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Instructivo para el Análisis de Proteína Cruda

Código: I-CCBA-LNA-02 Revisión: 05 Página: 1 de 8


Fecha de emisión: 19 -Abril-2010 Fecha de modificación: 23- junio-2016

1.- OBJETIVO

Establecer el método para la determinación de Proteína Cruda en alimentos balanceados, materias primas u otros tipos de
muestras que son admitidas en el Laboratorio de Nutrición Animal del CCBA-UADY.

2.- ALCANCE

Aplica para todas las muestras registradas en el Laboratorio de Nutrición Animal a las que les hayan solicitado la
determinación de Proteína Cruda.

3.- DESCRIPCIÓN DE LA OPERACIÓN

Análisis de Proteína Cruda (Método de Dumas)


El método de Dumas mide el nitrógeno total como gas nitrógeno después de la combustión completa del alimento.

3.1. MATERIAL Y EQUIPO


3.1.1. Balanza analítica
3.1.2. Navecillas de combustión (leco 528-203-250)
3.1.3. Estándar EDTA (leco 502-092-250)
3.1.4. Equipo analizador de CN (TRUMAC leco CN-2013)
3.1.5. Espátula de laboratorio

Figura 1. Equipo analizador C y N TRUMAC LECO

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3.2. MÉTODO

3.2.1 Chequeo de Rutina


Observar los tubos de filtros (primario y secundario), de reactivos (Reagent tube packing) y de
catalizadores (Reduction Heater tube) se encuentren adecuados para el posterior análisis, de no ser así
se tendrá que realizar el cambio de los tubos.

Primary y secundary filter tube


Cambio de filtro primario y secundario
El cambio del tubo de filtro primario y secundario, se debe de realizar cuando se encuentre hidratada y oxidada la lana de
acero y de vidrio. Seguir el procedimiento descrito en la pág. 2-34 del manual de instrucciones de equipo Leco CN-2013,
para el cambio de filtros (501-081 Glass wool, 502-310 steel wool).

Figura 2. Filtros primario y secundario


Reagent tube packing
Cambio de los tubos de reactivos
Las causas que ameritan el cambio de relleno de los tubos pueden ser.
a) El material de reactivos se encuentre hidratado y de color opaco al original.
b) La repetibilidad de los resultados es errónea.
Si todo el equipo está funcionando correctamente (mediante estándares), los tubos, no se cambian.
(Seguir el procedimiento descrito en la pág. 2-31 del manual de instrucciones de equipo Leco CN-2013. El material de estos
tubos dura aproximadamente 300 análisis. (Anhidrone (501-171-HAZ), lana de vidrio (501-081 Glass wool) y Lecosorb (502-
174-HAZ).

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Figura 3. Tubo de reactivo

Reduction Heater tube


Cambio de Reactivos del Catalizador

a) Cuando se realice algún cambio de reactivos del tubo catalizador, las válvulas de los gases deberán estar
cerrados.
b) Si el equipo Leco-2013 está trabajando en perfectas condiciones, no se cambiará el catalizador.
c) Si el equipo no está funcionando correctamente, se deberá verificar y corregir las fallas.
Para el cambio, se procede a retirar el tubo, con ayuda de un par de guantes resistentes al calor, éste se deja
enfriar, posteriormente, se lava donde dentro de una campana de extracción y se le añade HCl de grado reactivo,
para que se desprendan los reactivos solidificados. Seguidamente se lava el tubo con un escobillón y jabón y se
enjuaga con agua destilada, posteriormente se seca en una estufa a 100ºC. por 1h aprox.
Una vez seco el tubo y a temperatura ambiente, se rellena de acuerdo al manual del equipo pág. 2-32. a) 502-189,
b) 501-621, c) 502-049. Después se coloca el tubo en el lugar correspondiente del equipo LECO-2013 y se
esperan 24 horas para estabilizar el equipo.

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Figura 4. Tubo Catalizador

3.2.2 Preparación del Equipo

Antes de encender el equipo checar los tanques de gases Aire, Oxigeno y Helio y verificar que estén calibrados a
40 psi.
Posteriormente una vez abiertas las válvulas de los gases, encender la computadora del equipo.

3.2.3 Prueba de fuga de gases


Cada semana debe realizarse la prueba de fuga de gases de Helio y Oxigeno, el resultado del espectro siempre
debe de encontrase dentro de la zona gris obscuro, de no ser así revisar las válvulas de los gases, para verificar
que no haya fuga en los tanques, o que el manómetro externo indique una presión de 100 psi o menos, que es
cuando debe realizarse el cambio de los tanques.

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Figura 5. Reporte de prueba de fugas (O2 y He)

3.2.4 Análisis

i. Colocar 5 navecillas en el automuestrador para la calibración de los blancos (helio), registrarlos en el software de
acuerdo a la numeración correspondiente (nombre, peso, locación). Ejemplo: Blank, 1.0000, E1
Nota: el valor del peso lo da automáticamente el software.
ii. Una vez insertados los datos de los blancos oprimir el icono “Analyze”
iii. Al finalizar la calibración de los blancos, escoger los valores que se encuentren alrededor de 0.001% de nitrógeno y
de carbono. Oprimir el botón Configuration y seleccionar Blank
Nota: Es importante señalar que los porcentajes de N y C deberán tener un valor de cero (0) los primeros dos
decimales.
iv. Posteriormente, calibrar el equipo con el EDTA, pesando 0.5g de dicho estándar en cada una de 3 navecillas,
después colocarlas en el automuestrador e insertar los datos en el software de acuerdo a la numeración
correspondiente (nombre, peso, locación). Ejemplo: EDTA, 0.5001, D1. Apuntar los valores en la bitácora F-CCBA-
LNA-07
v. Una vez insertados los datos del estándar EDTA en el software, oprimir el icono “Analyze”
vi. Al finalizar la calibración del estándar EDTA, seleccionar los valores que se encuentran alrededor del rango
indicado (41.07±0.13 % de C y 9.56± 0.02 % de N), de no ser así oprimir el botón Configuration y seleccionar Drift
(ajustar). Seleccionar los valores correspondientes y registrarlos en la bitácora.
Nota: Si lo valores del estándar no son correctos o no se ajustan con los valores que emite LECO, se insertarán dos
estándares más y repetir el proceso. Así consecutivamente hasta que el equipo dé el valor correcto del Estándar
reportado.
vii. Una vez calibrado el equipo con el blanco y con el estándar EDTA, se realizará el análisis de las muestra de los
usuarios.
viii. Pesar y tarar las navecillas, añadir 0.5g de muestra aproximadamente (sólido o líquido), registrar los valores en la
bitácora F-CCBA-LNA-07 y en el software, oprimir el icono “Analyze”, siguiendo el mismo procedimiento de los
estándares.

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3.3 Cálculos
Este análisis se realiza por duplicado.

El cálculo del porcentaje de proteína cruda es directo, el software proporciona el resultado.


%PC= %N*factor(6.25)

El factor 6.25 se usa generalmente para la mayoría de las muestras, aunque es posible que este cambie
dependiendo de su naturaleza (www.fao.org).
El coeficiente de variación máximo permitido entre dos repeticiones será de acuerdo al Cuadro 1, en caso contrario
repetir el análisis hasta obtener dicho coeficiente de variación.

Cuadro1. Criterios de aceptación de resultados de Proteína Cruda de


acuerdo al tipo de muestra

TIPO DE MUESTRA % CV
Leche 4%
Quesos 2,5%
Orinas 3.5%
Pastos/ forrajes/ plantas 2%
Granos y cereales (sorgo, maiz, trigo, centeno) 1%

Alimentos balanceados 1%
Carnes 2,5%
Visceras 6%
Chorizos 2%
Suelos 3%
Heces 1%

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4.- DOCUMENTOS DE REFERENCIA

Código
Nombre del documento Lugar de almacenamiento

N/A Manual de determinación de nitrógeno/carbono TruMac CN Anaquel de manuales

FAO.ORG.Factores de conversión de proteína usados para


N/A convertir nitrógeno a proteína, entre diferentes ingredientes Vía Electrónico
alimenticios

5.- CONTROL DE REGISTROS

Identificación Nombre del Lugar de Responsable de Tiempo de Disposición de


registro almacenamiento su protección retención los registros

Área de Hasta
Químico que realiza
F-CCBA-LNA-07 Bitácora Proteína cruda completar su Archivo Muerto
documentos análisis
llenado.
Hoja de Reporte de Químico responsable
Área de 3 años
F-CCBA-LNA-14 Resultados Proteína de entrega de 1 año
cruda documentos resultados Archivo Muerto

6.- GLOSARIO

6.1 .- SIGLAS
LNA: Laboratorio de Nutrición Animal.
O2: Oxigeno
He: Helio
N: Nitrogeno
PC: Proteina Cruda

6.2 .- DEFINICIONES
Muestra: Subconjunto representativo de una poblacion. Parte representativa del universo de estudio. Una porcion del todo
que se elige para representar el todo de un experimento

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7.- CONTROL DE REVISIONES

Nivel de Sección y/o


Descripción de la modificación y mejora Fecha de modificación
revisión página
Se añadió la política 4. Antes de realizar cualquier análisis con
el equipo LECO-CN2000, el Químico Analista deberá revisar
las condiciones de la planta de luz de emergencia en la
Bitácora de Planta de Luz (F-CCBA-LNA-27) y el
funcionamiento de los aires acondicionados en la Bitácora
01 Políticas Control de aires acondicionados (F-CCBA-LNA-30) Mayo 2011
Se añadió la política 5. Antes de realizar cualquier análisis con
el equipo LECO-CN2000, el Químico Analista deberá revisar
el estado de los gases que utiliza el equipo en la Bitácora
Control de compra ( F-CCBA-LNA-31) y uso de gases (F-
CCBA-LNA-26)
Se modificó la metodología para determinar proteína (método
02 Método dumas) LECO 2013. Abril 2014
Se elimino el apartado de políticas.
Se agregó el cuadro 1 Criterios de aceptación de resultados
03 Cálculos Agosto 2015
de Proteína Cruda de acuerdo al tipo de muestra
Se Modifico el cuadro 1 Criterios de aceptación de resultados
04 Cálculos 5 de Abril 2016
de Proteína Cruda de acuerdo al tipo de muestra
Control de Cambió de responsable del laboratorio de nutrición animal 23 de junio 2016
05
revisiones
Nota: Ésta sección será utilizada a partir de la primera modificación a este documento. La revisión 00, se
mantendrá en blanco.

Elaboró Revisó Aprobó

Q.I Alejandra García Gutiérrez Dr. Armìn Ayala Burgos Dr. Armìn Ayala Burgos
Q.I Wendy Viridiana Couoh Chalé Responsable de LNA Responsable de LNA
Q.B.A Concepción Capetillo Leal
Técnico Académico

Las firmas avalan la responsabilidad de las personas que: elaboran el documento, revisan su
adecuación y aprueban para su implementación dentro del Sistema de Gestión de la Universidad
Autónoma de Yucatán.

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