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BIOQUIMICA_201103

TRABAJO COLABORATIVO 1

TUTORA: Dolffi Rodríguez

GRUPO: 78

Integrantes:

Marlene Suarez_63.286.452

Dania Rodríguez Cure_94052710833

Mayo de 2012

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

UNAD
INTRODUCCION

En el presente trabajo se estudiará la temática del ADN, donde se adquirirán


conocimientos sobre su desnaturalización, renaturalizacion, los aspectos que en
estos procesos participan y extracción del mismo (ADN) mediante un laboratorio
virtual; además se conocerá la importancia del ATP, y sus usos alternos como lo
es el de desinfección, y el papel fundamental que este método juega dentro de
otros campos de estudio como en las industrias de alimentos.
OBJETIVOS

 Adquirir conocimientos referentes a la extracción del ADN a través del


desarrollo del tutorial virtual.

 Analizar los efectos que producen los cambios de pH, temperatura y fuerza
iónica en el ADN.

 Realizar una interpretación entre la temperatura y las consecuencias de su


aumento en la estructura del ADN.

 Identificar la relación y función del ATP tanto en las células del organismo
humano, y las microbianas; como sus aplicaciones en métodos de
desinfección.

 Relacionar e identificar los métodos analíticos utilizados para seguir el


proceso de desnaturalización del ADN
1. Observe detalladamente (para iniciar la observación, dé clic en star lab), y
presente un diagrama de flujo de la metodología que allí se observa para la
extracción de ADN. Se requiere que el contenido del diagrama sea el que se
observe del recurso dado.

Recolección de celulas Hisopo


bucales

Corte del hisopo

Introducción de
muestra en tubo

Detergente + Micropipeta
Adición de
Proteinasa K solución lisis
Rompimiento de células

Introducción de muestra
en baño de agua caliente
Separación total del ADN
Extracción del
hisopo

Adición Micropipeta
concentración de
sal Proteínas y residuos se agrupan

Centrifugación
Proteínas y residuos precipitados;
ADN en el líquido
Desplazamiento
parte liquida

Adición alcohol
Isopropilico Micropipeta

Agitación del tubo


Mezcla de ADN + Alcohol Isopropilico ADN precipitado
Centrifugación

Extracción parte liquida ADN


2. En la introducción al foro se encuentra el documento en pdf: Denaturación
y renaturación del ADN: Este texto analiza los factores que causan la
desnaturalización del ADN, se analiza la Denaturación térmica del ADN (Tm)
y algunos métodos analíticos que miden el proceso de Tm.

2.1. Elabore un mapa conceptual en dónde explique en forma detallada la forma


como la temperatura y cambios de pH afectan la estabilidad de la doble hélice del
ADN.

ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL ADN

Cambio de condiciones

pH, temperatura y fuerza iónica

Sufre
DESNATURALIZACION LA
LA DOBLE HELICE

ROMPIMIENTO DE LAS PAREJAS DE BASES NITROGENADAS


RROMPI

Temperatura agente desnaturalizador A pH mayores de 10 - Álcalis

Tm (Temperatura de rompimiento o Bases ADN desprotonizadas


fusión)
2.2. Elabore un mapa conceptual en dónde explique en forma detallada la Tm del
ADN.

TEMPERATURA DE FUSION (Tm) ADN

Promedio aumento Absorbancia

Separación de hilos

Difieren en sus valores

A mayor contenido de G + C del DNA


LA
mayor es la Tm

Porque

Los pares G: C tienen mayor energías


de bases apiladas que los pares A: T

Depende la fuerza iónica

Entre más pequeña la fuerza iónica más pequeña la Tm

Causas
Los cationes suprimen la repulsión electrostática El ADN en agua pura se fusiona aún a
entre los grupos fosfatados cargados temperatura de ambiente.
negativamente en los hilos complementarios de la
doble hélice, entonces la forma doblemente
hilada es más estable en solución salina diluida.
2.3. Explique en 100 palabras el análisis de la gráfica 11.18 (documento 1) y
gráfica 1(documento 2).

En la primera grafica se estudia el comportamiento de cuatro microorganismos, en


los cuales se produce rompimiento de ADN por el aumento de temperatura, es
decir, a medida que aumenta la temperatura, así mismo aumenta la absorbancia;
el punto medio de desnaturalización corresponde a la Tm, donde todos los
microorganismos se ven afectados en diferente proporción, ya que la acción de la
Tm depende del numero de puentes de hidrogeno, del ADN de cada especie.

En la segunda grafica se analiza la desnaturalización térmica del ADN,


relacionando absorbancia a 260 nm con al aumento de temperatura; haciendo un
énfasis en la Tm (temperatura de fusión), la cual corresponde al 50% de
desnaturalización del ADN; se puede observar como a medida que la temperatura
aumenta el grado de absorbancia también se incrementa.
2.4 Elabore un mapa conceptual en dónde explique en forma detallada los
métodos analíticos para seguir el proceso de Tm del ADN.

Técnicas:
Calorimetría Métodos analíticos
diferencial, métodos para seguir el
espectroscópicos, y proceso de
electroforéticos desnaturalización

De rangos
De rango corto Químicos Biológicos
amplios

Alteración
Dependen de Estudia Ensayos:
estructural por
propiedades propiedades sensibilidad a
cambios
físicas macromoleculares las nucleasas
reactivos
3. El desarrollo de este punto se relaciona con la temática de Bioenergética:
De acuerdo a sus conocimientos sobre la molécula de Adenosín trifosfato
(ATP), analice y responda:

3.1 ¿Cómo puede Ud. explicar que el ATP sea utilizado en procesos de
desinfección de superficies en programas de limpieza y desinfección en plantas de
alimentos y servicios farmacéuticos?

El ATP al hidrolizarse, libera energía química permitiendo de este modo que se


den las actividades celulares que requieren de energía; dentro de esta actividades
se encuentra la bioluminiscencia originada por la oxidación de un sustrato de
proteína luciferina que es catalizada por la enzima luciferasa, mas el oxigeno y la
molécula energética de ATP. Es por esto que se han implementado métodos de
bioluminiscencia, donde se mide la presencia del ATP, que se encuentra en
microorganismos; evaluándose de esta forma el estado de higiene, para la
prevención de infecciones; en comparación con otros métodos como las pruebas
microbiológicas, los métodos de bioluminiscencia ofrecen una solución mas
rápida, lo cual es importante sobretodo en el campo de la manufactura de
alimentos, ya que allí, esta información debe ser inmediata, ya que si no se
controla la falta de higiene, puede provocar contaminación, lo que lleva al
crecimiento rápido de microorganismos.

Reacción bioluminiscencia:

ATP + Luciferina-luciferasa + Mg  Oxiluciferina + CO2 + PPi + AMP + Luz

3.2 Explique por qué el ATP es una molécula que se encuentra en células
somáticas, germinales, microbianas.

Las células somáticas forman el crecimiento de los tejidos, y por ende de los
órganos en un ser vivo, mientras que a partir de las células germinales se de la
formación de gametos (espermatozoides y óvulos) permitiendo de esta forma la
reproducción; por otro lado están las células microbianas que como las somáticas
y las germinales realizan funciones vitales por medio de reacciones metabólicas,
dentro de ellas se encuentra la respiración, movimiento, reproducción, transporte,
síntesis de moléculas y en el caso especial de las células microbianas, la
bioluminiscencia; para que cierta cantidad de estas reacciones puedan darse es
necesaria la presencia de energía en forma de ATP, ya sea que este sea
generado por degradación (catabolismo) o consumido por síntesis (anabolismo),
es fundamental su presencia para que el que se cumplan las reacciones
realizadas por las células.
CONCLUSIONES

Mediante el desarrollo de este trabajo, se pudo observar como distintos aspectos


como el pH, la temperatura, y la fuerza iónica, pueden afectar la estructura del
ADN, dando paso a su desnaturalización (rompimiento de puentes de hidrogeno),
mediante el análisis de factores como absorbancia y temperatura de fusión;
además se logró adquirir conocimientos sobre la extracción del ADN de un ser
vivo. Por ultimo se comprendió y estudio los usos del método de identificación de
ATP y la importancia de este dentro del metabolismo de las células.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

 Centro Agro lechero Ltda. (20 enero de 2008). Medición de ATP.


Disponible en:
http://www.tecnocarnicos.com/project/tecnocarnicos/resumen/dateien/alejan
dro_rodriguez_centro_agrolechero.pdf

 University of Utah (28 abril de 2003) Extracción del ADN. Disponible en:
http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/

 Departamento de higiene alimentaria. (4 mayo de 2006). Verificación y


control de limpieza y desinfección de superficies. Disponible en:
http://www.convet.net/index.php?option=com_content&view=article&id=646
%3Averificacion-y-control-de-limpieza-y-desinfeccion-de-superficies-
luminometro&catid=25%3Aempresa&Itemid=11&lang=es

 Silvia Acosta (13 julio de 2009). Prevención y control de infecciones.


Disponible en:
http://novo.sobecc.org.br/programacao/congresso/material_congresso_5_1
5.pdf

 Meyers, R. (1995). Molecular biology and Biotechnology: a comprehensive


desk reference. New York: Wiley- VCH.

 Garrett, R., Grisham, C. (2010). Biochemistry. Boston: Brooks/Cole.