratorios bioquímicos, fisiológicos, bacteriológicos, biológicos, químicos, etc. Muy
especialmente en el campo médico donde trabajamos con muestras ó material biológico que es considerado
potencialmente patógeno ó patógeno. La máxima seguridad y protección es necesaria en estos casos

PRACTICAS GENERALES
Se prohíbe fumar, comer y aplicarse cosméticos, para evitar la diseminación de agentes infecciosos o
productos químicos tóxicos de las mallas hacia la boca. Con el fin de evitar el contacto con agentes
infecciosos o diseminarlos, debe utilizarse alguna prenda protectora sobre la ropa, como el guardapolvo,
mandil, ó la bata de laboratorio. Estas prendas de protección externa no deben usarse fuera del laboratorio.
Los zapatos han de ser de punta y talón cerrado. No es conveniente que las personas que trabajan en el
laboratorio usen lentes de contacto debido al desprendimiento de vapores y a las salpicaduras que pueden
producirse. Los lentes de contacto inhiben el lagrimeo y permiten que las sustancias permanezcan más
tiempo en la córnea.
Se recomienda el uso de lentes de protección o protectores para la cara a las personas que usan lentes de
contacto, en particular si hay alto riesgo de vapores, aerosoles o salpicaduras. La joyería de tipo colgante, el
cabello largo y barba son riesgosos, ya que es posible que entren en contacto con muestras u otras
superficies, o se enreden o queden atrapados en instrumentos con movimiento, como máquinas rotatorias o
centrifugas. Se prohibe estrictamente pipetear con la boca todo tipo de muestra, reactivo, agua o cualquier
otra sustancia biológica deberán usarse pipetas manuales automáticas.

DERRAMES . .
Es necesario desarrollar y tener políticas escritas y procedimientos para instruir a los alumnos y a los
empleados acerca de la manera de manejar derrames químicos y biológicos. Existen en el comercio estuches
con insumos para ambos tipos de derrames.. Si no existen tales normas en la institución el laboratorio debe
desarrollarlas con el fin de asegurar el ambiente de trabajo.

LAVADO DE MANOS
El lavado de manos es una de las principales maneras de evitar la diseminación de agentes infecciosos.
Aunque se utilicen guantes, el lavado de manos es necesario. Por que es posible que éstos tengan huecos
microscópicos. Al tratar con pacientes, es necesario lavarse las manos tras atender a cada uno de ellos
aunque se utilicen guantes.

LIMPIEZA
No debe permitirse que la basura, los desperdicios biológicos, infecciosos. y el material de vidrio sucio se
acumulen en grandes cantidades en el laboratorio. Los recipientes con muestras de desecho y agentes
etiológicos deben taparse cuando no se estén empleando. Es necesario limpiar con frecuencia las superficies
de trabajo con algún desinfectante al comenzar y terminar cada turno. El personal de laboratorio fisiológico
es responsable de mantener el área de trabajo limpia y sanitaria, aunque haya servicio de limpieza adicional
por parte de la institución.

ETIQUETAS Y SEÑALES
Todos los recipientes que contienen productos químicos deben etiquetarse con claridad, indicando el nombre
del producto y cualquier precaución para su manejo. Las áreas en que se almacenan productos inflamables,
peligrosos o tóxicos y carcinógenos, o en las cuales se utilizan deben estar marcadas claramente. Las áreas
en que se almacenan o analizan sangre o liquidos corporales deben estar marcadas claramente con el signo
de riesgo biológico.

DESECHO DE DESPERDICIOS
Existen normas de la OSHA con respecto al desecho de productos biológicos. El desecho de materiales
biológicos, como desperdicios infecciosos, se examina y regula en la actualidad por leyes específicas del
Ministerio de Salud Pública.
AGUJAS Y OBJETOS PUNTIAGUDOS.
Las agujas y otros objetos puntiagudos constituyen un riesgo físico de infección potencial para el personal
de laboratorio fisiológico. Todas las agujas desechables y demás objetos punzantes deben colocarse en un
reclpl9nte resistente a la perforación y a prueba de fugas, marcado con el símbolo de riesgo biológico.
Estos recipientes se descartan, siguiendo las políticas de la institución, cuando están llenos hasta la mitad o
las tres cuartas partes. La mayoría de las instituciones incineran los recipientes que contienen objetos
punzantes. Inmediatamente después de usada una aguja deberá incinerarse y para ello existen en la
actualidad equipos especiales incineradores de agujas llamados destructores de agujas. Nunca, deberá
reenfundarse ó volverse a colocar la cubierta de las agujas a menos que se utilice algún dispositivo como
pinzas diseñadas para este fin, para evitar la punción cutánea accidental. Las agujas nunca deben cortarse,
ya que esto puede provocar salpicaduras de sangre o de otros líquidos al medio.
SEGURIDAD CONTRA INCENDIOS
Tipos de Incendio
En el laboratorio Fisiológico u otros laboratorios biológicos se requieren líquidos inflamables y
combustibles para ciertos procedimientos, y en ellos también existe el riesgo potencial de incendios
eléctricos y de basura. El científico del laboratorio debe comprender estos peligros y la manera de afrontarlos
en caso de urgencia. Los incendios se clasifican de la clase A a la D.

Los incendios de clase A ocurren con combustibles ordinarios, como madera o papel; los de la clase B
ocurren con líquidos inflamables; en los de la clase C participan circuitos eléctricos energetizados, sin
importar el combustible; y los de la clase D, son producidos por metales combustibles como el sodio. Para
cada tipo de incendio se requiere un extinguidor diferente y adecuado con el fin de controlar de manera
eficiente el fuego y evitar que se éste se extienda.

Extintores ó Extinguidores para incendios. Clases.


Los extintores contra incendios contienen diferentes sustancias y están marcados según el tipo de incendio
para el que deben emplearse. Los extintores clase A están llenos de agua y nunca deben utilizarse para
incendios de tipo eléctrico. ya que el agua puede conducir la electricidad de regreso a la persona que tiene
el extintor en las manos. Los extintores clase B contienen productos químicos secos, espuma acuosa que
forma una capa (AFFF) o dióxido de carbono. Los extintores clase C están llenos de dióxido de carbono o
Halon; los de la clase D de un polvo seco especial que contiene un enlazante termoplástico que permite que
el agente forme una corteza sólida al calentarse. Hay extintores que pueden emplearse para Incendios de
clases A ,B y C. Contienen un polvo seco y pueden utilizarse con eficacia y seguridad para las tres clases
de incendios. Generalmente este tipo de extintores es el que se compra para uso en el hogar o en las oficinas.
Sin embargo, si se emplea para incendios de equipo eléctrico en el laboratorio, es probable que sea difícil o
imposible eliminar posteriormente dicho polvo de los instrumentos. Por tanto, se recomiendan los extintores
de dióxido de carbono para incendios de equipo eléctrico.
Causas de incendio y su Prevención
Las causas fundamentales de incendios en el laboratorio son descuido, falta de conocimiento acerca de los
productos químicos que se utilizan, permitir que se efectúen procedimientos sin.
la vigilancia adecuada, sobrecarga de circuitos eléctricos , llamas de gas abiertas. Es necesario impartir
periódicamente conferencias para instrucción sobre seguridad en el trabajo, con el fin de recordar a los
empleados la manera segura de proceder para evitar incendios y otros tipos de accidentes.
En caso de que se produzca un incendio es necesario ponerse en contacto con el departamento de
bomberos y solicitar ayuda antes de intentar extinguirlo, Se pierde tiempo importante cuando se trata de
apagar el incendio primero, y después se solicita ayuda. Los pasos que deben seguirse en caso de incendio
son:
1. Rescatar a cualquier persona que se encuentre en peligro.
2. Aislar el incendio cerrando alguna puerta.
3. Solicitar ayuda.
4. Intentar extinguido.
5. Evacuar las instalaciones en caso de que no se pueda apagar el fuego
Por supuesto, cuando hay varias personas presentes, estos pasos pueden llevarse a cabo de manera
simultánea y rápida en un esfuerzo conjunto. Es necesario adiestrar al personal de laboratorio en el uso de
los extintores contra incendios. En general, el departamento de incendios de la localidad o el comité de
seguridad de la institución proporciona este entrenamiento.

SEGURIDAD BIOLOGICA
Protección Personal
La dispersión epidémica del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) ha revivido la preocupación
acerca de las enfermedades que se transmiten por la sangre entre las personas que trabajan en el laboratorio.
Se sabe que las personas que laboran en los laboratorios médicos en general, fisiológicos, bacteriólogos,
biólogos y otros relacionados con la salud en general, conforman un grupo de alto riesgo para infecciones
por virus de hepatitis B relacionadas con el trabajo y virus de inmunodeficiencia humana (HIV). En 1987
el Centro de Enfermedades Transmisibles USA (CDC) y la OSHA publicaron recomendaciones para
proteger a las personas que trabajan al cuidado de la salud y a otras de adquirir la infección por HIV y se
actualizaron nuevamente en 1988. Entre las recomendaciones se aconseja que "se tomen precauciones
congruentes al manejar sangre y líquidos corporales de todos los pacientes y las muestras que se obtengan".
Esto se conoce como precauciones universales. Las recomendaciones incluyen el uso de equipo para
protección personal, como guardapolvos, mandiles, batas, guantes descartables y protectores para los ojos
al manipular sangre y líquidos corporales en el laboratorio. La revisión de los CDC en 1988 recomendó usar
equipo de protección personal para manejar todas las sustancias biológicas y animales. Deben tratarse todas
las secreciones y excreciones corporales como potencialmente infecciosas, ya que hay otras enfermedades
además de HBV y HIV que se transmiten a través de diversos líquidos del organismo humano y de los
animales.
En 1991 la OSHA publicó una regulación final la Occupational Exposure to Bloudborne Pathogens
(Exposición ocupacional a patógenos que se transmiten por la sangre). Esta regla indica que el patrón debe
proporcionar equipo de protección personal que no permita que los materiales potencialmente infecciosos
entren en contacto con la ropa. la piel, los ojos y la boca del trabajador en condiciones normales de uso. La
regla también indica la manera correcta de disponer de objetos punzantes y otros desperdicios con riesgo
biológico y señala la necesidad de administrar la vacuna de HBV y el tratamiento tras alguna exposición a
todos los empleados que corran este riesgo.
Además de describir equipo de protección personal, dicha norma incluye instrucciones para el lavado de
manos, transporte de muestras, uso de pipetas, forma de recoger derrames, desechos de desperdicios y
descontaminación del equipo.

Derrames
Es necesario que las personas que limpian algún derrame biológico utilicen guantes descartables y bata de
laboratorio. Se colocan toallas desechables sobre el derrame y se vacía desinfectante sobre ellas. Tras dejarlo
reposar algunos minutos. se recoge la sustancia y el desinfectante con material absorbente (los cojinetes
absorbentes son útiles para derrames grandes) A continuación se coloca el material contaminado en un
recipiente para riesgos biológicos: bolsas plástico grueso color rojo en el Perú y bolsa de color negro para
basura doméstica.
Después de absorber la mayor parte de material, el área se limpia con un desinfect8nte de fuerza intermedia
o alta, por ejemplo, dilución de Lejía 1:10. La solución desinfectante se absorbe con material desechable.
El área se enjuaga con agua y se seca para evitar que quede resbalosa. Es conveniente preparar un conjunto
de utensilios para limpiar derrames con riesgo biológico que contenga todos los materiales necesarios para
efectuar la limpieza de este tipo y tenerlo a la mano en el laboratorio en que se manejan dichas muestras.

SEGURIDAD QUIMICA

Hoja De Datos Sobre Seguridad De Materiales


En Agosto de .1987.)a OSHA enmendó la norma Federal Hazard Communication Standard
29CFR 1919: 1200 (Rigllt to Kriow/HCS Standard), haciéndola extensiva a todas las industrias, incluyendo
las instalaciones para el cuidado de la salud. Esta norma establece que los responsables de cada área
determinen si se utilizan productos químicos peligrosos en el trabajo y proporcionen a los empleados hojas
con datos de seguridad en el uso del material riesgoso y marquen adecuadamente los recipientes que
contienen el producto, indicando el riesgo, y se mantendrá una lista de productos químicos peligrosos, es
decir, un inventario de productos químicos, y proporcionen al empleado información y entrenamiento, y
desarrollen un programa de comunicación de riesgos por escrito.
Información que contiene la hoja de datos de seguridad para cada material ó grupo de sustancias
relacionadas, de uso en Laboratorio fisiológico y otros Laboratorios biológicos.

1. Identificación del producto químico (nombre químico, y sinónimo y/o nombre vulgar.)
2. Ingredientes peligrosos
3. Datos físicos
4. Datos de incendios y explosiones
5. Información de riesgos para la salud
6. Datos de reactividad
7. Procedimientos para derrames, fugas y desecho
8. Información de protección personal.
9. Precauciones especiales y comentarios

Manejo de Animales
La mejor manera para aprender a manejar correctamente los animales de laboratorio es la instrucción
práctica directa. Pueden enunciarse aquí algunos principios generales.
El personal de laboratorio puede recibir de casi todos los animales (conejos. cobayas. ratones)., pequeños
arañazos cuando el animal trata de escapar; pero raras veces intenta éste lesionar al operador. En el caso de
las ratas, las cosas cambian; pueden realizar muchos esfuerzos para escapar. y producir mordeduras
peligrosas, También los monos deben manejarse con cuidado. En cualquier caso, es indispensable que aun
los pequeños arañazos de animales se traten en forma adecuada; si el animal ha sido inyectado con material
patológico la naturaleza de dicho material puede obligar a tomar ciertas medidas para proteger al personal
contra las consecuencias de la mordedura. Por lo tanto, debe reportarse de inmediato, y tratarse médicamente
cualquier lesión, por pequeña que sea.

Toma de Muestras de Sangre


La muestra de sangre para las pruebas de laboratorio pueden tomarse en diferentes sitios: capilar o periférica,
venosa y ocasionalmente arterial. Esta muestra se utiliza para la valoración de diversos parámetros del medio
interno que puede llevarse a cabo en sangre completa o una fracción de la misma. sea plasma o suero. Si la
muestra sanguínea no se recoge con una técnica adecuada puede ocurrir que los exámenes proporcionen
información inexacta o incorrecta ó bien que la muestra se rechace y sea necesario repetir la punción. Deben
tomarse precauciones en todos los casos por lo que la obtención y manipulación de las muestras se harán
con guantes quirúrgicos descartables..

Sangre Capilar o Periférica


La sangre que suele llamarse capilares, al menos parte arteriolar se obtienen por o general de: a). La yema
del dedo; b). el borde del lóbulo de la oreja; y c). el talón en los niños pequeños En cualquier de estos sitios
el área debe de estar tibia (ni fría ni congestionada) ya que de otra manera la composición de la sangre varia
por la éxtasis o la dilución. Sin embargo debe recordarse que aun ejecutando una buena toma, los valores de
los parámetros difieren entre la sangre capilar y la venosa. Usar alcohol y lancetas descartables.

TECNICA
1. Limpie la piel con una torunda de algodón con alcohol de 70º o con otro desinfectante adecuado y
deje secar.
2. Haga una punción profunda (2- 3 mm con una lanceta o aguja estéril desechable. La punción debe
efectuarse de un golpe y rápidamente para que resulte casi indolora (sobre todo el borde del lóbulo
de la oreja).
3. La primera gota de sangre se elimina por que contiene desechos tisulares. La sangre no debe
exprimirse o se obtendrá una muestra diluida; peso sí puede hacerse presión a distancia del sitio de
la punción. Tras concluir la toma de la muestra se entrega al paciente una torunda limpia que debe
presionar sobre el sitio de lesión.

SANGRE VENOSA
Por lo general se utiliza una de las venas de las fosas ante cubitales, pero con frecuencia también se
puncionan las venas de las manos las muñecas o cualquier vena visible de buen calibre (en los pacientes
prematuros es posible punzar las venas del cuero cabelludo ó la yugular externa o la femoral) Las venas
deben examinarse cuidadosamente; si son profundas y no se palpan con facilidad se descartan. Para facilitar
el examen se usa un torniquete de jebe.

EQUIPO.
La muestras se toman previa desinfección con alcohol y con jeringas desechables con aguja de calibre 19 ó
20 x1 (cuanto más bajo es el numero mas es el grosor de la aguja, las de menor grosor pueden hemolizar la
muestra y las de mayor grosor se reservan para la obtención de sangre para transfusiones).

TECNICA
1. El paciente debe estar acostado o sentado cómodamente y con el brazo apoyado en una mesa o
soporte. Algunas pacientes – en especiales los jóvenes – pueden sufrir malestar o incluso
desmayarse. Por tanto manténgase alerta ante señales como palidez o piel fría.
2. Coloque el torniquete con un medio lazo para poder retirarlo fácilmente. No efectué demasiada
presión ya que puede detener la circulación arterial.
3. Pida al paciente que abra y cierre el puño un par veces para obtener mayor distensión de las venas.
Algunas veces las venas no se ven con claridad pero se palpan.
4. Una vez elegido el sitio de punción se procede a limpiar con alcohol y se deje secar. Enseguida se
fija la vena sosteniendo el brazo del paciente con la mano mientras se estiran y comprimen con el
pulgar y los tejidos blandos situados justo debajo del escogido para punzar. La jeringa se sujeta
entre el pulgar y los tres últimos dedos de la otra mano y sus dorsos se apoyan con el brazo del
paciente. El dedo índice se coloca sobre el casquillo de la aguja y sirve como guía. El bisel de la
aguja debe quedar hacia arriba.
5. Cuando la vena es prominente se punza en forma directa con la aguja colocada horizontal y dirigida
en paralelo a la vena. Al perforar la pared se percibe una sensación de crujido. Cuando el acceso a
la vena no es tan perceptible, la punción se efectúa en dos tiempos: primero se punza la piel y luego
la vena. Para que la sangre entre a la jeringa se hace una tracción ligera sobre el embolo evite
realizar una tracción excesiva porque la vena puede contraerse e impedir el paso de la sangre hacia
la jeringa. Algunas veces al puncionar se traspasa la vena; entonces debe retirarse ligeramente la
aguja al verificar la entrada de la sangre. Esta operación puede producir hematomas; si se advierte
señales de extravasación de sangre a los tejidos, retire la aguja de inmediato y aplique presión local.
6. Antes de retirar la aguja, quite el torniquete y pida al paciente que abra el puño. En cuanto se
adquiera la destreza necesaria, esta última operación se efectúa cuando la sangre termina de entrar
a la jeringa. El paciente debe mantener la presión con una torunda en el sitio de la punción y el
brazo flexionado durante unos minutos para evitar hematomas.
7. Tras la obtención de la sangre, se retira la aguja de la jeringa con una pinza de metal y con un
movimiento de torsión y con la ayuda de otra pinza se coloca el extremo del embolo sobre la pared
interna del tubo. Nunca realizar el reenfundamiento de la aguja sin pinzas. La sangre se vacía
suavemente para evitar que se forme espuma y produzca hemólisis. Si la determinación que se va
efectuar exige sangre completa o plasma la muestra se coloca con un tubo con anticoagulante y se
invierte con suavidad varias veces para mezclar. Si en cambio se desea obtener suero, la sangre se
coloca en tubo, de preferencia de 37 ª C para que el coágulo se forme más rápido. La retracción del
coágulo puede acelerarse separando de la pared del tubo con un aplicador de madera. Es imperativo
usar destructores de agujas en todos los casos.

USO DE VACUTAINER
En muchos laboratorios se utilizan actualmente los tubos Vacutainer para obtener las muestras de sangre
venosa, en lugar de las jeringas. Los tubos están sellados con un tapón de goma y extraen un volumen de
sangre predeterminado. La aguja desechable se enrosca en el tubo de manera que el tapón de goma alcancé
justo la línea guía. La aguja más corta se mete dentro del tapón de goma, pero no penetra y por lo tanto no
rompe el vació. Una vez que se tiene la certeza de que la aguja ha abordado la vena, se empuja el tubo hasta
el fondo del sujetador lo que rompe el vacío y la sangre entra al tubo. Cuando el flujo cesa, el tubo se retira
y si se desea puede sustituirse por el otro para obtener otra muestra .No debe usarse el Vacutainer para dosaje
de gases arteriales.

SANGRE ARTERIAL
Para la determinación de gases se requiere punción arterial. En esos casos la arteria se ubica localizado el
latido por palpación muy cuidadosa. La punción es necesariamente más profunda y se requiere mayor
cautela para impedir hematomas. Debe practicarla el médico.

ANTICOAGULANTES
Los cuatro anticoagulantes mas usados son una mezcla de oxalato amoniaco y potasio, citrato trisodico,
Sequestrene (EDTA) y heparina. Los tres primeros impiden la coagulación al sustraer el calcio del plasma
sanguíneo por precipitación o fijación en forma no ionizada, e inhibe la activación de los factores de la
coagulación.
El citrato trisodico se utiliza para impedir la coagulación de la sangre destinada a transfusiones. El
Sequestrene y la heparina pueden servir para el mismo fin, pero no la mezcla de oxalatos porque es toxica.
La mezcla de oxalato de amonio y (6partes) y oxalato potasio (4partes) en la cantidad de 2 mg/ml de sangre
no afecta el volumen globular medio y puede usarse para hemoglobina, hematocrito y recuentos globulares.
En frotis de sangre su utilidad esta limitada a los primeros minutos por que se desarrollan con rapidez formas
dentadas en los hematíes, vacuolización en el citoplasma de los granulocitos y artefactos en los núcleos de
linfocitos y monocitos y otras deformidades. Asimismo, la sangre tomada con esta mezcla de
anticoagulantes no puede emplearse para determinados químicas de nitrógeno ni potasio.

El citrato trisódico en solución acuosa al 3.8%, se mezcla a razón de 1/9 con sangre para investigaciones de
coagulación. El Sequestrene (EDTA) se emplea en una concentración de 1 a 2 mg/ml de sangre. La sal di
sódica o di potásica de Etilendiaminotetracetato es tal vez el anticoagulante que mas se emplea para el
recuento de las células sanguíneas. Hay que mezclarlo minuciosamente con la sangre. Para el estudio del
hematocrito es equiparable al oxalato y para estudios morfológicos lo supera, ya que impide la deformación
y artefactos incluso después de un reposo prolongado. Se consiguen frotis aceptables aun cuando hayan
pasado 2 o 3 hs y hasta 24 hs si la sangre se refrigera. También es posible realizar el recuento de plaquetas
aun después de unas pocas horas.
La heparina, a razón de 0.1 a 0,2 mg/ml de sangre, no afecta el tamaño corpuscular ni el hematocrito. Es el
mejor anticoagulante para prevenir la hemólisis y para las pruebas de fragilidad osmótica. No resulta
satisfactoria para recuentos de leucocitos o cuando han de prepararse frotis (o extensiones de sangre por que
en este segundo caso produce un fondo azul en las preparaciones teñidas con el colorante de Wright.

CUIDADO, INOCULACIÓN Y SANGRIA DE LOS ANIMALES y


DIAGNOSTICO DE SUS ENFERMEDADES
Fundamentos
1. Para determinadas investigaciones de laboratorio fisiológico es indispensable disponer de los
animales apropiados.
2. Los animales habrán de ser sanos y seleccionados con cuidado y estar instalados con limpieza y
comodidad, así como adecuada y suficientemente alimentados.
3. Pocos métodos de inyección y sangría producen mayor dolor que los similares empleados en los
seres humanos, y todos los métodos operatorios de importancia habrán de efectuarse con el
animal anestesiado. Por otra parte estos animales habrán de ser tratados con la solicitud que
merecen por los servicios que prestan a la humanidad .

ALOJAMIENTO DE LOS ANIMALES.


Las jaulas para los animales pequeños, como conejos, cobayos, ratones y ratas deben construirse y
disponerse de modo que los animales se conserven sanos y cómodos. Se evitara atestar las jaulas con lotes
demasiados numerosos. Convendrá disponer de jaulas separadas para los animales normales que no se
utilicen.
Los animales recién llegados al laboratorio deberán ser examinados cuidadosamente, a fin de comprobar
que no están enfermos, antes de colocarlos en las jaulas de los normales. Si se dispone de suficiente
espacio será conveniente guardarlos en aislamiento durante una semana a diez días.
Las jaulas se construirán de modo que permitan la limpieza y desinfección mas completas y posean
suficiente luz y ventilación, deben construirse expresamente para fines experimentales fisiológicos.
Debe disponerse de compartimientos, y jaulas de aislamiento para los animales inoculados y deberán estar
solos, en jaulas aparte, para protegerlos de las molestias o herida que entre ellos pudieren infligirse.
Los compartimientos de animales deben estar bien iluminados y ventilados .Se procurara conservar a una
temperatura uniforme, día y noche.
IDENTIFICACION DE LOS ANIMALES
Es conveniente adoptar un sistema seguro para la identificación de los animales .La practica de rotular las
jaulas sirve para la distinción de los lotes numerosos de animales aun cuando para conseguir un registro
completo conviene numera a cada animal y anotar los detalles relativos al sexo, descripción, etc.

Chapas.
Para los conejos y cobayos pueden emplearse unas pequeñas chapas de aluminio que se fijan a una oreja
de animal por medio de una grapa o un hilo metálico que perfore estos órganos y atraviese también los
orificios de las chapas.
Para los animales de mayor tamaño pueden adquirirse identificadores especiales ..Pueden obtenerse en las
casas de artículos veterinarios.

Descripción.
Cuando se use únicamente este método de identificación y haya que alojar juntos en una misma jaula varios
animales, deben seleccionarse los que presenten señales o colores diferentes .Para facilitar el registro debe
disponerse de sellos de goma con dibujos de ratón , cobayo o conejo. Este método se utiliza junto con el
de la chapa metálica a fin de asegurar la identificación si la chapa se perdiera. Asimismo, debe anotarse
cuidadosamente cualquier deformidad o seña particular .El sexo debe registrarse en la descripción (macho
y hembra).
Señales o marcas para identificación de animales
Los animales pequeños, como ratones y ratas, pueden marcarse en el cuerpo o en la cola pintándose la piel
y el pelo con colorantes (soluciones alcohólicas saturadas de fucsina o ácido picrico).Las jaulas habrán de
rotularse.

PREVENCION Y TRATAMIENTO DE LOS ACCIDENTES EN LOS


LABORATORIOS DE FISIOLOGIA
Las personas que trabajan en los laboratorios fisiológicos se hallan rodeadas de múltiples peligros, de modo
especial a causa de las infecciones que pueden contraer durante el manejo de los animales de
experimentación, ó durante el trabajo mismo con ellos como actos quirúrgicos, exposición de órganos, u
otros trabajos que así lo demanden los experimentos fisiológicos, ó al manipular productos sépticos durante
las investigaciones o sufrir quemaduras o la deglución accidental productos biológicos ó producirse a
heridas consecutivas rotura de cristales ,etc. A estos peligros están principalmente expuestos los
investigadores poco experimentados que los ignoran o se entretienen o distraen mientras trabajan con
animales de experimentación ó con productos infecciosos. ó con ácidos, álcalis, etc.

PREVENCION DE LOS ACCIDENTES


Deben emplearse siempre guantes de goma descartables en los experimentos, el investigador ha de tener
especial cuidado en no herirse los dedos con las agujas y evitar cortarse con los instrumentos afiliados, como
bisturís, sierras, etc. Deben usarse pipetas automáticas manuales de volúmenes regulables con punteras
descartables.
Las pipetas de vidrio, en caso de ser usadas, aunque no es recomendable hacerlo, habrán de tener la parte
bucal tapada con algodón de modo obligatorio y tendrán bulbos de goma para aspiración, y nunca aspirar
con la boca. Pueden utilizarse asimismo diversas jeringas. De igual modo, al aspirar ácidos, álcalis y otras
soluciones peligrosas por medio de pipetas, deben usarse pipetas con bulbos de goma de aspiración y nunca
hacerlo con la boca. Vale la redundancia, el alumno deberá tomar todas estas preocupaciones con el máximo
cuidado. Es de suma importancia preocuparse del trabajo sin conversar ni distraerse.
Las manos del operador habrán de estar libres de cortes y escoriaciones, particulares en la proximidad de
las uñas, debiendo lavarse cuidadosamente con jabón y agua y luego sumergirlas en una solución
desinfectante antes y después de haber manipulado productos infecciosos y antes de las comidas.
Una vez terminado el experimento deberá lavarse la superficie de las mesas con una solución desinfectante;
algunas veces es recomendable trabajar sobre una toalla humedecida en una de estas soluciones, como por
ejemplo lisol o tricresol al 2 por 100.
Las pipetas, tubos de ensayo y demás instrumentos empleados en la experimentación fisiológica también
se desinfectarán con una solución lisol o tricresol al 2 por 100, o se esterilizarán inmediatamente por
ebullición durante 20 minutos o autoclave que es lo ideal.

Los recipientes, láminas portaobjetos u otro material contaminado con orina ò heces ò secreciones biológicas
de los animales, ò contaminados con productos biológicos humanos, no se volverán a tocar por ningún
concepto sino que se someterán a un proceso de desinfección inmediata, como hemos indicado líneas más
arriba

Los calentadores y demás aparatos eléctricos se comprobarán con frecuencia para verificar la exactitud de
su funcionamiento, reparando sin pérdida de tiempo sus averías a fin de evitar cortos circuitos incendios
.El mechero de Bunsen no debe utilizarse nunca en la proximidad de materias inflamables .Siempre se
verificara que la llave de mechero quede bien cerrada antes de retirarse del Laboratorio , igualmente se
asegurará de cerrar la llave del balón contenedor del gas ó la llave general del gas del Laboratorio de ser el
caso. El éter, el alcohol y similares deben mantenerse alejados de todo posible contacto eléctrico. Es
obligación del servicio de mantenimiento realizar revisiones periódicas de mantenimiento preventivo.
FISIOLOGIA DE LA MEMBRANA SEMIPERMEABLE
FRAGILIDAD OSMÓTICA

Introducción
Todas las células del organismo están rodeadas de una membrana limitante, a través de la cual obtienen sus
alimentos y el oxígeno y excretan sus productos de deshecho y el C02 resultante de su metabolismo. La
membrana celular tiene propiedades bien establecidas: Solo deja entrar las sustancias que se necesitan y solo
deja salir las secreciones, los productos de desecho y las sustancias no indispensables, en otras palabras, es
semipermeable. Estas funciones las realiza a través de diversos mecanismos, que hemos revisado con detalle
en las clases teóricas. En la presente práctica trataremos de una de ellas que es la Osmosis. En general la
osmosis significa el paso de líquidos a través de una membrana semipermeable. Cuando dos soluciones de
diferentes concentraciones están separadas por una membrana semipermeable, el solvente y los solutos
atraviesan la membrana siguiendo las leyes que rigen el fenómeno de la ósmosis.
El agua es transportada a través de la membrana celular por una fuerza hidrostática llamada presión
osmótica, dicho de otro modo, la presión osmótica es la fuerza de atracción que ejercen las partículas sobre
el agua atrayéndola. La osmolaridad depende del número de partículas que se encuentran es solución. La
Unidades de Osmolaridad son el Osmol /Kg H2O , en medicina usamos el sub múltiplo mili Osmol /Kg H20
Un Osmol por Kg es la fuerza para atraer agua que ejerce un MOL de partículas que se encuentran en 1
Litro ó Kg de solución. Cada partícula (átomo) ejerce una presión osmótica independientemente; por
ejemplo un mol de glucosa disuelto en un Kg (litro ) de agua ejerce una presión osmótica de 1 Osmol /kg
agua; en cambio un mol de ClNa disuelto en un litro de agua ejercerá una presión Osmótica de dos Osmoles
debido a las dos partículas en que se disocia, una de sodio y otra de cloro. (Na+ y Cl- )
La capacidad de una partícula para producir un flujo de agua a través de la membrana celular se llama
tonicidad.
Una solución extracelular que permite que el agua fluya hacia dentro de la célula haciendo que ésta se
hinche se llama hipotónica (Hipo osmolar)
Una solución que permite que el agua fluya hacia fuera de la célula se llama hipertónica. (Hiper osmolar)
La membrana del glóbulo rojo nos servirá en la presente práctica para demostrar este fenómeno y asimismo
demostrar que la membrana tiene ciertos límites de resistencia normales a variaciones de la tonicidad en el
medio interno.
Aplicación clínica.
Existen algunas enfermedades en las cuales se producen alteraciones en la membrana que generan
hemólisis por mayor fragilidad de la membrana, son defectos genéticos heterogéneos que afectan a las
proteínas constitutivas de la membrana del eritrocito. La Enfermedad Esferocitosis es una de ellas, en la en
la cual se ha demostrado una disminución de la proteína membranal Espectrina del hematíe, y el grado de
déficit de la proteína Espectrina parece asociarse con la gravedad clínica de esta enfermedad, pues los
hematíes son muy frágiles y se hemolizan produciendo anemia intensa.

Fundamento
Se llama resistencia globular osmótica a la que presentan los hematíes suspendidos en soluciones salinas
hipotónicas. Si empleamos soluciones salinas de 0.76 a 0.9 % y suspendemos dentro de ellas los hematíes
veremos que éstos se conservan sin alteración durante varias horas, y que una vez sedimentados
(espontáneamente ó por centrifugan), el líquido que sobrenada es claro y transparente como la misma
solución salina. Pero si efectuamos suspensiones de hematíes en soluciones de cloruro sódico a
concentraciones progresivamente decrecientes observaremos que al llegar a una determinada concentración
empiezan a destruirse, liberándose la Hb, lo que confiere al líquido una ligera coloración rojiza que no
desaparece por centrifugación. Esto se le llama hemólisis inicial o resistencia mínima, que normalmente se
presenta entre las concentraciones de 0.46 y 0.42 %.Esta hemólisis de los hematíes va aumentando en
cantidad a medida que la solución de cloruro sódico va siendo más hipotónica hasta presentarse una
hemólisis total. Esta hemólisis total se observa entre las concentraciones de 0.34 a 0.30 %
Esta práctica sirve para determinar la resistencia de la membrana de los glóbulos rojos a la hemólisis en
presencia de diferentes concentraciones de soluciones salinas hipotónicas a temperatura ambiente y veremos
en cuál de ellas se presenta hemólisis inicial y total.
.
Reactivos y Equipos Necesarios
1. Solución salina al 0.9 %
2.-Pipetas graduadas: 1 ml al 0.01
10 ml al 0.1
5 ml al 0.1
3.- Micropipetas de 0.1 ml
4.- Fiola de 100 ml
6.- Muestra de sangre venosa desfibrinada ó hematíes lavados.
7.- Agua destilada
8.- Tubos de vidrio 13x 100 mm sin reborde

Método
1.- Preparar soluciones seriadas, en tubos de prueba marcados del 1 al 19, según la tabla adjunta, haciendo
las diluciones con agua destilada según lo indicado:

Marcar 19 tubos de prueba y repartir así:


Solución Agua
Mezclar El alumno calculará la Osmolaridad
N° NaCl Destilada % NaCl de la sol.
Por correspondiente a cada uno de los tubos
Tubo 1% ml resultante
inversión ( expresaren unidades mOsm/Kg H20)
Ml
1 1.0 9 Sí 0.10 %
2 2.0 8 Sí 0.20 %
3 2.5 7.5 Si 0.25 %
4 3.0 7.0 Si 0.30 %
5 3.5 6.5 Si 0.35 %
6 3.75 6.25 Si 0.375 %
7 4.0 6.0 Si 0.40 %
8 4.25 5.75 Si 0.425 %
9 4.50 5.5 Si 0.45 %
10 4.75 5.25 Si 0.475 %
11 5.0 5.0 Si 0.50 %
12 5.5 4.5 Si 0.55 %
13 6.0 4.0 Si 0.60 %
14 6.5 3.5 Si 0.70 %
15 7.0 3.0 Si 0.70 %
16 7.5 2.5 Si 0.75 %
17 8.0 2.0 Si 0.80 %
18 8.5 1.5 Si 0.85 %
19 ------ 10.0 --- 0 % Control de hemolisis total para comparación visual.
NOTA: EL NUMERO 19 ES CONTROL DE HEMOLISIS TOTAL (100% HEMOLISIS)

2.- Una vez hecha la distribución anterior, mezclar bien, por inversión cada uno de
los tubos. NO OLVIDAR ESTE PASO.
3.- Recién ahora, después de haber mezclado, añadir 0.1 ml de sangre venosa desfibrinada cada uno de los
tubos.
4.- Tapar los tubos y mezclar nuevamente por inversión suave.
5.- Dejar en reposo 10 minutos a temperatura ambiente y luego volver a mezclar
por inversión suave.
6.- Centrifugar a 2000 rpm. Durante 10 minutos.
Examinar por simple inspección visual en cual de los tubos se inicia la hemólisis (hemólisis leve),
generalmente a partir del tubo Nº 8, de 0.425 % NaCl (lo que se manifiesta por el color ligeramente rojizo
del líquido) y luego examinar en qué otro tubo la hemólisis es intensa (aproximadamente en 0.36 % NaCl
).
En el Tubo Nº 19 se producirá hemólisis total y corresponde al 100% de Hemólisis. (Destrucción total de
los hematíes y no deja nada de sedimento).

Valores Normales:

Hemólisis inicial (leve) (empieza Hemólisis): 0.44 % + -- 0.02


Hemólisis Total (Hemólisis completa): 0.32 % + -- 0.02

CAUSAS DE AUMENTO DE LA FRAGILIDAD OSMÓTICA GLOBULAR:


(Los hematíes son más frágiles que lo normal, tienen poca resistencia ante ligeras
hipotonías, y se hemolizan muy fácilmente)
-Anemia Hereditaria Esferocítica, en la Enfermedad Hemolítica
del recién nacido por incompatibilidad ABO
-Después de alguna injuria térmica (quemaduras)
-Anemias Hemolíticas sintomáticas en algunos casos de:
Linfoma Maligno, Leucemias, Cáncer, Cirrosis, etc.

CAUSAS DE DISMINUCIÓN DE LA FRAGILIDAD OSMÓTICA


(Los hematíes son mas resistentes que lo normal a la hipotonía):
En la primera Infancia, tempranamente en la infancia.
En algunas Anemias por deficiencia de Hierro
Talasemia mayor ( ó anemia de Cooley, ó anemia del Mediterráneo )
Anemia Drepanocitica ( Hoz, Sickle cell anemia)
Anemia Megaloblástica Nutricional
Post Esplenectomía y algunas hepatopatías con ictericia

FRAGILIDAD EN MEDIO ACIDO:


- En la Hemoglobinuria paroxística nocturna, que cursa con anemia
hemolítica, usualmente la fragilidad globular realizada en sol. salina
solamente, es NORMAL, PERO la fragilidad
globular realizada en MEDIO ÁCIDO( pH ácido) SÍ ESTA
AUMENTADA .

La FRAGILIDAD MECANICA está aumentada en la Ovalocitosis hereditaria (ó Eliptocitosis), en los


casos que evolucionan con anemia hemolítica.

Referencias Bibliográficas
S., Mellor Leslie ,J. Inwood, Linch R. Medical Laboratory Technology.W.B.Saunders Co.Phila.USA.
1996.
Clinical Diagnosis by Lab Methods. Todd. Stanford, W.B Saunders Co. Phila. USA. 2002
Hematology Physiologic Basis for Clinical Practice .Reich P.MD. Little Brown Co. Boston USA.2004.
Clinical Laboratory Diagnosis Levonson and Mac Fate.Lea Febiger. 1999.
Wintrobe Clinical Hematology Lea Febiger. 1998.
Diagnótico Hematológico .Laboratorio y Clínica. Ciscar y Farrera. Edit.Jims 1998.

INTERCAMBIO DE LÍQUIDOS ELECTROLITOS Y OTROS SOLUTOS A


TRAVÉS DE MEMBRANAS
Introducción
Existe un intercambio continuo de sustancias entre el medio ambiente y el organismo, a través de los
epitelios dérmicos, digestivos y respiratorios.
Dentro del mismo organismo existe un intercambio entre los espacios intracelulares y extracelular.
Algunas sustancias pueden atravesar la membrana celular por difusión pasiva .Otras requieren consumir
energía para moverse a través de las membranas contra sus gradientes de concentración .Estos fenómenos
de difusión pasiva y transporte activo permiten la creación de una composición orgánica diferenciada.
La piel del sapo no solamente separa al espacio extracelular del medio ambiente, sino que permite el pasaje
de muchas sustancias, incluyendo el agua, el sodio, el cloro y la glucosa. La dirección del intercambio
depende del tipo de transporte involucrado y de la gradiente de concentración de los solutos. Cuando cambia
la composición del líquido extracelular los riñones excretan las sustancias presentes en excesos o reabsorben
las necesarias para lograr preservar la homeostasis.

Material
17 sapos
Beakers
Agua destilada
Solución de NaCI 7.5%
Solución de dextrosa al 15 %
Balanza
Urinómetro
Tubos de ensayo
Pipetas de Pasteur
Goteros
Pinzas mosquito

Método
Experimento Nº 1: Preparación del animal
Durante la noche previa al experimento se debe mantener a los sapos en un ambiente húmedo para que estén
adecuadamente hidratados.
Antes de la pruebas se vacía la vejiga de todos los animales y se liga la cloaca para analizar la orina formada
en condiciones experimentales. Si se coloca un sapo en una solución de dextrosa y luego se encuentra
dextrosa en la orina, puede deducirse que fue absorbida a través de la piel hasta alcanzar una concentración
suficiente en liquido extracelular que obligase a los riñones a excretar el exceso en la orina. Los sapos son
colocados en soluciones de diferente tonicidad y se les inyecta distintas soluciones para producir cambios
en la composición de los líquidos corporales.
Los animales son pesados antes de realizar la prueba y después de haber vaciado sus vejigas. Los cambios
de agua corporal se determinaran pesando a los sapos antes y después de la exposición a distintas
condiciones experimentales.
Para cerrar la papila cloacal se la toma con las pinzas mosquito y se liga con firmeza, sin llegar a cortar la
piel , pero lo suficientemente fuerte para prevenir el escape de orina .Después de esto se pesa al sapo y se
registra su peso.
Experimento Nº2
Se inyecta a los sapos 4ml de una solución en el saco linfático dorsal. Esta solución puede ser hipotónica,
hipertónicas o isotónicas; de cloruro de sodio o dextrosa , también inyectaremos en algunos casos agua
destilada .Se vuelve a pesar para confirmar que todo el líquido inyectado se encuentre en el animal.
Se colocan 150 ml de líquido en un beaker de 250 ml y se pone al sapo dentro de él. El líquido debe cubrir
la mitad inferior del animal pero el punto de inyección debe permanecer por encima del nivel .Se tapa el
beaker Se pesa el sapo a intervalos de 30 minutos hasta por 8 horas. Se registra los cambios obtenidos:
Saco Linfático
Baño (Inyectar 4ml)
Baño Saco Peso del Glucosa Peso al final Glucosa pos
externo linfático sapo al basal del experimento
(inicial) experimento (final)
(inyectar inicio del
4 ml). experimento
1 NaCl Agua
0.68%
2 agua NaCl
0.68%
3 Dextrosa Agua
3.87%
4 Dextrosa Dextrosa
7.74% 3.87%

Experimento Nº 3
Después de 2 horas, se saca el sapo del beaker y se retira la ligadura de la cloaca .Se vacía comprimiendo
el abdomen y se recolecta la orina.
Se pesa nuevamente al sapo .La diferencia entre este peso y el obtenido inmediatamente antes de quitar la
ligadura es igual al peso de la orina recolectada. La diferencia entre el peso después de recolectar la orina
del animal y el peso inicial antes de sumergido equivale al peso ganado o perdido durante el experimento.
Se debe tomar en cuenta el peso después de inyectar los 4ml.de solución en los sacos dorsales .Se calcula el
porcentaje de variación de peso con respecto a la medida inicial y se registra la cantidad de orina formada
durante el experimento.

Experimento Nº 4: Análisis de glucosa en orina del sapo.


La glucosa se determinara en la orina del sapo mediante el método de la glucocinta (Urine Strip Winer
Lab).
Estimulación muscular
Introducción
Los tejidos neural y muscular tienen la propiedad de excitabilidad y responden a estímulos, es decir
variaciones del medio químicas o físicas, tales como alteraciones de la temperatura, deformación mecánica,
etc.
En los fenómenos estímulo respuesta, la respuesta depende de las características del estímulo y de las
condiciones del tejido estudiado. La descripción correcta de la relación entre estímulo y respuesta requiere
el control de la duración , intensidad y frecuencia del estímulo.
Las relaciones estimulo-respuesta se desarrollan en función al tiempo y al espacio.

Material
Sapos grandes Tabla de fijación para batracios
Alambre de cobre
Estimulador eléctrico Alambre de zinc
Equipo de disección
Método
Experimento N° 1
Se anestesia al sapo por destrucción del cerebro y la médula espinal.
Con unas tijeras se hace un ojal en la piel de la región anterior homóloga al tronco. Se continúa la incisión
de la piel en cinturón. Una vez completado el cinturón, se desprende la piel de un tirón hacia abajo. En la
región dorsal se debe tener cuidado por la adherencia de la piel al urostilo.
Se levanta el urostilo con la pinza de disección y se seccionan los elementos paravertebralmente y en
dirección cefálica, fracturando el proceso del iliaco paralelo al urostilo que se articula con el proceso
transverso de la novena vértebra. Inmediatamente se observan dos formaciones blancas que se introducen
por tres raíces más arriba en la columna vertebral. Estas estructuras son los nervios ciáticos. Por debajo se
observa la aorta dorsal con sus bifurcaciones.
Con las tijeras se secciona transversalmente el urostilo, evitando traccionar o lesionar los dos nervios
ciáticos.
Se pasa un hilo por debajo de cada uno de los nervios ciáticos y se realiza una ligadura lo más proximal
posible a la columna vertebral. En este momento se observa una reacción muscular.
Se secciona el nervio proximalmente a la médula, entre la columna vertebral y la ligadura. Con la ayuda
del hilo se puede efectuar la disección del nervio ciático, no siendo necesario manipularlo con ningún
instrumento.
Para poder liberar el nervio, es necesario cortar el músculo piriforme, después se lo aísla por disección roma
entre el semimembranoso por dentro y el bíceps por fuera. A todo lo largo del nervio se irá seccionando sus
colaterales y se lo aislará hasta la rodilla, comprobando que exista conexión funcional entre el nervio y el
músculo gastrocnemio. Una vez que el nervio ha sido aislado, se debe evitar que se seque humedeciéndolo
constantemente en solución fisiológica.

Experimento N° 2: Experimento de Galvani


Se fabrica un asa con alambre de cobre y alambre de zinc. Con el alambre de cobre se toca la piel del animal
y con el zinc el nervio.

Experimento N° 3
Se toma la pata del animal y se pasa un hilo por debajo de la aponeurosis plantar, amarrándola fuertemente.
La ligadura queda ubicada proximalmente y se realiza la disección de la aponeurosis, que en el sapo se
continúa hacia la pierna por el tendón de Aquiles que tiene un sesamoideo.
Se libera el tendón de Aquiles por disección roma y se separa el gastronemio hasta llegar a su inserción
superior. Con un golpe de tijera se secciona la tibia por debajo de la rodilla y el fémur un poco por encima
de esta. Se libera el fragmento de fémur del exceso del tejido muscular y se le hace una fuerte ligadura.
Con cuidado se coloca el electrodo sobre el nervio y se procede a estimular la preparación neuromuscular.
Con el estimulador eléctrico se realiza el estímulo de menor intensidad y se incrementa gradualmente hasta
obtener una contracción muscular este es el nivel de umbral que genera la respuesta de contracción. Con el
estímulo eléctrico de esta misma intensidad se continuara la estimulación durante todo el experimento
(estimulo superior al umbral).
Humedecer constantemente la preparación con un gotero.

Experimento N° 4: fenómeno de la escalera


Se realizan descargas simples para buscar el umbral de estimulación y después se disminuye el voltaje para
obtener el estímulo subliminal.
Luego de repetir la estimulación por un tiempo se observará que las contracciones son cada vez más amplias,
de mayor intensidad hasta alcanzar un valor máximo. Este incremento progresivo de la amplitud es lo que
se denomina el fenómeno de la escalera.

Experimento N° 5: tetania
Se realizaran estimulaciones intensas, muy rápidas y/o continuas y se obtendrá una serie de contracciones
sucesivas de modo que las estimulaciones no permitan que termine la sacudida anterior y continuaremos así
hasta obtener una contracción sostenida, permanente, intensa y que es lo que denominamos tetania.

Experimento N° 6: Relación longitud - tensión


Emplearemos la fuerza muscular que ejerce el musculo gastronemio cuando se anudan ambos extremos del
musculo antes disecado en una balanza con pesas graduadas en gramos. Un extremo del musculo será anuda
en la parte inferior del platillo de la balanza y el otro extremo se anudara en el brazo de la nuez del soporte
de fierro, estando el fiel de la balanza en cero se desplazara la nuez hacia debajo de modo que el musculo
no quede ni mu flojo ni muy tenso de tal forma que pueda responder al estímulo con una contracción. A
continuación se estimula para que el músculo se contraiga sin vencer ninguna resistencia (pesa deslizante
en cero) al obtenerse respuesta de contracción el fiel de la balanza se deslizara hacia arriba. Ahora
incrementamos gradualmente de dos en dos gramos y al mismo tiempo la longitud el musculo bajando la
nuez de la balanza y repetimos el estímulo y el fiel de la balanza volverá a moverse hacia arriba, llegara el
momento en que el estímulo a medida que aumentamos el peso y la longitud del musculo el fiel de la balanza
no se desplazara. Esta es la longitud a la cual corresponde la máxima tensión capaz de ser ejercida por el
musculo. El alumno realizara una gráfica que ilustre la relación longitud vs tensión.

Discusión:
Placa Mioneural
1. Introducción
La placa mioneural media la transmisión de la señal de la fibra nerviosa motora a la célula muscular. Salvo
en el caso de las fibras musculares intrafusales, existe una sola placa terminal por cada fibra muscular. A
medida que el axón del nervio se acerca a su fin emite varias ramas, cada una de las cuales inerva una fibra
muscular. Estás ramas terminales son de poco diámetro y carecen de mielina, por lo que la velocidad de
conducción en ellas es baja. La placa mioneural es una discontinuidad entre la células nerviosa y la muscular
donde la transmisión del impulso de despolarización queda a cargo de un mediador químico, la acetilcolina.

La terminal presináptica posee vesículas sinápticas, las cuales han sido sintetizadas en el soma neural, y
presenta canales de membrana de sodio y calcio dependientes del voltaje.

La generación del potencial de acción da lugar a la apertura de los canales de calcio y se incrementa la
concentración citosólica de calcio. Este incremento promueve la fusión de las vesículas sinápticas con la
membrana citoplasmática del rafe sináptico, liberando acetilcolina. La acetilcolina actúa sobre receptores
nicotínico presentes en el miocito y produce despolarización de la membrana celular muscular. Este
fenómeno es denominado potencial de la placa terminal.

Este potencial de acción excita a las miofibrillas para que se contraigan. Para el control de la actividad
muscular existe además una vía inhibitoria recurrente, es decir, un mecanismo de retroalimentación
negativa que mejora la resolución espacial de la acción neural. Esta vía inhibitoria provee un mecanismo
para evitar la contracción muscular persistente.

El axón de la motoneurona A sale de la sustancia gris a nivel de la medula espinal, pero emite antes una
rama colateral, la rama recurrente. Esta rama se desprende a partir del primer nódulo de Ranvier, permanece
dentro de la materia gris ventral y pasa medialmente y dorsalmente. Está rama forma sinapsis con
interneuronas que se encuentran en la región ventromedial del asta anterior y son denominadas células de
Renshaw. Sus axones se proyectan hacia las motoneuronas α, tanto hacia aquella en la cual se originó la
primera sinapsis desde el hasta dorsal, representada como la motoneurona A, y a sus vecinas, representadas
como motoneuronas B, terminan en sinapsis inhibitorias. La transmisión de este sistema inhibitorio está a
cargo de la glicina.

Nota: en la presente práctica emplearemos ya sea dextrotubocurarina o succinilcolina.

Material
Sapos grandes Succinilcolina
Miógrafo
Estimulador eléctrico Vecuronio
Equipo de disección Neostigmina
Tabla de fijación para batracios Atropina

Método
Experimento N° 1
Se l anestesia a un sapo por destrucción del encéfalo. Se diseca y se expone el nervio ciático en la cara
posterior de ambos muslos, evitando lesionar la arteria femoral que corre paralela al nervio.

En una de las extremidades, se separa el nervio de la arteria y se procede a ligar alrededor del músculo y de
la arteria, dejando libre al nervio.

Se aplica estímulos de baja intensidad a los nervios ciáticos y se va incrementando su intensidad hasta
obtener la contracción muscular.
Luego se estimula directamente al músculo gastrocnemio a través de una incisión hecha en la piel.

Experimento N° 2
Se administra 1 mL de succinilcolina en el saco linfático dorsal del sapo. Luego de unos minutos se procede
a estimular con el carrete de inducción ambos ciáticos.

Experimento N° 3
Se administra 1 mL de vecuronio en el saco linfático dorsal del sapo. Luego de unos minutos procede a
estimular con el carrete de inducción ambos ciáticos.

Experimento N° 4
Se administra 1 mL de solución de atropina y neostigmina en el saco linfático dorsal del sapo. Luego de
unos minutos se procede a estimular con el carrete de inducción ambos ciáticos.

Discusión
La succinilcolina es un bloqueador muscular despolarizante. Inicialmente simula el efecto de la acetilcolina,
produciendo apertura de los canales iónicos y despolarización persistente. Inicialmente puede producir
excitación, la que se manifiesta por fasciculaciones transitorias. Esta fase es seguida por el bloqueo de la
transmisión neuromuscular y parálisis flácida.

La estricnina actúa a nivel de la medula espinal, bloqueando la sinapsis inhibitoria de las células de Renshaw
sobre las motoneuronas α, en las que ejerce el rol de antagonista competitivo selectivo que bloquea los
efectos inhibitorios de la glicina.

La estricnina produce aumento de los impulsos nerviosos sucesivos, creando contracciones similares a las
tetánicas. Origina una contracción muscular sostenida de extensores y flexores y espasmo muscular
persistente.
PRÁCTICA DE SHOCK ESPINAL PARA ESTUDIAR LOS
REFLEJOS EN EL SAPO

Leyes Pfluger, Turck, Sumacion Espacial, Sumacion Temporal y efecto de la ablación medular.-
Material
Sapo
Beakers, estilete de acero,
Carrete de Runckford
Acido sulfúrico diluído 0.1 %; 0.2%; 0.3 %; 0.4%; 0.5 %; 1% sol. acuosas.
Suero fisiológico
Equipo de disección, guantes látex descartables
Sol.Ringer para batracio.

Método
Experimento N° 1: PREPARACIÓN DEL SAPO ESPINAL
Observar la postura, los movimientos espontáneos y respuesta a los diversos estímulos, movimientos
respiratorios, reflejos del salto, respuesta a la rotación y posición de espalda del sapo normal.
Se fija al animal con la mono izquierda y se determina lasa siguientes líneas: una línea transversal a nivel
del límite posterior de la membrana timpánica ( A-B), Una segunda línea entre el ojo y la membrana
timpánica (X-Z). Se toma una tijera y se introduce uno de sus extremos en la boca del animal y se lo
decapita con un solo golpe, procurando que en este momento el sapo se encuentre con el dorso hacia
abajo, a lo largo de la línea X-Z Realizar hemostasia por compresión y realizar las mismas observaciones
que en el sapo normal. Este es el sapo descerebrado. En este caso, el sapo puede realizar movimientos
complejos tales como saltar y si se coloca de espalda puede regresar a la posición normal.
En otro sapo hacer las observaciones del tono y la respuesta a la estimulación eléctrica y luego realice el
corte a lo largo de la línea A-B. Inmediatamente se observa el tono y la actitud postural del animal y se
efectúa el pinzamiento de uno de sus dedos. Se objetivará la depresión motora que constituye uno de los
componentes del shock espinal, ademasno se encuentra los resultados del sapo descerebrado.
Se espera unos minutos y se observa nuevamente el tono y la actitud postural del animal y se efectúa el
pinzamiento de uno de sus dedos. Se objetivará las respuestas motoras.

Experimento N° 2: leyes de Pfluger


Se pasa un hilo a través de un orificio hecho en el piso de la boca y se cuelga al sapo espinal de un estativo.
A continuación se efectúa una secuencia de estímulos graduados, los que producen respuestas determinadas:
a) Ley de UNILATERALIDAD.- Se pellizca suavemente un dedo y se produce contracción de la
misma pata solamente.
b) Ley de SIMETRÍA.- Se pellizca con mayor intensidad el dedo y se produce contracción de la
misma pata y de la pata opuesta.
c) Ley de IRRADIACIÓN.- Se pellizca fuertemente un dedo y se produce contracción de la misma
pata, de la pata opuesta y finalmente de las extremidades anteriores.
d) Ley de GENERALIZACIÓN.- Se pellizca muy fuertemente un dedo y el animal se contrae y se
mueve enérgicamente.

Experimento N° 3: experiencia de Turck


Se emplea la preparación de sapo espinal. Se la cuelga de un estativo y se espera que esté en reposo.
Se prepara varios beakers con concentraciones crecientes de ÁCIDO SULFÚRICO desde 0.1, 0.2, 0.3, 0.4,
0.5 y 1%. Se sumerge la pata del animal en cada una de las distintas soluciones, empezando por la de menor
concentración; se espera y se registra el tiempo necesario para la respuesta. Una vez que se haya producido
la respuesta, se lava la pata del animal en suero fisiológico antes de pasar a la solución siguiente.
Se observa y se registra las características y tipo de respuesta en cada caso.
Experimento N° 4: sumación temporal
Se sumerge la pata del animal en una solución de ácido sulfúrico al 0.1% varias veces. Se observa el
incremento progresivo de la respuesta.

Experimento N° 5: sumación espacial


Se sumerge en una solución de ácido sulfúrico al 0.1% primero la punta del dedo, luego el dedo completo,
la pata y la rodilla. Se observa la mayor intensidad de las respuestas.

Experimento N° 6
Se introduce un estilete dentro del canal vertebral y se destruye la médula. Después se repite las mismas
estimulaciones hechas previamente.-
REFLEJOS OSTEOTENDINOSOS EN EL HOMBRE
Introducción
Los mecanismos reflejos están constituidos por un órgano receptor, un órgano efector y una red de
comunicaciones entre ambos. La acción refleja se inicia por un estímulo de entrada y tiene como resultado
una respuesta de salida. La acción refleja abarca el reflejo axónico sencillo hasta los reflejos complejos en
los que existe intervención cerebral.

El sistema nervioso comprende un gran número de arcos reflejos. Cualquier estímulo produce una respuesta.
El estímulo puede originarse en los órganos internos y afectar la parte visceral del sistema nervioso. El
sistema puede originarse en el exterior y afectar la parte somática del sistema nervioso. Un mismo arco
reflejo puede afectar tanto partes viscerales como somáticas.

Los reflejos viscerales no suelen alcanzar la conciencia, mientras que los reflejos somáticos pueden ser
percibidos concientemente. Muchos reflejos pueden considerarse como parte de un programa, puesto que la
respuesta adecuada parece estar prevista dentro del sistema nervioso.

Los reflejos espinales, que requieren transmisión del estímulo desde la periferia hasta la médula y de allí
regresar al órgano efector, son de este tipo. Los reflejos espinales no requieren de intervención del sistema
nervioso central y funcionan igualmente bien en un animal cuya médula se ha seccionado por encima de la
localización de las neuronas de los nervios correspondientes.

Las inserciones tendinosas de los músculos poseen receptores sensitivos especiales que responden a ala
distensión y envían la información al sistema nervioso central sobre la posición de un músculo o de un
miembro. Cuando estos receptores tendinosos son estimulados por una distensión rápida y brusca, mandan
impulsos a la médula espinal y, a través de una sinapsis a la motoneurona anterior que inerva el músculo.
Esta neurona manda impulsos al músculo y produce una sacudida rápida.

La respuesta de los reflejos espinales puede incrementarse elevando el nivel de excitación de la médula
espinal. Esta facilitación puede conseguirse haciendo que el sujeto enganche sus manos y tire con fuerza.

Material
Sujeto de prueba Martillo de reflejos

Método
Experimento N° 1: reflejo rotuliano
Se sienta al sujeto en una posición cómoda y cruza las piernas. La pierna superior debe estar relajada. Por
palpación, se localiza el tendón rotuliano y se da un golpe seco con el martillo de reflejos. La respuesta
adecuada es la contracción del cuadriceps, lo que produce extensión de la pierna.

Experimento N° 2: reflejo aquiliano


El sujeto se pone de rodillas sobre una silla y deja colgar fuera los pies sin contracción de los músculos de
las pantorrillas. Se busca el tendón de Aquiles y se estimula. La respuesta apropiada es la contracción de los
músculos gemelos y del sóleo, lo que produce extensión del pie.

Experimento N° 3: reflejo bicipital


El sujeto flexiona su antebrazo sobre el brazo, mientras el examinador soporta el antebrazo. Se busca el
tendón del bíceps con el pulgar de la mano que sostiene el antebrazo, se deja el pulgar sobre el tendón y se
da un golpe sobre el pulgar. la respuesta apropiada es la contracción del bíceps, lo que produce flexión del
antebrazo.
Experimento N° 4: reflejo tricipital
El sujeto flexiona su antebrazo sobre el brazo, mientras el examinador soporta el antebrazo. Se palpa el
tendón del tríceps, inmediatamente por encima de su inserción en el codo, y se golpea el tendón con el
martillo. La respuesta apropiada es la contracción del tríceps, lo que produce extensión del pie.

Experimento N° 5: reflejos radial y cubital


Se golpea los tendones insertados sobre los extremos inferiores de ambos huesos, por encima de la muñeca.
El examinador sostiene el brazo del sujeto. La respuesta adecuada para el reflejo cubital es la pronación de
la mano y para el reflejo radial la flexión del antebrazo.

Discusión
EVALUACIÓN DE LA PERCEPCIÓN SENSORIAL Y SENSACIONES
NOCICEPTIVAS: EVALUACION DEL UMBRAL DEL DOLOR.

Introducción
La estimulación de un receptor táctil de la piel es transmitida por la vía del asta posterior (sensitiva) hasta
la corteza somestésica. En esta la excitación del receptor activa un determinado número de neuronas que
constituye su campo cortical. Sin embargo, no todas las neuronas de este campo se estimulan en la misma
magnitud, sino que las que corresponden al centro del campo descargan de forma máxima y las de la periferia
en menor magnitud. Este contraste es el que permite localizar el punto exacto de estimulación.

Las capacidades táctiles se determinan en muchas ocasiones por la posibilidad de discriminar dos puntos de
estimulación sobre la piel.

Las diferencias en las capacidades de discriminación en las diferentes zonas del cuerpo se deben al número
de receptores que exista en esa zona y a la representación cortical que éstos poseen. Los dedos están
profusamente poblados de receptores y el área de corteza a que llega la información proveniente de ellos es
amplia, de ahí su mayor posibilidad de discriminación. Otras zonas del cuerpo tienen menor densidad de
receptores siendo éste uno de los factores que conlleva a que la información que llega al área de la corteza
sea reducida y, por lo tanto, sea menor su posibilidad de discriminación.

Cuando se estimulan dos puntos cercanos de la piel, cada uno excitará de forma máxima al centro de su
campo cortical; pero como los campos se superponen parcialmente, la resultante será una excitación mayor,
aunque se mantienen los máximos de excitación separados.

El ser humano puede percibir diferentes grados de calor y frío, que pasan del frío glacial, al frío, al fresco,
a la temperatura indiferente, a lo tibio, caliente y quemante.

Objetivos
1. Discriminar procesos y modalidades de percepción sensorial en el ser humano de tal manera que
pueda sistematizarlos.
2. Comprobar la distribución anatómica de los receptores cutáneos y la importancia fisiológica de
dicha distribución.
3. Comprobar la influencia de las bajas temperaturas en la sensibilidad.
4. Comprender los mecanismos que explican dichas funciones, estas observaciones deberán ser
correlacionadas con sus conocimientos neuroanatómicos y neurofisiológicos.

EXPERIMENTO 1: IDENTIFICACIÓN DE CAMPO RECEPTIVO SENSORIAL

Materiales
- Sello especial
- Hoja de papel
- Pelo de cerda (pelo de Von Frey)
- Sujeto experimental (alumno 1)
- Sujeto experimentador (alumno 2)

Procedimiento
1. Por medio de un sello especial marcar un área en la piel de un compañero: cara, dorso del cuello,
antebrazo, dorso de la mano.

2. Sellar en una hoja de papel un área similar y proporcional

3. Luego el sujeto experimental deberá cerrar los ojos y se le aplica por medio de un instrumento
sensibilizador llamado pelo de Von Frey, una ligera presión en cada uno de los cuadrantes del área
delimitada por el sello.

4. El sujeto experimental deberá reportar las modalidades de sensaciones que percibe en la piel de
cada cuadrante (tacto, dolor, temperatura, otros).

5. Marcar con notación diferente, en un esquema, los puntos correspondientes.

6. Anotar cuantos puntos diferentes hay para cada una de las sensaciones investigadas.

Resultados

EXPERIMENTO 2: DISCRIMINACIÓN DE DOS PUNTOS

Materiales
- Compás de doble punto.
- Regla.
- Sujeto experimental (alumno 1).
- Sujeto experimentador (alumno 2).

Procedimientos
Para la realización de estos experimentos los estudiantes se dividirán por parejas, actuando cada uno como
sujeto experimental y como experimentador.
1. Indique a su compañero que cierre los ojos y se concentre en las sensaciones que va a percibir.
2. Aplique los dos extremos del compás de forma tal que lleguen simultáneamente al área de piel
estimulada. Se deberá estimular las siguientes zonas: Yema de los dedos, antebrazo, cara y nuca.
3. En cada paso la separación de las puntas del compás se aplicarán de forma tal que la diferencia
entre ellas sea diferente y, alternante, manteniéndose constante para cada zona corporal esto es 0.5,
1, 1.5, 2, 2.5 y 3 cm.
4. Durante la aplicación de las agujas, pregunte al compañero cuantos puntos discrimina y anote su
respuesta.
5. Analice el comportamiento de los receptores.

Resultados
Area de la Piel Distancia de separación de las puntas del compás ( cm )
Estimulada 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
Yema de los dedos
Antebrazo
Cara
Dorso del Cuello
Dorso de mano
SENSACIONES NOCICEPTIVAS: EVALUACIÓN
DEL UMBRAL DEL DOLOR

Introducción
El dolor es un mecanismo de protección y por tanto puede definirse como una respuesta de defensa corporal,
el cual aparece siempre que un tejido está siendo lesionado y obliga al individuo a reaccionar para suprimir
el estímulo nocivo.
Si colocamos inadvertidamente el brazo sobre una plancha caliente sentimos dolor e inmediatamente
retiramos el brazo para evitar un mayor daño tisular.
La respuesta al dolor puede expresarse en términos conductuales, tales como el retiro de la fuente del
estímulo o la fuga; puede haber una respuesta verbal, como el quejido y la expresión del dolor; y puede
haber una respuesta fisiológica como cambios en la presión sanguínea, sudoración y taquicardia.
El dolor es una respuesta sensorial medible, su magnitud varía con la intensidad del estímulo. Todo ser
viviente presenta una tolerancia al dolor hasta determinado nivel, denominado umbral, en que el dolor es
insoportable. El dolor puede también ser socialmente determinado, se dice que hay grupos étnicos más
sensibles al dolor que otro, y el sexo femenino es más resistente al dolor que el sexo masculino.
El dolor se ha clasificado en dos tipos fundamentales: 1) Dolor Rápido, que aparece en menos de una
décima de segundo, no se percibe en los tejidos más profundos del cuerpo, se transmite a través de fibras de
tipo A y la señal dolorosa llega al sistema nervioso central vía el haz neoespinotalámico. 2) Dolor Lento,
aparece después de un segundo o más y aumenta lentamente en el curso de varios segundos o minutos, suele
ir acompañado de destrucción tisular, se percibe en la piel como en cualquier órgano o tejido profundo, se
transmite a través de fibras tipo C y las señales dolorosas llegan al sistema nervioso central vía el haz
palioespinotalámico.
El dolor como todo tipo de sensibilidad tiene receptores y vías neurales específicas.
Los receptores para el dolor son terminaciones libres y se diferencian por el tipo de estímulo al cual
responden y básicamente son de tres clases:
1) Los mecanociceptores responden a estímulos mecánicos muy intensos de la piel como apretar,
pellizcar, pinchar, etc. También pueden responder a estímulos térmicos repetitivos, entre 45° y
55°C.
2) Los termociceptores responden a bajas temperaturas, menos de 10°C, y altas temperaturas, por
encima de 42-45°C, y asimismo responden a estímulos mecánicos intensos.
3) Los nociceptores polimodales responden a estímulos dolorosos mecánicos, térmicos y químicos.

El estímulo doloroso (E) actúa sobre un terminal nervioso que lleva su axón hacia la neurona sensorial
primaria (1) en las astas posteriores de la médula espinal. El mediador excitatorio de esta información
dolorosa es la sustancia P, aunque también pueden participar otras sustancias como el ácido glutámico, la
somatostatina y el polipéptido intestinal vasoactivo (VIP).

Los axones de las segundas neuronas del sistema de transmisión del dolor (2) ascienden en dos tractos
diferenciables tanto anatómica como funcionalmente; el tracto Páleo-espino-talámico con proyecciones
amplias y difusas; y el tracto Neo-espino-talámico con proyecciones menores y circunscritas. La vía
neuronal del neo-espino-talámico es responsable de la localización certera en la superficie corporal de los
dolores agudos, siendo pequeño el número de las fibras que la componen. Los axones del Páleo-espino-
talámico se enlazan sinápticamente con neuronas del tronco encefálico en especial con la información
reticular tegmental y los cuadrigéminos (Tracto espino-tectal), mientras que otras de sus fibras alcanzan
directamente a los núcleos talámicos intramamilares. Hasta este nivel no hay participación de la corteza
cerebral en las sensaciones del dolor.
En el tálamo existen neuronas que vienen a denominarse de tercer orden (3) que provienen de los núcleos
intramamilares del tálamo y que se proyectan enviando sus axones al frontal superior de la corteza cerebral.
Igualmente existen neuronas de tercer orden en el núcleo ventro-basal y grupo posterior del tálamo que
proyectan sus axones al parietal posterior en la corteza cerebral. Es aquí, donde ocurre la modulación del
dolor, y donde socioculturalmente puede variar la expresión del dolor
EXPERIMENTO N° 1: SENSACIONES TÉRMICAS Y UMBRAL DEL DOLOR
Materiales: Hervidor eléctrico con agua ,termómetro y gotero.
Procedimiento
1. Introducir el termómetro en el hervidor eléctrico y registrar la temperatura del agua.
2. Aumentar la temperatura del agua, conectando el hervidor en el suministro eléctrico.
3. Cada minuto registrar la temperatura del agua y cargar el gotero y dejar caer unas dos o tres gotas
en el dorso de la mano hasta que el sujeto de experimentación perciba un cambio en la temperatura
del agua en relacion a la temperatura inicial del primer minuto.
4. Continuar con el paso tres hasta el momento en que al dejar caer una gota en la palma de la mano
sienta dolor. 5.- Construir una curva tiempo vs. Temperatura y determine el umbral del dolor.
Resultados
TIEMPO (MIN) TEMPERATURA °C DOLOR

EXPERIMENTO N° 2: ISQUEMIA LOCAL Y DOLOR

Materiales
- Tensiómetro.
- Cronómetro.
- Sujeto Experimental (alumno 1).
- Sujeto Experimentador (alumno 2).

Procedimiento
1. El sujeto de experimentación deberá sentarse cómodamente, colocando el brazo sobre la mesa de
modo que quede a nivel del corazón.
2. Coloque el manguito del esfigmomanómetro, completamente desinflado, alrededor del brazo de
manera que su borde inferior quede 2-4 cm sobre el pliegue del codo.
3. Aumentar la presión del sistema, con la pera insufladora, hasta alcanzar una presión de 200 mm
Hg.
4. Solicitar al sujeto de experimentación que abra y cierre rítmicamente ambas manos.
5. Registrar el tiempo en que el sujeto empieza a reportar que siente dolor y el momento en que el
dolor se torna insoportable.
6. Disminuir rápidamente la presión del sistema, abriendo la válvula de la pera insufladora.
7. Monitorear el tiempo en que desaparece el dolor.
8. Realizar el experimento tanto en la mano derecha como en la mano izquierda.

Resultados
BRAZO
Derecho Izquierdo
Inicia el dolor
Dolor insoportable
Desaparece el dolor

UMBRAL DEL DOLOR


DOLOR TIEMPO (MIN) TEMPERATURA (°C)
Insoportable

ISQUEMA LOCAL Y DOLOR


BRAZO
Derecho Izquierdo
Inicia el dolor
Dolor insoportable
Desaparece el dolor
PRUEBAS CEREBELOSAS

Marco Teórico.

Anatomía.

Rol Fisiológico.

Evaluación de la Fisiología Cerebelosa.

Síntomas y Signos de la alteración Cerebelosa.


FUNCIÓN DEL CEREBELO

 la principal función del cerebelo es la coordinación del movimiento, es


decir, permitir que el movimiento se realice con facilidad y precisión.

 los núcleos profundos tienen una actividad continua en situación basal, y


tienen conexiones excitadoras con el origen de las vías motoras (corteza motora
a través del tálamo, núcleo rojo, núcleos vestibulares y formación reticular, que
son el origen respectivamente de las vías motoras corticoespinal, rubroespinal,
vestibuloespinales y reticuloespinales). así, los núcleos del cerebelo mantienen
una activación tónica de las vías motoras que facilita la realización del
movimiento.

 Las células de Purkinje inhiben a los núcleos profundos, con lo que pueden
inhibir unos componentes del movimiento y otros no, y así DAR FORMA AL
MOVIMIENTO.

 EL CEREBELO REGULA EL TONO MUSCULAR, modificando la


actividad de las motoneuronas gamma, de manera QUE AUMENTA EL TONO
PARA MANTENER LA POSTURA, O LO INHIBE PARA FACILITAR LA
REALIZACIÓN DE LOS MOVIMIENTOS VOLUNTARIOS.
 También contribuye a la COORDINACIÓN DE LOS MOVIMIENTOS
POLIARTICULARES. Las fibras paralelas recorren una larga distancia en la
corteza del cerebelo, y en su recorrido pueden actuar sobre células de Purkinje
correspondientes a VARIAS ARTICULACIONES, COORDINANDO SU
ACTIVIDAD.

 EL CEREBELO PARTICIPA EN EL APRENDIZAJE DE LOS


MOVIMIENTOS. MIENTRAS SE ESTÁ APRENDIENDO UN
MOVIMIENTO NUEVO SE PRODUCEN FRECUENTES ESPIGAS
complejas en las células de Purkinje. Esto produce depresión a largo plazo, por
lo que una vez que el movimiento se ha aprendido disminuye la frecuencia de las
espigas simples. Puesto que las células de Purkinje inhiben a los núcleos
profundos, la disminución de las espigas simples produce una mayor actividad
de los núcleos profundos y de las vías motoras.

REGIONES FUNCIONALES DE CEREBELO

El cerebelo se divide en tres regiones funcionales. La estructura microscópica es


semejante en las tres, por lo que las diferencias entre ellas se deben a que tienen distintas
conexiones aferentes y eferentes, y realizan el mismo tipo de procesamiento pero con
distinta información.

Vestibulocerebelo

 El vestíbulocerebelo corresponde anatómicamente con el nódulo-flóculo.

 Colabora con los núcleos vestibulares en las funciones de mantenimiento


del equilibrio y de ajuste del reflejo vestibuloocular.

 Las lesiones del vestibulocerebelo en un lado producen síntomas parecidos


a las lesiones de los núcleos vestibulares en el lado cotralateral. La razón de esto
es que, puesto que la corteza del vestibulocerebelo inhibe a los núcleos
vestibulares ipsolaterales, la lesión del vestibulocerebelo produce hiperactividad
vestibular ipsoateral, que equivale a una lesión de los núcleos vestibulares
contralaterales.

Espinocerebelo.

 Incluye al vermis cerebeloso y la zona intermedia de los hemisferios


cerebelosos. El vermis junto con el núcleo fastigio se asocia a los movimientos
axiales (del tronco y raíz de los miembros) y la zona intermedia de los
hemisferios cerebelosos se asocia a los movimientos la parte distal de las
extremidades. Por5 eso las lesiones del ,los hemisferios cerebelosos se asocian
con alteraciones de los movimientos de las extremidades partes distales. Y las
lesiones de la línea media (VERMIS) producen inestabilidad en la marcha. Por
eso debe ampliar la base de sustentación.

 El espinocerebelo se encarga de controlar la ejecución de los movimientos.


Recibe información por las vías espinocerebelosas de cómo se están realizando
los movimientos, y si detecta que el movimiento comienza a apartarse del
objetivo deseado, envía señales correctoras. El núcleo fastigio envía las señales
correctoras al origen de las vías que controlan los movimientos axiales, que son
la vestibuloespinal y reticuloespinal, y el núcleo interpuesto envía señales
correctoras al origen de las vías que controlan los movimientos distales, que son
la vía corticoespinal lateral y rubroespinal.

 El espinocerebelo coordina la actividad de músculos agonistas y


antagonistas durante los movimientos. Regula la relajación del antagonista
durante realización del movimiento, y también la contracción del antagonista al
final del movimiento para frenarlo cuando llega al objetivo. Cuando se altera
produce el temblor intencional( no puede ensartar la aguja con un hilo).

 Cuando se altera la parte lateral (hemisferio neocerebeloso se produce la ataxia,


disimetría, disdiadococinesia (juego sucesivo de palma- dorso de las manos muy
dificultoso) .

Cerebrocerebelo.

 Comprende la parte lateral de los hemisferios cerebelosos y el núcleo


dentado.

 Participa en la preparación del movimiento. Recibe información de la


corteza, a través de los núcleos del puente, sobre el movimiento que se desea
realizar, elabora el plan motor (determina qué músculos hay que contraer, y en
qué secuencia, para realizar ese movimiento) y envía ese plan motor a la corteza
motora, a través del tálamo, para que se ejecute.:Cuando se retrasa esta acción de
descompone el movimiento en sus partes ( movimientos roboticos)

 El cerebrocerebelo es necesario para el aprendizaje de movimientos


complejos (p. ej. aprender a tocar el piano).

 El cerebrocerebelo también interviene en funciones cognitivas no


relacionadas directamente con el movimiento.
Para evaluar la FUNCIÓN CEREBELOSA se estudia la Taxia es decir se explora la
Taxia durante la ejecución de los movimientos ( Taxia dinámica) ó se evalúan en la
posición de reposo( Taxia estática).

Evaluación de la Taxia DINÁMICA: Se examina por medio de pruebas que consisten


en establecer una meta u objetivo a los movimientos de la persona. Si estas pruebas se
alteran se dice que existe ataxia dinámica, por ejemplo tenemos:

La Prueba del talón rodilla para miembros inferiores: estando la persona echada tocará
con el talón de un pié la rodilla del la otra pierna, lo debe hacer en forma precisa, exacta,
enseguida se le pide que descienda el talón bordeando la tibia de la pierna opuesta y no
debe zigzaguea hasta llegar al dedo gordo del otro pié. Si tiembla, duda ó zigzaguea el
talón , es anormal.

Para Miembros superiores: Prueba de Indice-Nariz ó de índice- oreja .

Con los dedos de la mano contraídos se le pide que con el índice extendido se toque la
punta de la nariz y luego el lóbulo de la oreja con los ojos abiertos y luego cerrados.
Debe hacerlo en forma precisa sin oscilaciones irregulares o bruscas y sin exceder la
distancia.

También índice del mismo paciente o con el del examinador.

Para el Tronco: Se invita a la persona a efectuar cambios de postura: incorporarse,


sentarse o caminar: En caso de ataxia dinámica se producirán movimientos oscilantes del
tronco.

Evaluación ce la TAXIA ESTATICA: Signo de ROMBERG:

La investigaremos con un voluntario de pié, con los pies juntos y las palmas de las
manos adosadas al cuerpo(en actitud de “firme”).

Se observará si la persona mantiene la postura erecta o si, por el contrario aparecen


oscilaciones y la persona busca apoyo para no caerse. Luego le pediremos que cierre los
ojos: si la persona oscila mucho y tiende a caer decimos que es ROMBERG POSITIVO
(anormal). Debemos permanecer cerca de la persona examinada o para sostenerlo en
caso de caída.

A veces esta maniobra no es suficiente para detectar el signo de Romberg y y entonces


se buscará lo que se denomina ROMBERG Sensibilizado que consiste en poner de pié a
la persona con un pié delante del otro , o sobre un solo pié ; o bien “haciendo un
cuatro” ( el paciente levanta un pié hasta la altura de la rodilla, con los ojos cerrados. Si
existe Romberg positivo aparecerán oscilaciones y tendencia a la caída.

Significado Fisiológico: Este signo revela un trastorno del sistema propioceptivo, un


déficit en las vías de conducción aferentes de la sensibilidad profunda o laberíntica
corregido por la visión. Por ello se pone de manifiesto cuando se le pide cerrar los ojos.
El mismo significado fisiológico tienen las alteraciones de la taxia dinámica cuando se
le pide al paciente que cierre los ojos. Revelan también alteración de los cordones
posteriores de la médula, sistema laberíntico y degeneraciones espinocerebelosas. El
signo de Romberg positivo pone de manifiesto la presencia de ataxia estática.

Evaluar Disimetría

Evaluar Disdiadococinesia

Evaluar Temblor intencional

LESIONES DEL CEREBELO

Los síntomas de las lesiones cerebelosas se pueden comprender fácilmente si se conocen


las funciones del cerebelo:

  Ataxia. Significa falta de coordinación de los movimientos

  Dismetría. Consiste en que el movimiento pasa de largo del objetivo,


porque los músculos antagonistas no se activan a tiempo para frenarlo

  Temblor intencional. el temblor cerebeloso o intencional se acentúa con


los movimientos voluntarios. Se produce porque se contraen a la vez los
músculos agonistas y antagonistas al realizar el movimiento

  Disdiadococinesia. Dificultad para los movimientos alternantes y


repetitivos, como golpear rítmicamente con el dorso y la palma de la mano. Se
debe a la falta de coordinación en la activación alternante de agonistas y
antagonistas.

  Disartria. Dificultad en el habla, por falta de coordinación en los


músculos de la articulación de las palabras.

  Hipotonía. Por alteración en la regulación del tono muscular.

  Descomposición de los movimientos. Cuando un movimiento implica a


varias articulaciones de un miembro, primero se mueve una articulación y luego
otra.

  Alteración del equilibrio y nistagmus si la lesión afecta al


vestibulocerebelo
FISIOLOGIA DEL VIII PAR CRANEAL VESTIBULO COCLEAR

En esta practica evaluaremos solamente la función de la rama coclear del VIII Par craneal (mediante test
Weber, Rinne y Schwabach) y evaluar hipoacusia solamente, pues la rama vestibular será evaluada de
modo diferencial conjuntamente con el estudio del cerebelo en su oportunidad.

Exploración de la rama coclear del Nervio acústico VIII par;nervio vestíbulo coclear)
• El nervio coclear conduce los estímulos auditivos inducidos por las vibraciones
sonoras ,recogidas por el receptor: órgano de Corti ,de los estímulos auditivos.
• No nos olvidemos que el nervio vestibular conduce los estímulos específicos del sentido del
equilibrio que traduce las sensaciones de posición o movimientos del cuerpo en relación al
espacio.
• Para la evaluación fisiológica de la percepción del sonido evaluaremos la transmisión aérea y la
transmisión ósea.
• La hipoacusia POR ALTERACIÓN EN LA TRANSMISION Ó CONDUCCION AÉREA
(HIPOACUSIA DE CONDUCCIÓN) : en AFECCIONES DEL OIDO EXTERNO O MEDIO ó
acumulo de cerumen o perforación timpánica.
• Y LAS AFECCIONES DE HIPOACUSIA POR ALTERACIONES EN LA CONDUCCIÓN
ÓSEA EN LOS TRANSTORNOR DEL NERVIO AUDITIVO)RAMA COCLEAR Ó DEL
LABERINTO(Hipoacusia sensorial, nerviosa o de Percepción .

Evaluación fisiológica de la audición.


• El estudio de la transmisión ósea se efectúa por medio de tres pruebas CLÁSICAS QUE SON
Weber, Rinne y Schwabach. El objeto de ellas es comprobar si la eventual hipoacusia se debe:
• a que existe una pérdida de la conducción aérea(hipoacusia de conducción ó
si se trata de una perturbación de la transmisión ósea como ocurre en la afecciones del laberinto ,
nervio ó vias auditivas nerviosas(hipoacusia sensorial nerviosa ó de percepción).

• Las pruebas de audición constituyen lo que se llama: Acumetría Puede ser Fónica o
Instrumental.

AUDIOMETRIA INSTRUMENTAL: Se realiza mediante los DIAPASONES, que son instrumentos


metálicos vibrantes de acero o de magnesio cuyas ramas son de forma de «U» alargada y con un mango
corto que sirve para cogerlos. Las frecuencias del juego completo de diapasones van desde 64 Hertz
hasta los 4000 Hertz. Con ellos se puede hacer el diagnóstico cualitativo de las hipoacusias y decir si
se trata de una hipoacusia conductiva o de transmisión, una hipoacusia neurosensorial o de una mixta,
lo cual se averigua mediante las siguientes pruebas:

PRUEBAS DE AUDICION

TEST DE WEBER COMPARATIVO: ambos oídos


Es una prueba de lateralización y generalmente se utiliza cuando la audición por vía aérea es diferente en
los dos oídos.
En el oído normal y en el paciente con hipoacusia simétrica, no hay lateralización del sonido.
La prueba se realiza pellizcando las ramas de un diapasón de 500, 250 o 128 Hertzios y no golpeándolas
para no originar armónicos, se coloca el mango del diapasón en la frente o en los incisivos superiores y se
le pregunta al paciente de qué lado oye mejor el sonido.
- Si el paciente afirma sentir el sonido más fuerte hacia el oído hipoacúsico quiere decir que se trata de
una sordera de tipo conductivo o de transmisión.
- Si el sonido del diapasón colocado en la frente o en los incisivos superiores lateraliza hacia el oído sano,
ello indica que el oído contralateral presenta una hipoacusia de tipo neurosensorial.

TEST DE WEBER COMPARATIVO


Con el diapasón vibrando en medio del cráneo (vertéx), se escucha bien en
ambos lados el sonido no se lateraliza, el sonido es igual en ambos lados.
El test compara las vías óseas en ambos oídos. Se puede colocar el diapasón
en la frente ó en incisivos superiores.

RESULTADO
Si el sonido se lateraliza hacia el lado sano, entonces es hipoacusia Neuro sensorial Derecha. Si
se lateraliza hacia el oído que escucha mejor, el oído Derecho enfermo ó peor prácticamente no
escuchara.
Si el oído Derecho (enfermo) escucha mejor, el sonido lateraliza hacia la izquierda, será hipoacusia
de transmisión o de conducción.

TEST DE RINNE
• Compara la calidad de la Percepción Auditiva por medio de 2 Vías:

• AEREA OSEA
• Transmisión Apófisis mastoides
• Conducción
• (Investigamos un solo oído cada vez ; es monoaural)
• PARA COMPARAR AEREA Y OSEA SE TOMA EL TIEMPO DE DURACION DEL SONIDO
CON CRONÓMETRO DESDE EL INSTANTE EN QUE COLOCAMOS EL MANFGO DEL
DIAPASON VIBRANTE EN HUESO MASTOIDES (INICIO) HASTA QUE DES APARECE
EL SONIDO
Metodo para exploración de Rinne

TEST DE RINNE EN UN SOLO OIDO


Vía ósea
1. Diapasón vibrando sobre apófisis mastoides.

Vía aérea
2. De inmediato acercar el diapasón a la oreja
del mismo lado.
3. Preguntar al paciente ¿Cuándo escucho
mejor?, ¿Dónde con mayor intensidad?

RESULTADO
Si se escucha mejor por vía ósea, Hipoacusia de
Transmisión ó conducción RINNE NEGATIVO.

Si se escucha mejor por Vía aérea es normal ó


Hipoacusia de percepción neurosensorial. RINNE
POSITIVO.

TEST DE RINNE:
Tiene por objeto comparar la audición de un sonido transmitido por vía ósea(mastoidces), con la audición
del mismo sonido transmitido por vía aérea ( delante oreja ) tomando los tiempos de duración del sonido
en segundos con el diapason en mastoides y luego con el mismo estímulo tomar tiempo delante de la oreja.

Al poner un diapasón vibrante en la mastoides de un individuo sano, éste oirá el sonido generado hasta que
la magnitud de la vibración no se se escuche pues se hace insuficiente para vencer la impedancia acústica
que le ofrecen los tejidos que se interponen en su transmisión hasta la cóclea, el sonido en región mastoidea
normalmente se percibe durante 20 segundos.
Una vez que el diapasón deja de ser audible por vía ósea si se lo coloca INMEDIATAMENTE frente al
conducto auditivo externo (sin tocar la oreja) reaparece la sensación auditiva por vía aérea 40 segundos más,
ya que la impedancia a vencer por esta vía es mucho menor que por vía ósea. En este caso que es el normal
se dice que el RINNE es POSITIVO.

En las hipoacusias conductivas la percepción se mantiene durante un tiempo mayor por vía ósea que por vía
aérea, por ejemplo 35 segundos por vía ósea y 20 segundos por vía aérea, esto constituye el RINNE
NEGATIVO.

En las hipoacusias neurosensoriales se hayan disminuidas ambas fases, las proporciones se mantienen pero
los tiempos están disminuidos y se habla de RINNE POSITIVO ACORTADO. Los valores podrían ser 10
segundos por vía ósea y 20 segundos por vía aérea.

TEST DE SCHWABACH

Consiste en comparar el tiempo de audición de un diapasón vibrante colocado en el vértex del paciente con
el tiempo que oye un sujeto normal. Se aplica el diapasón vibrante en el vértex del paciente hasta que deja
de oírlo.
Si el examinador o testigo normal oye, se habla de SCHWABACH CORTO y orienta a una sordera
neurosensorial;
en el caso contrario SCHWABACH LARGO orienta hacia una lesión de tipo conductivo, por ejemplo una
otoesclerosis.
Si los tiempos son semejantes se dice que el SCHAWABACH es normal.

RESULTADOS COMPARATIVOS ENTRE LA ACUMETRÍA FÓNICA (VOZ) Y LA


ACUMETRÍA INSTRUMENTAL ENTRE UNA PERSONA NORMAL Y UNA CON HIPOACUSIA
NEUROSENSORIAL:

FONICA NORMAL NEUROSENSORIAL


Voz cuchicheada 6 metros 0.2 metros
Voz alta 40 metros 1 metro

Instrumental
Conducción ósea 20 segundos 10 segundos
Conducción aérea 40 segundos 20 segundos
Weber Sin lateralización Lateralizacion (al mejor oído)
Rinne Positivo (normal) Positivo (corto)
Schwabach Menor que el examinador
Igual al examinador
normal

• Resumen :
• En la hipoacusia de conducción (Trastorno de la conducción aérea , afecciones del oído externo
y/o medio) tenemos:
• El Weber se lateraliza hacia el oído afectado ó el oído peor
• El Rinne es negativo en el oído afectado
• El Schwabach es normal o más prolongado en el lado afectado
• En la hipoacusia de percepción o nerviosa(trastorno de la transmisión ósea , afecciones del oído
interno laberinto u nervio auditivo) tenemos:
• Weber lateralizado hacia el lado sano
• Rinne es positivo en el oído afectado
• El Schwabach s acorta en el oído afectado.
Sistema Nervioso Autonómico
EFECTOS SIMPÁTICOS Y PARASIMPÁTICOS
Introducción
El sistema nervioso autónomo comprende dos grandes divisiones antagónicas: sistema simpático y
parasimpático, relacionados a respuesta de stress y antiestrés.
Se emplea el sapo para observar los efectos simpáticos y parasimpáticos en la actividad cardiaca.

Material
Sapos grandes Algodón
Conejos Jeringas descartables
Adrenalina Suero fisiológico
Acetilcolina Electrocardiógrafo con juego de agujas de metal
Atropina Atenolol
Tabla de fijación para batracios
Pilocarpina Solución de Ringer para batracios
Equipo de disección

Método

Experimento N° 1
Anestesiar al sapo por destrucción del cerebro y la medula espinal. Colocar al animal en la tabla de fijación.
Abrir el peto esternal y exponer el corazón. Humedecer periódicamente con la solución de Ringer para
batracios. Conectar el electrocardiógrafo por medio de las agujas de metal y obtener un trazado
electrocardiográfico basal. Instilar una gota de solución de Acetilcolina al 1/5000 y obtener un nuevo trazado
electrocardiográfico. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla reposar por al menos 2
minutos.

Experimento N° 2
Emplear la preparación descrita en el experimento anterior. Instilar dos gotas de solución de Adrenalina al
1/2000 y obtener un trazado electrocardiográfico. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla
reposar por al menos 2 minutos.

Experimento N° 3
Emplear la preparación descrita en el experimento anterior. Instilar una gota de solución de Atenolol y
obtener un trazado electrocardiográfico. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla reposar
por al menos 2 minutos. A continuación instilar dos gotas de solución de Adrenalina al 1/2000 y obtener un
nuevo trazado electrocardiográfico. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla reposar por al
menos 2 minutos.

Experimento N° 4
Emplear la preparación descrita en el experimento anterior. Instilar una gota de solución de Atropina al 0.1%
y obtener un trazado electrocardiográfico. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla reposar
por al menos 2 minutos. A continuación instilar dos gotas de solución de Acetilcolina 1/5000 y obtener un
nuevo trazado electrocardiográfico. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla reposar por al
menos 2 minutos.
Experimento N° 5
Instilar 1 gota de Pilocarpina en el ojo derecho de un conejo y una gota de solución de Adrenalina en el ojo
izquierdo.

Discusión

FISIOLOGÍA
CARDIOVASCULAR

Corazón “in situ”: Propiedades del Corazón

1.- Fundamento
El miocardio tiene propiedades tales como: automatismo, excitabilidad, conductibilidad y contractilidad que
le permite al corazón trabajar como bomba, de una manera adecuada a las necesidades del organismo. Tiene
inervación autónoma y sistema de conducción eléctrica organizada.
La actividad eléctrica que genera puede ser captada por electrodos colocados en la superficie corporal y
graficarse en ondas por medio del Electrocardiógrafo. Existe una correlación entre la actividad eléctrica y
el ciclo cardiaco.

2.-Objetivos
a. Reconocer la anatomía del corazón y vasos
b. Reconocer las fases del ciclo cardiaco-características del músculo cardiaco
c. Detectar la actividad eléctrica del corazón (Electrocardiograma)
d. Relacionar la actividad eléctrica y el ciclo cardiaco
e. Demostrar los efectos de estímulos físicos y químicos (adrenérgicos y colinérgicos) sobre el
corazón
f. Conocer el efecto vagal

3.-Materiales
- Animal para experimentar- sapo - Tablilla de fijación
- Electrocardiógrafo - Tubos de ensayo (03)
- Quimógrafo - Agua caliente (40°), fría (80°)
- Miógrafo para cardiografía por suspensión - Sol. Ringer.
- Carrete de estimulación eléctrica - Adrenalina 1/2000
- Equipo de disección y 2 pares de guantes) - Acetilcolina 1/5000
- Sol. CIK 1% - Sol. C12Ca 1%
- Propranolol 1/1000 - Atenolol 1/1000

4.-Experimentos
4.1 N° 1: Exposición del corazón-anatomía- ciclo cardiaco
- Anestesiar al sapo por destrucción del cerebro y médula espinal
- Colocar al sapo en la tablilla en decúbito dorsal-fijarlo con alfileres
- Cortar la piel del tórax (tijera) y ampliar el corte desde el piso de la boca hasta la porción media
del abdomen
- Humedecer permanentemente las vísceras y tejidos con Sol. Ringer
- Reconocer la punta del esternón y cortar por su lado izquierdo
- Con tijera cortar el esternón en su línea media
- Exponer al corazón e identificar el pericardio, cortarlo y observar las partes del corazón y vasos-
reconocer las fases del ciclo cardiaco
- Colocar el Electrocardiógrafo y tomar un basal; relacionarlo con el ciclo cardiaco
4.2 N° 2. Experimento de Gaskel- Estímulo físico (temperatura) al corazón
- Colocar la tablilla con el sapo en forma vertical, (la cabeza hacia abajo); identificar la pared
posterior del corazón.
- Observar los latidos por minutos (Seno Venoso, Aurículas y Ventrículo)
- Con tubo de ensayo (agua fría) tocar el Seno venoso y observar los latidos
- Esperar que regrese al basal y proceder de igual manera con el tubo de ensayo con agua caliente;
observar latidos
- Interpretar los eventos que acontecen
4.3 N° 3. Cardiografía directa por suspensión- Efecto Vagal y Farmacológico
Fase A: Disecar el nervio vago derecho:
- Cortar piel y subcutáneo hasta llegar al ángulo externo del maxilar
- Identificar y cortar y transversalmente al músculo cutáneo pectoral derecho
- Colocar el brazo derecho a 45° con respecto al eje del cuerpo
- Observar debajo de la mandíbula a dos nervios :glosofaríngeo(lateral) y el hipogloso (medial),
individualizarlos y seguir sus recorridos hasta la línea media , en donde cambian de dirección y se
dirigen al piso de la boca
- Entre los dos nervios, reconocer la arteria carótida primitiva (en el ángulo externo de la
mandíbula). Desplazarla hacia arriba e identificar por debajo al nervio vago derecho.
- Pasar por debajo del nervio vago un hilo mojado con sol. Ringer
Fase B: Proceder a los siguientes experimentos:
4.3.A: Cardiografía directa- Efectos del vago en el corazón
- Colocar el clamp del Cardiógrafo en al punta del ventrículo ; Aproximar el Quimógrafo a la
palanca y obtener un trazado
- Determinar el ritmo, frecuencia y amplitud del trazado ; relacionarlo con el ciclo cardiaco
- Dibujar un gráfico, señalando sus características
- Desconectar Electrocardiógrafo.Estimular al nervio vago ( usar los electrodos del carrete de
inducción ), observar los cambios en el latido (Durante/estimulación desconectar /
Electrocardiógrafo)
- Estimular con una aguja a las aurículas y al ventrículo y reconocer la contracción prematura –
morfología y la pausa compensadora.
4.3.B Efecto de la Acetilcolina y Adrenalina
- Instilar una gota de acetilcolina 1/5000; observar efectos. Lavar c/Sol. Ringer
- Instilar una gota de adrenalina 1/2000; observar efectos. Lavar
- Instilar 1 gota de sol CIK 1%; observar efectos. Lavar
- Instilar 1 gota de sol C12Ca 1%; observar efectos. Lavar
4.3.C Ligadura de Stannius- Conducción eléctrica – automatismo
- En el surco en el Seno venoso y las aurículas colocar un hilo humedecido con sol. Ringer y ligar.
Observar efectos en el ECG. Analizar
- Una segunda ligadura entre las aurículas y el ventrículo ; ligar y observar ECG
- Observar la frecuencia de contracción de aurícula y el ventrículo (Bloqueo aurículo- ventricular)

5. Graficar, analizar e interpretar los experimentos realizados


ACTIVIDAD ELÉCTRICA DEL CORAZON Y EFECTO DE LOS
ELECTROLITOS

1. Fundamento
Los potenciales de membrana de la célula cardiaca tienen relación directa con la concentración de los iones
dentro y fuera de la célula. El potencial de acción es consecuencia de la entrada y salida de los iones, de la
célula. Algunos iones INTERVIENEN en la despolarización y otros en la repolarización celular.
La perfusión del corazón con soluciones que tienen mayor concentración de iones van a
alterar los potenciales de la célula y se expresaran en la contracción del miocardio.

2. Objetivos
a. Reconocer y analizar los cambios de la actividad cardíaca cuando se le expone a soluciones con
Potasio, Calcio y Magnesio
b. Esquematizar los lugares de acción de dichos cationes en el potencial de Acción
c. El alumno será competente para entender los conceptos :
- Relaciones espaciales de las Cavidades cardiacas: (aplicación en el ECG, auscultación cardiaca)
- Diferenciar entre el músculo auricular y ventricular: relación con presiones que manejan.
- Sistema de conducción: automatismo, conducción, velocidad de conducción, excitabilidad
- Diferencias del potencial de acción entre N. Sinusal y fibra ventricular: Canales iónicos en la
despolarización y repolarización, efectos y su fundamento de administración de Potasio, calcio-
cambios en el ECG. ¿Por que el N. sinusal comanda el inicio de la despolarización cardiaca?
- Periodo refractario absoluto y relativo :consecuencias ante estímulos
- Innervación cardiaca: efectos en las propiedades del músculo cardiaco
- Irrigación cardiaca: a. coronarias y venas cardiacas- relación de la sístole y diástole con la irrigación
coronaria.

3. MATERIAL
- Animal de experimento: sapo - Sol. Ringer (Sol A)
- Tablilla de fijación y alfileres - Sol. Ringer con C1Ca (1 gr/lt)(Sol.B)
- Catéteres EV - Sol. Ringer con CIK (0.3 g/lt)(Sol.C)
- Frascos de perfusión de 125 ml - Sol. Ringer con C1Mg (1g/lt)(Sol.D)
- Anzuelos - Quimógrafo
- Cera - equipo de disección

4. EXPERIMENTOS:

4.1. Experimento N° 1: Preparación


- Anestesiar al sapo por destrucción del cerebro y médula espinal
- Fijar al animal a la tablilla, con alfileres
- Exponer al corazón a través de una incisión media toraco –abdominal
- Cortar el pericardio, insertar el anzuelo, con un hilo, a la punta del corazón
- Levantar el corazón para exponer la vena cava y canularla
- Conectarla a un sistema de perfusión graduando la altura de los frascos
- Se conecta los frascos de perfusión a través de tubos en Y a una vía común que se inserta en la
vena cava
- Cada una de los frascos posee una llave para abrir o cerrar el flujo
- Frasco A: Sol. Ringer
- Frasco B: Sol Ringer con CLCa
- Frasco C: Sol. Ringer con CIK
- Frasco D: Sol. Ringer con CIMg
- Evitar que quede aire en el sistema de perfusión llenar un lado del sistema con sol. Ringer
- Se inicia la perfusión hasta que el corazón se contraiga

4.2. Experimento 2: Exponer al corazón al Cloruro de Calcio


- Prefundir al corazón con la sol. B.
- Registrar la actividad cardiaca y las características de las contracciones

4.3. Experimento 3: Exponer al corazón al Cloruro de Magnesio


- Prefundir al corazón con la sol. D.
- Registrar la actividad cardiaca y las características de las contracciones

4.4. Experimento 4: Exponer al corazón al cloruro de Potasio


- Prefundir al corazón con la sol. C.
- Registrar la actividad cardiaca y las características de las contracciones

5. Graficar y analizar los efectos de los iones Potasio, Calcio y Magnesio


ELECTROCARDIOGRAFIA EN EL SER HUMANO EN REPOSO

1. Introducción
El corazón tiene la capacidad de generar su propio potencial de acción , el que es transmitido a través del
sistema de conducción a las aurículas y los ventrículos. Es transmitido a través del volumen conductor a la
superficie del cuerpo. Donde es captado por los electrodos del electrocardiógrafo.
La electrocardiografía puede realizarse en reposo (electrocardiografía clínica de reposo) o en actividad
(prueba de esfuerzo).
En la presente práctica se realizara la electrocardiografía de reposo.

1. A Objetivos y competencias que obtendrá el alumno: Electrocardiografía


1. Relacionar la actividad eléctrica del corazón con las ondas e intervalos del ECG
2. Conceptos de derivaciones periféricas y precordiales
3. Relación entre la ubicación de una derivación y las ondas del ECG.
4. ¿Por que hay diferencias entre la morfología de ondas en cara diafragmática y cara lateral?
5. Derivaciones de la cara inferior y posterior del corazón
6. Derivaciones de la cara lateral del corazón: morfología del QRS
7. Derivaciones de la cara anterior del corazón
8. Derivaciones de la cara anteroseptal del corazón
9. Eje eléctrico del QRS: importancia y relación con la masa ventricular
10. Concepto de ritmo sinusal y noción elemental arritmias y bloqueos.

2. Material
Sujetos de prueba varones y mujeres, Electrocardiógrafo, leptosómicos y pícnicos

3. Método
3.1. Experimento N°. 1
Colocar al sujeto en decúbito dorsal y aplicar los electrodos de acuerdo a la convención internacional.
Estandarizar el aparato aplicando 1 mV , debiendo defleccionar la aguja inscriptora 10mm amplitud; la
velocidad de registro del aparato deberá ser 25 mm/seg. Realizar 6 trazados de derivaciones de miembros y
6 trazados de de derivaciones precordiales.
Informar de acuerdo al siguiente protocolo:

Nombre: Fecha:
Edad: Talla:
Peso: Tipo constitucional:

Informe electrocardiográfico:
Ritmo: Frecuencia cardiaca:
Intervalo PR: Complejo QRS: Intervalo Q-T: Q-Tc:
Eje QRS
Morfología de P
Morfología de QRS:
Morfología de T:
Conclusiones:
Comentario:

4. Discusión

PRESIÓN SANGUÍNEA EN EL HOMBRE ADULTO

1.-FUNDAMENTO
El volumen sistólico produce en la circulación periférica cambios en el flujo y presiones intravasculares;
presión arterial, presión venosa. Estas presiones están relacionadas con la longitud y radio del vaso y con
la viscosidad de la sangre; factores que producen resistencia al flujo. La presión arterial tiene un pico mayor
denominado presión sistólica y un nivel inferior denominado presión diastólica. La presión promedio se
denomina presión arterial media. La presión arterial puede determinarse en forma indirecta por medios de
un aparato Esfigmomanómetro de mercurio o aneroide.

1. OBJETIVOS
a. Determinar la presión arterial sistólica, diastólica, en forma indirecta
b. Determinar los cambios de la presión arterial cuando se expone factores, físicos (temperatura),
cambios de posición y de actividad física
c. Calcular la presión arterial media-El alumno tendrá competencia para saber:
- ¿Cuales son los factores mecánicos y humorales que determinan la presión arterial?
- Relacionar presión hidrostática y oncótica con la PA
- Mencionar tres sustancias que sean vasoconstrictoras y tres que sean vasodilatoras –
¿cómo actúan? ¿Cómo se regulan?
- Relacione los cambios de PA y FC en relación con el ejercicio y la postura corporal
- ¿Qué importancia tiene la PAM? ¿Cómo la determina?
- Relacionar gasto cardiaco, resistencia vascular, vol. Sistólico, frecuencia cardiaca,
Inotropismo, precarga, volumen sanguíneo, capacidad venosa, presión venosa central,
regulación de agua y sodio por el riñón

2. MATERIAL
- Sujeto de prueba: alumnos
- Tensiometro de mercurio o anaeroide
- Estetoscopio
- Beakers
- Agua fría (5° C)

3. EXPERIMENTO
Experimento 1: Determinar la presión arterial
- Sujeto de prueba en posición sentada, brazo descubierto a la altura del corazón
- Esperar 5 minutos
- Colocar el brazalete por encima del pliegue del codo
- Colocar la campana del estetoscopio sobre la arterial humeral
- Inflar el manguito hasta que desaparezca el pulso arterial
- Desinflar el manguito lentamente y
- Registrar la presión sistólica con el primer ruido de Korotkoff
- Registrar la presión diastólica con el quinto ruido de Korotkoff
- Recordar: 1mmHg = 0.13 Kpa = 13.6 cm. H2O

Experimento 2: Efecto del ejercicio físico sobre la presión arterial


- Realizar un ejercicio físico intenso ( 20 abdominales o 20 cuclillas)
- Tomar la presión inmediatamente, a los dos y cinco minutos
- Registrar la frecuencia cardiaca en el basal y post ejercicio
- Interpretar los cambios

Experimento 3: Efecto de la posición del cuerpo sobre la presión arterial


- Registrar la presión arterial y frecuencia cardiaca en la posición de decúbito dorsal, sentado y de
pie; previo descanso entre cada posición
- Interpretar los resultados

Experimento 4: Efectos del frió sobre la presión arterial


- Sumergir la mano en agua fría (5° C) por 30 a 60 segundos, hasta cubrir la muñeca
- Determinar la PA
- La prueba se considera positiva si la PAS sube más de 20mmHg y la PAD más de 15 mmHg.

- Bibliografía

Mc Graw Hill: Practicas de Fisiología. Interamericana


William Ganong. Fisiología Médica
Arthur Guyton y may John. Tratado de Fisiología Médica
ESPIROMETRÍA: VOLÚMENES Y CAPACIDADES PULMONARES.
TESTS DE FUNCIÓN VENTILATORIA.

1. Introducción

La medición de los volúmenes pulmonares se realiza por medio de la Espirometría. Este procedimiento
permite determinar todos lo volúmenes pulmonares, excepto el volumen residual, cuya medición se realiza
por métodos indirectos. Emplearemos el Espirómetro Pneumotacómetro Fleich Datospir 120
En esta práctica el alumno adquirirá competencia para entender:

1. Cantidad de Aire inspirado y expirado normalmente: Volumen Tidal


2. Volúmenes pulmonares: V. espiratorio forzado(VEF); V. Inspiratorio Forzado(VIF) ; Volumen
residual (VR)
3. Capacidades Pulmonares (relación de dos ó más volúmenes): Capacidad Vital (CV); Capacidad
funcional residual (CFR); Capacidad pulmonar Total (CPT)
4. Espacio Muerto (EM): relación con el VT
5. Espacio Muerto fisiológico (EMF): ejemplos
6. Volumen alveolar (VA) - Relación entre VA, EM y VT
7. Ventilación: (volumen de aire por minuto): tipos
8. Ventilación alveolar: FR x VA
9. Ventilación Pulmonar: FR x VT
10. Volumen Espiratorio Forzado al primer segundo (VEF1) (80% de la CV)
11. Diferencias procesos Obstructivos de Restrictivos pulmonares.

2. Equipo

Pinza Nasal
Dispositivo bucal descartable para espirar e inspirar
EQUIPO ESPIRÓMETRO NEUMOTACÓMETRO FLEICH DATOSPIR

3. Método

3.1. Obtención del Espirograma

Sentar al sujeto de prueba, colocarle la pinza nasal y la pieza bucal unida al neumotacómetro. Constatar que
no haya fugas de aire por la boca, borde de los labios, ni nariz.
Permitir que el sujeto de prueba respire un momento con la pieza bucal, para que se acostumbre a ella. Una
vez que la frecuencia respiratoria se ha vuelto constante y la profundidad de la respiración uniforme, conectar
al espirómetro para obtener un trazado Usualmente se consigue en unos minutos). A continuación solicitar al
sujeto que realice las siguientes maniobras según instrucciones del profesolr de Practicas.:
a) Al final de una inspiración normal (FIN) realizar una espiración máxima y luego respirar
normalmente. .
b) Al final de una espiración normal (FEN) realizar una inspiración máxima y luego respirar
normalmente.
c) Al final de una inspiración normal (FIN) realizar una espiración máxima seguida de una inspiración
máxima, luego respirar normalmente.

Mediciones de la capacidad ventilatoria.


CAPACIDAD VITAL FORZADA (CVF)
Es la máxima espiración forzada y rápida realizada después de una inspiración profunda.

VOLUMEN ESPIRATORIO FORZADO DEL PRIMER SEGUNDO (VEF1)


Es el volumen de aire espirado durante el primer segundo de la espiración de una CVF. Los valores normales
son: 83% para el primer segundo, 94% para el segundo segundo y 97% para el tercer segundo.

FLUJO ESPIRATORIO FORZADO DE 25% AL 75% (FEF 25-75%)


Es la medición del flujo espiratorio considerando el 50% del medio de la CVF. De esta medición se obtiene
el flujo espiratoria máximo medio, cuyo valor normal para un sujeto joven es de 150L/minuto.

MÁXIMA VENTILACIÓN VOLUNTARIA (MVV) o máxima capacidad ventilatoria o


máxima capacidad respiratoria
Es el máximo volumen de aire que pueden movilizar voluntariamente los pulmones en un minuto.
Velocidad del flujo medio respiratorio máximo (MMEFR) o velocidad del flujo espiratorio forzado
(FEF 25-75%)
Es la relación del medio de la CVF y el TEM. Es el test más sensible para el diagnóstico de la enfermedad
obstructiva.
Se discutirán los trazados obtenidos con los respectivos profesores de Prácticas en cada mesa.
OXIMETRIA: SATURACION ARTERIAL DE OXIGENO

Introducción

En los seres humanos como en todos los mamíferos, la hemoglobina, constituye el principal componente
del eritrocito y normalmente es responsable del transporte del 99.2% de oxigeno presente en la sangre.
También juega un papel importante en el transporte de di6xido de carbono (C02) y del ion hidr6geno (H+).

La hemoglobina es una proteína conjugada con un peso molecular de 68000.


Está formada por cuatro subunidades de peso molecular cercano a 17000. Cada subunidad está constituida
por un grupo “heme” y una cadena polipeptídica. La molécula de hemoglobina, por lo tanto, está integrada
por cuatro grupos "heme" y cuatro cadenas polipeptídicas, que en su conjunto constituye la globina.

La globina constituye el 96% de la molécula de hemoglobina y está compuesta por cuatro cadenas
polipeptídicas que aparecen como dos pares no idénticos. La hemoglobina A, la principal hemoglobina en
los adultos, consta de dos cadenas α y dos cadenas β siendo su estructura α2 y β2 , y representa el 90%
del total de la hemoglobina. Una segunda especie de hemoglobina es la HbA2, y representa el 2.5% del
total, y contiene dos cadenas alfa y dos cadenas delta (α2 y δ2 ) Además de estas dos hemoglobinas, otras
seis formas adicionales se encuentran en pequeñas cantidades y cuyo significado fisiológico aun falta
precisar.

Además de la heterogeneidad presente a nivel individual, se observa una heterogeneidad de la


hemoglobina durante el ciclo vital. Durante la vida embrionaria aparece la hemoglobina embrionaria ( HbE
), en la cual las 2 cadenas a están combinadas con las 2 cadenas epsilon (a2E"z); rnientras que durante la
vida fetal, la principal proteína transportadora es la hemoglobina Fetal (HbF) donde las cadenas alfa están
combinadas con cadenas gamma (α2 γ2)

Un tercer tipo de heterogeneidad de la hemoglobina, resulta de mutaciones de genes que controlan


la secuencia de aminoacidos en las cadenas alfa y beta, dando lugar a la aparición de hemoglobinas
anormales.
El grupo "heme" constituye el 4% de la molécula de hemoglobina; y es una rnetaloporfirina que
resulta de la combinación de un metal, el hierro, con una porfirina. EI hierro puede estar en el estado de
oxidación ferroso (+2) o en el ferrico (+3), y las formas correspondientes de hernoglobina se denominan
ferrohemoglobina y ferrihemoglobina o metahemglobina, respectivamente; y solamente la
ferrohemoglobina puede captar oxigeno.

La hemoglobjna presenta las siguientes caracteristicas:

1) Cada atomo de, hierro de los grupos "hemo" reacciona directamente con el oxigeno molecular
(Oz) y logra fijar una molécula de oxigeno por cada átomo de hierro, de lo que podemos deducir que una
molecula de hemoglobina puede transportar cuatro moleculas de oxigeno.

Para que esta reacción ocurra, el hierro debe encontrarse en la forma divalente (Fe2+o ferroso).
Este estado no se modifica cuando el hierro reacciona con la hemoglobina: existe oxigenación y no
oxidación de la hemoglobina. Cuando el átomo de hierro es oxidado a su forma trivalente (férrico), como
ocurre en la metahemoglobina, no reacciona con el oxigeno, perdiendo la hemoglobina la capacidad de
transportarlo. En condiciones normales in vivo, el sistema metahemoglobina reductasa del eritrocito
mantiene al hierro de la molécula en estado ferroso.
2) La hemoglobina también se combina con el monóxido de Carbono (CO2), unión que se
realiza, al igual que con el oxígeno, con el hierro. Cada átomo de hierro puede fijar una molécula de
monóxido. EI producto resultante recibe el nombre de "carboxihemoglobina".

Cada átomo de hierro puede fijar una molécula de monóxido de carbono, compuesto producido
por la combustión incompleta del carbono (braseros, estufas, gas de alumbrado, motores a explosión). El
monóxido de carbono se combina más fácilmente con la hemoglobina, unas 200 a 300 veces, que el oxigeno.
El peligro de la intoxicación con monóxido de carbono radica en el hecho de que la carboxihemoglobina
no tranporta oxigeno. Si un 30% del total de la hemoglobina circulante esta ocupada con monóxido de
carbono aparecen las cefaleas y vómitos; si lo esta un 50 %, la vida peligra; si lo está un 60-70 %, se produce
la muerte por asfixia.

3) El hierro de la hemoglobina sufre constantemente procesos de oxidación, formándose la


metahemoglobina. Ocurre en un 3% del total de la hemoglobina por día. La conversión de una fracción
de hemoglobina en metahemoglobina tiene un efecto similar al de la carboxihemoglobina, es decir, pierde
la capacidad de transportar oxigeno. En condiciones normales "in vivo" la metahemoglobina es reducida
a hemoglobina por acción de la diaforasa del eritrocito, enzima que permite acoplar la NADH2 generada
por la gliceraldehido-fosfato-deshidrogenasa en la reacción de Embden-Meyerhoff

Entre los factores que ocasionan una acumulación excesiva de metahemoglobina se encuentra: a)
La metahemoglobinemia hereditaria, por disminución de la actividad de la diaforasa o bien por síntesis de
hemoglobinas anormales, y b) La metahemog!obinemia adquirida., que ocurre como resultado de lai
ingesta de fármacos oxidantes (nitritos, nitratos, derivados de la anilina) y desaparece cuando se suspende
la administración de las drogas.

4) La hemoglobina se combina con el dióxido de carbono, produciéndose la


carboxihemoglobina. Esta combinación se efectúa con la globina de la molécula, mediante la formación de
compuestos carbamínicos, reacción que aumenta considerablemente cuando desciende la saturación con
oxígeno.
5) La combinación de la deoxihemoglobina (Hb) con el oxígeno da lugar a la formación de
oxihemoglobina (HbO2). Esta combinación es reversible y la proporción de desoxihemoglobina que se
transforma en oxihemoglobina al ponerla en contacto con el oxigeno depende de la presión parcial de
oxigeno (PO2) del medio que rodea a la molécula. Cuando toda la hemoglobina está como oxihemoglobina,
se dice que el contenido de oxigeno de la hemoglobina ha alcanzado la "capacidad de oxigeno" del
compuesto, pero cuando el contenido de oxigeno de la sangre es menor que la capacidad de oxigeno, el
contenido de oxígeno se expresa en términos de porcentaje de saturación (SO2).

La saturación arterial de oxígeno (SaO2), es la cantidad de oxígeno unida a las moléculas de


hemoglobina en relación a la cantidad total de moléculas presente en la sangre arterial. Contenido/ capacidad
x 100

La medición de la saturación arterial de oxígeno requería de métodos invasivos, punción vascular


arterial, que hacían difícil su utilización en estudios dinámicos y en estudios poblacionales. Esta limitación
se ha superado en la actualidad gracias al advenimiento de métodos no invasivos, como la oxirnetría de
pulso.

La oximetría permite medir la cantidad de hemoglobina que es capaz de unirse reversiblemente al


oxígeno [hemoglobina funcional u oxihemoglobina (HbO2)], en relación a la totalidad de hemoglobina
presente en sangre (oxihemoglobina, deoxihemoglobina, carboxihemoglobina y metahemoglobina). En la
mayoría de circunstancias clínicas la carboxihemoglobina y la metahemoglobina, forrnas disfuncionales de
la hemoglobina, constituyen tan sólo una fracción insignificante de la hemoglobina total. De tal forma que
la medición de la saturación arterial de oxígeno puede ser representada por la siguiente fórmula:
[HbO2 ]

Saturación (%) = ---------------------------- x 100


[HbO2] + [ Hb ]

La oximetría de pulso mide la fracción de luz transmitida a través de los tejidos. La oxihemogobina
absorbe más luz cerca del infra-rojo (vg. 900 nm); mientras que la deoxihemoglobina absorbe más luz roja
(vg. 660 nm). Por lo tanto, la absorción de luz por la oxihemoglobina y la deaxihemoglobina es diferente
en estas dos longuitudes de ondas.

Los oxímetros de pulso (figura 1) basicamente están constituidos por dos diodos que emiten luz
en forma intermitente, y una célula fotosensitiva, capaz de medir por separado y en forma secuencial la luz
transmitida a través de la piel, en el orden de mil veces por segundo. Primero se ilumina el diodo que emite
luz roja y luego el diodo que emite luz cerca del infra-rojo y la luz transmitida por los tejidos, en ambas
longitudes de onda, son cuantificadas y cornparadas por la célula fotosensitiva para determinar el porcentaje
de la saturación arterial de oxígeno.

La saturación arterial de oxígeno normalmente varía entre 95 a 100% en sujetos de nivel del mar
y entre 84 a 92% en sujetos adultos, nativos-residentes en las grandes alturas. En recién nacidos varía entre
85 a 90%. Valores que se modifican con el ejercicio físico y la altitud de residencia.

Experimento N° 1:
MEDIDA DE LA SATURACIÓN ARTERIAL DE OXIGENO
Materiales:
- Oxímetro de pulso
- Sensores de Oxígeno (Fig. 2)
- Algodón
- Alcohol

Procedimiento:
1. Encender el oxímetro de pulso.
2. Limpiar y secar el dedo índice, con algodón y alcohol.
3. Colocar el sensor de oxígeno en el dedo índice.
4. Leer y registrar la saturación arterial de oxígeno y la frecuencia cardiaca, tres veces.

Resultados:
Saturación (%) Fr. Cardiaca
1ra. Medición
2da. Medición
3ra. Medición
Promedio
5. Determinar si la saturación arterial de oxígeno varía en los diferentes dedos de la mano derecha e
izquierda
Saturación (%) Fr. Cardiaca
Derecha Izquierda Derecha Izquierda
Dedo Pulgar
Dedo Índice
Dedo Cardinal
Dedo Anular
Dedo Meñique

6. Determinar si la postura modifica la saturación arterial de oxígeno.


Saturación (%) Fr. Cardiaca
Posición Decúbito
Posición Sentado
Posición de Pie

Experimento N° 2: EFECTO DEL EJERCICIO FISICO SOBRE LA SATURACIÓN ARTERIAL


DE OXIGENO

Materiales:
- Oxímetro de pulso
- Sensor de oxígeno
- Algodón
- Alcohol
- Sujeto experimental (alumno 1)
- Sujeto experimentador (alumno 2)

Procedimiento:

1. Con el sujeto experimental cómodamente sentado, monitorizar registrar la saturación arterial de


oxígeno y la frecuencia cardiaca, hasta lograr valores constantes con un + 5% de variación
(Medición Pre-Ejercicio).
2. Desconectar el oxímetro y solicitar al sujeto experimental que abra y cierre rítmicamente ambas
manos durante 10 minutos.
3. Al final del ejercicio motorizar la saturación arterial de oxígeno y la frecuencia cardiaca (Medición
Post-Ejercicio)
4. Cada dos minutos monitorizar la saturación arterial y la frecuencia cardiaca hasta obtener valores
similares a las condiciones basales (Pre-Ejercicio) (1ra.-10ma. Medición).
Resultados:
Tiempo (min.) saturación (%) Fr. Cardiaca

Pre-Ejercicio

Post-Ejercicio

1ra. Medición

2da. Medición

3ra. Medición

4ta. Medición

5ta. Medición

6ta. Medición

7ma. Medición

8va. Medición

9na. Medición

10ma. Medición

Experimento N° 3: ISQUEMIA Y SATURACIÓN ARTERIAL DE OXIGENO

Materiales:
- Tensiómetro
- Cronómetro.
- Oxímetro de pulso.
- Sensor de oxígeno.

Procedimiento:
1. El sujeto experimental deberá sentarse cómodamente, colocando los brazos sobre la mesa de modo
que quede a nivel del corazón, medir la saturación arterial de oxigeno en el dedo índice de ambas
manos (1ra. Medición).
2. Coloque el manguito del tensiómetro, completamente desinflado, alrededor del brazo derecho, de
manera que su borde inferior quede de 2-4 cm. sobre el pliegue del codo.
3. Aumentar la presión del sistema, con la pera insuflora, hasta alcanzar una presión de 200 mmHg.
4. Solicitar al sujeto experimental que abra y cierre rítmicamente la mano derecha hasta que el sujeto
empiece a reportar dolor e inmediatamente medir la saturación arterial en el dedo índice de la mano
derecha y luego en el dedo índice de la mano izquierda (2da. Medición).
5. Solicitar al sujeto experimental que siga abriendo y cerrando rítmicamente la mano derecha hasta
el momento en que el dolor sea insoportable y medir nuevamente la saturación arterial en ambas
manos (3ra. Medición).
6. Disminuir rápidamente la presión del sistema abriendo la válvula de la pera isuflora y retirar el
tensiómetro.
7. Medir y registrar la saturación arterial y la frecuencia cardiaca, cada dos minutos durante 10 min.
hasta obtener valores similares al de las condiciones basales. (4ta.-6ta. Medición).
Resultados:
Saturación (%) Frecuencia Cardiaca
Índice Derecho Índice Izquierdo Índice Derecho Índice Izquierdo
1ra. Medición
2da. Medición
3ra. Medición
4ta. Medición
5ta. Medición
6ta. Medición
SATURACIÓN ARTERIAL DE OXIGENO

INFORME DE PRACTICA

Nombre:............................................................................................................................Fecha:....../....../......
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

ANTECEDENTES PERSONALES:
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Nombre:..................................................................................Sexo:.................. Edad:..............años
Peso:............Kg Talla:.............. mts Peso Ideal:...............Kg
Lugar de Nacimiento:............................................................... T. Resd. Lima:.......................
Actividad Física: 1) Sedentaria: ..........
2) Ocasional: ..........
3) Frecuente: ..........
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

EJERCICIO FÍSICO Y SATURACIÓN ARTERIAL DE OXIGENO:


Saturación (%) Fr. Cardiaca

Pre-Ejercicio

Post-Ejercicio

Tiempo (min.) de Recuperación

ISQUEMIA LOCAL Y SATURACIÓN ARTERIAL DE OXIGENO:


Saturación (%) Fr. Cardiaca

BRAZO DERECHO:
Basal
Iniciar Dolor

Dolor Soportable

Tiempo (min.) de Recuperación

BRAZO IZQUIERDO:
Basal
Inicia Dolor

Dolor Soportable

Tiempo (min.) de Recuperación


FISIOLOGIA DE LA SANGRE

HEMATOCRITO
Es la relación porcentual entre la cantidad de glóbulos rojos y el plasma sanguíneo en relación a la sangre total. Esta
determinación es muy útil para del diagnóstico diferencial de anemias porque ayuda a determinar su intensidad y tipo.
Reactivos , Material de Vidrio y Equipos
Anticoagulante de Wintrobe: Oxalato de potasio 0.8 gm y oxalato de amonio 1.2 gm y agua dest. csp. 100 ml.) Colocar
0.5 ml en cada frasquito de vidrio y desecarlos en estufa a 56 ºC. Cada frasco así preparado servirá para anticoagular
5 ml de sangre.
Sangre venosa anticoagulada .
Pipetas Pasteur y Tubo de Wintrobe
Tubos capilares para microhematocrito con y sin heparina.
Jeringas y agujas descartables.
Desinfectante para piel..
Guantes descartables
Centrífuga Clínica
Centrífuga para Microhematocrito
Existen 2 métodos: Macro y Micrométodo para determinar el Hematocrito.
Procedimiento: Macrométodo de Wintrobe.
Usando la pipeta Pasteur llenar con sangre el tubo de Wintrobe hasta la marca 100.
Evitar formación de burbujas.
Centrifugar el tubo (contrapesado), a 3000 rpm. durante 30 minutos.
Lectura en la escala ascendente en el límite del paquete globular, excluyendo los glóbulos blancos y
plaquetas.
Expresar el Hematocrito en valor porcentual.
Valores Normales:
Hematocrito Valores
Referenciales
%
Recién Nacidos 60
Infantes 35 a 44
Varones Adultos 41 a 52
Mujeres Adultos 38 a 46

------------------------------
Procedimiento: Método MICROHEMATOCRITO.
Llenar el tubo capilar con la muestra de sangre. Sellar el extremo inferior con plastilina.
Centrifugar a 12,000 rpm en la centrífuga para microhematocrito, durante 10 min. Lectura en la tabla Ad-
hoc para este efecto. Expresar el valor porcentual.

------------------------------

HEMOGLOBINA
Es una molécula de estructura cuaternaria, tetramérica proteica, es el pigmento rojo portador del Oxígeno
de los hematíes. Está formada por un núcleo Hem y una proteína llamada Globina.

MEDICION DE LA HEMOGLOBINA:
Materiales:
Jeringa y agujas descartables.
Desinfectante.
Algodón.
Ligadura.
Alcohol.
Anticoagulante de Wintrobe.
Pipeta de Sahlí de 0.02 ml
Tubos de prueba.
Solución de HCl 0.1 N
Espectrofotómetro.

Procedimiento
Obtener 3 ml sangre venosa con anticoagulante. Medir 0.02 ml sangre con la pipeta de Sahlí (0.02 ml).
Limpiar la parte externa de la punta de la pipeta para eliminar la sangre adherida al exterior de la pipeta.
Vaciar en contenido de la pipeta en un tubo conteniendo 5.0 ml de la Sol. de HCl 0.1 N
Mezclar, por inversión, suavemente, sin agitar. Reposo 10 min. Lectura en el Espectrofotómetro, en Long.
Onda de 540 nm. Colocar el espectrofotómetro en 0.00 Abs. ; leer luego la muestra problema. Anotar la
lectura de Absorbancia.

CALCULOS:
Absorbancia del Problema X Factor de Calibración = gm Hb %

Valores Referenciales:
Hemoglobina Valores
Referenciales
gm %
Recien Nacidos 17 a 25
Infantes 10 a 15
Hombre Adulto l4a17
Mujer Adulto 12 a 16
Hombre de Altura 16.4 a 18.8

Índices Hematológicos o Constantes Corpusculares

Los índices hematológicos, son elementos de juicio muy importantes para clasificar las anemias, en
relación a su contenido de hemoglobina, volumen globular y valor porcentual de la concentración de
hemoglobina en cada uno de los glóbulos en promedio.
VOLUMEN GLOBULAR MEDIO

Volumen Globular Medio = Hcrito x 10 = micras cúbicas


GR
Valores Normales:
Al nacer : 105 micras cúbicas
Infancia: 83 a 87 micras cúbicas
Adulto: 83 a 95 micras cúbicas

HEMOGLOBINA MEDIA GLOBULAR

Hemoglobina media globular = Hb x 10 = Micro microgramos


GR
Valores Normales: 27 a 32 Micro microgramos
CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA GLOBULAR MEDIA

C Hb Glob Media = Hb gr% X 100


Hto

Valores Normales: 32 a 36%

Referencias Bibliográficas:
Clinical Hematology Wintrobe ",. Lea Febiger. Phila USA 9ª Edition. 1993
Medical Laboratory Technology. Lynch.Raphael Saunders USA 1989.
Manual of Clinical Hematology. Joseph Mazza. Little Brown 1998.

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR


La Velocidad de Sedimentación globular consiste en determinar la rapidez de caída ó sedimentación de los
glóbulos rojos de la sangre cuando está anticoagulada, esto se realiza en un tubo de caracteristicas especiales
llamado tubo de Wintrobe.
Materiales:
Tubo de Wintrobe
Algodón, alcohol, ligadura, agujas y jeringas descartables. Anticoagulante de Wintrobe.
Pipetas Pasteur.
Guantes de látex descartables.
Gradilla tipo soporte vertical para el tubo Wintrobe, perpendicular a la mesa (plomada).
Procedimiento
Llenar el tubo con sangre venosa anticoagulada hasta la marca 0 de lectura de la Velocidad., empleando la
pipeta Pasteur. Luego dejar en reposo vertical, perpendicular, durante 60 min. Lectura en la escala de valores
descendentes para Velocidad de Sedimentación.

Los Valores Referenciales de Velocidad de Sedimentación, según el método Wintrobe son:


Hombres: 0 a 6.5 mm a la hora
Mujeres: 0 a 15 mm a la hora
Gráfica de Wintrobe y Landeberg para “corregir” la Velocidad de Sedimentación cuando existe Anemia ó
Policitemia. La V. S. tiende a ser más rapida en la anemia intensa, y disminuir en la Policitemia. En presencia
de una de estas anomalias debe hacerse la “corrección” de los resultados obtenidos con la gráfica diseñada
por el mismo Wintrobe. Se corrgirá la VS. en función del Hematocrito del paciente.

Valores Referenciales de Glóbulos Rojos:


Recién Nacidos: 6 000.000 pmm3
Niños: 4 000.000 a 5 500.000 pmm3
Hombres adultos: 4 500.000 a 6 000.000 pmm3
Mujeres adultas: 5 200.000 a 5 400.000 pmm3
HEMOSTASIA Y COAGULACIÓN DE LA SANGRE

HEMOSTASIA: significa prevención de la pérdida de sangre. Cuando se lesiona o rompe un vaso la


hemostasia se consigue mediante:
A) ESPASMO o CONSTRICCION VASCULAR
B) FORMACION DE UN TAPON PLAQUETARIO
C) COAGULACION SANGUINEA: FORMACION DE UN COAGULO DE FIBRINA
DEBIDO A LA COAGULACION DE LA SANGRE
D) PROLIFERACIÓN FINAL DE TEJIDO FIBROSO DENTRO DEL COÁGULO SANGUÍNEO
PARA CERRAR DE FORMA DEFINITIVA EL AGUJERO DEL VASO.

A) ESPASMO O CONSTRICCION VASCULAR: Ante un corte o lesión de un vaso inmediatamente se


produce el espasmo vascular que es el resultado de un reflejo miógeno local y factores humorales locales de
los tejidos traumatizados y de las plaquetas. Los reflejos nerviosos se inician por impulsos dolorosos o de
otro tipo originados en el vaso traumatizado o en los tejidos vecinos. La lesión directa de la pared vascular
genera la contracción miógena refleja de la pared vascular además la adrenalina ejerce acción
vasoconstrictora.
En los vasos de menor calibre las plaquetas se acupan de la mayor parte de la vasoconstricción al liberar el
vasoconstrictor Tromboxano A2.
Cuanto mayor es el vaso sanguíneo mayor es el grado de espasmo, que en algunos casos puede impedir una
pérdida mortal de sangre.

B) FORMACION DE UN TAPON PLAQUETARIO: Ante un vaso dañado las plaquetas se hinchan,


emiten pseudópodos y hacen pegajosas y se adhieren fuertemente al tejido colágeno expuesto y se unen al
Factor von Villebrandt, aumenta el ADP y se forma Tromboxano A2.
ADP Y Tromboxano activan las plaquetas y aumentan su "Adherencia" y se van "Agregando" en el sitio
lesionado y se forma el "Tapón plaquetario".

C) COAGULACION SANGUINEA: Formación del coágulo de fibrina debido a la coagulación de la


sangre:
Teoría básica:
En la sangre hay sustancias que favorecen la coagulación:
PROCOAGULANTES
y sustancias que la inhiben: ANTICOAGULANTES.
La coagulación de la sangre depende del equilibrio entre estos dos grupos de sustancias.
En el torrente sanguíneo normalmente predominan los anticoagulantes de forma que la sangre no se coagula
mientras esté circulando en los vasos. Sin embargo cuando se rompe un vaso, se "activan" los
Procoagulantes del área de la lesión tisular y anulan a los anticoagulantes, con lo que se forma el coágulo.

MECANISMO GENERAL DE LA COAGULACION Ó CASCADA de la Coagulación.

La Coagulación se realiza en TRES ETAPAS:


1.- Formación del Complejo Activador de la Protrombina
2.- Conversión de la Protrombina en Trombina (conversión catalizada por el Activador de la
Protrombina).
3.- Conversión del Fibrinógeno en Fibrina (conversión catalizada por la Protrombina).

Los mecanismos de la coagulación se ponen en funcionamiento por:


1.- Traumatismo pared vascular o tejidos adyacentes (endotelio)
2.- Traumatismo de la sangre
3.- Contacto de la sangre con las células endoteliales dañadas ó con colágeno y otros elementos
titulares en el exterior del vaso sanguíneo.

En todos los casos LO PRIMERO QUE SE FORMA ES EL "ACTIVADOR DE LA PROTROMBINA"


que transforma la Protrombina en Trombina e inicia los pasos posteriores de la Coagulación (Vía final
común).
Se considera que el "Activador de la Protrombina" se forma por las dos Vías, aunque en realidad las dos
vías interactúan constantemente:

LA VÍA EXTRÍNSECA: Comienza con el traumatismo de la pared vascular y de los tejidos subyacentes
(lesión tisular) o un tejido extravascular sufre un traumatismo y entra en contacto con la sangre circulante.
La célula endotelial vascular dañada libera un Factor Tisular llamado Tromboplastina Tisular III,
fosfolípidos y un complejo lipoproteico y se desata así la vía Extrínseca. Así pues, el tejido lesionado ha
liberado esta serie de sustancias o complejo de factores (FACTOR TISULAR O TROMBOPLASTINA
III TISULAR) que trabaja como una verdadera enzima activando al Factor VII ----- VIIa. y éste en presencia
del Ca++ activan al Factor X ---- Xa, éste a su vez activa al V ----- Va el cual genera el COMPLEJO
ACTIVADOR DE LA PROTROMBINA. (Observar las retroalimentaciones enzimáticas en el cuadro de la
cascada). Luego Fribrinógeno ---- Fribrina coágulo.

VÍA INTRÍNSECA: Comienza con el traumatismo de la propia sangre o con la exposición de la sangre al
propio tejido colágeno expuesto por el traumatismo del vaso sanguíneo lesionado, hay contacto de la sangre
con epitelios distintos del vascular normal: Se Activa el Factor XII --- XIIa y se liberan fosfolípidos
plaquetarios que contiene el Factor Plaquetario 3. Luego se activa el XI --- XIa en presencia de Cininógeno.
Se activa luego el IX…..IXa, y el IXa junto con el VIII…..VIIIa activan al X ----- Xa.
El Xa junto con el V y factores tisulares generan el COMPLEJO ACTIVADOR DE LA PROTROMBINA.
Y sigue luego la vía final común de conversión de la Protrombina en Trombina y Fibrinógeno en Fibrina y
el coágulo es consolidado por el factor XIII.

Nota: El Calcio acelera todas las reacciones de la coagulación excepto en los primeros pasos
de la vía intrínseca. Por lo tanto en AUSENCIA de iones de calcio la sangre no se coagulará
por ninguna de las dos vías.
EVALUACION DE LA HEMOSTASIA
Y LA COAGULACION DE LA SANGRE

TIEMPO DE COAGULACIÓN

Se denomina así al tiempo que transcurre desde que la sangre es extraída hasta que pasa al estado de gel.
Esta prueba mide el tiempo tomado por la sangre para coagular en ausencia de factores provenientes de los
tejidos (factor tisular). El trauma que significa la obtención de sangre venosa marca el inicio, y el intervalo
de tiempo entre la obtención de la muestra y su coagulación es lo que se denomina Tiempo de Coagulación.
Esta es en términos generales una prueba grosera de la coagulación. Sirve para detectar groseramente
alteraciones de la coagulación que puedan alargarla. La prolongación del Tiempo de Coagulación puede
deberse a varias causas;:
1.- Disminución de la Tromboplastina,
2.- Disminución de la Protrombina,
3.- Disminución del Fibriógeno ó
4.- A la presencia en la sangre de algún anticoagulante.

METODO DE LEE – WHITE


Reactivos y Aparatos:
Tubos de prueba de 8 mm diámetro, limpios y secos
Agujas y jeringas para uso endovenosos descartables, estériles.
Baño maría 37 °C
Reloj cronómetro
Procedimiento:
Obtener 3 ml de sangre venosa, anotando la hora exactamente (Para controlar el tiempo de inicio)
Inmediatamente transferir 1.5 ml de sangre a cada uno de dos tubos y colocarlos en Baño María a 37°C.
Luego de tres min. de reposo ir sacando cada uno de los tubos e ir inclinándolos suavemente en 90° cada
minuto, hasta que no se observe desplazamiento de sangre y pueda ser completamente invertido el tubo sin
caerse la sangre. Anotar el tiempo.
Valores referenciales:
Con este método de Lee White los valores normales para hombres y mujeres varía entre: 5 a 8 min.
Los valores referenciales dependen del diámetro del tubo empleado:
Usando tubos de diámetro interno de 11 mm: 9 a 15 min.
Usando tubos de diámetro interno de 8 mm: 6 a 10 min.
Existen otros métodos para determinar el tiempo de Coagulación por ejemplo el método del portaobjetos:
Valor normal de 2 a 8 minutos.
Método del Tubo Capilar: Valor referencial de 3 a 7 min.

Tiempo de Sangría
El tiempo de sangría depende de la elasticidad de la pared vasos sanguíneos y de la cantidad y capacidad
funcional de las plaquetas.
El tiempo de sangría es el tiempo transcurrido desde el momento en que se hace una punción standard
profunda en la oreja o en el pulpejo del dedo y aquél en que la sangre deja de brotar de la herida.
METODO DE DUKE
Reactivos y Aparatos:
Cronómetro, lancetas descartables, desinfectante de piel, papel de filtro.
Procedimiento:
Desinfectar la yema de un dedo (anular) ó el lóbulo de una oreja y punzar con la lanceta descartable standard
de manera que la sangre fluya libremente, gota a gota, sin necesidad de exprimir la piel. Anotar el tiempo
de aparición de la primera gota y, luego con el papel de filtro ir secando cada gota, cada 30 segundos sin
tocar la piel, hasta que deje de sangrar. Anotar el tiempo transcurrido.
Valores Referenciales:
1 a 3 MINUTOS.
TIEMPO DE PROTROMBINA Y TIEMPO DE
TROMBOPLASTINA PARCIAL

En la presente práctica evaluaremos las dos vías de la coagulación por separado:

Primero determinaremos la VÍA EXTRÍNSECA de forma global mediante la determinación del Tiempo
de Protrombina o Tiempo de Quick, que determina los factores involucrados en esta vía como son:
Factor VII llamado Proconvertina, el Factor II ó Protrombina, el Factor V ó Proacelerina y el Factor X
llamado Factor de Stuart-Prower. Cualquier alteración de estos factores será detectado por la determinación
del Tiempo de Quick. Esta prueba no detecta deficiencias en los factores de la vía intrínseca (VIII, IX, XI,
XII).
Para el TP usaremos un exceso de Tromboplastina Tisular o Factor III (de cerebro) y calcio. Puede usarse
Simplastin de Warner Chilcota. El método que emplearemos para TP es el de la Casa Wiener que se
llama Soluplastín y que es una Tromboplastina tisular (de cerebro) de alta calidad e incluye cloruro de
calcio y cloruro de sodio.
Materiales:
Soluplastin (Tromboplastina cálcica) Casa Wiener
Lab. (Rosario. Argentina)
Tubos de ensayo de vidrio de 12 x 75 mm.
Cronómetro
Baño María 37 °C
Asa de alambre Níquel Cromo Nuevas (Bacteriológicas)
Micropipetas 100 y 200 lambdas.

Muestra de plasma sanguíneo:


En un tubo de ensayo contendiendo
0.5 mI de anticoagulante citrato trisódico 3.8 % u oxalato de sodio
añadir
4.5 ml de sangre venosa
Mezclar suavemente, centrifugar y separar el plasma.

Procedimiento para TP:


Usar tubos de 13 x 100 mm:
Pre incubar el plasma: en un tubo de ensayo, marcado (Px) colocar 1 ml del plasma en BM 37 °C, por 3
min. (El saldo del plasma refrigerarlo). (No pre incubar mas de 10 min.)

Pre incubar el Soluplastin: en otros dos tubos de ensayo colocar 0.2 ml de Soluplastin en cada uno y colocar
en BM a 37 °C por 3 min. (No pre incubar mas de 10 min.).

Pipetear 100 lambdas del plasma Pre incubado y añadir rápidamente al tubo conteniendo los 0.2 ml de
Soluplastin, disparando simultáneamente el cronómetro.

Soluplastin pre incubado 37°C 0,2


( incluye calcio) ml

Plasma pre incubado 37°C ml 0.1 y ! cronómetro!!


Simultáneamente,
de inmediato iniciar cronómetro Simultáneo
Mezclar y esperar coágulo y de inmediato frenar cronómetro
Anotar tiempo en segundos.

Mantener el tubo dentro del Baño María cerca de una fuente de luz. Previo al tiempo estimado de
coagulación sacar el tubo del baño e inclinar suavemente por una o dos veces por segundo y detener el
cronómetro en el momento exacto de la aparición del coágulo, que se manifestara por la aparición de muy
discretos hilos de fibrina, en ese instante precisamente para el cronómetro.
Repetir por triplicado esta prueba. Calcular el valor promedio en segundos.

Valores Referenciales:
11- 12 sgs. + - 2 segs del control Normal
El control Normal estará entre 10 a 13 segundos +- 0.5 2DS.
Con estos valores en segundos a través de una curva de calibración podemos expresarlos en porcentaje de
actividad protrombinica en relación a los valores normales: examinemos el siguiente cuadro que muestra
los valores porcentuales:

Tiempo Protrombina Actividad Protrombínica


en segundos Valores porcentuales
Respecto de lo Normal

11 - 12.5 100 %
13.5 60 %
15 50 %
17 40
19.5 30
22 25
24 – 36 20
37 – 40 10
55 – 65 5

El tiempo de Protrombina se encuentra alargado por defectos de Factor I (Fibrinógeno), Factor H


(Protrombina), Factor V (Proacelerina ó F. Lábil), Factor VII (Factor Estable ó Proconvertina), y Factor X
(Factor Stuart-Prower).
El TP se encuentra prolongado en pacientes con dieta deficitaria en Vit K, infantes prematuros, infantes
recién nacidos de madres que están con deficits de Vit K (es la enfermedad hemorrágica del recién nacido).
En la mala absorción de las grasas, ictericia obstructiva, diarrea crónica, etc.
El TP está prolongado también en el daño hepático severo (envenenamientos, hepatitis, cirrosis).
Por Drogas (tipo coumarínico de la terapia anticoagulante)
Presencia de anticoagulantes circulantes, hipofibrinogenemia adquirida o hereditaria.

En resumen, debo decirles que el Tiempo de Protrombina es primariamente usado con TRES fines:
1.- Para la evaluación de los desórdenes de la Coagulación: para investigar la anormalidad de los
factores involucrados en la vía Extrínseca V, VII, X, Protrombina y Fibrinógeno. Y debe ser usada
junto con el tiempo de Tromboplastina Parcial Activada.
2.- Para controlar la terapia anticoagulante oral a largo plazo con coumadinas y derivados indanedionas.
3.- Evaluación de la función hepática: el test del Tiempo de Protrombina es uno de los mas útiles para
evaluar la capacidad del hígado en la síntesis de los factores del complejo Protrombínico: II, VII,
yX .
DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADO.
(TTPA Ó APTT Ó PTT).

El TTPA es un método de investigación de la VÍA INTRÍNSECA de forma global XII, XI, IX, X, VIII, V,
II y I. En esta prueba APPT se usa un activador específico de la Vía Intrínseca (del Factor XII) y es un
Fosfolípido CEFALINA activado con caolín ó sílice micronizado. El test de TTPA consiste en la
recalcificación del plasma en presencia de un exceso de cefalina fosfolípido, (que es un sustituto de las
plaquetas y factor plaquetario) preparado a partir de cerebro de conejo y de un activador Kaolín tamponado.
Esta prueba usa este activador específico de la vía intrínseca que es el Factor plaquetario -3 sustituido por
la cefalina fosfolípido de cerebro de conejo y que tiene además un activador kaolín en finísimas partículas
ó sílice micronizado (activador para el Factor XII) de la vía intrínseca solamente y un tampon de piperazida
estanolsulfónico. Además este reactivo tiene una especial reactividad con la presencia de heparina lo cual
lo hace especial para el monitoreo de la terapéutica con heparina.
Emplearemos en esta practica el método de la casa WIENER LAB. Que usa cefalina fosfolípido y que se
llama reactivo APTTEST

METODO DE CASA WIENER LAB.


PTT Ó APT TEST

A. REACTIVOS: Cloruro de calcio, listo para usar (0.0125 mol/l y ClNa 0.1 mol/l)
B. Reactivo de APTT: al vial del liofilizado, añadir el volumen de agua indicado en el rasco
que es 2.5 cc de agua destilada, tapar y mezclar suave por inversión, queda así listo el
homogenizado.
C. Obtencipón de la muestra de sangre:
A 4.5 cc de sangre venosa añadirle 0.5 cc del anticoagulante oxlato de sodio. Centrifugar para
separar el plasma.
D. Distribuir los reactivos en la lsiguiente forma utilizando tubos de vidrios de 12 x 75 mm de diámetro
o 13 x 100 ml:

TUBO 1 TUBO 2

Plasma desconocido 100 ul (LAMBDAS)

PLASMA CONTROL 100 ul (LAMBDAS)


NORMAL O ESTANDAR
REACTIVO DE APTT 100 ul (LAMBDAS) 100 ul (LAMBDAS)
(HOMOGENIZADO)

Mezclar e incubar por 3 minutos cada uno de los tubos a 37°C.

Al tubo N° 1 añadirle solución de cloruro de calcio pre incubado a 37 °C …. 100 ul.


Inmediatamente disparar el cronometro, agitar suavemente y mantenerlo en el baño maría por 25 segundos
solamente y luego retirarlo para observar la formación del coagulo, que se manifestara por la aparición de
filamentos de fibrina inmediatamente detener el cronómetro, este es el tiempo de Tromboplastina Parcial,
valores normales de 33 a 48 segundos.
Al tubo N°2 que es el control normal le añadiremos luego Cloruro de calcio 100 ul y procederemos
exactamente igual que el caso anterior y servirá como control normal, cuyos valores normales van desde 33
a 48 segundos.

También podemos emplear los reactivos de cefalina con caolín de la casa francesa que vemos a
continuación.
Equipos, reactivos y materiales .-(idem que TP).-

Procedimiento para APTT:


Emplearemos CK Prest™ activado (Cefalina con Kaolin) (APTT) (Diagnostica Stago-Francia).
Reactivo N° 1: Cefalina
Reactivo N° 2: Kaolín tamponado :
Agitar el contenido del frasco N°2 y transferido completamente dentro del frasco N°1. Dejar
que repose 30 min. para embeber el gel. Y después de la imbibición, agitar
suave y circunferencialmente para homogenizar la mixtura.

Solución de Cloruro de calcio (C12Ca): 0.025 M


Cl2 Ca anh ……………………..1.38 gm
Agua destil ……………………………..500 ml

Pipetas automáticas de 100 lambdas

En un tubo ensayo 13 x 100mm que está previamente en el BM a 37 °C colocar:


Plasma paciente 0.1 ml
Plasma paciente duplicado 0.1 ml
Plasma paciente triplicado ó Control Normal 0.1 ml
React 1 Cefalina Bien Reconstituido
0.1 ml
y resuspendido

Mezclar y pre incubar 37°C


3 minutos
Exacto
Simultáneamente: Añadir Cl2Ca 0.025M
0.1 ml
precalentado e INICIAR CRONOMETRO

Mezclar y esperar coágulo. Parar cronómetro


inmediatamente que aparezca el coágulo
Anotar tiempo en segundos EXACTO

Los valores referenciales varían de 30 a 45 segundos y deben reportarse en relación a un control normal
Cuando el Tiempo Tromboplastina Parcial está prolongado, pero el Tiempo de Protrombina es Normal nos
indica un a alteración de alguno de los factores de la vía intrínseca de tipo congénito: VIII, IX (Hemofilias),
XI, XII. Si todos estos factores están normales, puede haber una deficiencia de HMWK kininógeno (Factor
Fritgerald). También se encuentra alargado el APPT en deficiencias adquiridas ó condiciones anormales
como: Enfermedades hepáticas, Coagulopatía por consumo, anticoagulantes circulantes, en la terapia
anticoagulante oral, o en la heparización. Ó en el tratamiento con inhibidores de la trombina como hirudina,
argatroban., etc

Vía Intrínseca Vía Extrínseca


XII FACTOR

Pre K TISULAR
Tiempo
HMWK
Protrombina
Tiempo Tromboplastinas
Tromboplastina VII
XI Tisulares:
Parcial Simplastin
Activada Soluplastin
Celafina y kaolín
(activador del XII) IX
APPT
VIII

VÍA FINAL
COMUN
X
V
PF -3

Protrombina Trombina
Fibrionógeno Fibrina
XIII

Referencias Bibliográficas:
Clinical Hematology Wintrobe. EJ. Lea Feboger. Phila. London. 1998
Technical Hematology Simmons. Lippincott. 1999.
Laboratory Methods by J. B. Henry. Saunders Co. 1999.
The Principles and Practice of Blodd Grouping Addine G Mosby Co 1993
Fisiología Médica W Ganong El Manual Moderno 2002
An Introduction to Inmunohematology N Bryant W B Saunders Co. Pfila. London 1997
GRUPOS SANGUÍNEOS Y FACTOR RH

Introducción:
En 1900, Landsteiner descubrió que el suero de algunas personas aglutinaba los glóbulos rojos de otras y
que éste fenómeno podría ser usado para clasificar a las personas en diferentes fenotipos de grupos
sanguíneos. Se reconocen 4 fenotipos cimunes: O, A, B, y AB. También se han identificado antígenos de
los subgrupos del tipo A y B.
Cada tipo de glóbulo rojo transporta un Antígeno determinado, específico, que le es característico. El plasma
de las personas tiene Aglutininas Naturales ó Anticuerpos diferentes al de su propio grupo, así por ejemplo
las personas del Grupo A tienen aglutininas Anti B. El plasma de las personas del Grupo B tiene Aglutininas
(Anticuerpos naturales) Anti A. El plasma de las personas del Grupo O tiene un título bajo de Aglutininas
Anti A y Anti B. (Es muy importante saber que algunas personas del Grupo O pueden tener un título elevado
de aglutinininas Anti A y Anti B y ser donantes peligrosos).
Es absolutamente necesario y obligatorio hacer siempre una prueba compatibilidad mayor y menor entre el
Donante y el Receptor antes de realizar una transfusión de sangre cualquier sea el tipo de sangre y/o Rh.
El fenotipo ABO de una persona es determinado mediante reacciones de aglutinación de los hematíes con
antisueros monoclonales Anti A, Anti B, Anti AB y antisueros de los Subgrupos correspondientes.

Determinación del Grupo Sanguíneo:


Este procedimiento se basa en la aglutinación de los glóbulos rojos (que transportan un Antígeno específico),
que se produce cuando está en presencia de su correspondiente anticuerpo específico.
Los reactivos usados para la tipificación de los grupos del Sistema ABO contienen anticuerpos
monoclonales IgM. Estos reactivos producirán aglutinación directa de los glóbulos rojos que transporten el
antígeno específico correspondiente. La determinación del grupo sanguíneo puede hacerse por el método
del tubo de ensayo ó por el método en lámina portaobjeto.

MÉTODO EN LÁMINA PORTAOBJETO:

Materiales y Reactivos:
Suero monoclonal Anti A
Suero monoclonal Anti B
Suero monoclonal Anti AB
Lámina excavada o lámina portaobjetos
Lancetas descartables
Muestra de sangre
Algodón y desinfectante

Procedimiento para Determinar el Grupo Sanguíneo


1.- Dividir una lamina portaobjetos en 3 secciones: izquierda, central y derecha con lápiz de cera marcador.
La muestra de sangre puede obtenerse de la yema del dedo o por venipuntura.
Colocar una gota suero Anti A en el lado izquierdo y una gota del suero Anti B en el centro y una gota del
suero Anti – AB en la derecha de una lámina de vidrio plana.
Colocar una gota de sangre al lado de cada una de las gotas del antisuero correspondiente sin tocar los
reactivos !!, para evitar contaminación cruzada, y luego mezclar bien usando aplicadores o baguetas
distintas.

2.- Hacer girar el porta objetos con la mano y observar si existe aglutinación macroscópica. La aglutinación
se producirá en unos pocos segundos. La lectura deberá hacerse antes de que se seque la mezcla. El tiempo
máximo habitual es de tres minutos.
INTERPRETACION DE LAS PRUEBAS CON ERITROCITOS
EN LA DETERMINACION DEL GRUPO SANGUÍNEO
Suero Anti Suero Anti Suero Anti
Grupo Sanguineo
-A -B - AB
O - - -
A + - +
B - + +
AB + + +

+ : Indica aglutinación macroscópica


- : Indica que no hay aglutinación
------------------------------

FACTOR RHO (D)


Aparte de los Antígenos del sistema ABO, existe otro que es el sistema de Antigenos del Rh que son de gran
importancia fisiológica y clínica.
El Factor Rh (Aglutinógeno o Antígeno) llamado así por que fue estudiado por primera vez en los monos
del género Rhesius, es en realidad, un sistema compuesto por mucho Antígenos: Ver Tabla

Fisher-Race Wiener
Dce Rho
DCe Rh1
DcE Rh2
Dce rh (hr’)
dCe rh’
dcE rh”
dCE Rhy
DCE Rhz

El factor D, es con mucho, el más antigénico y el término “Rh Positivo”, como generalmente se usa, significa
que el individuo tiene Aglutinógeno D.
El individuo Rh Negativo no tiene antígeno D y solo forma la aglutinina Anti D cuando se le inyectan
células D positivas. El suero que se emplea rutinariamente para tipificar el Rh es un suero Anti D.
El 85% de los caucásicos son Rh Positivos y el 15% restante Rh Negativos. Las personas Rh negativas (D
Negativas) que reciben una transfusión de sangre Rh Positiva (aún muchos años antes) forman Anticuerpos
Anti Rh y tienen títulos Anti D apreciables y dan reacciones transfusionales graves cuando reciben una
transfusión de sangre Rh (D) Positiva.
Igualmente sucede cuando una madre Rh (D) Negativa concibe un hijo D positivo, porque pequeñas
cantidades de sangre del feto se filtran a la circulación materna en el momento del parto y desarrollan títulos
elevados de aglutininas Anti Rh durante el post parto. Durante el embarazo siguiente las aglutininas
desarrolladas contra el antígeno RH cruzan la placenta y llegan al feto que ha heredado el antígeno Rh
positivo del padre y se produce la reacción Antígeno-anticuerpo que produce hemólisis y la Enfermedad
Hemolítica del Recién Nacido (Eristroblastosis Fetal).
DETERMINACIÓN DEL FACTOR Rh.
Materiales y Reactivos:
Reactivo Antisuero Monoclonado Anti - Rho (Anti D)
Lámina portaobjeto
Varillas de vidrio ó aplicadores
Lancetas descartables
Desinfectante y Algodón
Lápiz de cera marcador.

Procedimiento:
En una lámina portaobjetos se colocan 2 gotas de la sangre problema.
Al costado de las gotas de sangre colocar una gota del Reactivo Suero Anti Rh. Mezclar bien. Observar
inmediatamente para ver si existe o no aglutinación.

INTERPRETACIÓN:
Sangre total paciente + RESULTADO
Suero Anti- Rh (D)

AGLUTINACIÓN Rh (D) POSITIVO


NO AGLUTINACIÓN Rh (D) NEGATIVO

INVESTIGACIÓN DE LA SENSIBILIZACIÓN DE LOS HEMATÍES


Cuando algún anticuerpo (por ej. Garnmaglobulina - IgG) se fija y recubre al glóbulo rojo se dice que el
eritrocito está sensibilizado. Los eritrocitos pueden sensibilizarse in vivo, y esto ocurre por ejemplo en la
Eritroblastosis Fetal (EF), que es una enfermedad del Feto y del Recién nacido y se caracteriza por
aglutinación y fagocitosis de los eritrocitos del feto, que se produce cuando una madre siendo Rh Negativa
y el esposo Rh Positivo, concibe un niño Rh positivo.
El niño hereda el Rh Positivo del padre. Durante el embarazo la madre desarrolla Aglutininas Anti - Rh por
la exposición al antígeno (Aglutinógeno Rh) del niño. A su vez, éstas aglutininas Anti Rh de la madre
difunden por la placenta al feto y recubren los glóbulos rojos del feto. Los hematíes del niño están ahora
sensibilizados y esto produce la aglutinación y lisis de los hematíes del propio hijo. Durante el primer
embarazo puede no producirse daño, pero durante el segundo embarazo el 3 % presentarán E F; durante el
tercer embarazo el 10 % presentarán EF, y así va aumentando la incidencia.
Se puede investigar la presencia de estos anticuerpos (IgG- anti Rh) que recubren a los hematíes del niño
mediante el Test de Coombs Directo (test de Antiglobulina directo) y que es el objeto de la presente
práctica.

TEST DE COOMBS DIRECTO:


Esta Prueba se realiza en los hematíes del paciente.
Fundamento
Esta prueba se fundamenta en la aglutinación de los eritrocitos humanos sensibilizados por anticuerpos
gamma-globulínicos que se produce cuando se les coloca en presencia de un suero antihumano gamma-
globulínico preparado en conejos. Este suero antiglobulínico puede ser específico para globulina IgG, ó
también puede ser un preparado monoclonalmente obtenido.
Esta Prueba DIRECTAMENTE demuestra la sensibilización de los eritrocitos que se ha producido in vivo.
Materiales y Reactivos:
Centrífuga Clínica y Microscopio Binocular
Suero Antiglobulínico de Coombs (Gamma IgG) (Monoclonal)
Hematíes del paciente (Niño)
Solución Salina 0.85 % Tubos de prueba de vidrio 13 x l00 mm y 12 x 75 mm; algodón, desinfectante de
piel (Alcohol iodado), ligadura venosa, aguja y jeringas descartables. Varillas de vidrio ó mondadientes de
plástico, pipetas Pasteur.

Procedimiento:
Lavado previo de los glóbulos rojos:
1.- Medir aproximadamente 0.4 ml de sangre y colocar en el fondo de un tubo de prueba de 13 x 100 mm,
añadir luego 6 ml de solución salina 0.85 %. Mezclar suavemente por inversión.
2.- Centrifugar a 3400 rpm. Por 30 segundos hasta que las células se empaqueten al fondo del tubo.
3.- Decantar la solución salina completamente, limpiando la boca del tubo con papel servilleta.
4.- Repetir el lavado dos veces mas, añadiendo una pequeña cantidad de solución salina al comienzo y
mezclar para suspender bien los eritrocitos; y luego añadir una mayor cantidad de solución salina lavando
hacia abajo la pared interna del tubo de prueba. Después del tercer lavado el sobrenadante debe estar
completamente limpio de sangre, absolutamente límpido y transparente.
5.- Ahora, calcular (aproximadamente) el volumen de los glóbulos rojos lavados, anotar este volumen, y
añadir una cantidad de solución salina como para hacer una suspensión de glóbulos al 2%
6.- En otro tubo de prueba colocar 2 gotas de esta suspensión al 2 % y añadir 1 gota de 1 suero de
Coombs.
7.- Centrifugar a 5000 rpm. durante 15 segundos.
8.- Muy suavemente, con gran cuidado, percuta con un dedo el fondo del tubo, lo suficiente para dislocar el
fondo celular y observar la aglutinación tanto macroscópica como microscópicamente con objetivo en seco
a 40 X.

Resultado:
La presencia de aglutinación indica una Prueba de Coombs Directa POSITIVA, demostrando que los
eritrocitos están sensibilizados.
Ausencia de Aglutinación: Test de Coombs Directo: NEGATIVO.

Interpretación:
Esta Prueba Coombs Directa es POSITIVA en los casos de:
Eritroblastosis Fetal ,Anemias Hemolíticas Autoinmunes y sirve también para el diagnóstico de
reacciones transfusionales debido a Incompatibilidad sanguínea.

TEST DE COOMBS INDIRECTO


Detecta los anticuerpos presentes en el suero del paciente (madre) y para ello deben sensibilizarse primero
in vitro algunos glóbulos rojos de otra persona de grupo conocido (Tipo O por ejemplo) y luego de haber
sensibilizado los glóbulos rojos escogidos se les aplica el Coombs Directo. Para sensibilizar a los para
glóbulos rojos seleccionados (conocidos) se debe primero incubar el suero del paciente (madre) con los
eritrocitos seleccionados (grupo O por ejemplo) para que las células se sensibilicen (es decir, se recubran
con el anticuerpo sérico) si es que está presente, y, después averiguar si están sensibilizadas aplicándoles el
test de Coombs Directo, tal como hemos descrito líneas arriba..

TEST DE COMPATIBILIDAD CRUZADA

MUESTRAS Y
TUBO A TUBO B
REACTIVOS
Suero del Paciente
2 gotas 2 gotas
Receptor
Hematíes del Dador
Suspensión al 2 % 2 gotas 2 gotas
En salina
Albúmina Bovina
22%
---------- 2 gotas
Centrifugar (serofuga
sí sí
a 1000 rpm) 1 minuto

EXAMINAR ambos tubos por aglutinación ó hemólisis.


Luego INCUBAR ambos tubos A y B, en BM a 37 °C por 15 minutos
CENTRIFUGAR por 1 minuto a 1000 RPM. Lectura del tubo B por aglutinación ó hemólisis.

Luego CONTINUAR con el tubo "A": Tres lavados en sol salina 0.9 %
Añadir suero de Coombs 2 gotas
Centrifugar a 1000 rpm durante 1 min
Lectura por aglutinación ó hemólisis

Interpretación de Anticuerpos:
TUBO "A": detecta incompatibilidad hacia: Sistema ABO , MN, P, Lewis
TUBO "B": detecta incompatibilidad: Antic. Rh, Duffy, Kidd, Cellano y Antic.calientes.
PRÁCTICA SOBRE LA FISOLOGÍA DEL APARATO INMUNE

FUNDAMENTOS.-
La definición contemporánea del término inmunidad incluye todos aquellos mecanismos que le dan al
animal la capacidad de reconocer tanto los materiales extraños a su propio organismo para neutralizarlos,
eliminarlos o metabolizarlos sin injuria a sus propios tejidos.
Las respuestas inmunes pueden ser clasificadas en dos categorías:
a) Respuestas inmunológicas específicas:
Estas respuestas dependen de la exposición a una partícula o sustancia de configuración extraña, el
subsecuente reconocimiento y la reacción hacia ella.
b) Respuestas inmunológicas no específicas:
Se producen siguiendo a una exposición inicial y subsiguiente exposición a una configuración
extraña.
La selección en diferenciar lo propio de lo no propio no depende de un reconocimiento específico.
En la actualidad se consideran que las respuestas inmunológicas sirven a tres funciones:
Defensa, sostenimiento de la homeostasis celular y vigilancia celular.
Función Naturaleza del Ejemplo Aberraciones
estímulo Hiper Hipo
Inmunológico
Defensa Exógeno Microorganismos Alergia Deficiencia
Polen inmune
Homeostasis Endógena Remoción de células Enfermedad
celular Exógena viejas o dañadas autoinmune:
Formación de auto
anticuerpos
Artritis
reumatoidea, lupus.
Vigilancia Endógena Remoción de células Enfermedad
celular Exógena mutantes. maligna

FILOGENIA DE LA INMUNIDAD NO ESPECÍFICA.-

En los animales más primitivos, como en los unicelulares, el mecanismo de resistencia es la fagocitosis la
cual es esencialmente una función nutritiva: y en las formas evolutivas más elevadas involucra también un
mecanismo defensivo. A medida que evolucionan a formas más complejas aprenden a reconocer los cuerpos
extraños. En los invertebrados superiores se desarrollan un sistema vascular en el cual la fagocitosis se
desarrolla además por medio de células circulantes y en el ser humano por fin hay cinco células circulantes
(leucocitos), tres de los cuales son fagocitarias o fagocíticas (monolitos, polinucleares y eosinófilos).
Entonces filogenéticamente los elementos no específicos más importantes, fagocitosis y respuesta
inmunitaria vienen desde la forma
más primitiva de vida. Con la evolución, estos mecanismos persistieron y fueron suplementados e
implementados por la adición de nuevos componentes tales como la
inmunidad específica y los sistemas de amplificación de esta inmunidad, por ejemplo el complemento,
coagulación, etc. Entonces, pues, en resumen, estos mecanismos antiguos no fueron reemplazados por la
evolución de las especies sino que más bien continuaron y fueron reforzados adicionalmente con nuevas
respuestas (amplificadoras).

FILOGENIA DE LA INMUNIDAD ESPECÍFICA.-


La primera evidencia de la inmunidad específica apareció en los vertebrados primitivos que presentan un
sistema linfoide diseminado (elasmobránquios) que generan inmunoglobulinas M. posteriormente en los
anfibios apareció la inmunoglobulina G, en los conejos aparece la Ig A y en el hombre se añaden la Ig D y
E.
Con la evolución filogenético también aprendieron a desarrollar sustancias y sistemas de amplificación y
reforzamiento de la eficiencia de la resistencia como el sistema complemento.

Invertebrados Vertebrados
Amebas En lampreas, ciclóstomos, peces de rio, etc. Anfibios Mamíferos Ser humano
Fagocitosis Ig M Ig M Ig M Ig M
Ig G Ig G Ig G
IG A Ig A
Ig D
Ig E
Sistemas de Sistemas de
amplificación amplificación
biológicas biológicas

ONTOGENIA DE LA RESPUESTA INMUNE EN EL HOMBRE.-


La maduración del sistema inmune en el hombre comienza durante el segundo a tercer mes de la gestación
a partir de las células madres pluripotenciales o hemocitoblastos en la médula ósea se generan dos líneas
celulares:
Hematopoyética y linfopoyética, según el siguiente esquema

ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE LAS INMUNOGLOBULINAS

Ig Función Estructura Cadena Cadena Concentración


pesada Adicional Plasmática
mg/dl
Ig G Fijación del Monomérica Gama 1 700 - 1600
Complemento gama2
Gama 3
gama 4
Ig A Protección Monómero, dímero o Alfa 1 J, CS 70 -400
(secretora) trímero, con cadena J Alfa 2:
Mucosas – secreciones
externas lágrimas,
secreción intestinal,
bronquial
Ig M Fijación del Pentámero con Mu J 40 -260
complemento cadena J
Ig D Reconocimiento de Monomérica Delta 3
antígeno por las células
B.
Ig E Liberación de Monomérica Épsilon 0.05
histamina por los
basófilos (alérgias) y
de reaginas (prot
inespecíficas: sífilis,
pian)

El rol fisiológico de la inmunidad tumoral o respuesta bursal en la defensa del huésped es la síntesis de
anticuerpos (cuadro anterior) ayudando a prevenir la infección y esto lo hace por medio de varios
mecanismos: opsonización, antitoxicidad, activación del complemento, neutralización de los antígenos,
uniéndose al antígeno ( bacterias o virus) lo neutralizan impidiendo su acción ganándole la entrada a la
célula huésped.

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA.

En la presente práctica tiene por objeto determinar la respuesta bursal en personas normales y en pacientes
con inmunodeficiencia por desnutrición, a través de la determinación cuantitativa de Ig A, Ig M, Ig G
empleando anticuerpos específicos que formen inmunocomplejos insolubles, turbios, y su medición
espectrofotométrica.

MATRIALES Y REACTIVOS.

Solución salina fisiológica 9/1000ml


Solución anticoagulante: heparina sódica, frasco por 5 ml, 500 U.I./ml (LIQUEMINE).
Jering descartabla por 5 ml y aguja de 20x1´´.
Antisueros: anti Ig A, anti Ig M, anti Ig G.
Buffers Ig A, IgM, Ig G.
Solución patrón de proteínas de concentración conocida.
Suero sanguíneo o plasma heparinizado normal
Suero sanguíneo o plasma heparinizado de paciente desnutrido.
1 sapo grande para punción intracardiaca
Equipo de disección completo y estilete para obtener animal espinal..
Espectrofotómetro y microcubetas.
Micropipetas automáticas de 0 á 200 y de 0 a mil microlitos o lambdas.
Tubos de prueba 10x75 mm
Cronómetro

PROCEDIMIENTO.-
Se repartirá el trabajo en 5 mesas diferentes del siguiente modo:
Mesa 1: determinara en un suero normal la Ig A
Mesa 2: determinará en un suero normal la IgM
Mesa 3. determinará en un suero normal la Ig G
Mesa 4: determinará en la sangre de un sapo la Ig A (punción intracardiaca con anticoagulante).
Mesa 5: determinará en el suero de un paciente desnutrido la Ig G.
Distribuir las muestras y reactivos según los siguientes protocolos para cada inmunoglobulina.
Nota: las muestras problemas para el dosaje de cada inmunoglobulina deberán ser diluídas al 1/10 antes de
empezar a trabajar:
Suero problema: ----------------------------- -------------- 0.1 ml
Solución salina fisiológica: (9 por mil) ------------------ 0.9. ml

DOSAJE DE Ig A
Suero diluído 1/10 : 50 ul
Buffer IgA 900 ul
Homogenizar y leer la absorbancia en 340 nm (DO1) llevando el aparato a 0 con agua destilada y luego
agregar:
Antisuero anti Ig A 80 ul
Mezclar e incubar a temperatura ambiente
Leer la absorbancia nuevamente a 340 nm (DO2), llevando el aparato a 0 con agua destilada.

CÁLCULOS DE LOS RESULTADOS

Calcular la diferencia de absorbancia DO2 - DO1 correspondiente a cada muestra analizada. Interpolar el
valor de esta diferencia en la curva de calibración para determinar la concentración en mg/100 ml
correspondiente o multiplicar por el factor de calibración .

VALORES DE REFERENCIA NORMALES:


70 – 400 mg/dl

DOSAJE DE LA Ig G
Suero diluído 1/10 : 40 ul
Buffer IgG 900 ul
Homogenizar y leer la absorbancia en 340 nm (DO1) llevando el aparato a 0 con agua destilada y luego
agregar:
Antisuero anti Ig G 160 ul
Mezclar e incubar a temperatura ambiente
Leer la absorbancia nuevamente a 340 nm (DO2), llevando el aparato a 0 con agua destilada.

VALORES DE REFERENCIA NORMALES:


700 – 1600 mg/dl
DOSAJE DE LA Ig M
Suero diluído 1/10 : 60 ul
Buffer Ig M 900 ul
Homogenizar y leer la absorbancia en 340 nm (DO1) llevando el aparato a 0 con agua destilada y luego
agregar:
Antisuero anti Ig M 100 ul
Mezclar e incubar a temperatura ambiente
Leer la absorbancia nuevamente a 340 nm (DO2), llevando el aparato a 0 con agua destilada.

VALORES DE REFERENCIA NORMALES:


40 – 260 mg/dl
DISCUSIÓN:
Los alumnos compararán los resultados en las distintas mesas en relación a la respuesta bursal encontrada
para Ig A, Ig G e Ig M en las personas normales, desnutridos y en el sapo y explicarán las razones de las
diferencias encontradas

FUNCIÓN GLOMERULAR
DEPURACIÓN DE CREATININA ENDOGENA.

Es una medida muy aproximada de la función glomerular.


La filtración glomerular es un proceso mecánico que se produce como resultado de un juego de presiones:
1. La presión hidrostática dentro del glomérulo es + 60 mmHg (70% de la presión aórtica)
2. Se oponen a la filtración:
a. La presión oncótica proteica 32 mmHg
b. La Presión Inters. caps. Bowman 18 mm Hg
- 50 mm Hg
Presión Neta de Filtración +10 mmHg

El riñón trata, dentro de ciertos límites, de mantener una presión de filtración eficiente mediante mecanismos
de aumento del tono de la arteriola eferente.
En 24 horas se filtran 180 litros de líquido por los glomérulos pero se excretan solamente 1 a 1.5 litros de
orina en 24 horas, lo que quiere decir que los tubulis reabsorben 178.5 a 179 litros en 24 horas.
No solamente hay reabsorción de agua a nivel tubular sino también de muchas otras sustancias del filtrado
glomerular y que son útiles al organismo como glucosa, aminoácidos, sodio, potasio, cloro, etc.
El filtrado glomerular tiene todos los constituyentes y en la misma proporción que en el plasma sanguíneo
exceptuando las proteínas.
La densidad del filtrado glomerular es 1010 y su pH es 7.40.
Si este filtrado glomerular no fuese sometido a la acción tubular el organismo perdería grandes cantidades
de agua, sales, elementos útiles como glucosa, aminoácidos, etc. Junto con los productos finales del
metabolismo de las proteínas como la urea, creatinina, ácido úrico, y otros.

Concepto de Clearance:
El concepto de CLEARANCE fue introducido por Van Slyke, la palabra clearance significa depuración o
limpieza y se entiende por Clearance o Depuración renal de una sustancia al número de centímetros cúbicos
de plasma que son liberados de dicha sustancia en la unidad de tiempo (minuto), por el riñón. Si una
sustancia es únicamente filtrada por el glomérulo, y no reabsorbida, ni secretada por el túbuli, su depuración
medirá el número de ml que los glomérulos filtran en un minuto. Es el caso de la Inulina, el manitol,
thiosulfato, etc., que solo se filtran por el glomérulo, pero no se reabsorben ni secretan por los túbulis
renales.
La depuración de una sustancia se obtiene dividiendo la cantidad de dicha sustancia excretada en la orina
en la unidad de tiempo entre la cantidad que existe de dicha sustancia en un ml de plasma.
Llamemos V’ el Vol. Minuto de orina; (Vol. recolectado/tiempo de recolección en minutos (cc/min.))
U a la concertación de una sustancia “x” en orina mg/ml y
P a la concentración de la sustancia x en 1 ml de plasma mg/ml
SI MULTIPLICAMOS U x V´ , NOS DARA LA CANTIDAD DE SUSTANCIA X EXCRETADA EN 1
min. y LA FORMULA DE LA DEPURACIÓN SERÁ: C=UxV
P
Generalmente se recolecta orina durante 12 o 24 horas.
Se escoge la CREATININA para medir la filtración glomerular porque el manejo renal de este metabolito
es muy parecido al de la Inulina y Manitol, por eso su Depuración es una medida muy aproximada de la
filtración glomerular, y se usa como índice de función glomerular.

EJEMPLO UN SUJETO TIENE 55 Kg. DE PESO Y MIDE 1.65 m, EL DOSAJE DE CREATININA EN


LA SANGRE ES 0.9 mg/dl EN SUERO.

Es decir 0.009 mg/ml entonces P = 0.009 mg/ml


El volumen urinario fue de 1500 cc en 24 horas: 1500/1440 – 1.04 ml/min., es decir V = 1.04 ml/min.
La concentración de creatinina en la orina fue de 100 mg %, es decir 1.5 mg/ml.
La depuración será:

C = 1.0x1.04 = 115 ml/min.


0.009

Quiere decir que 115 cc de plasma a su paso por el glomérulo han sido liberados de toda su creatinina en 1
minuto. PARA NUESTRO PACIENTE DE PESO: 55 Kg. Y TALLA: 1.65 m. le corresponde una ASC. de
1.60 m2 de acuerdo al Nomograma según la formula de Du Bois.

Depuración corregida = depuración sin corregir x 1.73 / ASC = ml/min./1.73 m2 de ASC


ASC
115 mlmin 1.60 m2
X 1.73 m2

X= 115 x 1.73 = 124 ml/min./1.73 m2 ASC (DEPURACIÓN CORREGIDA)


1.60

METODO PARA EL DOSAJE DE CREATININA EN SANGRE Y ORINA

En esta práctica emplearemos el Método espectrofotométrico colorimétrico de la casa comercial WIENER


LAB. Que es el método de Jaffé modificado empleando picrato alcalino en medio taponado con glicina,
previa desproteinización de la muestra de suero con ácido pícrico directamente proporcional a la
concentración de creatinina cuando se mide en 510 mm de Longitud de onda. Se comparará con la
absorbancia de un patrón de creatinina de concentración conocida.

Equipos, Materiales y Reactivos


01 Espectrofotómetro y 01 Centrifuga clínica
Jeringa descartables de 10 ml con aguja 20 x 1”
Algodón, alcohol yodado y ligadura
09 tubos de ensayo de 13 x 100 mm en cada mesa
01 tubo de ensayo de 12 x 75 mm en cada mesa
06 Pipetas de 1 ml graduadas al 1/100 en cada mesa
03 Pipetas de 5 ml graduadas al 1/10 en cada mesa
Frasco con agua destilada 100 ml en cada mesa
Pipetas Pasteur de Vidrio (capilares) con chupón jebe, para separar sobrenadante.
Frascos de boca ancha de 1 litro de capacidad ó beakers de plástico de 1 litro para obtención de muestras de
orina.
Reactivo N° 1: Ácido Pícrico 41.4 mMol / Lt
Reactivo N° 2: Buffer de Glicina / Na OH 1 mol/Lt (pH = 12.4). Muy cáustico (alcalino): Precaución.
Sol. Standard de Creatinina: 2 mg/dl

Procedimiento
Recolectar muestra de orina de 12 ó 24 horas para dosaje de creatinina urinaria. Si se recolecta en frasco
estéril, la muestra guardada en refrigeración puede durar 4 días. Medir exacto el volumen y tiempo de
recolección. Anotar
El mismo día de la recolección de orina obtener la muestra de sangre para el dosaje de Creatinina sérica.

1.- Primer paso.- DESPROTEINIZACION de la muestra de suero:


En un tubo prueba 13 x 100 mm ó 12 x 75:
Medir 0.7 ml de suero y añadir 3.5 ml Reactivo N° 1 (ácido pícrico)
Mezclar por inversión y reposo 10 minutos.
Centrifugar a 3000 RPM x 5 min.
Separar el sobrenadante del suero con la pipeta Pasteur y trasladarlo a otro tubo y marcarlo:
Sobrenadante suero (SS).
2.- Disponer los tubos de prueba 13 x 100 mm según la siguiente tabla y marcarlos según lo indicado:
Tubos Blanco Standard Sobrenad del Orina Dilución
Suero (SS) 1/50
Sobrenadante Suero SS ml 3
Sol St. : 2 mg/dl ml 0.5
Orina Dil 1/100 ml 0.5
Agua Destil. Ml 1.0 0.5 0.5
React Nº 1 (Ac.Pícrico 41.4 mMol/l) ml 2 2 2
React Nº 2 (Buffer Glicina alcalino pH 12.4) ml 0.5 0.5 0.5 0.5

Mezclar por inversión. Reposar 15 min. a Temp. Ambiente.


3.- Lecturas: Colocar el Espectrofotómetro en 510 mm de Long. Onda, y colocando el espectofotometro en
100% de T osea 0% de Absorbancia.
Leer la Absorbancia de cada uno de los tubos anotando las absorbancias de: Blank, estándar, sobrenadante
del suero (SS) y de la orina diluida.

4.- Cálculos.

a.- Creatinina Sérica (Crs): mg/dl

Crs = Conc St X Abs suero = 2 X Abs suero – Abs Blank = mg/dl


Abs St – Abs blank Abs St – Abs Blank

b.- Creatinina en Orina (CrO): mg/dl

Exactamente igual al anterior, sustituyendo las absorbancias del suero por las de la orina y se multiplica
ademas por 100 (factor de dilución de la orina).

c.- Calcular la Depuración Creatinina Endógena (Corregida por el ASC):

Según: Depuración = U x V X 1.73 m2


P ASC m2

Nota: No se olvide de usar siempre las mismas unidades de medida para los cálculos
Por ejemplo:
U = CrO en mg/ml
V = Vol. Min ml/min
P = Crs mg/ml

Valores Referenciales
Depuración de Creatinina endógena:

Hombres: De 97 hasta 137 ml / min. / 1.73 m2 ASC


Promedio 120 ml / min. / 1.73 m2 ASC (+/- 25)
Mujeres: De 88 hasta 128 ml / min. / 1.73 m2 ASC
Promedio 85 ml / min. / 1.73 m2 ASC
Creatinina Sérica Adultos Varones: 0.8 a 1.2 mg / dl
Creatinina en Orina: 1.0 a 1.6 gm en 24 hs (15 a 25 mg/Kg. peso Corporal/24 hs)

Depuración de Creatinina Aumentada:


Gestación, Ejercicio físico.
Depuración de Creatinina Disminuida:
Insuficiencia renal glomerular ó Insuficiencia Cardiaca.
Edad avanzada: Disminuye aprox. 1 ml / min. / año después de los 40 años.
Medicamentos nefrotóxicos
Mala recolección urinaria
FUNCIONES DE CONCENTRACIÓN Y DILUCIÓN
Fundamento
El riñón tiene una remarcable capacidad para regular el volumen urinario diario concentrado y diluyendo la
orina. Esta característica fisiológica es una de las más importantes del riñón normal, y se conoce desde hace
más de 50 años. Se realiza según un mecanismo de flujo a contracorriente multiplicador.
Adaptando el principio fisicoquímico del flujo térmico a contracorriente, a la presión osmótica diremos que
en el asa de Henle ocurre un fenómeno similar, lo mismo que a nivel de la Vasa Recta, pero con electrolitos
y que estudiamos con detalle en nuestras clases teóricas. Este mecanismo impide que se disipe la gradiente
de Osmolaridad llegando a tener así el intersticio medular y papila hasta 1200 mOsm/Kg. agua. (El Plasma
tiene 280 a 290 mOsm/Kg. agua). El trasporte activo de Cloro en el Asa de Henle es también responsable
del sostenimiento de esta alta osmolaridad en el interticio medular renal.
Esta práctica tiene por objeto aprender a medir estas capacidades de concentración y dilución de la orina por
el riñón a través de los parámetros fisiológicos siguientes:
Densidad Urinaria, relación Uosm/Posm, Cosm, TcH2O sometiendo a una persona sana a una dieta
hidropónica primero y luego a una sobrecarga acuosa.

Definiciones previas.-
Posm: Es la concentración osmolar plasmática, normalmente puede variar desde 280 a 290 mOsm/Kg agua,
es la concentración de solutos en el plasma.
Uosm: Es la concentración Osmolar urinaria ó concentración de solutos en la Orina u osmolaridad Urinaria.
Generalmente la orina es tres veces más concentrada que el plasma. El riñón reabsorbe agua hasta concentrar
el filtrado glomerular unas tres veces más que osmolaridad plasmática. Los valores normales pueden variar
desde 50 hasta casi 1200 mOsm/Kg. agua.
Uosm x V: Es la excreción de solutos por minuto, es la cantidad de solutos osmóticos activos excretados
por minuto.
Cosm: Depuración Osmolar: Uosm x V / Posm
Es el volumen de plasma que es depurado de sus solutos en la unidad de tiempo.
Representa la tasa a la cual las sustancias osmóticas activas son aclaradas ó depuradas del plasma. La
depuración basal ó endógena en el hombre tiene un rango del 1 al 3 % del filtrado glomerular.

CH2O: Es depuración de agua libre de solutos que se elimina por la orina por minuto.
Es igual al Volumen minuto menos la Dep Osmolar:
CH2O = V – Cosm
La depuración de agua libre es ese núcleo de agua en la orina en exceso de su depuración osmolar. Durante
la diuresis de agua caracterizada por la excreción de gran volumen de orina diluida debido a la gran ingesta
de agua, la diuresis se debe a la inhibición de la hormona antidiurética de la neurohipófisis.
Durante la diuresis de agua pura, de cualquier duración ó magnitud, la orina consiste de una mezcla de agua
osmoticamente obligada que se excreta disolviendo los solutos que es igual a la depuración osmolar, mas
un vol. de agua osmóticamente libre, es agua libre de solutos, literalmente es agua químicamente pura,
representada por CH2O. El flujo urinario total en este caso es la suma de estos dos términos:
V = Cosm + CH2O, de donde tenemos que: CH2O = V – Cosm

Tc H2O: Durante la concentración urinaria (Antidiuresis) la orina se concentra por encima de la


Osmolaridad Plasmática por sustracción dependiendo de la de agua libre de solutos del filtrado glomerular,
es agua que el organismo se reinfunde. En este caso el Vol. min. es menor que la dep. Osmolar.
TcH2O = Cosm – V representa el volumen de agua reabsorbido a nivel tubular, esto concentra la orina
tubular.
Procedimiento
Para esta práctica se seleccionó a una persona a quien el día anterior se le hizo un dosaje de Osmolaridad
Plasmática y luego al día siguiente se le sometió a una prueba de hidropenia, es decir dieta seca, supresión
total de líquidos pero con una dieta normal en proteínas, hasta conseguir en lo posible una disminución del
3% del peso corporal.
A las 6 de la tarde miccionó (vejiga vacía), y se descartó esta orina y se anotó la hora exacta. Luego empezó
a recolectar toda la orina emitida, en un mismo frasco hasta las 6 am del día siguiente.
Dos horas mas tarde, 8 am, se obtuvo una segunda muestra de orina en recipiente a parte. En este momento
se obtuvo una muestra para determinar Osmolaridad Plasmática. Aquí termina el test de Concentración.
Inmediatamente se inició la Prueba de Dilución, para ello se le dio a beber 20 ml de agua x cada Kg. de peso
corporal, con el objeto de probar su capacidad para diluir la orina. Se recolectaron las muestras emitidas,
cada una en frascos separados, cada 20 ó 30 minutos, según el protocolo del cuadro adjunto, numerándose
todas las muestras emitidas durante casi tres horas.
Al intermedio y al final de las recolecciones se obtuvieron muestras de sangre para determinar las
Osmolaridades plasmáticas, en el osmómetro. Para la práctica, a partir de estas muestras calcularemos las
Osmolaridades Urinarias a partir de las densidades y con los datos obtenidos de Volúmenes urinarios,
tiempos de recolección, Uosm, y Posm se determinarán, para cada muestra, los valores de U/P, Cosm,
TcH2O, y CH2O.

Tabla-Protocolo de trabajo para las PRUEBAS de CONCENTRACIÓN


Y DILUCIÓN Urinaria
Tiempos Tiempo N° Vol. Vol. Posm Densi Uosm U/P Cosm Tc CH2O
de Acumulat de Orina Minut mOsm Dad mOsm/ H2O ml/
Recolecc. min Mues ml ml/ Kg Kg ml/ min
(minutos) tra min H2O Urina H2O min
ria

CONCEN
Prueba TRACIÓN
Supres
De líquidos

12 Hs 720 1a 432 298 ------


2 Hs 840 2a 60 ------
De Inges Y se
Prueba ta de Conti
Inmedia 20 Nuó
to ml Reco
De
se hizo: agua/ lec-
DILU Kg cion
Peso
CION

30 30 3a 18 295 ------
25 55 4a 200 ----
20 75 5a 190 ----
22 97 6a 209 294 ----
20 117 7a 140 ----
18 135 8a 126 ----
15 150 9a 38 290 ----

A continuación graficar en papel milimetrado:


Volumen Urinario (ordenada) vs Densidades (abscisa)
Cosm ((Ordenada) vs Vol. minuto (Abscisa), y determinar TcH20 y C H2O Interpretar los resultados de
cada prueba.
REGULACION RENAL DEL EQUILBRIO ACIDO I BASICO
Acidificación y/o alcalinizaci6n urinaria.

Introducción: Bases Fisiológicas:


Existen tres grandes procesos de regulaci6n del pH en los líquidos del organismo: el mecanismo de
intercambio i6nico (entre las células y los líquidos), el mecanismo respiratorio y el mecanismo renal.
Los riñones son los reguladores mas eficientes del equilibrio ácido básico, en vista de que realizan la
EXCRECION de los llamados ácidos fijos ó propiamente dichos, los HIDROGENIONES H+; mientras
los H+ se excretan, circulan en la sangre en equilibrio con los aniones correspondientes como el HC03- ,
con lo cual impiden cambios importantes en el pH. La cantidad de Hidrogeniones producidos en el curso
del metabolismo es de hasta 100 mEq. diarios ( 4.1 mEq/hora), dependiendo de la dieta. El Riñón se encarga
de excretarlos, al mismo tiempo que recobra el HC03- .La orina de un sujeto sano, con una dieta normal
mixta, es ácida y su pH habitual es de 6.0; el filtrado glomerular tiene un pH de 7.40. Esta disminución en
el pH urinario, se debe a que están siendo eliminados los Hidrogeniones por el riñón. La magnitud de esta
eliminación es variable de acuerdo con las exigencias fisiológicas del momento y se refleja en el pH de la
orina que puede variar de 4,0 hasta 8.0, según las necesidades del organismo. Cómo se logra excretar una
orina ácida ? Se logra por la adición de H+ secretados por las células de los túbulis renales hacia la luz
tubular lo cual permite la modificación de algunos ácidos que están disociados en el plasma, pero que se
convierten en formas no disociadas, al aumentar la acidez del medio. Por ejemplo las relaciones entre el
Na2HPO4 y el NaH2PO4 es de 4 a 1 en el plasma y en el filtrado glomerular donde el pH es 7.40. Si se baja
el pH por la adición de H+ esta relación disminuye hasta 4/100 (predominancia del Fosfato ácido), y el pH
urinario baja a 5.4.
Si la relación bajase hasta 1/99 (mayor predominancia aún del fosfato ácido) el pH llegará hasta 4.8.
El resultado neto de la producción de una orina ácida es la ganancia de un Na+ y SE RECUPERA EL HCO3-
La eliminación del H+ a cambio de un Na+ permite así retener el HC03- y tener reserva de HC03- para
situaciones de emergencia. Puede así entonces el riñón eliminar constantemente H+ sin vaciar el Na+
extracelular ni perder su bicarbonato en condiciones normales.
En el caso opuesto cuando hay alcalinidad aumentada se produce en el riñón el fenómeno inverso:
Disminuye la excreción tubular de H+, se reabsorbe menos bicarbonato, se excretará fosfato en la forma
Na2HPO4 y se pierden 2 Na+ y el efecto neto será la perdida de 2 Na+ (base), disminución del HC03- del
plasma y los ácidos orgánicos serán eliminados a un pH más alto en equilibrio con más Na+ que se pierden.
En resumen, pueden Ustedes pues darse cuenta que las diferentes funciones del mecanismo renal responden
a requerimientos específicos: en el caso de la acidosis, hay un incremento de la excreción de ácidos y una
conservación de base; en la alcalosis, hay un incremento de la excreción de base y conservación de ácidos y
el pH de la orina cambiará correspondientemente y puede variar como les acabo de señalar en muestras de
orina random desde pH 4.5 hasta 8.2. Esta capacidad de excretar cantidades variables de ácido es de una
gran importancia fisiológica porque convierte al riñón en el mecanismo de defensa final contra cualquier
cambia del pH corporal o de la composición anión-catión.
En la producción de orina ácida: Resultado neto: Ganancia de un sodio a cambio de excreción de de un
H+. Se recupera el NaHCO3. Eliminación constante de H+ sin vaciar el Na+ del LEC.-

EI otro mecanismo para regular del pH que opera en el riñón es la EXCRECION DEL H+ EN LA FORMA
DE ION AMONIO NH4+ O AMONIOGÉNESIS, a partir del NH3 de la glutamina o los aminoácidos.
El NH3 por lo general no se encuentra en el filtrado glomerular y por lo tanto proviene de las células del
túbuli renal. Sin embargo su excreción no es rápida sino tardía y solo empieza a funcionar después de un
lapso prolongado de acidosis .. En la figura podemos ver como se conserva el sodio por medio de la
excreción del NH4+. El Na+ ingresa a favor de la salida de un H+, el cual con el NH3 proveniente de la
desaminación de aminoácidos o de la glutamina, se excreta como NH4+.
AMONIOGÉNESIS:
El NH3 liberado por la Glutaminasa sirve para neutralizar las sustancias ácidas: NH3 + H+ NH4
Se conserva sodio por medio de la excreción de NH4, el sodio ingresa en favor de la salida de H+
EI NH3 neutraliza el H+ formando NH4; y el H+ con el NH3 se excretan como NH4. (ClNH4)

TEST DE SOBRE CARGA ÁCIDA CON CLORURO DE AMONIO (Durante tres días)

Un día antes de la prueba se recolecta orina de 24hs para acidez de titulación Basal. Luego se le prescribe
una dosis de 0.1 gm de Cloruro de amonio por Kg de peso corporal, durante tres días consecutivos y se va
recolectando la orina de 24 horas cada día, durante tres días. En cada una de las muestras de orina se
medirá el volumen y el pH, Acidez de titulación fosfática y acidez amoniacal. Se determinará el pH
sanguíneo basal y al final del test.

Fundamento de la prueba de sobrecarga ácida de Cloruro de amonio para medir la capacidad de


acidificación del túbuli urinario:
El Cloruro de amonio ingerido extrae H+ de la célula.
El Hígado depura el amonio que llega por la circulación portal y se produce la siguiente reacción que
libera H+:

2 NH4+ + CO2 ----------- CO(NH2) 2 + 2 H+ + H2O


(La conversión de amoniaco en urea e
acidificante.)
Acidificante

El H+ liberado se combina con el Na2HPO4 de la orina tubular:

Na2HPO4 + H+ NaH2PO4
Sal más ácida y baja el pH hasta
menos de pH 5.4 en la orina.

PRUEBA DE ACIDIFICACIÓN URINARIA MODIFICADA. (Durante de 6 horas).


Después de un desayuno normal se recogen 2 muestras de orina con una diferencia de una hora, luego se
le administra al paciente cloruro amónico a la dosis de 0.1 gm / Kg. Peso corporal por la vía oral. Se dará
en cápsulas de gelatina de 0.50 gm. De preferencia con tostadas y mermelada, recogiendo la orina durante
las 6 horas siguientes. Se extraen muestras de sangre antes y tres horas después de la administración del
Cloruro amónico. Con la carga administrada el pH urinario deberá descender por debajo de 5.4

En nuestra práctica solamente haremos una prueba de corta duración (2 horas) del siguiente modo:

Equipos, Materiales y Reactivos


pH Meter para determinación de pH sanguíneo
Potenciómetro para determinar pH en soluciones.
Cinta para determinación universal de pH
06 Cilindros graduados de vidrio o plástico de 500 ml
08 beakers de 50 ml
02 Pipetas de 5 ml graduadas al 0.1
02 Pipetas de 1 ml graduadas al 1/100
03 Buretas para titulación química
03 Ehrlemeyers de 500 ml con agua destilada
Fenolsulfotaleína indicador (PSP) sol alcohólica 1 % o Rojo fenol.
Sol. NaOH 0.1 Normal titulada, Formol 40 % 50ml.

Procedimiento
Colocar a una persona de prueba en reposo. Evacuar la vejiga por micción espontánea (con deseos de
orinar) y será la muestra basal. (identificarla). Determinar el pH sanguíneo al inicio de esta prueba.
Administraremos luego 400 ml de una solución de Cloruro de amonio al 0.5% en 15 minutos.
Iniciar la recolección de orina cada 20 min., por micción espontánea, en muestras separadas durante dos
horas.
Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas.
Determinaremos el pH sanguíneo basal y al final del test. Titularemos la acidez Fosfática y Amoniacal
urinaria con sol. valorada NaOH 0.1 Normal y retitulación de la acidez amoniacal previo tratamiento con
formol taponado:
Colocar en beakers : 5 ml orina + 1 gota Roja fenol. Titular con NaOH 0.1N hasta rosado.
Anotar gasto.
Corresponde a la acidez del Fosfato ácido. Cada ml NaOH gastado 0.1 mEq H+
Luego añadir 0.5 ml formol para extraer los H+ del Amonio y titular de nuevo la acidez amoniacal.
Hacer la sumatoria de acidez fosfática + amoniacal, acidez total y luego calcular la (H+) urinaria en mMol
/ litro. Calcular la Depuración de Hidrogeniones.

Emplearemos una persona normal como CONTROL a la cual le haremos la misma prueba anterior
sustituyendo el cloruro de amonio por una dosis de 25 ml de agua hervida y fría por kilo de peso corporal
así:
Colocar a una persona de prueba en reposo. Evacuar la vejiga por micción espontánea (con deseos de
orinar) y será la muestra basal. (identificarla). Determinar el pH sanguíneo al inicio de esta prueba.
Administraremos luego 25 ml de agua x Kg peso corporal en 15 minutos.
Iniciar la recolección de orina cada 20 min., por micción espontánea, en muestras separadas durante 2
horas.
Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas.
Determinaremos el pH sanguíneo basal y al final del test. Titularemos la acidez Fosfática y Amoniacal
urinaria exactamente igual como el caso anterior con sol. valorada NaOH 0.1 Normal y retitulación de la
acidez amoniacal previo tratamiento con formol taponado, todos los cálculos también se harán
exactamente iguales al caso anterior.

CÁLCULOS:
En la práctica anterior ya hemos aprendido como se calcula la Depuración de una sustancia, entonces si
hemos recolectado un volumen de orina en un plazo de tiempo determinado podemos calcular el Volumen
minuto y si conocemos las concentraciones de H+ urinarias y pH, y además se conocemos el pH
sanguíneo estamos en condiciones de poder calcular las respectivas depuraciones y evaluar la Depuración
del ión Hidrógeno.
CONCLUSIONES:
En la condición Basal encontraremos que: Dep H+ > Vol min
En la Acidosis como la concentración de H+ urinaria es mucho mayor que la sanguínea
tendremos: Dep H+ será > Vol. min.
en la Alcalosis será la inversa: Vol. min. > Dep H+
Para estos cálculos recordar que: D=UxV/P

y pH = -log (H+)
(H+) = antilog pH

-pH
(H+) = 10

EXAMEN QUIMICO DE ORINA


INVESTIGACIÓN DE ALBÚMINA:
Excreción normal: Menos de 75 mg en 24hs. No detectable por los métodos habituales rutinarios.
Por métodos especiales se detectan cantidades menores y se llama microalbuminuria.
Para detectar presencia de albúmina se emplea el método del Ácido Sulfosalicílico al 3% así:
Filtrar la orina a través de papel de filtro.
Colocar 1 ml de orina filtrada en un tubo de ensayo
Añadir 1 ml de ácido sulfosalicílico. Reposar 5 minutos.
Si no se produce enturbiamiento no hay albúmina: Negativo
Si aparece enturbiamiento indica presencia albúmina.
El grado de turbiedad está en relación con la cantidad e albúmina presente.
Hacer un control negativo sustituyendo el ácido sulfosalicílico con 1 ml de
agua destilada y proceder exactamente igual. Comparar grados de turbidez.
Entre los métodos rutinarios cualitativos, el más simple: test de calor y acidificación:
Filtrar la orina a través de papel de filtro.
En tubo de ensayo hervir 3 ml orina filtrada, en mechero alcohol o Bunsen ó Baño María hirviente. Un
precipitado blanco ó floculante al hervir indica:
a) Proteína ó fosfatos.
b) Para diferenciar: Fosfatos: si al añadir ácido acético 5% desaparece la turbidez:
Fosfatos (Los fosfatos son solubles en medio ácido). Si hay
efervescencia: carbonatos presentes.
Proteínas: si al añadir ácido acético 5% la turbidez aumenta.

INVESTIGACIÓN DE GLUCOSA
Reacción de Benedict Cualitativa: Por reducción del cobre el solución alcalina y calor.
Colocar 3 ml de Benedict Cualitativo en tubo de ensayo. Añadir 0.3 ml orina
Hervir por 3 minutos en BM hirviente. Enfriar por reposo de 5 min.
Positivo: Precipitado rojo ladrillo al fondo del tubo
Negativo: Permanece azul o color verdoso sin precipitado.
Dan resultado positivo: Glucosa, lactosa, levulosa, pentosas.

TEST PARA ÁCIDOS BILIARES


Los ácidos biliares reducen la tensión superficial de los líquidos que las contienen:
Colocar 3 ml de orina en un tubo 18 x 150 ml.
Espolvoréese sobre la superficie peque cantidad de azufre pulverizado finamente (flor de azufre). Si el
azufre cae al fondo enseguida, la orina tiene ácidos biliares en cantidad mayor de 0.01 % ó más.
El cloroformo, alcohol, trementina, timol dan resultados falsos.
INVESTIGACIÓN DE CUERPO CETÓNICOS
En tubo ensayo colocar 3 ml orina, añadir 3 gotas ácido acético. Mezclar.
Añadir 1 ml de agua oxigenada. Luego, añadir unos 500 mg de nitroprusiato en polvo y agitar suave para
disolver. Colocar en zona 1 ml de hidróxido de amonio. Anillo verde en la interfase: positivo a cuerpos
cetónicos.

Referencias Bibliográficas:
Libro: Fisiología Renal, Autores Manuel y Carlos Ramírez Velasco
Editorial Escomel. Arequipa. Perú. 1a Ed. 1988.
Libro: Fisiología Medica Guyton 1996
Physiology and Kidney Diseases, Brow, Londiniun EdCo.2002. First Ed.
ROL FISIOLÓGICO DE LA PTIALINA (DIGESTIÓN DEL ALMIDÓN)

Fundamento Fisiológico

El alimento en la boca se mezcla con la saliva lo cual se favorece por la masticación que fragmenta las
partículas grandes de alimentos y mezcla a éste con las secreciones de las glándulas salivales. En las
glándulas salivales los gránulos secretorios (cimógeno) que contienen las enzimas salivales se descargan
en los conductos a partir de las células acinosas. Diariamente se secretan 1500 ml. de saliva y el pH es
ligeramente menor de 7.0, pero se aproxima a 8.0 durante la secreción activa. La saliva contiene dos
enzimas digestivas: la lipasa lingual, secretada por la glándula de la lengua, y la alfa amilasa salival
(ptialina) secretada por las glándulas salivales. La saliva también contiene mucinas, que son glucoproteínas
lubricantes del alimento y protectoras de la mucosa oral. Además contiene IgA, inmunoglobulina que viene
a ser la primera defensa inmunitaria contra bacterias y virus. La alfa amilasa salival ataca al almidón. Sin
embargo, el pH óptimo para esta enzima es de 6,7 y su acción es inhibida por el jugo gástrico ácido en el
momento del ingreso del alimento al estómago. El activador de la amilasa salival es el cloro; siendo su
substrato el almidón hidroliza los enlaces alfa 1 - 4 para producir dextrinas, alfa-limitantes, maltotriosas y
maltosa, siendo esta función hidrolítica la acción catalítica que estudiaremos en la presente práctica. El
almidón, polímero de la glucosa da color azul con la solución de yodo. El almidón está constituido por un
15% - 20% de amilosa y un 80% - 85% de amilopectinas.

Objetivo
Estudiar la acción de la amilasa sobre el almidón y determinar los substratos y productos de la actividad
alfa-amilásica salival y el efecto del pH y activador enzimático sobre esta reacción enzimática ó digestión
hidrolítica.

Procedimiento
Digestión del substrato por la alfa-milasa salival:
Tubo No. 1 2 3 4
Sol. almidón 1 % ml. 2,0 2,0 2,0 2,0
Tampón fosfato pH 6,8 ml. 1,0 1,0 1,0 ----
HCI 0,3 N ml. ---- ---- ---- 3,4
CIN a 0,9% ml. 3,0 2,4 ---- ----
Agua destil. ml. ---- ---- 2,4 ---
Baño María 37 °C x 5'(Pre-
incubación,no añadir saliva si si si si
todavía
Después de los 5 minutos,recién añadir: ----
Sol. amilasa salival ( diluída 1/20) ml. 0,6 0,6 0,6
Baño María 37°C x 20' si si si si

Luego se determinarán los substratos remanentes y los productos de degradación intermedia del almidón en
cada digerido:1.2.3 y 4, por separado, empleando soluciones de Lugol y Benedict cualitativo.
A. DETERMINACION DEL SUSTRATO
TUBOS N° 5 6 7 8
DIGERIDO DEL TUBO 1:ml 0.5 - - -
DIGERIDO DEL TUBO 2:ml - 0.5 - -
DIGERIDO DEL TUBO 3:ml - - 0.5 -
DIGERIDO DEL TUBO 4:ml - - - 0.5
HCl 0.05 N : mI 5 5 5 5
Sol. De Lugol: mI 0.5 0.5 0.5 0.5

Mezclar, reposar 15': Observar los resultados

B. DETERMINACION DEL PRODUCTO

TUBOS N° 9 10 11 12 13

DIGERIDO DEL TUBO l:ml 0.5 - - - -


DIGERIDO DEL TUBO 2:ml - 0.5 - - -
DIGERIDO DEL TUBO 3:ml - - 0.5 - -
DIGERIDO DEL TUBO 4:ml - - - 0.5 -
SOLUCION DE BENEDICT: mI 2 2 2 2 2
SOLUCION DE GLUCOSA 1 %: ml - - - - 0.5
Baño hirviente: 100° X 5'

Enfriar en agua helada y observar los resultados.


Conclusiones:
Influencia del pH salival y gástrico en la digestión del almidón.
Influencia del Cloro sobre la actividad de la amilasa salival.
Verificar la ubicación de los puntos de hidrólisis del almidón por acción de la alfa amilasa salival
FUNCIÓN DE LAS CÉLULAS PARIETALES DEL ESTÓMAGO.
ACIDEZ GÁSTRICA TOTAL ESTIMULADA Y DÉBITO
ACIDO/HORA.
El Gastroenterólogo A. W. Kay describió un método con el objeto de lograr una estimulación máxima de
las células apriétales del estómago.
En el contexto de la fisiología gástrica, se considera condición basal aquella en la cual el paciente está en
completo ayuno después de haber dormido unas 6 horas tranquilamente, sin estar expuesto a ningún estímulo
visual, ni olfativo, ni auditivo.
Bajo control fluoroscópico debe insertarse una sonda naso-gástrica de modo que la punta de la sonda se
encuentre en la parte más baja del cuerpo del estómago. En seguida el paciente se coloca en decúbito lateral
izquierdo y escupe toda saliva que tenga durante toda la prueba. En estas condiciones la sonda se conecta a
una bomba de succión continua eléctrica y el contenido del estómago es aspirado continuamente a presión
negativa de 30 a 50 mmHg, se aspira primero todo el contenido gástrico de la noche anterior y se descarta.
Se recolecta luego J.G. durante los primeros 30 minutos y se mide el volumen y se conserva esta primera
muestra para trabajarla, es la muestra llamada BASAL. El flujo Gástrico debe ser chequeado a menudo lo
mismo que la succión. Luego debe inyectarse un antihistamínico como Clorotrimetón 20 mg Intramuscular
(para disminuir en lo posible los efectos colaterales de una fuerte dosis de Histamina que recibirá luego). Se
usa como estimulante de la célula parietal.
Fosfato de Histamina a una dosis de 0.04 mg x Kg. de peso, vía subcutánea, ó mejor Pentagastrina: 6
microgramos x Kg. peso.
Se continúa recolectando las muestras de jugo gástrico durante los lapsos de tiempo de 15 min. cada uno y
que son los siguientes:
0 a 15 min.; 15 a 30 min.; 30 a 45 min. y 45 a 60 min.
Se medirá la acidez de titulación e cada una de las muestras empleando NaOH 0.1 Normal, hasta la
neutralización, empleando indicador de Fenoltaleína solución alcohólica al 1%.

Procedimiento
Identificación de las Muestras I II III IV V
Descripción de los tiempos Primera Inyectar 0 a 15 15 a 30 30 a 45 45 a 60
Muestra Antihistamínico y min. min. min. min.
(Basal) luego Histamina ó
Pentagastrina

Tiempos de recolección 30 min. 15 min. 15 min. 15 min. 15 min.


Anotar los volúmenes
Recolectados cada vez (ml)
De cada una de las muestras
anteriores medir:
Jugo Gástrico (ml) 10 ml 10 ml 10 ml 10 ml 10 ml
Agregar:
Agua Destilada (ml) 10 ml 10 ml 10 ml 10 ml 10 ml
Indic. Fenoltaleína (gotas) II II II II II
Agitar suavemente sí sí sí sí sí
Anotar la cantidad gastada de
NaOH 0.1 N en la titulación
Resultados según Cálculos
(expresados en mEq/litro)
Luego se titularán cada una de las muestras obtenidas por separado, empleando Solución de NaOH 0.1
Normal, gota a gota, agitando suavemente después de la adición de cada gota de NaOH, hasta la aparición
de un color rosado muy tenue y persistente, color que indica la completa neutralización del ácido del Jugo
Gástrico.

CALCULOS:
Ejemplo: Se gastó 2.40 ml en la titulación de una de las muestras
Cada 1 ml de NaOH 0.1 N que se gaste en la titulación indica – 0.1 mEq. H+
2.40 ml de NaOH 0.1 N gastados indicarán ------------ X mEq. H+

2.4 x 0.1 = 0.24 mEq.H+


1

0.24………………….10 ml de Jugo Gástrico usado


x .............................1000

0.24 x 1000 = 24 mEq.H+ / lt de Jugo Gástrico


10

En este caso hemos calculado la concentración ácida expresada en mEq.H+/cada litro de jugo gástrico, estas
son unidades de expresión química en rigor. Pero en fisiología expresamos la acidez en débito acido
Es decir la cantidad de acidez generada en un tiempo determinado, por ejemplo cada 24 horas.
En el ejemplo anterior encontramos 0.24 mEqH+ en el volumen de 10 ml de jugo gástrico usado, si en los
primeros 15 minutos se obtuvieron 30 cc de jugo gástrico tendremos:

En 10 ml jugo gástrico = 024 mEqH+


En los 30 ml obtenidos en los primeros 15 minutos tendremos: X

X= 30 x 024 / 10 = 072 mEqH+ en 15 minutos.

Esto se llama debito acido. Y es el débito acido de los primeros 15 minutos, asi continuaremos en la misma
forma calculando el débito acido para los 30, 45 y 60 minutos. La sumatoria de estos 4 valores será por
consiguiente el débito acido/ hora o gasto acido de la célula parietal.

Valores Referenciales

Residuo Gástrico Después de 12 hs de ayuno: 20 a 100 ml (generalmente menos de 50 ml)

pH: 1.5 a 3.5


Acidez sin Estímulo: 1 a 4 mEq H+ / litro
Acidez post estímulo (Kay) ó Pentagastrina: 10 a 120 mEqH+ / litro
Débito Ácido Basal/hora: Normal Hombres: 1 a 10.5 mEq/hora
Mujeres: 1 a 5.6 mEq/hora
Débito Ácido Máximo/hora: Normal Hombres: 12 a 60 mEq/hora
Mujeres: 8 a 40 mEq/hora
MOTILIDAD INTESTINAL

1. Introducción
El esófago, el estómago y los intestinos tienen inervación parasimpática predominante. La acetilcolina es
el neurotransmisor de este sistema y actúa como un agonista de la motilidad intestinal.

2. Material
Equipo para órganos aislados
Conejo Algodón embebido en aceite
Quimógrafo Acetilcolina
Equipo de disección Pilocarpina
Solución de Ringer para mamiferos Adrenalina
Suero fisiológico Atropina
Bañomaría a 40 °C Tesmostato
Balón de oxígeno

3. Método
3.1. Experimento No. 1
Se sacrifica al animal y se realiza una laparotomía para resecar una segmento de intestino delgado de unos
20 centímetros. Se marca el extremo proximal. Se lava la pieza operatorio con suero fisiológico, se le
sumerge en un baño de solución de Ringer a 40 °C y se fija a la palanca inscriptora de1 quimógrafo. Se
mantiene oxigenado e! medio por burbujeo constante.
Se realiza el registro de la actividad intestinal basa1.
.
3.2. Experimento No. 2
Se añade unas gotas de acetilcolina en el bañornaría y se obtiene un nuevo registro en el quimógrafo.

3.3. Experimento No. 3


Se añade unas gotas de pilocarpina en el bañomaría y se obtiene un nuevo registro en el quimógrafo.

3.4. Experimento No. 4


Se añade unas gotas de adrenalina en el bañomaría y se obtiene un nuevo registro en el quimógrafo.

3.5. Experimento No. 5


Se añade unas gotas de pilocarpina en el bañomaría y se obtiene un nuevo registro en el quimógrafo.

3.6. Experimento No. 6


Se añade unas gotas de atropina en el bañomaría y se obtiene un nuevo registro en el quimógrafo.

3.7. Experimento No. 7


Se suspende la oxigenación y se obtiene un nuevo registro en el quimógrafo.

3.8. Experimento No. 8


Se introduce un pedazo de algodón embebido en aceite en el extremo proximal intestinal y se observa su
progresión.

4. Discusión
MOTILIDAD GASTRO-INTESTINAL

Objetivo
El objeto de esta práctica es estudiar los movimientos peristálticos rítmicos del aparato gastrointestinal y el
control que el Sistema Nervioso Autonómico tanto Simpático como Parasimpático ejercen sobre la
motilidad gástrica e intestinal; además demostraremos la influencia de los neurotransmisores acetilcolina y
adrenalina sobre las funciones de contracción y relajación de la musculatura lisa gastrointestinal.

Introducción
La actividad motora del estómago está gobernada fundamentalmente por dos tipos de inervación ó redes de
fibras nerviosas: una intrínseca a la vía gastrointestinal y otra extrínseca.
a.-La inervación intrínseca del estómago comprende dos plexos interconectados el plexo Mientérico de
Auerbach y el plexo submucoso de Meissner dentro de la pared estomacal, como lo hacen a través de toda
la vía intestinal. Estos plexos son directamente responsables de la peristalsis y otras contracciones. Como
este sistema es continuo entre el estómago y el duodeno, la peristalsis del antro influencia la peristalsis del
bulbo duodenal.
b.- La inervación extrínseca es autonómica dual y proviene del Sistema Nervioso Autónomo: la Simpática
de actividad noradrenérgica inhibidora, vía plexo celíaco; y la Parasimpática de actividad colinérgica
excitatoria, vía del Nervio Vago.
La inervación simpática inhibe la motilidad lisa, pero contrae los esfínteres; y la parasimpática estimula la
contracción de la fibra m. lisa pero relaja los esfínteres. Estos dos sistemas juntos modifican la actividad
motora coordinada que se origina independientemente en el sistema intrínseco.
Existe además un marcapaso controlador en la curvatura mayor del cuerpo del estómago dentro de la capa
muscular longitudinal. Este marcapaso es responsable del ritmo y frecuencia de las contracciones gástricas
y genera una onda excitatoria que tiene un ritmo eléctrico basal (REB) de una frecuencia de 3/min. y una
velocidad de 1 cm./seg. cuando pasa por el cuerpo del estómago, y aumenta hasta 3-4 cm./seg. cuando pasa
por el antro.
El sistema nervioso entérico se conecta con el SNC mediante fibras simpáticas y parasimpáticas, pero es
capaz de funcionar de manera autónoma sin estas conexiones. El plexo mientérico inerva las capas de
músculo liso circular y longitudinal y tiene a su cargo principalmente el control motor; en cambio el plexo
submucoso inerva el epitelio glandular, las células intestinales endocrinas y los vasos sanguíneos de la
submucosa y además está involucrado sobre todo en el control de la secreción intestinal. Los
neurotransmisores en el sistema nervioso entérico incluyen la acetilcolina, noradrenalina, serotonina, Gaba,
ATP, Oxido nítrico, CO y numerosos péptidos, CCK, endotelina 2, SustanciaP, Neuropéptido Y, VIP, etc.
El PERISTALTISMO es una respuesta refleja que se inicia cuando la pared del intestino se elonga por el
contenido en el lumen y se presenta en todas las partes de la vía gastrointestinal desde el esófago hasta el
recto. Esta elongación inicia una onda de contracción circular detrás del estímulo y una de relajación en el
frente de éste. Esta onda de contracción se mueve en dirección oral-caudal para impulsar hacia adelante los
contenidos del lumen a una velocidad variable entre 2 a 25 cm. /seg.
Aunque la actividad peristáltica puede aumentarse o disminuirse mediante la actividad autónoma del
intestino, su presencia es independiente de la inervación extrínseca.
El estiramiento local libera serotonina que activa las neuronas sensitivas que a su vez activan el plexo
mientérico. Las neuronas colinérgicas que pasan en dirección retrógrada en este plexo mientérico activan a
las neuronas liberadoras de la sustancia P, así como de acetilcolina y dan lugar a la contracción del músculo
liso. Al mismo tiempo, las neuronas que pasan en dirección anterógrada activan a las neuronas secretoras
de NO, VIP, Y ATP para producir la relajación que precede al estímulo.
El REB del músculo liso gastrointestinal trabaja a un potencial de membrana entre -65 y - 45 mV. Este REB
se inicia en las células intersticiales de Cajal, que son células mesenquimatosas estrelladas similares al
músculo liso y actúan como marcapasos, estas células de Cajal envían múltiples prolongaciones hacia el
músculo liso intestinal. .El REB por sí solo rara vez produce contracción muscular, pero los potenciales de
espiga sobrepuestos a la mayor parte de las porciones despolarizadas de la ondas del REB incrementan la
tensión (contracción) muscular. Las despolarizaciones se deben al ingreso del Calcio y las repolarizaciones
a la salida del K. Muchos polipéptidos y neurotransmisores afectan esta onda de ritmo eléctrico basal por
ejemplo la acetilcolina incrementa la cantidad de espigas y la tensión (contracción de la F m lisa) en tanto
que la adrenalina disminuye la cantidad de espigas y la tensión. En el estómago la frecuencia del REB es de
4/min., en el duodeno 12/min., colon, 9/min., ciego 16/min. Por lo tanto el rol fisiológico del REB es
coordinar la actividad peristáltica y otras actividades motoras gastrointestinales. Las contracciones se
producen solamente durante la parte despolarizante de las ondas. Si hacemos una vagotomía el peristaltismo
estomacal de hace irregular ó a veces caótico. La motilidad gastrointestinal y la secreción es regulada
también por polipéptidos biológicamente activos que son segregados por las células nerviosas y las células
glandulares de la mucosa, algunas son paracrinas y otras endocrinas y se les llama hormonas
gastrointestinales, aunque sus efectos fisiológicos son discretos, sin embargo sus alteraciones pueden
producir enfermedades del tránsito intestinal (ejemplo algunas diarreas motoras).
Se agrupan en familias, y entre algunas ellas tenemos:
Familia de la Gastrina: Gastrina y CCK (ó CCK-PZ: Colecistoquinina-pancreocimina)
Familia de la Secretinas: GIP, Secretina, VIP, enterogastrona.
Otros grupos: Motilina, Sustancia P, Serotonina.

Materiales, equipos, animales de experimentación y reactivos.- Para cada mesa de trabajos prácticos:
Materiales: Reactivos:
01 sapo vivo Solución de Ringer para anfibio fresca a 30 °C
Tabla de corcho para soporte y fijación anfibio Col. Azul de metileno
Alfileres para sujeción extremidades Sol. Acetilcolina 1%
01 par guantes descantables Sol. Adrenalina 1%
Equipo de disección quirúrgico Sol. Atropina 1%
Estilete para sección medular y tijera, algodón Prostigmine (Neostigmina): 0.5 mg / 1ml ampolla
04 jeringas descartables de 3 ml parasimpáticomimétrico.
01 Aguja descartable de 18 G x 1 ½
01 Aguja descart. doblada en 90°
3 hilos blancos de 15 cm. largo N° 50 para las
ligaduras
Cánula de vidrio 2mm diám. ad-hoc

Procedimiento
l.- El alumno realizará la preparación de sapo espinal según lo aprendido para producir el shock espinal en
el sapo (Ver práctica de reflejos en animal espinal) y realizará la hemostasia con algodón por compresión.
2.- Disección: Sujetar luego el animal en posición decúbito dorsal en la tabla de fijación con los alfileres y
realizar un corte en toda la línea medio abdominal y seguir disecando por planos hasta llegar al peritoneo.
3.-Abrir la cavidad abdominal en la misma forma y localizar el estómago cardias, estómago, píloro e
intestinos. Observar de inmediato y muy cuidadosamente los movimientos peristálticos espontáneos del
estómago e intestinos. Anote estas observaciones basales . Si estuviesen ausentes estimularlos
mecánicamente.
4.- Con un algodón mojado en Ringer-Batracio a 30° mantener en todo momento la preparación bien
húmeda con instilaciones abundantes de la sol. Ringer.
5.- Aplicar sobre el estómago e intestino (en cada uno) 6 gotas de cada una de las siguientes soluciones en
el orden: a, b, c, d, e siguiente:
a.- Acetilcolina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
b.- Adrenalina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
c.- Fisostigmina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
d.- Atropina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
e.- Al final, nuevamente Acetilcolina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer.
Graduar las observaciones visuales de relajación o contracción con cruces, comparando con los
movimientos peristálticos espontáneos del inicio del experimento.

Conclusiones y Comentario
EFECTOS DE LA HORMONA TIROIDE EN RATONES

Introducción
EI trabajo biológico tiene como fuente de energía a los enlaces intramoleculares y puede ser medido en
condiciones de actividad o reposo. A esta última condición se le denomina METABOLISMO
BASAL, que puede ser medido directamente por el método calorimétrico o indirectamente por el
consumo de oxígeno.
Las hormonas tiroideas incrementan el metabolismo basal, el consumo de oxígeno por los tejidos y la
producción de calor por el organismo. Estas hormonas activan los procesos oxidativos celulares.
En humanos, extirpación de la glándula tiroidea disminuye el consumo de oxígeno a cifras inferiores, del
30 a 50% de lo normal. En los hipertiroideos aumenta el consumo de oxígeno.
EI aumento o disminución del metabolismo basal a partir de la determinación del consumo de oxígeno se
empleó como un método diagnóstico del hipertiroidismo y del hipotiroidismo. En los sujetos hipertiroideos
con sintomatología definida el metabolismo basal está incrementado en 40 a 60% y puede superar más del
100%. Al aumentar el metabolismo disminuyen las reservas de carbohidratos y se emplea grasas para cubrir
las necesidades metabólicas. Este produce pérdida de peso y aumento de la temperatura corporal. Debido a
que los mecanismos de disipación de calor están sobrecargados, los sujetos hipertiroideos toleran muy mal
los ambientes cálidos. Las hormonas tiroideas aumentan la frecuencia cardiaca y la presión arterial sistólica.
EI sujeto hipotiroideo presenta síntomas opuestos: metabolismo bajo, temperatura inferior a la normal,
depósito de grasa y reacciones lentas.
En la presente práctica se comparará los metabolismos de ratones hipotiroideos e hipertiroideos con
ratones eutiroideos ( normales).
Diez a quince días antes del experimento se toma ratones machos adultos jóvenes, de la misma edad y
similar peso. Se los coloca en jaulas separadas, que se rotulan eutiroideo, hipertiroideo e hipotiroideo. Los
ratones serán pesados todos los días.
EI ratón hipertiroideo recibe diariamente 15 ug. D levotiroxina. EI ratón hipotiroideo recibe diariamente
1.25 g de metimazol.
Material
Ratones
Jaulas
Jaulas ó cámaras
metabó1icas
Cal sodada
Metimazol
Levotiroxina
Termómetro
Plastilina

Método
Experimento N° 1

Se coloca en tres jaulas metabó1icas a un ratón eutiroideo, uno hipertiroideo y uno hipotiroideo.
Las jaulas o cámaras metabó1icas deben contener cal sodada. Se recomienda que los animales reciban luz,
ya que esta permite que se mantengan quietos, pues los ratones son muy susceptibles a los ruidos a los
movimientos bruscos.

Se coloca un termómetro dentro de cada jaula metabólica. Se espera cinco minutos para que se equilibre la
temperatura dentro de la jaula y se registra.

Se humedece el interior de la pipeta colocada en la tapa de la jaula metab61ica con agua jabonosa.
Se coloca una película de espuma de jabón al final de la pipeta y se observara como, a que medida que el
animal va consumiendo el oxígeno, la película de jabón va moviendo a lo largo de la pipeta. EI CO2
producido será absorbido por la cal sodada.
Con un cronómetro se determina el tiempo requerido para consumir 1 cm3 de oxigeno y se convierte los
segundos en fracción centesimal.
A continuación se calcula en consumo de oxígeno por minuto del animal y se convierte litros por hora.
Este volumen calculado se encuentra en condiciones ATPS y debe ser convertido en condiciones STPD de
acuerdo a la siguiente fórmula:

o
Vo STPD = {[Vol ATPS x (Pb - PH2O / Ts)] / 760} x [273 / (273 + Ts)]

Donde:

Vol = L/h
Pb= presión barométrica.
PH2O= presión de vapor de agua Ts= temperatura del aparto
EI valor cal6rico del oxigeno varia según el cociente respiratorio. Con una dieta promedio el cociente
respiratorio es 0.8 y el equivalente cal6ricodel Oxígeno es 4.8 Kcal/l, por 1o que el número de calorías por
hora será:

Cal/h = 4.8 cal/l x L/h


Dado que el número de calorías es proporcional al peso y a la superficie corporal, entonces:

S=K x W 2/3
o
S = K x logW X 2/3
Donde:
S = superficie corporal
K = constante de von Muralt

Equivalentes calóricos a diferentes


Cocientes respiratorios (R)
R no proteico Equivalente calórico en cal/L
0.70 4.69
0.75 4.74
0.80 4.80
0.85 4.86
0.90 4.92
1.00 5.05

Animal Constante de von Muralt

Hombre 12.3
Conejo 11.2
Caballo 8.5
Ratón 11.4

EI resultado esta expresado en centímetros cuadrados y debe convertirse a metro cuadrados:


m2 = cm2/10000

EI metabolismo es igual:
Metabolismo = (cal/h) / S en m2

o
Metabolismo = cal/m2/h

Consideremos un ejemplo práctico:

MEDICIÓN DE LAS Kcal PRODUCIDAS EN UN RATÓN EN SU


METABOLISMO
Peso del ratón: 28 g
1) Consumo de O2 en ml/min
Si el ratón en 40 seg consumió 1ml de O 2
en 60 seg cosumirá x ml de O 2

(60 seg ) (1 ml de O2 )
xml O2  1,5 ml de O2 / min
40 seg
2) Consumo de O2, en ml/h , en condiciones ATPS
El ratón consume 1,5 ml de oxígeno en 1 min
El ratón consumirá x ml de oxígeno en 60 min

(1,5 ml de O2 ) (60 min)


Consumo de O2 en 1 hora = x ml O2 /h   90 ml de O2 / h en
1 min
condiciones ATPS
3) Consumo de O2 en ml/h en condiciones STPD
a) 90 ml/h = 0,09 L/h
b) Encontrar el factor de conversión: Si la presión barométrica fue de 754 mm de Hg y la
temperatura fue de 37ºC encontramos en la tabla que el factor de conversión es 0,867.
c) Multiplicando el consumo de O2 en ml/h por el factor de conversión tendremos:
(0,09 L/h) (0,867)= 0,078 L de O2/h como consumo en condiciones STPD.
4) ¿Cuántas Kcal se habrán producido cuando el ratón en su metabolismo consumió 0,078 L/ de
oxígeno, en condiciones STPD?
a) Sabemos que en una dieta mixta el equivalente calórico del O 2 es de 4,825 Kcal/L de oxígeno.
b) Entonces podemos calcular las Kcal/h producidas por nuestro ratón, razonando así:
1L de 02 ………………………….equivale a 4,835 Kcal
0,078 L de O2 equivale a…………………x Kcal
O sea:

0,078 L de O2 / h (4,825 kcal)


x Kcal   0,367 kcal / h
1 L de O2
c) Pero para poder comparar un indivíduo con otro debemos referir este resultado al área de superficie
corporal (ASC).
i) Calculo del ASC: peso del ratón de 28g de peso
ASC = 11,4( peso 2 / 3 )

según Mulralt la K=11.4

ii) Aplicando la fórmula en nuestro ratón:

ASC  11,4 (282 / 3 )  11,4(3 28 2 )  11,4 (3 784 )  11,4(9,22)  105,11cm 2


iii) Convertir los cm2 a m2:
1 m2 tiene 100 cm(100 cm)= 10.000 cm2
Luego nuestro ratón tiene como ASC:
105 cm 2
 0,01 m 2 como ASC en m2
10.000
iv) Entonces nuestro ratón produce 0,376 kcal/h/0,01 m2

5) ¿Cuántas Kcal por m2/h produce nuestro ratón?

Si el animalito produce 0,376 kcal por 0,01 m 2


Entonces producirá x Kcal por 1,00 m 2

(0,376 Kcal ) (1 m 2 )
X Kcal/m2/h= N2
 37,6 Kcal / mm m 2 / h (RESPUESTA)
0,01 m

ATPS: Ambient Temperature Pressure saturated (con vapor de agua)


STPD: standard temperatura and pressure dry
El consume de Oxígeno y CO2 producido son estandarizados a la temperatura standard (0ºC) a la presión
barométrica a nivel del mar (760 mm de Hg) y a condición de gas seco.

Profesor Enrique Avila Zamora

Lima 13 de noviembre del 2010


GONADOTROFINA CORIONICA HUMANA
CORION PLACENTARIO Embriol y Estructura Liso y Frondoso (Vellosidades) DIBUJO PRACTICA
hCGH crv 2013: Fases : Fecundación Blastómero de dos células a las 24 hs; luego 4 células a las 6 hs;
16 células al 4º día ; Sigue la multiplic celular hasta MORULA; Luego Blastociste y Blastocele;

Luego viene la IMPLANTACION del blastocisto en mucosa uterina a los 6 días de la fecundación;
Luego numerosas células del citotrofoblasto se convertirán en sincitio trofoblasto y éste en el Corion
Liso y otras corion frondoso o velocidades , es el Corion velloso.. Así la Placenta tendrá dos partes Fetal
(Corion ) y Materna (mucosa uterina). Veamos pues las figuras para mejor repasar la embriología del
CORION , antes de entrar a la Fisiología de la hormona hCGH: Son 4 figuras de la Embriología :

Fig N° 1

FIG N° 1
Fig N° 2

FIG N° 2
Figura N°3

Fig N°
3
Fig N° 4

La Gonadotrofina aperece precozmente y desde ya funciona:

El Corion Placentario secreta a partir del TERCER mes la PROGESTERONA, hCG , Relaxina,
Somatotrofina o Lactógeno placentario humano (HPL)
Fig.
4
TOLERANCIA A LA GLUCOSA

Introducción
La glicemia en condiciones basales, varía entre 70 y 110 mg/dl, ( 0 3.8 a 5.6 mmol/L. )En la diabetes mellitus
se presenta elevación de la glicemia en ayunas
En la práctica vamos a estudiar la respuesta del organismo a una carga de glucosa es el llamado test de
Tolerancia a la glucosa..

Material
Sujeto de prueba en ayunas.
Glucosa 75 gr. Anhidra disuelta en 300 ml de agua más zumo de tres limones.
Glucómetro "Glucotrend" con las cintas reactivas.
Balanza.
Tallímetro.
Tubos de prueba.
Pipetas.
1 fiola de 100 ml.
Matraz de 1000 ml.
Reactivos para análisis de glucosa en orina:
Sulfato de cobre (puro cristalizado) 17.3 g
Citrato de sodio o potasio (cristalizado) 173.0 g Carbonato
de sodio (cristalizado) 200.0 g
Agua destilada, c.s.p. 1000.0 ml

Peso previo:
Colocar el chip del glucómetro.
Encender y ver el número de cinta reactiva que reconoce para su uso.
Colocar la tira reactiva en el glucómetro para su reconocimiento.

Método

Experimento N° 1
Pesar y tallar al alumno en estado de ayuno de 12 horas.
Hacer una determinación de glicemia en ayunas y después administrar una solución de 75 gr de glucosa.
Obtener muestras de sangre cada 30 minutos por 2 horas y determinar la glicemia. Simultánea buscar
presencia de glucosa en orina. Construir el gráfico correspondiente.

EXPERIMENTO N° 2: Test de Benedict


EI test de Benedict puede detectar concentraciones tan pequeñas como 0.15 a 0.2 por ciento de glucosa. La
solución de Benedict no es reducida por el ácido úrico, la creatinina, c1oroformo ó aldehídos.

DIABETES EXPERIMENTAL ALLOXANTICA

Introducción
En la práctica la Diabetes Mellitus se presenta en dos modalidades. Insulina Dependiente (tipo 1) e Insulina
No Dependiente (tipo 2). Estudiaremos la Diabetes de Tipo I por medio de la destrucción experimental de
las células beta del páncreas por medio de la administración intraperitoneal de una sustancia tóxica Alloxan
en la rata , es la Diabetes experimental. Diferenciaremos la glucosuria diabética de la glucosuria renal y para
ello emplearemos además, en esta práctica otra sustancia tóxica, el Phlorizin (Floricina) que es un glucósido
que provoca glucosuria en el mamífero . La floricina es un veneno enzimático que disminuye la cantidad de
energía disponible para el transporte activo de la glucosa desde la luz del túbuli proximal al interior de la
célula tubular y desde ésta a la sangre y disminuye la reabsorción tubular de glucosa., es decir, intoxica al
túbulí renal produciendo glucosuria renal, (que es una afección tubular en la cual aparece glucosa en la
orina con niveles normales de glucosa en la sangre). Sabemos que los estudios con micropunción han
demostrado que la glucosa es reabsorbida completamente en el tubo proximal y su depuración es cero. La
administración del tóxico floricina produce aclaramiento de la glucosa y esta tasa de aclaramiento de la
glucosa va aumentando hasta igualar a la inulina, esto demuestra que la floricina disminuye la reabsorción
tubular de glucosa y puede llegar a producir un bloqueo completo de la reabsorción tubular de la glucosa
y así se explica presencia de glucosuria renal por floricina. En la Diabetes Mellitus el orígen de la glucosuria
es diferente siendo el mecanismo primario la hiperglicemia y cuando la glucosa en el plasma va
incrementando hasta llegar a un nivel en que las células tubulares proximales alcanzan su máxima capacidad
de reabsorción de la glucosa; y es cuando la carga de glucosa filtrada por los glomérulos rebasa la
capacidad máxima de reabsorción de los túbulis que aparece glucosa en la orina. El valor medio de la TmG
es de 375 mg/min/1.73 m2 para los hombres y 303 mg/min/1.73 m2 para las mujeres.
En la Diabetes Mellitus existe un nivel elevado previo de glucosa en la sangre antes de que aparezca
glucosuria.

Materiales y Reactivos y Animales de experimentación.


3 Animales de experimentación: ratas de 200 a 300 gr. De peso, bien hidratadas en ayunas.
3 Jaulas metabólicas.
3 Jeringas de insulina
3 Jeringa con aguja de 5 ml.
Alloxan en solución 4% (4000 mg en 100 ml de suero fisiológico).
1 glucómetro con cintas reactivas.
Insulina cristalina
Phlorizin ( Floricina ) en solución al 4% en solución
salina.
1 tijera.
2 tubos de prueba.
Reactivos de Benedict
Procedimiento
Identificar tres ratas A, B, y C .
Determinar la glicemia basal en las tres ratas previamente pesadas (la muestra de sangre se obtiene de la
cola a través de un corte en el extremo).
Administrar vía intraperitoneal:
- A la rata A (control) se administra vía intraperitoneal 1.5 ml de Suero fisiológico.
- A la rata B: se administra vía intraperitoneal Alloxan en solución al 4% a la dosis de 200 mg. par
kilogramo de peso corporal.
- A la rata C: se administra vía intraperitoneal Phorizin en solución al 4% a la dosis de 200 mg. por
kilogramo de peso corporal.
En la rata B hacer control cada 5 minutos hasta que se haga diabética, y luego cada 20 minutos.
A la rata diabética administrar Insulina intraperitoneal a la dosis de 1 U! por cada 100 gramos de
peso.
Discusión