Centro de Ciencias Básicas.

Departamento de Química.
Academia de Química.
Lic. Químico Fármaco Biólogo.

Pre-reporte 6
“Actividad de la succinato deshidrogenasa en
músculo.”

Materia: Bioquímica II

Profesora: María Cristina Serna Gutiérrez.

Alumna: Flores Ibarra Joselyn Georgina.

Fecha: 04/Mayo/2018
OBJETIVO
Observar de manera indirecta la actividad enzimática de la succinato deshidrogenasa en
músculo.
INTRODUCCIÓN
En 1935, el bioquímico americano de origen húngaro Szent-Gyӧrgi, utilizando
preparaciones de musculos pectorales de pichones, en las que las mitocondrias estaban
intactas, demostró que la respiración celular (consumo de oxigeno) esa estimulada por
ácidos dicarboxilicos tales como succínico, fumárico, málico y oxalacético. También
demostró que la oxidación del ácido succínico a fumárico, catalizada por la succinato
deshidrogenasa, formaba parte central del metabolismo oxidativo de la celula, ya que el
inhibidor de esta enzima, el malonato, era también un potente inhibidor de la respiración
celular. En la misma época, los bioquímicos alemanes: Knoop y Martinius estaban
estudiando las etapas intermedias de la oxidación del ácido cítrico, y llegaron a establecer
la siguiente secuencia de reacciones en preparaciones del hígado:

Estos antecedentes, y hallazgos de sus propios experimentos, llevaron al bioquímico inglés

Sir Hans Krebs al convencimiento de que la oxidación de los ácidos tricarboxílicos y
dicarboxílicos estaba conectada con la combustión (ocidación) de los alimentos en el
organismo, y que el “ácido oxalocético junto con otra sustancia, entonces desconocida, pero
que ahora se sabe que es el Acetil CoA, podrían combinarse para la síntesis de citrato en
forma de un ciclo”. El ciclo del ácido cítrico fus postulado, por vez primera en 1937, ocmo
la oxidación del piruvato en los tejidos animales, por Hans Krebs. (Melo, 2007)
La capacidad del musculo esquelético para llevar a cabo un trabajo prolongado de
intensidad moderada depende de su capacidad oxidativa. Los regímenes de entrenamiento
de resistencia que producen un incremento de la capacidad aerobia también tienen como
resultado un incremento de las actividades de las enzimas oxidativas en los músculos
utilizados en la actividad de entrenamiento, pero la actividad de las enzimas glucoliticas
permanece relativamente inalterada. El tamaño y número de mitocondrias y las actividades
de las enzimas como succinato deshidrogenasa aumentan en los músculos que han
seguido un entrenamiento de resistencia. (Booth, 1991)
Las actividades enzimáticas del ciclo de Krebs como la succinato deshidrogenasa, los
componentes de la cadena de transporte de electrones y la capacidad para transportar y
oxida NADH aumentan como resultado del entrenamiento de resistencia. (Wilmore, 2007)
La respiración celular ósea el consumo de oxigeno es estimulado por ácidos dicarboxilicos
tales como succínico, fumarico, malico y oxalacetico. También se demostró que la oxidación
del ácido succínico a fumarico, catalizada por la succinato deshidrogenasa formaba parte
central del metabolismo oxidativo de la célula, ya que un inhibidor de esta enzima, el
malonato, era también un potente inhibidor de la respiración celular. (Wilmore, 2007)
 MATERIAL
 Arena lavada.
 Mortero con mano.
 Tubos de centrifuga.
 2 ratas grandes de laboratorio.
 Gradilla con 3 tubos de ensaye.
 2 pipetas de 5 mL.
 Baño maría a 40°C.
 Termómetro.
REACTIVIOS
 Corazón de rata recién sacrificada.
 NaOH 10%
 Ác. Succínico al 3% pH 7.4
 Ác. Manólico al 3% Ph 7.4
 Azul de metileno 0.01% en agua.
 Ác. Tricloroacético.
 Aceite mineral.

PROCEDIMIENTO

1. Triturar en un mortero 3. El sobrenadante se

aprox 1g de musculo
fresco molido, usando
un poco de arena
lavaada y 12 mL de la
solución de ácido
succinico 3% pH 7.4.
2. El homogenado se
coloca en tubos de
centriguga y se
centrifuga a 2000 rpm
por 10 min.
reparte en volúmenes
iguales de 30 gotas en
tre stubos de ensaye. A
los tres se añade 1mL
adicional de ácido
succinico 3% pH 7.4.

4. Al tubo #1 se le añade 6. Al tubo #3 se añade

5. Al tubo #2 se añade
1mL de ácido 1mL deácido malónico al
1mL de agua destilada.
tricloroacético al 20%. 3% pH 7.4.

9. Todos los tubos de

ensaye se incuban en
8. Los tubos se mezclan
baño maría a 40°C y se
por inversión y se les
7. A los tres tubos se observan los cambios de
añade 1mL de aceite
añaden 5 gotas de azul color durante 20min,
mineral para aisalr la
de metileno al 0.01%. midiendo el tiempo que
reaccion del oxigeno del
tarda el decolorarse el
aire.
azul de metileno si
acaso esto ocurre.

CUESTIONARIO
1. Describa el ciclo de Krebs completo usando formulas químicas de sustratos y
productos de todas las reacciones, e indique donde se encuentran en el ciclo la
reacción de la succinato deshidrogenadas.
El ciclo de Krebs (conocido también como ciclo de los ácidos tricarboxílicos o ciclo del
ácido cítrico) es un ciclo metabólico de importancia fundamental en todas las células que
utilizan oxígeno durante el proceso de respiración celular. En estos organismos aeróbicos,
el ciclo de Krebs es el anillo de conjunción de las rutas metabólicas responsables de la
degradación y desasimilación de los carbohidratos, las grasas y las proteínas en anhídrido
carbónico y agua, con la formación de energía química.
El ciclo de Krebs es una ruta metabólica anfibólica, ya que participa tanto en procesos
catabólicos como anabólicos. Este ciclo proporciona muchos precursores para la
producción de algunos aminoácidos, como por ejemplo el cetoglutarato y el oxalacetato, así
como otras moléculas fundamentales para la célula. (Pérez G. , 2017)
Pasos.
Paso 1. En el primer paso del ciclo del ácido cítrico, el acetil-CoA se une con una molécula
de cuatro carbonos, oxalacetato, y libera el grupo CoA a la vez que forma una molécula de
seis carbonos llamada citrato.
Paso 2. En el segundo paso, el citrato se convierte en su isómero isocitrato. En realidad,
este es un proceso de dos pasos en el que primero se retira una molécula de agua que
luego se vuelve a añadir; por eso, a veces describen al ciclo del ácido cítrico como una vía
de nueve pasos en lugar de los ocho que aquí enlistamos
Paso 3. En el tercer paso, el isocitrato se oxida y libera una molécula de dióxido de carbono,
con lo que queda una molécula de cinco carbonos (el α-cetoglutarato). Durante este
paso NAD+ reduce a NADH. La enzima que cataliza este paso, la isocitrato
deshidrogenasa, es un importante regulador de la velocidad del ciclo del ácido cítrico.
Paso 4. El cuarto paso es similar al tercero. En este caso, es el α-cetoglutarato que se
oxida, lo que reduce un NAD+, NADH y en el proceso libera una molécula de dióxido de
carbono. La molécula de cuatro carbonos resultante se une a la coenzima A y forma el
inestable compuesto succinil-CoA, o, A. La enzima que cataliza este paso, α-cetoglutarato
deshidrogenasa, también es importante en la regulación del ciclo del ácido cítrico.
Paso 5. En el quinto paso, la CoA de la succinil-CoA se sustituye con un grupo fosfato que
luego es transferido a ADP para obtener ATP. En algunas células se utiliza GDP (guanidín
difosfato) en lugar de ADP con lo que se obtiene GTP (guanidín trifosfato) como producto.
La molécula de cuatro carbonos producida en este paso se llama succinato.
Paso 6. En el sexto paso se oxida el succinato y se forma otra molécula de cuatro carbonos
llamada fumarato. En esta reacción se transfieren dos átomos de hidrógeno (junto con sus
electrones) a FAD para formar FADH2. La enzima que realiza este paso se encuentra
incrustada en la membrana interna de la mitocondria, por lo que el FADH2 puede transferir
sus electrones directamente a la cadena de transporte de electrones.
Paso 7. En el séptimo paso se le añade agua a la molécula de cuatro carbonos fumarato,
con lo que se convierte en otra molécula de cuatro carbonos llamada malato.
Paso 8. En el último paso del ciclo del ácido cítrico, se regenera el oxalacetato (el
compuesto inicial de cuatro carbonos) mediante la oxidación del malato. En el proceso, otra
molécula de NAD+ se reduce a NADH. (Bernal, 2017)
Crédito de la imagen: modificado de "Oxidación de piruvato y ciclo del ácido cítrico: Figura 2" de
OpenStax College, Biología, CC BY 3.0

2. Reporte la reacción del succinato con la succinato deshidrogenasa describiendo las

formulas químicas de sustratos y productos. ¿Por qué es importante está reacción
para la célula muscular?
Reacción 6: Succinato deshidrogenasa (De succinato a fumarato)
La parte final del ciclo consiste en la reorganización de
moléculas a cuatro átomos de carbono hasta la regeneración
del oxalacetato. Para que eso sea posible, el grupo metilo
presente en el succinato tiene que convertirse en un carbonilo.
Como ocurre en otras rutas, por ejemplo en la beta oxidación
de los ácidos grasos, tal conversión ocurre mediante tres
pasos: una primera oxidación, una hidratación y una segunda
oxidación. Estos tres pasos, además de regenerar oxalacetato,
permiten la extracción ulterior de energía mediante la formación
de FADH2 y NADH.

La primera reacción de oxidación es catalizada por el complejo enzimático de la succinato

deshidrogenasa, la única enzima del ciclo que tiene como aceptor de hidrógeno al FAD en
vez de al NAD+. El FAD es enlazado de modo covalente a la enzima por un residuo de
histidina. La enzima se vale del FAD ya que la energía asociada a la reacción no es
suficiente para reducir el NAD+.

El complejo enzimático también es el único del ciclo que pasa dentro de la membrana
mitocondrial. Tal posición se debe a la implicación de la enzima en la cadena de transporte
de los electrones. Los electrones pasados sobre el FAD se introducen directamente en la
cadena gracias a la unión estable entre la enzima y el cofactor mismo. (Pérez G. , 2017)
3. ¿Qué son el malonato y el oxalacetato y cómo afectan la reacción de la succinato
deshidrogenasa?
Malonato. Molécula con estructura similar a la del succinato que se emplea para inhibir de
forma competitiva la enzima succinato deshidrogenasa.
El malonato es un inhibidor competitivo de la reacción de la succinato deshidrogenasa y
bloquea la transformación del succinato a fumarato. El malonato bloquea el flujo de
metabolitos a través del ciclo, deteniendo completamente la oxidación del piruvato. (Pérez
G. , 2017)
Oxalacetato. Intermediario metabólico que participa en la vía del ácido cítrico. Su
transformación reversible en malato por la malato deshidrogenasa se emplea para
intercambiar poder reductor entre el citoplasma y la mitocondria (ver lanzadera del malato-
aspartato).
La velocidad de oxidación del piruvato está determinada por la velocidad a la que entra el
acetil-CoA en el ciclo del ácido cítrico, lo que depende de la disponibilidad de oxalacetato
como aceptar, esto es, el aumento de concentración de oxalacetato incrementa el flujo de
acetil-Coa a través del ciclo. El succinato añadido se puede convertir en oxalacetato por
medio de los enzimas del ciclo y, por tanto, estimula la oxidación del piruvato. (Pérez G. ,
2017)
BIBLIOGRAFÍA
Bernal, A. D. (25 de Noviembre de 2017). KhanAcademy. Obtenido de
https://es.khanacademy.org/science/biology/cellular-respiration-and-
fermentation/pyruvate-oxidation-and-the-citric-acid-cycle/a/the-citric-acid-cycle
Melo, V. (2007). Bioquímic ade los procesos metabólicos. México: Reverté S.A.
Pérez, G. (24 de Octubre de 2017). CiclodeKrebs.com. Obtenido de
https://www.ciclodekrebs.com/
Pérez, G. (24 de Octubre de 2017). CiclodeKrebs.com. Obtenido de
https://www.ciclodekrebs.com/regulacin_del_ciclo_de_krebs
Wilmore, J. H. (2007). Fisiología del esfuerzo y del deporte. Barcelona: Paidotribo.
Booth F. W., Thomason D. R (1991). Molecular and cellular adaptation of muscle in
response to exercise: Perspectives of various models.