Está en la página 1de 18

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO

FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito


CLAVE
Laboratorio integral de básicas

Nombre de la práctica: Práctica Páginas Páginas de la

Espectroscopía Uv-Vis y de luminiscéncia


3
Realizó: Revisó: Autorizó:
Fernando Israel Mata
Reséndiz, Paulina Lira
Rangel,
Fecha de inicio: 27/01/2017- Fecha: Fecha:
03/02/2017

Contenido Página
I. INTRODUCCIÓN
II. CONOCIMIENTOS PREVIOS
III. OBJETIVO
IV. METODOLOGIA
IV. 1. Material y equipo.
IV. 2. Reactivos y soluciones.
IV. 3. Requerimientos de seguridad
IV.4. Disposición de residuos
IV. 5. Procedimiento.
IV. 6. Diseño experimental (si lo hay)
V. RESULTADOS.
V.1 Cálculos
VI. DISCUSION.
VII. CONCLUSIONES.
VIII. BIBLIOGRAFIA
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

I. Introducción:
La espectroscopía, al ser la ciencia que estudia la interacción de la masa con
la radiación electromagnética; comprende así una serie de técnicas que se
pueden clasificar de acuerdo a regiones del espectro electromagnético con
las que se esté trabajando el fenómeno que se esté viendo. Las regiones de
la radiación electromagnética se ubican en un orden de acuerdo a su nivel de
energía: ondas de radio, microondas, infrarrojo, visible, ultravioleta, rayos x y
rayos γ. Muchas de las propiedades de la luz se explican con el modelo
clásico de onda sinusoidal con parámetros como la longitud de onda “λ”. La
frecuencia “ν”, la velocidad “v” y la amplitud “Am” (Skoog, 2001) .
El modelo ondulatorio (onda sinusoidal) falla al intentar explicar la absorción y
la emisión energética. Para su entendimiento, se introdujo un modelo
corpuscular, en que se emplea un flujo de partículas llamadas fotones.
Como la radiación electromagnética se absorbe y emite, se produce una
transferencia permanente de energía al medio absorbente o procedente del
objeto emisor. Por ello, se trata a la luz no como ondas, sino como un flujo
corpuscular a raíz del hallazgo del efecto fotoeléctrico; en el que se irradia un
haz de luz a un metal, la radiación lleva una energía, cual es necesaria para
para desprender un electrón de su capa superior de valencia del átomo
metálico y el electrón se mueve hacia un electrodo cargado negativamente y
el número de fotones liberados es proporcional a la intensidad del haz de luz
(Atkins, 1999).
Posteriormente, Planck en 1900 propuso dos postulados para la teoría
cuántica:
1: Los átomos, iones y moléculas sólo existen en estados discretos
caracterizados por cantidades enérgicas fijas. Cuando una especie cambia su
estado electrónico, absorbe o emite una cantidad energética igual a la
diferencia entre el estado inicial y final.
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

2: los átomos, iones o moléculas absorben o emiten radiación al realizar una


transición de un estado de energía a otro, la frecuencia “ν” o la longitud de
onda “λ” de la radicación con una diferencia de energía entre los estados por
𝑐ℎ
la ecuación 𝐸1 − 𝐸0 = 𝜈ℎ = donde “c” es la velocidad de la luz.
𝜆

Consecuentemente, los distintos estados de energía se llaman “estados


electrónicos”; “estados vibracionales”, asociados a la energía de las
vibraciones interatómicas; y “estados rotacionales”, provenientes de la
rotación de las moléculas alrededor de sus centros gravitatorios. El estado
energético menor de un átomo o molécula se
Figura 1: ejemplo de un espectro de llama “estado fundamental”, los estados
emisión
superiores se llaman “estados excitados”
(Skoog, 2001).
La luz se origina al relajarse las partículas
excitadas a un nivel menor de energía
cediendo el exceso de energía como fotones,
la excitación se da por el bombardeo de
electrones que conduce a la emisión de rayos
“x”, la exposición a chispas de corriente alterna,
al calor de una flama, a un arco eléctrico o un
horno; se produce radiación ultravioleta, visible o infrarroja; la irradiación con
un haz de luz produce radiación fluorescente; una reacción química produce
quimio-luminiscencia.
La radiación emitida por una fuente de excitación se caracteriza por un
espectro de emisión (ver figura 1). Hay tres tipos de espectros: líneas, está
formado por una serie de picos agudos definidos dados por la excitación de
átomos individuales; bandas, consiste en varios grupos de líneas
estrechamente espaciadas que no se dan a separar ampliamente; y el
continuo, consecuencia del aumento del ruido del fondo evidenciado por
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

arriba de 350 nm. Los espectros de bandas y líneas se disponen al espectro


continuo.
Cuando la luz pasa por una capa de una muestra en el estado que sea,
ciertas frecuencias se eliminan selectamente por absorción, por la cual la
energía de la luz va a través de unos átomos a otros. Este fenómeno produce
que las partículas pasen de su estado fundamental a T amb a uno o varios
estados excitados de energía superior.
La mecánica cuántica dice que los átomos, moléculas, iones tienen un
número limitado de niveles de energía discretos por lo que para excitarse, se
debe de incidir energía de la misma requerida a la diferencia de energía entre
el estado excitado y el basal, como la diferencia energética de cada especie
es específica. Con este principio, se hace experimentalmente una
representación gráfica de la absorbancia en función de la longitud de onda “λ”
o la frecuencia “ν”.
Al pasar luz policromática de UV-Vis a través de un medio constituido por
partículas monoatómicas, como Hg, Na gaseoso hay absorción sólo a pocas
frecuencias definidas, se debe a que hay un pequeño número de estados
excitados posibles de las partículas absorbentes. La excitación se da par la
promoción de electrones de un nivel electrónico basal a uno exitado. La luz
ultravioleta y visible tienen la energía suficiente para producir transiciones
únicamente electrónicas en las partes externas, la luz de rayos “X” puede
excitar los electrones de los orbitales próximos al núcleo y su respectiva
absorción se da en la región de los rayos “X”.
La absorción molecular, en estado condensado son más complejos en su
espectro de absorción pues el número de estados excitados es grande
respecto a los de átomos individuales. La energía asociada a las bandas de
una molécula se asocia por tres componentes 𝐸 = 𝐸𝑒𝑙𝑒𝑐 + 𝐸𝑣𝑖𝑏 + 𝐸𝑟𝑜𝑡 , para
cada estado de energía electrónica de una molécula hay varios estados
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

vibracionales posibles y a su vez, éstos tienen múltiples estados rotacionales


(ver figura 2, (Skoog, 2001)).
Los métodos espectro-químicos se basan en cuatro categorías. Todas
requieren de una potencia radiante “P” que es la energía de un haz de luz
que alcanza un área por cada segundo. En los equipos, la energía se
convierte en un detector a energía eléctrica “S”, que es un potencial o la
corriente idealmente es directamente proporcional a la potencia radiante 𝑆 =
𝑘𝑃 hay varios métodos que se basan en la emisión, absorción luminiscencia
y dispersión, todos ellos se resumen en la figura 3.
Para la radiación monocromática la absorbancia “A” es proporcional a la
concentración “c” y la relación se da por 𝐴 = 𝜖𝑏𝑐 donde “ε” es el coeficiente
de absorbitividad molar. Si “b” está en cm y “c” en mol/L, se conoce como la
ley de Beer, sirve como base para el análisis cuantitativo mediante medidas
de absorción molecular y atómica (Skoog, 2001).
Un proceso de desactivación radiada, es un proceso en que una molécula

Figura 3: resumen de métodos electroquímicos.

elimina su energía de excitación en forma de fotones. Un común destino es la


desactivación no radiada, en el que la energía en exceso se transfiere en
forma vibración o rotación y la traslación de las moléculas del entorno. Esta
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

Figura 2: diagrama de niveles energéticos de una molécula orgánica fluorescente.

degeneración térmica convierte la energía de excitación en movimiento


térmico de su entorno (calor).
En la fluorescencia, la radiación emitida cesa espontáneamente en el
momento que desaparece la radiación de excitación. La fosforescencia, la

Figura 5: representación gráfica de la fluorescencia y su espectro de absorción.


UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

emisión persiste por largos periodos, la comparación entre ambos fenómenos


se da en la figura 4.
La molécula excitada experimenta colisiones en el entorno, va perdiendo
energía no radiada, desciende en peldaños en la escala de niveles
vibracionales hasta llegar al nivel vibracional inferior del estado molecular
electrónicamente excitado menor. La molécula sobrevivirá lo suficiente para
experimentar una emisión espontánea, emitiendo la energía excesiva en
forma de luz. El espectro de absorción presenta una estructura vibracional
característica del estado electrónico inferior (ver figura 5) (Atkins, 1999).

II. Conocimientos previos.


Fenómenos de espectroscopía molecular
La radiación electromagnética, al atravesar una muestra de forma que
cuando los cuantos de radiación sean absorbidos por las moléculas de la
misma, dichas moléculas aumentan su energía de rotación, vibración o
electrónica desde un valor permitido a otro de los valores permitidos de
mayor energía. Si el intervalo de frecuencias de la radiación, y su energía
cuántica, se elige convenientemente, puede afectar en una cierta extensión a
un tipo determinado de energía molecular.
Se emplea radiación de microondas, los cuantos de radiación que absorben
incrementan la energía de rotación de las moléculas y se pueden determinar
las posiciones relativas de las energías de rotación permitidas de una
molécula, los estudios afirman que puede llamarse espectroscopia de
rotación.
Similarmente, al absorber energía de la radiación infrarroja por una molécula,
la energía de vibración de la misma aumenta y puede investigarse del
diagrama de niveles enérgicos de vibraciones permitidas, tales estudios
constituyen la espectroscopia de vibración.
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

Finalmente, la absorción de radiación visible y ultravioleta ocasionan que los


electrones de una molécula se exciten desde la distribución que tienen
ordinariamente a otra distribución permitida que tenga mayor energía. Las
medidas de espectros visibles y ultravioleta y la deducción del
comportamiento de los electrones de una molécula a partir de estos
espectros constituyen la espectroscopia electrónica (Barrow, 1967)
Fluorescencia y fosforescencia, se supone qye una molécula absorbe
radiación y pasa desde su estado electrónico fundamental “S 0” hasta un
estado electrónico excitado “S1”. Estos estados deben tener el mismo espín,
debe cumplir la condición que “ΔS=0”.
La molécula en “S1” puede retornar al estado fundamental mediante emisión
de radiación. “t1/2” de estos estados es “10-9 s”, que es una cantidad grande
para una molécula, pues hace 10-14 /s de vibraciones, 10-12 /s rotaciones y
10-10 /s de choques con otras moléculas. Por ello, el estado excitado puede
transferir el exceso de energía vibracional poseída como energía cinética. La
molécula electrónicamente excitada cae a “ν=0” de “S1” antes de emitir el
fotón. La molécula emite el fotón manteniéndose la distancia interatómica
constante, y la molécula cae al estado electrónico fundamental, pero a
niveles vibracionales excitados. La anterior descripción explica la razón que
el espectro de absorción sea mayor energéticamente que el espectro de
fluorescencia o emisión.
Dado un estado excitado “S1” con espín “s=0”, siempre habrá otro estado
electrónico excitado de espín “s=1” llamado “T 1” de menor energía que el
anterior. Este último estado no es accesible por absorción, pues lo prohíben
las reglas de selección. Frecuentemente, las curvas de energía potencial “E p”
y distancia “x” de los estados “T1” y “S1” se entrecruzan, durante el fenómeno
de transición no radiante, se procede al salto desde “T1” a “S1” sin emisión
radiante. Así, las moléculas caen a un estado de espín diferente al estado
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

fundamental, desde el cual la emisión de la radiación para retornar a “S 0” es


prohibida por las reglas de selección. De esta forma, las moléculas quedan
bloqueadas durante largos periodos de tiempo antes de reunir la radiación la
radiación. En cualquier caso, el fotón es remitido por la fosforescencia o
emisión retardada espontánea de radiación. También se conoce la
espectroscopia que mide esta radiación.
Frecuentemente, en un espectro de emisión, la fluorescencia y fosforescencia
tienen lugar simultáneamente. El porcentaje de moléculas que fluorescen o
fosforescen depende de la naturaleza de las moléculas y de las condiciones
experimentales. Además, estos fenómenos compiten contra otro fenómeno
llamado “atenuación de la radiación” durante la cual, toda la energía del fotón
es absorbida para transformarla en energía térmica y la molécula no remite
radiación (UCO, 2010).
III. Objetivo
Estudio de los diversos fenómenos de la espectroscopia de UV-VIS y de
luminiscencia.
IV. Metodología
Espectrómetro de UV/VIS
El método consiste en la determinación por la espectroscopia de UV-VIS de
los cromatóforos presentes en las muestras liquidas.
1. Se enciende el espectrofotómetro y se espera hasta que se calibre el
equipo.
2. Se selecciona el programa de lectura de absorbancia.
3. La muestra de blanco se vierte en una celda
4. Se toma la lectura correspondiente para la muestra en blanco
5. Se retira y se vierte ahora la solución estándar.
6. Se toma la lectura de la solución estándar
7. Este procedimiento se repite para las diferentes soluciones estándar.
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

V. Resultados
Espectros de Uv-Vis y luminiscencia:

Figura 6: barridos de espectros de absorción de verde de malaquita, KMnO4 y rojo de metileno

Figura 7: espectros de emisión en luminiscencia para la solución Naftaleno/cilohexano


UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

Figura 8: espectro de emisión de la solución Antraceno/ciclohexano

Figura 9: espectro de emisión de la solución de edulcorante/metanol en fluorescencia


UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

Figura 10:
Benceno-Ciclohexano ( ____)
Naftaleno-etanol (----)

Figura 11: Barridos de Naftaleno- Etanol en


UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

Figura 12: Barrido Edulcorante-Etanol

Figura 13: Barrido Naftaleno-Ciclohexano


UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

Lecturas de las distintas soluciones empleadas a su longitud de onda de máxima


absorbancia en cuadro 1. Cuadro 1: máxima absorbancia adquirida para las
siguientes soluciones a su determinada longitud de onda

sustancia λ /nm Absorbancia


verde de malaquita 497 0,3
rojo de metilo 617 0,146
KMnO4 526 0,195
Naftaleno/cilohexano 254 1,007
naftaleno/etanol 284 0,401

Cálculo del coeficiente de absortividad molar


Ley de Lambert-Beer
𝐴
𝐴 = 𝜀𝑏𝑐 Sale que 𝜀 = 𝑏𝑐 para cada solución para las soluciones medidas en el

rango del UV-Vis en cuadro 2 y en las unidades del SI (cuadro 3).

Cuadro 2: coeficientes de absortividad molar adquiridos para cada


solución indicada.
sustancia Absorbancia ε L/mol cm con.
Mol/L
verde de malaquita 0,3 1111111,11 2,70E-07
rojo de metilo 0,146 5840 2,50E-05
KMnO4 0,195 19500 1,00E-05
Naftaleno/cilohexano 1,007 1007 1,00E-03
naftaleno/etanol 0,401 401 1,00E-03

Cuadro 3: coeficientes de absortividad molar del cuadro


2en las unidades del SI
sustancia con. ε (m2/mol)
Mol/m3
verde de malaquita 0,00027 111111,11
rojo de metilo 0,025 584,00
KMnO4 0,01 1950,00
Naftaleno/cilohexano 1 100,70
naftaleno/etanol 1 40,10
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

Determinación de las longitudes de onda de emisión y absorción en luminiscencia


(cuadro 4).

Cuadro 4: longitudes de onda de emisión y excitación


para las siguientes soluciones mediante la luminiscencia
Sustancia/solvente λ excit./nm λ emi./nm
naftaleno/ciclohexano 238 323
antraceno/ciclohexano 312 442
naftaleno/etanol 311 342
edulcorante/metanol 219 321
VI. Discusión
En el cuadro cuatro, se mostró las longitudes de onda de excitación y emisión en
cada una de las soluciones empleadas para la el ensayo de luminiscencia. En ella,
se puede ver que las longitudes de onda de excitación son de mayor energía que
las longitudes de onda de emisión, por lo que debieron de haber perdido parte de
esa energía en los niveles vibracionales de los estados electrónicos excitados
hasta llegar a los estados electrónicos del estado fundamental.

En la figura 11, se muestra las longitudes de onda de emisión (naranja) y


excitación (azul), pueden verse dos picos en los diagramas en las longitudes de
onda de excitación (azul), esto quiere decir que son dos longitudes de onda a los
que tienen la energía suficiente para poder llevar un electrón del estado
fundamental a un respectivo excitado. Debido a la proximidad de estos, se dice
que hay dos estados electrónicos excitados, por la proximidad aparente de los
picos (línea azul, figura 11) los dos estados electrónicos excitados son estados
singulete de energía aparente o próxima entre ellos. Durante la relajación
energética en el estado excitado singulete mayor, al caer de su respectivo nivel
vibracional menor, la energía corresponde a la energía de algún estado vibracional
superior al menor del otro estado electrónico singulete excitado de menor energía
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

que el mayor, y la energía continúa bajando hasta llegar al menor nivel vibracional
del estado excitado menor y cae a cualquier nivel vibracional del estado electrónico
vibracional (Skoog, 2001), liberando así la energía característica de la longitud de
onda de emisión del naftaleno en metanol. Y así de esta manera, todas las
sustancias con sus respectivas longitudes de onda de emisión y de excitación.

La mayoría de los hidrocarburos aromáticos no sustituidos son fluorescentes


(Skoog, 2001). Todas las soluciones empleadas en el cuadro 4 son compuestos
aromáticos y por ende presentaron el fenómeno de fluorescencia.

En el cuadro 4, se pude ver que hay un mismo analito, pero distinto solvente; pese
a que son los mismos analitos, se pude apreciar diferentes longitudes de onda de
emisión y excitación como en el caso del naftaleno, la longitud de excitación es de
mayor energía con el solvente de ciclo-hexano respecto al solvente de etanol. Este
fenómeno se conoce como relajación por solvente (Denícola, 2015). Pues la
energía vibracional se comunica a otras moléculas por colisiones que no emiten
fotones, y también por el fenómeno del desplazamiento de Stokes, por desplazarse
las longitudes de onda de emisión y excitación a longitudes de onda de menor
energía.

El coeficiente de absortividad molar es un parámetro dependiente de la frecuencia


radiante y es mayor en la zona de máxima intensidad y es propia para cada
sustancia. Por ello, en la espectroscopia Uv-Vis se empleó la longitud de onda de
máxima absorbancia, y éste es un indicador de la intensidad de la transición
(Atkins, 1999).
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

En el cálculo del coeficiente de absortividad molar, para el naftaleno en diferentes


solventes, en ciclo-hexano y etanol, dieron valores distintos. Esto ocurre porque el
valor del coeficiente de absortividad molar “ε” depende también del solvente que se
esté usando y la temperatura (Sibey, 2005).

Todos los valores del coeficiente de absortividad de las soluciones empleadas en


𝐿
Uv-Vis fueron superiores a 100 𝑚𝑜𝑙𝑐𝑚 por lo que no ocurre una transición prohibida

por las reglas de selección, por lo que todas las sustancias implicadas tenían
bandas de absorción pronunciadas o intensas. Generalmente, se considera
𝐿
transiciones prohibidas las que poseen una absortividad molar inferior a 100 𝑚𝑜𝑙𝑐𝑚.

(Fernández, 2014)

Se incluyeron los valores del sistema internacional de unidades “SI” (cuadro 3)


debido al El REAL DECRETO 2032/2009, de 30 de diciembre por el que se
establecen las Unidades Legales de Medida, publicado el jueves 21 de enero de
2010, reproduce lo dispuesto en la Ley 3/1985 de 18 de marzo, sobre la utilización
obligatoria del Sistema Internacional de Unidades (SI) adoptado por la Conferencia
General de Pesas y Medidas y vigente en la Unión Europea (García, 2008).

VII Bibliografía
Atkins, P. (1999). Química-física. Oxford: Editoriales omega, S.A.
Barrow, G. M. (1967). estructura de las moléculas. Nueva York: Reverté.
Denícola, A. (23 de noviembre de 2015). Universidad de la República. Recuperado el 17 de
febrero de 2017, de Laboratorio de fisicoquímica biológica:
http://fqb.fcien.edu.uy/docs/Clase%20Intro%20+%20efecto%20solvente.pdf
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA Pre-requisito
CLAVE
Laboratorio integral de básicas

Fernández, G. (2014). Determinación Estructural de Compuestos Orgánicos: Vis-Uv, IR, RMN,


Masas. Asturias.
García, Á. F. (5 de mayo de 2008). Unidades y Medidas. Recuperado el 16 de febrero de 2017,
de Unidades y Medidas:
http://www.sc.ehu.es/sbweb/fisica_/unidades/unidades/unidades.html
Sibey, B. A. (2005). phisical-chemistry. Boston: John Wiley y sons. inc.
Skoog, A. D. (2001). principios de análisis instrumemtal . McGrawHill.
UCO. (01 de enero de 2010). Universidad de Córdoba. Recuperado el 09 de febrero de 2017, de
Universidad de Córdoba: www.uco.es/organiza/departamentos/quimica-
fisica/quimica.../L14_QF_10_11.pdf