Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Cromatografía Aceite de Oliva PDF
Cromatografía Aceite de Oliva PDF
SANTIAGO, CHILE
ENERO DE 2009
LA PRESENTE INVESTIGACIÓN SE LLEVÓ A CABO CON EL
ii
DEDICATORIA
A herMario, mi padre Mario, mi Estrella del cielo y mi familia, los amo con todo mi
corazón…
iii
AGRADECIMIENTOS
Me gustaría agradecer:
Mario y mi madre Julia por incentivarme a estudiar y llegar más lejos siempre;
invitarme a trabajar junto a ella y estar dispuesta a ayudarme en cada momento que
lo necesité;
A los profesores del laboratorio, Sra. Lilia Masson, Sra. Nalda Romero y Sr.
Jaime Ortiz, por acompañarme durante este proceso con sus consejos;
año en el laboratorio;
A cada uno de los que de alguna forma se han hecho participes de mi vida
universitaria.
iv
INDICE
DEDICATORIA ........................................................................................................... ii
AGRADECIMIENTOS ............................................................................................... iv
INDICE ....................................................................................................................... v
RESUMEN ..............................................................................................................xvii
I. INTRODUCCION .................................................................................................... 1
v
1.7. Validación de métodos analíticos ...................................................................... 13
vi
4.4 Medidas de exactitud ......................................................................................... 35
V. CONCLUSIONES ................................................................................................ 40
ANEXO 1 .............................................................................................................. 45
ANEXO 2 .............................................................................................................. 48
y cuantificación. ........................................................................................................ 51
ANEXO 3 .............................................................................................................. 55
Repetibilidad ..................................................................................................... 55
ANEXO 4 .............................................................................................................. 57
Replicabilidad ................................................................................................... 57
ANEXO 5 .............................................................................................................. 59
Recuperación ................................................................................................... 59
ANEXO 6 .............................................................................................................. 61
Muestras ........................................................................................................... 61
vii
6.1. Composición en porcentaje de los ácidos grasos de las muestras de aceite de
viii
INDICE DE TABLAS
Págs.
TABLA 1. Número de plantaciones por variedad de olivo. 4
ix
la determinación de la linealidad de los ácidos
linoleico (C18:2).
(C22:0).
(mg/mL)
x
TABLA 12. Porcentajes de recuperación (R) y desviación estandar 29
C18:2.
xi
TABLA 20. Concentración y área obtenida para la curva de 42
xii
TABLA 28. Valores de yi e y’i obtenidos mediante la curva de 45
variedad arbequina
coeficiente de variación.
variedad arbequina
variación.
xiii
TABLA 35. Datos obtenidos para el cálculo de la recuperación del 52
variedad picual
variedad arbequina
variedad frantoio
xiv
INDICE DE FIGURAS
Págs.
FIGURA 1. Participación de las distintas regiones en el área 3
en porcentaje.
(C16:0)
(C18:0)
(C18:2)
(C16:1)
(C18:3)
xv
FIGURA 9. Curva de calibración para el ácido araquídico 25
(C20:0)
(C20:1)
(C22:0)
Behénico.
xvi
RESUMEN
El presente trabajo tuvo por objetivo validar e implementar una metodología analítica
por cromatografía de gases para la composición en ácidos grasos de un aceite de oliva extra
virgen, variedad arbequina.
Se determinó la linealidad del método de detección para los principales ácidos
grasos presentes en el aceite de oliva extra virgen, utilizando ésteres metílicos de los ácidos
palmítico (C16:0), esteárico (C18:0), oleico (C18:1) y linoleico (C18:2) en contenidos similares
a los del aceite. Las curvas de calibración obtenidas presentaron un coeficiente de
correlación superior a 0,99.
Se determinó el límite de detección y de cuantificación para los ácidos grasos
minoritarios presentes en el aceite de oliva extra virgen, utilizando ésteres metílicos de los
ácidos palmitoleico (C16:1), linolénico (C18:3), araquídico (C20:0), eicosenoico (C20:1) y
behénico (C22:0) en contenidos similares a los del aceite. Las concentraciones del límite de
cuantificación (0,017-0,154 mg/ml) fueron superiores al límite de detección (0,005-0,046
mg/ml), cercanas al último punto de la curva de calibración.
La precisión se determinó por medio de la repetibilidad y la replicabilidad. La
repetibilidad se evaluó con 10 muestras de aceite de oliva extra virgen en un mismo día, por
un mismo analista y en el mismo instrumento. La replicabilidad se evaluó en 10 días
diferentes. Los coeficientes de variación obtenidos en repetibilidad y replicabilidad para los
ácidos grasos se ajustaron a la norma de la AOCS, excepto el ácido esteárico, que superó el
CV máximo permitido de 4%.
La exactitud se evaluó a través de la determinación de la recuperación en una
muestra de aceite sin y con (fortificación) la adición de los ésteres metílicos de los ácidos
palmítico, esteárico, oleico y linoleico. Se obtuvieron valores de recuperación entre 77 y
109%.
Se analizaron 26 muestras de aceites de oliva de las variedades arbequina, picual y
frantoio, encontrando diferencias significativas en el porcentaje de ésteres metílicos de
algunos ácidos grasos. La variedad arbequina presentó valores significativamente mayores
(p<0.05) en C16:0, C16:1, C17:0, C17:1 con respecto a las variedades picual y frantoio. La
variedad picual presento valores significativamente mayores (p<0,05) en C18:0 y C18:1 y
significativamente menores (p<0,05) de C18:2 y C18:3, con respecto a las variedades de
arbequina y frantoio. Para los ácidos 20:0, 20:1 y 22:0 no se encontraron diferencias
significativas.
xvii
SUMMARY
The objective of the present work was to validate and to implement the fatty acid
composition of a virgin extra olive oil, arbequina variety by gas chromatography.
The linearity of the detection method for the main fatty acids in the virgin extra olive oil was
determined using methyl esters of the palmitic (C16:0), stearic (C18:0), oleic (C18:1) and
linoleic (C18:2) acids with similar contents to those of the oil. The correlation coefficient of the
calibration curves obtained was above to 0.99.
The quantification and detection limit was determined for fatty acids minority in the virgin
extra olive oil, using methyl esters of the palmitoleic (C16:1), linolenic (C18:3), araquidic
(C20:0), eicosenoic (C20:1) and behenic (C22: 0) acids, in similar contents to those of the oil.
The concentration of the quantification limit (0,017-0,154 mg/ml) was higher than the detection
limit (0,005-0,046 mg/ml), near to the last point of the calibration curves.
Repeatability and replicability were used as the precision parameter. The repeatability was
evaluated with 10 virgin extra olive oil samples in a same day, by a same analyst and
instrument. The replicability was evaluated in 10 days different. The variation coefficients
obtained in repeatability and replicability for fatty acids were in according with the AOCS,
except for the stearic acid, with CV above 4%.
The exactitude was evaluated through the determination of the recovery in an oil sample
without and with (fortification) the addition of methyl esters of palmitic, stearic, oleic and linoleic
acids. The recovery values were between 77 and 109%.
Twenty six olive oil samples of the arbequina, picual and frantoio varieties were analyzed,
significant differences in the percentage of methyl esters of fatty acids were found. The
arbequina variety showed values of C16:0, C16:1, C17:0, C17:1 significantly higher (p<0.05)
than picual and frantoio varieties. The picual variety showed values significantly higher
(p<0.05) for C18:0 and C18:1 and lower (p<0.05) for C18:2 and C18:3, respect to arbequina
and frantoio varieties. There were not significant differences for C20:0, C20:1 and C22:0
acids.
xviii
I. INTRODUCCION
los romanos y árabes alrededor del siglo VI a.C., el olivo ha sido considerado como
de oliva. Del vocablo griego elaia deriva la palabra latina olea y olivum (olivo); de la
palabra hebrea zait viene la palabra árabe az-zait y zaitum que posteriormente han
Grecia era una potencia en el cultivo de los olivos. Estos llevaron el olivo y
aceite de oliva por el Mediterráneo. Sin embargo, los romanos fueron los que se
considerablemente ya que el mundo estaba dominado por las guerras, por lo cual el
Colón a América, a fines del siglo XV, llegaron olivos los cuales fueron distribuidos
A pesar de que hoy en día los olivos se pueden encontrar en todos los
producción, siendo España el país con más olivos y con mayor producción de
1
El desarrollo de la producción del Aceite de Oliva ha venido evolucionando
año 2006. Los principales países a los cuales Chile exporta son Estados Unidos
(42%), España (14%), Canadá, Venezuela y México con cifras cercanas al 5% cada
I Región:
2
1.2.2. Norte Chico
III Región:
IV Región:
que se pueden encontrar en esta zona son: Frantoio, Arbequina, Leccino, Empeltre
y Ascolano.
Región Metropolitana:
VII Región:
3
importante de la región. Las variedades aceiteras que se encuentran en esta región
4
TABLA 1. Número de plantaciones por variedad de olivo.
Variedad N° Plantaciones
Arbequina 36
Frantoio 30
Leccino 23
Picual 18
Coratina 10
Otros 60
Fuente. Catastro asociación de olivicultores. Variedades desde 1940
hasta 2006, según datos encuesta.
Arbequina
34% 20%
Frantoio
Leccino
17% Picual
Coratina
6%
10% 13% Otros
Fuente. Catastro asociación de olivicultores. Variedades desde 1940 hasta 2006, según
datos encuesta.
5
Leccino: Se cultiva en toda la península italiana, ya que se utiliza como
representa el 20% del total mundial y el 50% de las plantaciones ibéricas. Su fruto
es mediano muy estable, de color verde y con un sabor picante bien acentuado.
Picholine, Suri, Cerasuola, Racimo (Racimo negra, racimo verde, racimo grando),
6
El COI/T.15/NC nº 3/Rev. 1. 2003 denomina los diferentes tipos de aceites
Aceite obtenido del fruto del olivo únicamente por procedimientos mecánicos
la alteración del aceite y no hayan sufrido tratamiento alguno distinto del lavado,
siguientes:
Aceite de Oliva Virgen Extra: aceite de oliva virgen con una acidez libre,
expresada en cantidad de ácido oleico, como máximo de 0,8g por 100g, siendo la
Aceite de Oliva Virgen: aceite de oliva virgen con una acidez libre máxima
de 2g por 100g, siendo la mediana de sus defectos inferior o igual a 2,5, y la del
7
Aceite de oliva Lampante: aceite de oliva virgen con una acidez libre,
superior a 2g por 100g siendo la mediana de sus defectos superior a 2,5, y la del
cuya acidez no podrá ser superior a 0,3 g por 100g, y cuyas otras características
de oliva vírgenes:
aceites de oliva vírgenes distintos del aceite lampante, cuya acidez libre no podrá
ser superior a 1g por 100g, y cuyas otras características son conformes a las
8
1.4.5. Aceite de orujo de oliva refinado:
acidez libre, expresada en ácido oleico, no podrá ser superior a 0,3g por 100g y
aceites de oliva vírgenes distintos del lampante, cuya acidez libre, expresada en
ácido oleico, no podrá ser superior a 1g por 100g y cuyas otras características son
9
se atribuyen funciones como las agregación y antiagregación plaquetaria, la
inflamatorio o antiinflamatorio.
pertenece al grupo de los omega 6, ambos con una marcada acción benéfica sobre
que una dieta rica en aceite de oliva, disminuye las concentraciones de colesterol
plasmático, tanto del total como del LDL, el cual es aterogénico, además mantiene y
Los ácidos grasos trans son ácidos grasos que contienen al menos un doble
10
están presentes naturalmente en productos como la mantequilla y la carne de
rumiantes.
el aceite de oliva por sobre los niveles permitidos, podría indicar que existe alguna
11
TABLA 2. Composición de ácidos grasos, expresada en % de ésteres
metílicos según el CODEX STAN 33-1981, COI y Reglamento Sanitario de
los Alimentos Chile.
Acido Graso CODEX COI DS 977 96
C14:0 (Mirístico) 0 - 0,05 ≤0,05 < 0,1
C16:0 (Palmítico) 7,5 - 20,0 7,5 - 20,0 7 - 17
C16:1 (Palmitoleico) 0,3 - 3,5 0,3 - 3,5 0,3 - 4
C17:0 (Heptadecanoico) 0,0 - 0,3 ≤0,03 NE
C17:1 (Heptadecenoico) 0,0 - 0,3 ≤0,03 NE
C18:0 (Esteárico) 0,5 - 5,0 0,5 - 5,0 1-3
C18:1 (Oleico) 55,0 - 83,0 55,0 - 83,0 65 - 85
C18:2 (Linoleico) 3,5 - 21,0 3,5 - 21,0 4 - 14
C18:3 (Linolénico) NE ≤ 1,0 0,5 - 1,5
C20:0 (Araquídico) 0,0 - 0,6 ≤ 0,6 < 0,5
C20:1 (Eicosenoico) 0,0 - 0,4 ≤ 0,4 < 0,2
C22:0 (Behénico) 0,0 - 0,2 ≤ 0,2 < 0,2
C24:0 (Lignocérico) 0,0 - 0,2 ≤ 0,2 < 0,1
NE= no especificado
caracterizar los atributos de calidad de los aceites de esta industria como producto
debidamente validados.
12
1.7. Validación de métodos analíticos
13
través de los datos analíticos del producto ya comercializado. Se aplica a métodos
condiciones respectivamente.
presentes en ella.
14
II. OBJETIVOS
parámetros de desempeño:
y la repetibilidad.
recuperación.
15
III. MATERIALES Y METODOS
3.1. Materiales
obtenidas de Chile-Oliva.
3.1.1 Reactivos:
palmitoléico (C16:1), ácido esteárico (C18:0), ácido oleico (C18:1), ácido linoleico
3.1.2 Equipo
integrador HP 3395, con columna SP-2560 (100 m x 0,25 µm film x 0,20 d.i.;
SUPELCO, USA)
16
3.1.3 Material de Laboratorio
- Pipetas pasteur
- Matraces aforados 5, 10 y 25 mL
3.2. Metodologia
Nº 2568/91.
17
Procedimiento
al siguiente programa:
patrones.
18
3.2.2. Aplicación de los parámetros de desempeño a las metodologías analíticas de
los ésteres metílicos de los ácidos grasos C16:0, C18:0, C18:1 y C18:2 en hexano.
solución estándar y se aforaron a 5 mL, de tal manera que el área de los ésteres
metílicos del aceite de oliva (muestra) pudiera ser interpolada en ella. En la tabla 4
19
Cada dilución se inyectó en el CG, registrándose las áreas obtenidas, y
Y = S* x + b (1)
Donde:
Y= Área
S= Sensibilidad (área*mL/mg)
X= Concentración (mg/mL)
b= Intercepto
ser detectada por el instrumento usado en el análisis, y que arroja una señal
20
El límite de detección y cuantificación del método para la determinación de
solución estándar con los ésteres metílicos de los ácidos grasos C16:1, C18:3,
21
TABLA 6. Intervalos de concentración de ésteres metílicos
de los ácidos grasos minoritarios: palmitoleico (C16:1),
linoleico (C18:3), araquídico (C20:0), eicosenoico (C20:1),
behénico (C22:0).
Ácidos Concentración Concentración
Grasos mínima (mg/mL) máxima (mg/mL)
C16:1 0,080 1,00
C18:3 0,020 0,69
C20:0 0, 016 0, 56
C20:1 0, 020 0, 40
C22:0 0, 009 0, 30
Donde:
y’i= Valor teórico del punto obtenido por la predicción del modelo de
regresión
ecuaciones 3 y 4.
22
Límite de cuantificación (LC) es: CLC= 10σ (4)
S
Donde:
23
muestras de aceite de oliva extra virgen, variedad arbequina, de acuerdo al método
obtuvieron los datos de las áreas de ésteres metílicos de los ácidos grasos: ácido
palmítico (C16:0), ácido esteárico (C18:0), ácido oleico (C18:1), y ácido linoleico
siguiente forma:
24
El porcentaje de recuperación se calculó de acuerdo con la ecuación 5
25
IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES
concentración (mg/mL) para los estándares de los ésteres metílicos de los ácidos
26
En la tabla 7 y las figuras 3-6, se observa una alta correlación, dada por el
coeficiente de correlación r para las curvas de calibración de cada uno de los ácidos
5000000
4500000
4000000
3500000
3000000
área
2500000
2000000
1500000
1000000
500000
0
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00
Concentración [mg/mL]
2000000
1800000
1600000
1400000
1200000
áreas
1000000
800000
600000
400000
200000
0
0,00 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00 1,20 1,40 1,60 1,80 2,00
Concentración [mg/mL]
27
Curva Calibración C18:1
30000000
25000000
20000000
áreas
15000000
10000000
5000000
0
0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 30,00 35,00 40,00 45,00 50,00
Concentración [mg/mL]
3000000
2500000
2000000
áreas
1500000
1000000
500000
0
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00
Concentración [mg/mL]
28
ácidos palmitoleico, linolénico, araquídico, eicosenoico y behénico, los cuales
En la tabla 8 y las figuras 7-11, se observa una alta correlación, dada por el
coeficiente de correlación (r) para las curvas de calibración de cada uno de los
29
350000 Curva Calibración C16:1
300000
250000
200000
150000
100000
50000
0
0,150 0,250 0,350 0,450 0,550 0,650 0,750 0,850 0,950 1,050
Concentración (mg/ mL)
30000
Area
25000
20000
15000
0,000 0,100 0,200 0,300 0,400 0,500 0,600
Concentración (mg/mL)
200000
150000
Area
100000
50000
0
0,000 0,100 0,200 0,300 0,400 0,500 0,600
Concentración (mg/mL)
70000
50000
30000
10000
-10000
0,000 0,050 0,100 0,150 0,200 0,250
Concentración (mg/mL)
30
Curva Calibración C22:0
120000
100000
80000
Area
60000
40000
20000
0
0,000 0,050 0,100 0,150 0,200 0,250 0,300 0,350
Concentración (mg/mL)
último punto de la curva de calibración de todos los ácidos grasos. Los ácidos
está por debajo de estos valores, no serán detectados, es decir, no arrojarán una
31
señal detectable. Si bién un valor mayor al límite de detección arroja una señal,
ésta es sólo una medida cualitativa, ya que los valores de límite de cuantificación
son mayores. Los valores de límite de cuantificación para los ácidos palmitoleico,
0,057 mg/mL, de tal forma que cuando la concentración de estos ácidos grasos en
el aceite de oliva se encuentra sobre estos valores se podrá asegurar que se está
cuantificando certeramente.
4.3.1 Replicabilidad
32
TABLA 10. Resultados de replicabilidad. Se presenta el promedio
(X) de los porcentajes de ésteres metílicos, la desviación estándar
(DE) y el coeficiente de variación (CV) de cada ácido graso
Ac.Graso X DE CV
C14:0 (ác. Mirístico) tz -- --
C16:0 (ác. Palmítico) 12,45 0,14 1,11
C16:1 (ác. Palmitoleico) 1,08 0,01 1,04
C17:0 (ác. Heptadecanoico) 0,10 0,00 1,94
C17:1 (ác. Heptadecenoico) 0,22 0,00 1,85
C18:0 (ác. Esteárico) 2,11 0,09 4,16
C18:1 (ác. Oleico) 73,15 0,12 0,17
C18:2 (ác. Linoleico) 8,97 0,16 1,74
C18:3 (ác. Linolénico) 0,31 0,00 0,88
C20:0 (ác. Araquídico) 0,40 0,00 0,83
C20:1 (ác. Eicosenoico) 0,47 0,01 2,86
C22:0 (ác. Behénico) 0,14 0,00 3,07
C24:0 (ác. Lignocérico) tz -- --
tz: trazas
analitos que se encuentran entre un 0,1 - 1,0%, 1,0 - 10,0% y sobre 10%, el CV
mayoría de los ácidos grasos que componen el aceite de oliva, C17:0, C17:1,
encuentran sobre un 10%, como los ácidos C16:0 y C18:1, el CV fue de 1 y 0,17%,
estos criterios.
33
4.3.2 Repetibilidad
Los ácidos C17:0, C17:1, C18:3, C20:0, C20:1 y C22:0, en un rango de 0,1-
al criterio del valor máximo del coeficiente de variación permitido (<8%) por la
34
AOAC para este rango de concentración del analito. Para los ácidos grasos en el
intervalo de concentración de 1-10%, el ácido C16:1, cumple con tener un CV< 4%,
en cambio, el ácido C18:0 presentó un valor muy superior (14%) al aceptado. Los
menores al 2%. Por lo tanto el ácido esteárico es el único que no cumple con estos
criterios.
replicabilidad, lo que se puede explicar por el cambio de día, ya que las otras
forma se puede concluir que el cambio de día de análisis de una muestra de aceite
de oliva afecta los parámetros que se está midiendo, sin perjuicio de que los
4.4.1. Recuperación
oliva.
35
TABLA 12. Porcentajes de recuperación (R) y
desviación estandar (DE) obtenido para los
ácidos C16:0, C18:0, C18:1 y C18:2.
Acido Graso %R DE
C16:0 109 9,6
C18:0 77 9,3
C18:1 101 14,9
C18:2 91 18,2
que se traduce en que el método es exacto para estos ácidos grasos, pero es
poco exacto para el ácido esteárico que presenta una recuperación más baja.
36
TABLA 13. Perfil en ácidos grasos de aceites de oliva extra virgen, variedades
arbequina, picual y frantoio, expresado como % de ésteres metílicos
Variedad aceite / Arbequina Picual Frantoio
ácido graso (n=10) (n=10) (n=6)
C16:0 (Ác. Palmítico) 12,5 ± 1,10a 11,2 ± 0,83b 11,3 ± 0,56b
C16:1 (Ác. Palmitoleico) 1,0 ± 0,21a 0,9 ± 0,14b 0,9 ± 0,09b
C17:0 (Ác. Heptadecanoico) 0,1 ± 0,03a 0,04 ± 0,02b 0,06 ± 0,01b
C17:1 (Ác. Heptadecenoico) 0,2 ± 0,06a 0,09 ± 0,03b 0,09 ± 0,03b
C18:0 (Ác. Esteárico) 2,5 ± 0,27b 2,9 ± 0,30a 2,5 ± 0,35b
C18:1 (Ác. Oleico) 74,7 ± 2,50a 79,6 ± 0,88b 76,5 ± 1,04c
C18:2 (Ác. Linoleico) 6,8 ± 1,18b 3,4 ± 0,38a 6,5 ± 0,67b
C18:3 (Ác. Linolénico) 0,3 ± 0,05b 0,2 ± 0,04b 0,3 ± 0,04a
C20:0 (Ác. Araquídico) 0,4 ± 0,04a 0,4 ± 0,03a 0,4 ± 0,03a
C20:1 (Ác. Eicosenoico) 0,7 ± 0,17a 0,8 ± 0,12a 0,8 ± 0,10a
C22:0 (Ác. Behénico) 0,1 ± 0,05a 0,09 ± 0,05a 0,1 ± 0,06a
Letras distintas significa diferencia estadística significativa a un nivel de confianza de 95%
diferencias estadísticas significativas (Anexo 6.2). Uno de los factores que más
para cada ácido graso. La media de concentración de los ácidos grasos de las
37
intervalos, con excepción del C20:1(0,7%; 0,8%; 0,8%, respectivamente) valores
superiores al rango establecido por esta norma para este ácido graso (0,0-0,4%).
de 2003.
parámetros, con excepción del C20:1(0,7%; 0,8%; 0,8%) en cada una de ellas,
cuyos valores son superiores a los limites establecidos por esta norma (<0,2%), y
del C18:3 (0,3%; 0,2%; 0,3%), cuyos porcentajes son inferiores a los límites
establecidos por esta normativa para este ácido graso (0,5 - 1,5%). En esta
establecer si los valores obtenidos están dentro o fuera del intervalo de aceptación.
presenta valores medios de 12,5, 11,2 y 11,3% para arbequina, picual y frantoio,
las variedades picual (11,9%) y frantoio (10,9%), pero no para arbequina (20,1%)
(Moyano et al., 2005; Sánchez Casas 2003, Aguilera 2003). Otro de los principales
ácidos grasos saturados es el ácido esteárico, cuyo rango varía entre 2,2 - 2,8 %;
2.6 - 3.2% y 2,2 - 2,9% para los aceites de las variedades arbequina, picual y
38
frantoio, respectivamente. Estos resultados son similares a los descritos para la
(antes mencionada), el ácido oleico, el cual se encuentra por sobre un 70% en las
muestras de las tres variedades, de éstas, picual presenta el valor más elevado
concuerdan con diversos autores (INIA Uruguay 2007, Aguilera 2003, Sánchez
Casas 2003, Matías et al 2003) para la variedad picual (79,31%), pero no para las
de la variedad picual (3,4%) está de acuerdo con el perfil descrito por Sánchez
valores reportados por Motilva (2001) de 0,34%. Sin embargo para las variedades
C18:1, C18:2, C18:3, C201) por sobre los saturados, (C16:0, C17:0, C18:0, C20:0,
39
C22:0), en especial del ácido monoinsaturado C18:1, que es el que caracteriza al
FIGURA 12. Cromatograma aceite de oliva extra virgen, variedad arbequina, (1) ác.
Palmítico, (2) ác. Palmitoleico, (3) ác. Heptadecanoico y heptadecenoico, (4) ác.
Esteárico, (5) ác. Oleico, (6) ác. Linoleico, (7) ác. Araquídico, (8) ác. Linolénico, (9)
ác. Eicosenoico, (10) ác. Behénico.
40
V. CONCLUSIONES
con los objetivos propuestos en este estudio ya que permitió la determinación de los
ácidos grasos del aceite de oliva dentro del rango que pueden esperarse en un
aceite de oliva comercial, con excepción del ácido esteárico que no cumplió con los
lineales, entre 0,83 - 7,45 mg/mL; 0,20 - 1,84 mg/mL; 5,00 - 44,97 mg/mL y 0,64 -
5,80 mg/mL para los ácidos palmítico, esteárico, oleico y linoleico, respectivamente,
oleico (101%) y linoleico (91%) son aceptables, y se puede concluir que el método
41
VI. BIBLIOGRAFIA
42
autentificación. En: XI SIMPOSIUM CIENTÍFICO-TÉCNICO Expoliva 2003 Feria
internacional del aceite de oliva. 14 a 16 de Mayo de 2003. Jaén, España. pp. s.p.
10. HARRIS, Daniel. Análisis químico cuantitativo. 3ª ed. Barcelona. Reverté, 2006.
744p.
11. HERNANDEZ, Manuel. Tratado de nutrición y salud pública. 2ª ed. Madrid, Díaz
de Santos, 1999. 1476p.
12. IGLESIAS R. Mercado del aceite de oliva. Mercados Agropecuarios 187 Febrero
2008.
15. MOTILVA María José, RAMO Tomás, ROMERO María Paz. Caracterización
geográfica de los aceites de oliva vírgenes de la denominación de origen protegida
“Les Garrigues” por su perfil de ácidos grasos. Grasas y Aceites. 52 (1): 26-32.
2001
16. Norma para los aceites de oliva y aceites de orujo de oliva CODEX STAN 33-
1981 (rev. 2-2003).
43
18. Resolución nº RES-3/89-IV/03. ESPAÑA. Norma comercial aplicable a los
aceites de oliva y los aceites de orujo de oliva. Consejo Oleicota Internacional,
Madrid, España, diciembre de 2005.
20. SERRA, Lluis y Aranceta, Javier. Nutrición y salud pública: métodos, bases
científicas y aplicaciones. 2ª ed. Barcelona, Masson, 2006. 826p.
21. STENDER, Steen and Dyerberg, Jorn. The influence of trans fatty acids on
health. 4th ed. Denmark, the Danish nutrition council. 2003. 86p
22. TARDÁGUILA J., Montero F., Olmeda M., Alba J., Análisis del sector del aceite
de oliva. Alimentación, Equipos y Tecnología, Abril, 1996.
44
VII. ANEXOS
ANEXO 1
curva de calibración para cada éster metílico de ácido graso que se analizó. (ácidos
45
1.2. Construcción de las curvas de calibración
el CG. Con los datos de área obtenidos para cada concentración de cada éster de
concentración del éster metílico del ácido graso en la solución y el área obtenida
Y= 607561X + 63450
r= 0,9996
46
TABLA 16. Concentración y área
obtenida para la curva de calibración
del ácido esteárico C18:0
Conc[mg/mL] Área
1,22 1261959
0,82 826872
0,41 488378
0,20 280290
Y= 811465X + 155547
r= 0,9923
Y= 587630X - 100040
r= 0,9991
Y= 480022X - 27759
r= 0,9998
47
ANEXO 2
eicosenoico y behénico).
la tabla 19.
48
2.2. Construcción de las curvas de calibración
el CG. Con los datos de área obtenidos para cada concentración de los ésteres
metílicos de los ésteres metílicos de los ácidos grasos, se construyó una curva de
tablas 20, 21, 22, 23 y 24 muestran la concentración del éster metílico del ácido
correlación.
Y= 324939X + 1682
r= 0,9999
Y= 34484X + 14914
r= 0,9998
49
TABLA 22. Concentración y área
obtenida para la curva de
calibración del ácido araquídico
C20:0
mg/ml área
0,563 208480
0,241 90230
0,080 31951
0,040 15124
Y= 377935X + 5171
r= 0,9974
Y= 576894X - 3581
r= 0,9987
Y= 381434X – 1236
r= 0,9986
50
2.3. Cálculo de σy/x de la regresión para la determinación de los límites de detección
y cuantificación.
ecuación (2):
Donde:
y’i= Valor teórico del punto obtenido por la predicción del modelo de regresión
En las tablas 25, 26, 27, 28 y 29 se muestran los datos de yi e y’i para cada
51
n= 5
σy/x = 4989
n=3 σy/x=188
n= 3 σy/x= 983
52
TABLA 29. Valores de yi e y’i obtenidos
mediante la curva de calibración del ácido
behénico.
Conc.[mg/mL] yi y'i
0,300 112043 113194
0,214 82841 80390
0,128 46136 47587
n= 3 σy/x= 2174
cada ácido graso. Luego se presenta el cálculo del σy/x para ácido palmitoleico
como ejemplo, y los valores de los σy/x de los restantes ácidos grasos.
En donde:
CLD= Concentración del limite de detección (mg/mL)
CLC= Concentración del limite de cuantificación (mg/mL)
σ = Desviación estándar de la regresión (área).
b = intercepto de la curva de calibración (área)
S= pendiente de la curva de calibración (área* mL/mg)
53
TABLA 30. Valores de σy/x
obtenido para cada ácido
graso.
Ácido graso σ
C16:0 4989
C18:3 188
C20:0 1061
C20:1 983
C22:0 2174
ácido palmitoleico
CLD= 3σ
S
CLC= 10σ
S
54
c) Concentración del límite de detección y cuantificación del ácido araquídico
ANEXO 3
Replicabilidad
día, por el mismo analista y en el mismo equipo, con los cuales se elaboró la
55
TABLA 31. Áreas de cada éster metílico de los ácidos grasos en las 10 repeticiones de la muestra de aceite
de oliva variedad arbequina
Ácido graso M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8 M9 M10
C16:0 2012573 2667760 2034201 3057822 2020763 2801558 1906268 3534246 2543189 3393582
C16:1 2012573 2667760 2034201 3057822 2020763 2801558 1906268 3534246 2543189 3393582
C17:0 16126 21931 16198 24726 16237 22300 15303 27663 20432 25572
C17:1 34808 46451 35338 53967 36130 48412 33544 61136 41525 58391
C18:0 341843 446921 341973 520424 335901 472833 308427 572208 461367 595223
C18:1 376651 493372 377311 574391 372031 521245 341971 633344 502892 465912
C18:2 1454939 1966151 1419001 2192077 1495458 2033634 1409283 2579901 1759385 2395621
C20:0 65806 87614 65468 101548 66035 91982 60790 112992 80712 107947
C18:3 51288 68305 50002 77489 51193 71136 47106 87673 61874 82807
C20:1 75431 103638 73178 113323 79054 107278 75602 137967 93202 127918
C22:0 23617 30883 21527 34581 23034 31569 20272 38396 27959 35641
TABLA 32. Composición en ácidos grasos expresada como porcentaje de ésteres metílicos en las 10
muestras analizadas, promedio, desviación estándar y coeficiente de variación.
56
ANEXO 4
Repetibilidad
por el mismo analista y en el mismo equipo, con los cuales se elaboró la tabla 34
coeficiente de variación de cada ácido graso, parámetros con los cuales se evaluó
57
TABLA 33. Áreas de cada éster metílico de los ácidos grasos en las 10 repeticiones de la muestra de aceite
de oliva variedad arbequina
TABLA 34. Composición en ácidos grasos expresada como porcentaje de ésteres en las 10
muestras analizadas, promedio, desviación estándar y coeficiente de variación.
58
ANEXO 5
Recuperación
sin fortificar y una fortificada con una solución estándar de los ésteres metílicos de los
ellas se realizó en triplicado. En las tablas 35, 36, 37 y 38 se muestran los datos del
área del aceite de oliva natural y la muestra con estándar, el área correspondiente a la
1 213288
1* 1449604 1236316 1,93 116,62
2 301332
2* 1353641 1052309 1,62 98,33
3 404755
3* 1596809 1192054 1,85 112,22
X= 109,06
DE= 9,55
* muestra fortificada con estándar
Concentración verdadera estándar = 1,65 mg/mL
59
TABLA 36. Datos obtenidos para el cálculo de la recuperación del ácido
esteárico C18:0
Área muestra
Concentración
Área fortificada - Área % de
Nº Muestra recuperada
muestra muestra sin Recuperación
estándar
fortificar
1 54161
1* 392555 338394 0,32 79,20
2 64978
2* 342210 277232 0,27 66,17
3 84780
3* 412227 327447 0,34 84,30
X= 76,56
DE= 9,35
* muestra fortificada con estándar
Concentración verdadera estándar = 0,41 mg/mL
TABLA 37. Datos obtenidos para el cálculo de la recuperación del ácido oleico
C18:1
Área muestra
Concentración
Área fortificada - Área % de
Nº Muestra recuperada
muestra muestra sin Recuperación
estándar
fortificar
1 11842616
1* 28812352 16969736 29,05 116,26
2 13645272
2* 28361232 14715960 25,21 100,91
3 14777456
3* 27347696 12570240 21,56 86,29
X= 101,15
DE= 14,99
* muestra fortificada con estándar
Concentración verdadera estándar = 24,99 mg/mL
60
TABLA 38. Datos obtenidos para el cálculo de la recuperación del ácido
linoleico C18:2
Área muestra
Concentración
Área fortificada - Área % de
Nº Muestra recuperada
muestra muestra sin Recuperación
estándar
fortificar
1 1568088
1* 3199901 1631813 3,46 107,68
2 1750203
2* 3147066 1396863 2,98 92,61
3 1936868
3* 3003093 1066225 2,29 71,40
X= 90,56
DE= 18,23
* muestra fortificada con estándar
Concentración verdadera estándar = 3,22 mg/mL
ANEXO 6
Muestras
6.1. Composición en porcentaje de los ácidos grasos de las muestras de aceite de oliva
analizadas
ácidos grasos de cada una de las muestras de las variedades se presentan en las
61
TABLA 39. Composición de ácidos grasos expresado en porcentaje de ésteres
metílicos, promedio y desviación estándar de 10 muestras analizadas de aceite de
oliva variedad picual
Ac. Graso MP1 MP2 MP3 MP4 MP5 MP6 MP7 MP8 MP9 MP10 PROM DE
C16:0 12,00 12,28 11,49 11,45 11,43 9,52 10,37 10,44 11,50 11,23 11,17 0,83
C16:1 0,97 0,97 0,92 0,93 0,82 0,49 0,81 0,80 0,89 0,87 0,85 0,14
C17:0 0,05 0,05 0,05 0,04 0,03 0,00 0,05 0,04 0,06 0,05 0,04 0,02
C17:1 0,11 0,11 0,08 0,09 0,08 0,00 0,08 0,09 0,10 0,10 0,09 0,03
C18:0 2,43 2,49 2,89 2,67 2,96 3,47 2,98 3,01 2,81 2,75 2,85 0,30
C18:1 79,11 78,60 79,30 79,87 79,44 81,00 80,69 80,52 78,63 78,84 79,60 0,88
C18:2 3,17 3,09 3,23 3,29 3,42 3,63 3,14 3,09 4,12 4,02 3,42 0,38
C18:3 0,25 0,00 0,17 0,19 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,20 0,04
C20:0 0,36 0,35 0,36 0,35 0,38 0,45 0,39 0,39 0,38 0,38 0,38 0,03
C20:1 0,64 0,86 0,56 0,56 0,79 0,83 0,87 0,86 0,82 0,80 0,76 0,12
C22:0 0,12 0,11 0,10 0,10 0,11 0,00 0,12 0,11 0,00 0,13 0,09 0,05
62
TABLA 41. Composición de ácidos grasos expresado en porcentaje de
ésteres metílicos, promedio y desviación estándar de 10 muestras
analizadas de aceite de oliva variedad frantoio
Ac. Graso MF1 MF2 MF3 MF4 MF5 MF6 PROM DE
C16:0 11,30 12,09 11,09 10,90 11,90 10,70 11,33 0,56
C16:1 0,93 0,92 0,76 0,73 0,84 0,90 0,85 0,09
C17:0 0,08 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,06 0,01
C17:1 0,04 0,12 0,09 0,09 0,10 0,12 0,09 0,03
C18:0 2,53 1,92 2,94 2,76 2,51 2,39 2,51 0,35
C18:1 77,94 76,13 75,72 75,92 75,73 77,79 76,54 1,04
C18:2 5,18 6,71 6,94 6,87 6,72 6,26 6,45 0,67
C18:3 0,27 0,33 0,00 0,00 0,00 0,00 0,30 0,04
C20:0 0,41 0,36 0,41 0,00 0,41 0,34 0,39 0,03
C20:1 0,62 0,66 0,86 0,80 0,85 0,76 0,76 0,10
C22:0 0,14 0,12 0,15 0,15 0,14 0,00 0,12 0,06
63
6.2. Análisis estadístico ANOVA
Analysis of Variance
-----------------------------------------------------------------------------
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
-----------------------------------------------------------------------------
Between groups 9,83947 2 4,91973 6,05 0,0077
Within groups 18,6924 23 0,812712
-----------------------------------------------------------------------------
Total (Corr.) 28,5318 25
--------------------------------------------------------------------------------
Method: 95,0 percent LSD
Muestras Count Mean Homogeneous Groups
--------------------------------------------------------------------------------
2 10 11,171 X
3 6 11,33 X
1 10 12,489 X
--------------------------------------------------------------------------------
Contrast Difference +/- Limits
--------------------------------------------------------------------------------
1-2 *1,318 0,834013
1-3 *1,159 0,963035
2-3 -0,159 0,963035
--------------------------------------------------------------------------------
• denotes a statistically significant difference.
64
6.2. 2. Análisis ANOVA para el ácido palmitoleico (C16:1 )
Analysis of Variance
-----------------------------------------------------------------------------
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
-----------------------------------------------------------------------------
Between groups 0,184445 2 0,0922226 3,60 0,0437
Within groups 0,589343 23 0,0256236
-----------------------------------------------------------------------------
Total (Corr.) 0,773788 25
--------------------------------------------------------------------------------
Method: 95,0 percent LSD
Muestras Count Mean Homogeneous Groups
--------------------------------------------------------------------------------
3 6 0,846667 X
2 10 0,847 X
1 10 1,02 X
--------------------------------------------------------------------------------
Contrast Difference +/- Limits
--------------------------------------------------------------------------------
1-2 *0,173 0,14809
1-3 *0,173333 0,170999
2-3 0,000333333 0,170999
--------------------------------------------------------------------------------
• denotes a statistically significant difference.
65
6.2.3. Análisis ANOVA para el ácido heptadecanoico (C17:0)
Analysis of Variance
-----------------------------------------------------------------------------
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
-----------------------------------------------------------------------------
Between groups 0,0275415 2 0,0137708 26,57 0,0000
Within groups 0,01192 23 0,000518261
-----------------------------------------------------------------------------
Total (Corr.) 0,0394615 25
--------------------------------------------------------------------------------
Method: 95,0 percent LSD
Muestras Count Mean Homogeneous Groups
--------------------------------------------------------------------------------
2 10 0,042 X
3 6 0,055 X
1 10 0,113 X
--------------------------------------------------------------------------------
Contrast Difference +/- Limits
--------------------------------------------------------------------------------
1-2 *0,071 0,021061
1-3 *0,058 0,0243191
2-3 -0,013 0,0243191
--------------------------------------------------------------------------------
• denotes a statistically significant difference.
66
6.2. 4. Análisis ANOVA para el ácido heptadecenoico (C17:1)
Analysis of Variance
-----------------------------------------------------------------------------
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
-----------------------------------------------------------------------------
Between groups 0,110002 2 0,055001 27,46 0,0000
Within groups 0,0460633 23 0,00200275
-----------------------------------------------------------------------------
Total (Corr.) 0,156065 25
--------------------------------------------------------------------------------
Method: 95,0 percent LSD
Muestras Count Mean Homogeneous Groups
--------------------------------------------------------------------------------
2 10 0,084 X
3 6 0,0933333 X
1 10 0,221 X
--------------------------------------------------------------------------------
Contrast Difference +/- Limits
--------------------------------------------------------------------------------
1-2 *0,137 0,0414017
1-3 *0,127667 0,0478066
2-3 -0,00933333 0,0478066
--------------------------------------------------------------------------------
• denotes a statistically significant difference.
67
6.2.5. Análisis ANOVA para el ácido esteárico (C18:0)
Analysis of Variance
-----------------------------------------------------------------------------
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
-----------------------------------------------------------------------------
Between groups 0,731882 2 0,365941 4,05 0,0311
Within groups 2,07813 23 0,0903536
-----------------------------------------------------------------------------
Total (Corr.) 2,81002 25
--------------------------------------------------------------------------------
Method: 95,0 percent LSD
Muestras Count Mean Homogeneous Groups
--------------------------------------------------------------------------------
1 10 2,497 X
3 6 2,50833 X
2 10 2,846 X
--------------------------------------------------------------------------------
Contrast Difference +/- Limits
--------------------------------------------------------------------------------
1-2 *-0,349 0,278085
1-3 -0,0113333 0,321105
2-3 *0,337667 0,321105
--------------------------------------------------------------------------------
• denotes a statistically significant difference.
68
6.2.6. Análisis ANOVA para el ácido oleico (C18:1)
Analysis of Variance
-----------------------------------------------------------------------------
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
-----------------------------------------------------------------------------
Between groups 126,314 2 63,1569 22,52 0,0000
Within groups 64,5003 23 2,80436
-----------------------------------------------------------------------------
Total (Corr.) 190,814 25
--------------------------------------------------------------------------------
Method: 95,0 percent LSD
Muestras Count Mean Homogeneous Groups
--------------------------------------------------------------------------------
1 10 74,603 X
3 6 76,5383 X
2 10 79,6 X
--------------------------------------------------------------------------------
Contrast Difference +/- Limits
--------------------------------------------------------------------------------
1-2 *-4,997 1,54925
1-3 *-1,93533 1,78892
2-3 *3,06167 1,78892
--------------------------------------------------------------------------------
• denotes a statistically significant difference.
69
6.2.7. Análisis ANOVA para el ácido linoleico (C18:2)
Analysis of Variance
-----------------------------------------------------------------------------
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
-----------------------------------------------------------------------------
Between groups 64,3543 2 32,1771 46,39 0,0000
Within groups 15,9523 23 0,69358
-----------------------------------------------------------------------------
Total (Corr.) 80,3066 25
--------------------------------------------------------------------------------
Method: 95,0 percent LSD
Muestras Count Mean Homogeneous Groups
--------------------------------------------------------------------------------
2 10 3,42 X
3 6 6,44667 X
1 10 6,763 X
--------------------------------------------------------------------------------
Contrast Difference +/- Limits
--------------------------------------------------------------------------------
1-2 *3,343 0,770465
1-3 0,316333 0,889656
2-3 *-3,02667 0,889656
--------------------------------------------------------------------------------
• denotes a statistically significant difference.
70
6.2.8. Análisis ANOVA para el ácido linolénico (C18:3)
Analysis of Variance
-----------------------------------------------------------------------------
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
-----------------------------------------------------------------------------
Between groups 0,459902 2 0,229951 5,56 0,0107
Within groups 0,951713 23 0,0413788
-----------------------------------------------------------------------------
Total (Corr.) 1,41162 25
--------------------------------------------------------------------------------
Method: 95,0 percent LSD
Muestras Count Mean Homogeneous Groups
--------------------------------------------------------------------------------
2 10 0,061 X
1 10 0,061 X
3 6 0,376667 X
--------------------------------------------------------------------------------
Contrast Difference +/- Limits
--------------------------------------------------------------------------------
1-2 0,0 0,188189
1-3 *-0,315667 0,217302
2-3 *-0,315667 0,217302
--------------------------------------------------------------------------------
• denotes a statistically significant difference.
71
6.2.9. Análisis ANOVA para el ácido araquídico (20:0)
Analysis of Variance
-----------------------------------------------------------------------------
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
-----------------------------------------------------------------------------
Between groups 0,00396154 2 0,00198077 1,77 0,1923
Within groups 0,0257 23 0,00111739
-----------------------------------------------------------------------------
Total (Corr.) 0,0296615 25
--------------------------------------------------------------------------------
Method: 95,0 percent LSD
Muestras Count Mean Homogeneous Groups
--------------------------------------------------------------------------------
2 10 0,379 X
3 6 0,39 X
1 10 0,407 X
--------------------------------------------------------------------------------
Contrast Difference +/- Limits
--------------------------------------------------------------------------------
1-2 0,028 0,0309248
1-3 0,017 0,0357089
2-3 -0,011 0,0357089
--------------------------------------------------------------------------------
• denotes a statistically significant difference.
72
6.2.10. Análisis ANOVA para el ácido eicosenoico (C20:1)
Analysis of Variance
-----------------------------------------------------------------------------
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
-----------------------------------------------------------------------------
Between groups 0,288728 2 0,144364 2,35 0,1177
Within groups 1,41173 23 0,0613797
-----------------------------------------------------------------------------
Total (Corr.) 1,70046 25
--------------------------------------------------------------------------------
Method: 95,0 percent LSD
Muestras Count Mean Homogeneous Groups
--------------------------------------------------------------------------------
3 6 0,481667 X
1 10 0,648 XX
2 10 0,759 X
--------------------------------------------------------------------------------
Contrast Difference +/- Limits
--------------------------------------------------------------------------------
1-2 -0,111 0,229201
1-3 0,166333 0,264659
2-3 *0,277333 0,264659
--------------------------------------------------------------------------------
• denotes a statistically significant difference.
73
6.2.11. Análisis ANOVA para el ácido behénico (C22:0)
Analysis of Variance
--------------------------------------------------------------------------------------------------
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
---------------------------------------------------------------------------------------------------
Between groups 0,00651282 2 0,00325641 1,24 0,3068
Within groups 0,0601833 23 0,00261667
-----------------------------------------------------------------------------
Total (Corr.) 0,0666962 25
--------------------------------------------------------------------------------
Method: 95,0 percent LSD
Muestras Count Mean Homogeneous Groups
--------------------------------------------------------------------------------
2 10 0,09 X
3 6 0,116667 X
1 10 0,125 X
--------------------------------------------------------------------------------
Contrast Difference +/- Limits
--------------------------------------------------------------------------------
1-2 0,035 0,0473237
1-3 0,00833333 0,0546447
2-3 -0,0266667 0,0546447
--------------------------------------------------------------------------------
* denotes a statistically significant difference.
74