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PRÁCTICA Nº 5

DETERMINACION DE PROTEINAS EN UNA MUESTRA DE CARNE POR EL METODO DE


BIURET

ESTUDIANTES

JOSE FERNANDO BERNAL CASTAÑEDA Cód. 117003548

CRISTIAN CAMILO BUITRAGO MONTENEGRO Cód. 117003506

PROFESOR

MIGUEL ÁNGEL RAMIREZ

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS Y RECURSOS NATURALES

INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

VILLAVICENCIO-META

2017
OBJETIVOS

 Determinar el contenido de proteínas en una muestra de carne por el método de


Biuret.

DATOS

4.1 Preparación y digestión de la muestra.

Tabla Nº 1

Muestra de Carne (Salchichas rica) 1.0326 g

4.2 Preparación de la curva de calibración.

Tabla Nº 2

Absorbancia Curva De Calibración


Muestra Concentración Abs1 Abs2 Abs3
(mg/mL)
1 0.00 0.00 0.00 0.00
2 1.00 0.052 0.053 0.052
3 2.00 0.091 0.097 0.097
4 3.00 0.132 0.137 0.139
5 4.00 0.181 0.186 0.187
6 5.00 0.229 0.235 0.236

4.3 Determinación de proteínas totales en la muestra.

Tabla Nº 3

Absorbancia Muestra De Carne (Salchicha rica)


Concentración Abs1 Abs2 Abs3
1 0.028 0.031 0.031
2 0.047 0.049 0.050
3 0.064 0.066 0.068
CALCULOS

4.2 Preparación de la curva de calibración.

Solución de BSA 5.00 mg/mL

𝐶1 × 𝑉1 = 𝐶2 × 𝑉2

CONCENTRACION

Tubo N°1 Blanco:


Vsp: 0.00 mL
Tubo N°2:
Vsp: 0.20 mL
0.20 mL x 5.00 mg/mL
𝐶2 = = 1.00 mg/mL
1.00 𝑚𝐿
Tubo N°3:
Vsp: 0.40 mL
0.40 mL x 5.00 mg/mL
𝐶3 = = 2.00 mg/mL
1.00 𝑚𝐿
Tubo N°4:
Vsp: 0.60 mL
0.60 mL x 5.00 mg/mL
𝐶4 = = 3.00 mg/mL
1.00 𝑚𝐿
Tubo N°5:
Vsp: 0.80 mL
0.80 mL x 5.00 mg/mL
𝐶5 = = 4.00 mg/mL
1.00 𝑚𝐿
Tubo N°6:
Vsp: 1.00 mL
1.00 mL x 5.00mg/mL
𝐶6 = = 5.00 mg/mL
1.00 𝑚𝐿
Promedio de absorbancias:

TUBO N°2

𝐴𝑏𝑠1 + 𝐴𝑏𝑠2 + 𝐴𝑏𝑠3


𝑥̅ =
3
0.052 + 0.053 + 0.052
𝑥̅ = = 0.052
3

TUBO N°3

0.091 + 0.097 + 0.097


x̅ = = 0.095
3

TUBO N°4

0.132 + 0.137 + 0.139


x̅ = = 0.136
3

TUBO N°5

0.181 + 0.186 + 0.187


x̅ = = 0.185
3

TUBO N°6

0.229 + 0.235 + 0.236


x̅ = = 0.233
3
y = 0.0459x + 0.0022
CURVA DE CALIBRACION R² = 0.999
0.25

0.2
ABSORBANCIA

0.15

0.1

0.05

0
0 1 2 3 4 5 6
CONCENTRACION

Con la ecuación dada se calcula la absorbancia

𝑦 = 0.0459𝑥 + 0.0022

Donde:
Y: Absorbancia
X: Concentración

4.3 Determinación de proteínas totales en la muestra.

Volumen después del centrifugado: 17.0 mL

Muestra N°1

Volumen de 0.20 mL

Volumen de agua destilada: 0.80

Promedio de Absorbancia

0.028 + 0.031 + 0.031


𝑥̅ = = 0.030
3
Si despejamos de la ecuación a X podremos conocer el valor de la concentración
𝑦 − 0.0022
𝑥=
0.0459
0.030−0.0022
𝐶𝑑′ = = 0.606 mg/mL
0.0459

Concentración absorbancia N°1

𝐶𝑑 × 𝑉𝑑 = 𝐶𝑑 ′ × 𝑉𝑑′

𝑚𝑔
0.606 𝑚𝐿 × 1.00𝑚𝐿
𝐶𝑑 = = 3.03 𝑚𝑔/𝑚𝐿
0.20 𝑚𝐿

𝐶𝑐 × 𝑉𝑐 = 𝐶𝑑 × 𝑉𝑑

𝑚𝑔
3.03 𝑚𝐿 x 50.0 mL
𝐶𝑐 = = 15.15 mg/mL
10.0 𝑚𝐿

𝑚𝑔
15.15 × 17.0 𝑚𝐿 = 257.55 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎
𝑚𝐿

1.00 𝑔
257.55 𝑚𝑔 × = 0.258 𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎
1000 𝑚𝑔

Muestra N°2

Volumen de 0.40 mL

Volumen de agua destilada: 0.60 mL

Promedio de Absorbancia
0.047 + 0.049 + 0.050
𝑥̅ = = 0.049
3

0.049−0.0022
𝐶𝑑′ = = 1.02 mg/mL
0.0459
Concentración absorbancia

𝐶𝑑 × 𝑉𝑑 = 𝐶𝑑 ′ × 𝑉𝑑′

𝑚𝑔
1.02 𝑚𝐿 × 1.00𝑚𝐿
𝐶𝑑 = = 2.55 𝑚𝑔/𝑚𝐿
0.40 𝑚𝐿

𝐶𝑐 × 𝑉𝑐 = 𝐶𝑑 × 𝑉𝑑

𝑚𝑔
2.55 𝑚𝐿 x 50.0 mL
𝐶𝑐 = = 12.75 mg/mL
10.0 𝑚𝐿

𝑚𝑔
12.75 𝑚𝐿 × 17.0 𝑚𝐿 = 216.75 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎

1.00 𝑔
216.75 𝑚𝑔 × = 0.217 𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎
1000 𝑚𝑔

Muestra N°3

Volumen de 0.60 mL

Volumen de agua destilada: 0.40 mL

Promedio de Absorbancia
0.064 + 0.066 + 0.068
𝑥̅ = = 0.066
3

0.066−0.0022
𝐶𝑑′ = = 1.39 mg/mL
0.0459

Concentración absorbancia

𝐶𝑑 × 𝑉𝑑 = 𝐶𝑑 ′ × 𝑉𝑑′

𝑚𝑔
1.39 𝑚𝐿 × 1.00𝑚𝐿
𝐶𝑑 = = 3.48 𝑚𝑔/𝑚𝐿
0.40 𝑚𝐿

𝐶𝑐 × 𝑉𝑐 = 𝐶𝑑 × 𝑉𝑑

𝑚𝑔
3.48 𝑚𝐿 x 50.0 mL
𝐶𝑐 = = 17.4 mg/mL
10.0 𝑚𝐿
𝑚𝑔
17.4 × 17.0 𝑚𝐿 = 295.8 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎
𝑚𝐿

1.00 𝑔
295.8 𝑚𝑔 × = 0.296 𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎
1000 𝑚𝑔

 Promedio de proteínas totales:

0.258 + 0.217 + 0.296


𝑥̅ = = 𝟎. 𝟐𝟓𝟕 𝐠
3

Desviación estándar:

(0.258 − 𝟎. 𝟐𝟓𝟕 )2 + (0.217 − 𝟎. 𝟐𝟓𝟕)2 + (0.296 − 𝟎. 𝟐𝟓𝟕)2


𝑠=√
2

𝒔 = 𝟎. 𝟎𝟒

Coeficiente de varianza:
𝑆 0.04
% CV = 𝑋 x 100 = 0,257 x 100 = 15,6%

Porcentaje peso/peso:
0.257 g
%p/p = x 100 =24.9%
1.0326 g
Error absoluto:

𝐸: 𝑥̅ − 𝑥𝑡

𝐸: ̅̅̅̅̅̅̅
0.257 − 0.1033

𝐸: 0.1537g

Error relativo:
εa
εr= x 100
X

0.257−0.1033
εr = x 100 = 1.5%
0.1033

RESULTADOS

3.2 DETERMINACION DE PROTEINAS EN LA MUESTRA.

Tabla Nº 4

Promedio de proteínas 0.257 g


Desviación Estándar 0.04
Coeficiente de Variación 15,6%
Error Absoluto 0.1537g
Error Relativo 1.5%
DISCUSION DE RESULTADOS

Fig. 1. Tabla nutricional de salchichas enlatadas Rica

En la práctica se determinó la cantidad de proteínas contenidas en una muestra de carne


(Salchichas rica), la cantidad de muestra que se tomo fue de 1.0326 g y la prueba para la
cuantificación o determinación de dichas proteínas fue con el método de Biuret, el cual se
caracteriza por una coloración azul celeste cuando los iones cúpricos son acomplejados
por los enlaces peptídicos a pH alcalino, la intensidad de color es directamente
proporcional a la cantidad de proteínas, es decir que entre más intenso sea el azul más
proteínas contiene la muestra.

Teóricamente las proteínas de la salchicha rica se encuentran en un 10% del peso al que
se va analizar, en este caso el peso inicial es de 1,033 g el cual tendría 0,1033 g de
proteína (Teóricamente). En las Tablas Nº 4 se anexan todos los datos realizados en los
cálculos donde se encontró una cantidad de proteínas de 0,257 g este valor se dio
Promediando la cantidad de proteínas en cada absorbancia, en cuanto a la desviación
estándar fue de 0.04 es decir que los valores dados son muy cercanos o similares, en
cuanto al coeficiente de variación fue de 15,6% es decir cuánto se aleja cada dato del
promedio siendo este un porcentaje grande.

CONCLUSIONES

 El método de Biuret fue efectivo para determinar el contenido de proteínas en una


muestra de Salchichas rica.
 Hubo la necesidad de modificar el valor del patrón de albumina sérica para los
cálculos, a consecuencia de que no correspondía a 10 mg/mL dicha en el
laboratorio. Se trabajó con una concentración de 5 mg/mL, además que la práctica
no se podía repetir por el tiempo.
 En cuanto al error relativo y absoluto dieron valores pequeños en comparación a
los reales por motivo de buen manejo y practica de los métodos.
 Las salchichas enlatas rica tiene una cantidad significativa de proteína, alta podría
decirse ,con 5g de proteína por 50g que es el peso total las salchichas.
BIBLIOGRAFIA

 Contenido de Proteinas en los alimentos


http://www.redvegetarianos.com/magazine/read/porcentaje-de-protenas-en-los-
alimentos-_11.html

 Manual de experimentos de laboratorio para bioquímica, Silvia Quesada Mora,


Pag. 31 Determinación de Proteínas por el método de Biuret.

 LABORATORIO DE ALIMENTOS I. Fundamentos y técnicas de análisis de alimentos.


México, Departamento de alimentos y biotecnología, Facultad de química, UNAM,
2007-2008.

 Química de los alimentos. Hans-Dieter Belitz, Werner Grosch, Peter Schieberle –


2011.

 Química de Alimentos: Manual de laboratorio - Página 111. Nuria Bolaños V.,


Giselle Lutz C., Carlos H. Herrera R. – 2003.