EFFECT OF TEMPERATURE ON ENZYMATIC REACTION SPEED
EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN
ENZIMÁTICA
Lidia Alba – Chavez1,
1 estudiantes de ingeniería agroindustrial. Facultad de ingeniería. Universidad de sucre. Sincelejo (Colombia).
Correo: yei-2196@hotmail.com
Abstract
INTRODUCCIÓN
Los procesos catalizados por enzimas en la
industria alimentaria son cada día más
numerosos, ya que presentan una serie de
ventajas frente a los catalizadores
1
Resumen
El estudio de la velocidad de reacción
enzimática tiene mucha aplicabilidad ya que
permite determinar con qué rapidez los
componentes de un sistema reactivo se
formen o se consuman durante una reacción.
En esta práctica de laboratorio se evaluó el
efecto de la temperatura sobre la velocidad de
reacción teniendo en cuenta los parámetros de
la ecuación de Arrhenius. Se utilizo almidón
soluble como sustrato, solución enzimática
de alfa amilasa y se estabilizo la temperatura
de biorreacción en 40, 48, 55, 63, 70 y 80ºC.
se obtuvo una energía de activación de
23008,1636 J/mol. Se logro establecer que la
temperatura está relacionada con la velocidad
de reacción enzimática de una forma
directamente proporcional. Reconociendo la
importancia de este estudio ya que analizar la
cinética química de una biorreacción permite
predecir el comportamiento de la misma.
Palabras Claves: ALFAamilasa, cinetica
química, , temperatura ,energía de activación,
almidon.
.
convencionales no biológicos, entre las
cuales se encuentra la gran actividad
enzimática que presentan, mayor control de
los parámetros de la reacción y mayor
eficiencia en los procesos de conversión
(Castellano & Ramirez, 2006).
La industria del procesamiento del almidón
depende totalmente del uso de enzimas para
la producción a gran escala (Crabb & Shetty,
1999). Entre estas enzimas, las amilasas y las
glucoamilasas son las más importantes. Estos
hidrolizados de polisacáridos obtenidos
mediante reacciones enzimáticas se utilizan
en la producción fermentativa de alcoholes,
aminoácidos, biopolímeros, ácidos
carboxílicos y enzimas (Koch & Roper,
1998). Por lo tanto, representan un valioso
material de partida para síntesis química y
bioquímica. Aplicaciones amplias de la
glucoamilasa en la industria del almidón
motivar la investigación en la mejora de las
propiedades de la enzima por métodos de
selección de enzimas, la biología molecular y
la ingeniería de la enzima (Norouzian,
Akbarzadeh, Scharer, & Young, 2006), por lo
que es importante la determinación de los
parámetros cinéticos y termodinámicos.
Se han realizado diversos estudios para
estudiar el efecto de la temperatura sobre la
velocidad de reacción enzimática empleando
alfa amilasa. Shucla et. al. (2015) realizo un
estudio de los parámetros termodinámicos y
cinética de la alfa amilasa para la hidrólisis
del almidón soluble, obtuvieron una energía
de activación de 21,16 KJ /mol, este
parámetro se determinó a la temperatura
óptima de la enzima la cual se reportó de 50
°C. De igual forma, Ghollasia et. al. (2012)
en un estudio de la hidrolisis de almidón en
glucosa por alfaamilasa aislada de Bacillus
megaterium encontrando que la energía de
activación para la reacción fue E =37,5
kj/mol.
Por otro lado, Yadav, & Svens (2012)
Evaluaron diferentes concentraciones de
2
cacl2 en la estabilidad térmica y la actividad
catalítica de la alfa amilasa obtenida a partir
de una cepa de bacillus amyloliquefaciens y
usando almidón como sustrato. Se encontró
que Sin concentración de cacl2: Se obtuvo
que la energía de activación para la reacción
fue E =100 kj/mol.
Con una concentración de 2mm de cacl2: Se
obtuvo que la energía de activación para la
reacción fue E =228 kj/mol. Concluyendo
que la concentración de calcio aumenta la
energía de activación.
En este sentido y en vista de la importancia
que tiene estudiar la cinética química de una
biorreacción, el presente estudio busca
evaluar el efecto de la temperatura sobre la
velocidad de reacción teniendo en cuenta los
parámetros de la ecuación de Arrhenius.
MATERIALES Y MÉTODOS
Este estudio se llevó a cabo en las
instalaciones de la planta piloto de la
universidad de Sucre sede granja el perico. Se
utilizo almidón soluble como sustrato y
solución enzimática de alfa amilasa.
Primeramente, como medio se preparó una
solución de almidón al 18% p/p, se estabilizó
el pH utilizando NaOH al 0,1N dependiendo
del pH inicial obtenido en las muestras, hasta
lograr un valor de 5, así mismo se procedió a
estabilizar la velocidad de agitación a 400
rpm y de igual forma la temperatura, las
cuales fueron de 40, 48, 55, 63, 70 y 80ºC. Se
adicionó 100 μL de enzima en cada uno de los
biorreactores agitando continuamente. Se
tomaron muestras de 500 μL de cada
biorreactor cada 25 minutos, desde el tiempo
0 hasta los 75 minutos, se inactivó la enzima
en agua hirviendo a 100ºC durante 5 minutos
con posterior choque térmico en baño de hielo
a -4ºC. Para la determinación de la

concentración de azucares reductores Productos

(Producto) presente en cada muestra para (g/L)
cada tiempo se utilizó la técnica del DNS. T (K)
318,15 321,15 328,15 336,15 343,15 351,15
Se procedió a calcular los parámetros de la t
función de Arrhenius linealizada. Primero se (segundos)
calculó las velocidades para cada una de las 0 1,65 1,455 1,73 28,64 6,72 20,492
temperaturas de trabajo (40, 48, 55, 63, 70 y 1500 16,85 32,77 48,86 82,85 100,25 90,698
80ºC) requeridas para el cálculo de la 3000 27,87 42,03 55,8 79,791 102,74 96,46
constante de velocidad (K) usando la 4500 29,03 40,87 66,74 91,481 84,651 94,34
siguiente formula:
Tiempo Vs productos
y = 0.0152x + 41.402
120
R² = 0.6377
y = 0.0085x + 10.156
[𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛]𝐼𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 − [𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛]𝐹𝑖𝑛𝑎𝑙 100 R² = 0.7504
𝑣= y = 0.0135x + 12.987
𝑇𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜𝐵𝑖𝑜𝑟𝑒𝑎𝑐𝑐𝑖ó𝑛
R² = 0.8275
80
Productos (g/L)

318,15 K
321,15 K
60
Luego, se graficó Ln (v) vs 1/T, partiendo de 328,15 K
la fórmula: 336,15 K
40
𝐸𝑎 343,15 K
𝐿𝑛(𝑣) = − + 𝐿𝑛(𝐴) 251,15 K
𝑅𝑇 20
y = 0,0158x + 38,148
R² = 0,4536
0 y = 0.0062x + 4.876
0 2000 4000 6000 R² = 0.895
𝐸𝑎
Donde la pendiente equivale a − 𝑅𝑇 y el Tiempo (s) y = 0.0124x + 42.871
R² = 0.7074
intercepto es igual a 𝐿𝑛(𝐴)
Figura 1: variación de la concentración de
RESULTADOS Y DISCUSION
glucosa con respecto al tiempo a las
La tabla 1 muestra la producción de producto diferentes temperaturas.
en cada una de las temperaturas evaluadas.
Se logra observar que la concentración de
glucosa producida en la mayoría de los casos
tiende a ser mayor a medida que aumenta la
temperatura de trabajo de la reacción para un
mismo intervalo de tiempo.

3
Parámetros de Arrhenius Figura 2. Relación de la constante de
velocidad con la temperatura.
El comportamiento presentado por la
reacción en cuanto a la producción de glucosa De la pendiente de la figura 2 se determinó
en función del tiempo, muestra una relación una energía de activación de 23008,1636
lineal (figura 1). De lo cual se puede J/mol y una constante de Arrhenius de
establecer que la constante de velocidad (K) 0,25761218 mol/L*s.
será igual a la velocidad de reacción para cada
temperatura evaluada. El fin de todas las enzimas es reducir la
energía libre de activación de las reacciones
Tabla 2. Valores de las velocidades y que catalizan. De esta manera se reduce el
constantes de velocidad para cada umbral energético a superar de la reacción y
temperatura a la cual se evaluó la reacción. por ende se hace mucho más rápida. Podemos
afirmar que cuanta más alta es la energía de
T (K) 1/T V (mol/L*seg) ln V activación más lenta será la reacción pues el
318,15 0,00314317 0,0000344139 -10,2771 complejo enzima-sustrato será más inestable.
321,15 0,00311381 0,0000471803 -9,9615
328,15 0,00304739 0,0000749334 -9,4989 Aunque la energía de activación encontrada
336,15 0,00297486 0,0000688277 -9,5839 en este estudio no presento valores
343,15 0,00291418 0,0000843694 -9,3803 semejantes a los reportados en la literatura, se
352,15 0,0028397 0,0000876998 -9,3416 logra establecer que está en el rango de
valores reportados para la actividad
enzimática. Shucla et. al. (2015) quien realizo
De las pendientes de las gráficas, se obtienen
un estudio de los parámetros termodinámicos
las velocidades en (g/L*seg) para lo cual se
y cinética de la alfa amilasa para la hidrólisis
convierten a (mol/L*seg) para lograr
del almidón soluble, y obtuvieron una energía
homogeneidad en las unidades.
de activación de 21,16 KJ /mol. Por su parte
Ghollasia et. al. (2012) en un estudio de la
1/T Vs Ln V hidrolisis de almidón en glucosa por alfa
-9.0000 amilasa aislada de Bacillus Megaterium
0.0028 0.0029 0.003 0.0031 0.0032
-9.2000 encontraron que la energía de activación para
la reacción fue E =37,5 kj/mol. Esto indica
-9.4000
Ln V(mol/L*s)¯1

que la energía de activación encontrada en

-9.6000 este estudio la cual fue de aproximadamente
-9.8000 23,0 kj/mol, está en el rango teniendo en
cuenta los estudios citados anteriormente.
-10.0000 y = -2767.4x - 1.3563
R² = 0.7773
-10.2000

-10.4000 Teniendo en cuenta una revisión realizada se

1/T( k¯1)
encontró las energías de activación para
reacciones de hidrolisis de almidón por

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acción de alfa amilasa, están en un rango de
21,16 KJ /mol a 100 kj/mol, para los sistemas
en los cuales no se utiliza ninguna clase de
sustancias inhibidoras; en el estudio
reportado por (Yadav, 2012)donde se utilizó
una concentración de 2mm de cacl2, la
energía de activación presento un máximo de
228 kJ/mol; lo que indico que para este
estudio en el cual no se utilizó sustancias
inhibidoras la energía de activación estuvo en
el rango citado anteriormente.
En cuanto a la energía de activación se
encontró que es menor a las reportadas, esto
se debe a que la energía necesaria para que se
dé el complejo activado a partir del cual la
reacción ocurre de forma normal, es más baja
para la maltosa como sustrato que para el
almidón.
CONCLUSION
Se logró establecer que en la mayoría de los
casos la concentración de glucosa producida
es mayor a medida que aumenta la
temperatura de trabajo de la reacción; de igual
manera se establece que a medida que la
temperatura aumenta, aumentan la velocidad
de reacción ya que se da un aumento de la
frecuencia de las colisiones entre moléculas
de enzima y de sustrato.
tecnológica. Ingenieria e Investigación, 52-
67.
Crabb, W., & Shetty, J. (1999). Commodity
scale production of sugars from starches.
Curr Opin Microbiol, 252–256.
Koch, H., & Roper, H. (1998). New industrial
products from starch. Starch Starke, 121 -
131.
Ghollasia, M. (2012). Improvement of
thermal stability of a mutagenised alfa-
amylase by manipulation of the calcium-
binding site.
Norouzian, D., Akbarzadeh, A., Scharer, J., &
Young, M. (2006). Fungal glucoamylases.
Biotechnol Adv, 80 – 85
Yadav, J. K. (2012). A differential behavior
of alfa-amylase, in terms of catalytic activity
and thermal stability, in response to higher
concentration CaCl2.
Shukla, R. (2015). Characteristics and
thermodynamics of alfa-amylase from
thermophilic actinobacterium, Laceyella
sacchari TSI-2.

En cuanto a la energía de activación, se logra

establecer que cuanta más alta es la energía de
activación más lenta será la reacción pues el
complejo enzima-sustrato será más inestable.

BIBLIOGRAFIA

Castellano, O., & Ramirez, D. (2006).

Perspectiva en el desarrollo de las enzimas
industriales a partir de la inteligencia

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