FACULTAD DE QUÍMICA

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA

CURSO DE BIOQUÍMICA CLÍNICA

(CLAVE 1807)
Licenciatura de QFB

Prof. Laura Carmona Salazar

Semestre: 13-II

Este material es exclusivamente para uso educativo y no de lucro

ENZIMOLOGÍA CLÍNICA
 ENZIMOLOGÍA CLÍNICA
• Los enzimas como catalizadores biológicos
• Determinación de la actividad enzimática
• Los enzimas como marcadores de lesión
tisular
• Enzimas séricas de importancia en el
diagnóstico clínico
ESTRUCTURA Y NATURALEZA DE LOS ENZIMAS
EL ARREGLO DE UNA PROTEÍNA PARTICULAR ES EL
RESULTADO DE
SU SECUENCIA ÚNICA Y ESPECÍFICA DE AMINOÁCIDOS
Y ES INDISPENSABLE PARA SU FUNCIONALIDAD

Ha y Loh, 2012
Chemistry 18 (26):7984
LA ACTIVIDAD CATALÍTICA DEPENDE
DE LA INTEGRIDAD DE SU CONFORMACIÓN
PROTEICA NATIVA

ADEMÁS PUEDEN REQUERIR DE OTROS COMPONENTES

QUÍMICOS ADICIONALES
 COENZIMAS FUNDAMENTALES PARA LA ACTIVIDAD
CATALÍTICA DE VARIOS ENZIMAS
VITAMINA COENZIMA REACCIÓN EN LA QUE ESTÁ
INVOLUCRADA
Tiamina (vitamina B1) Tiamina pirofosfato Activación y transferencia de aldehídos

Riboflavina (vitamina B2) Flavin mononucleótido o Oxidación-reducción

FMN; flavin adenin
dinucleótido o FAD+,
Niacina Nicotin amida adenin Oxidación-reducción
dinucleótido o NAD+; Nicotin
amida adenin dinucleótido
fosfato o NADP+
Ácido pantoténico Coenzima A Activación y transferencia de grupos acilo

Piridoxina Fosfato de piridoxal Reacciones que involucran la activación de

aminoácidos
Biotina Biotina Activación y transferencia de CO2

Ácido lipoico Lipoamida Activación del grupo acilo:oxidación-

reducción
Ácido fólico Tetrahidrofolato Activación y transferencia de grupos
funcionales de un sólo carbono
Vitamina B12 Adenosil cobalamina; metil Isomerizaciones y transferencia de grupos
cobalamina metilo
 CLASIFICACIÓN DE LOS ENZIMAS ACORDE A LA
REACCIÓN QUE CATALIZAN

1) Oxidoreductasas.- Reacciones redox que involucran

transferencia de electrones

2) Transferasas.- Reacciones de transferencia de grupos

funcionales
3) Hidrolasas.- Reacciones de hidrólisis

4) Liasas.- Crean dobles enlaces

5) Isomerasas.- Reacciones de isomerización

6) Ligasas.- Formación de puentes con rompimiento de ATP

LOS ENZIMAS CATALIZAN REACCIONES DE MANERA
EFICAZ Y ALTAMENTE ESPECÍFICA

COMPLEJA ESTRUCTURACIÓN PROTEICA

INTERACCIÓN PRECISA DEL ENZIMA-SUSTRATO

ESPECIFICIDAD
¿QUÉ HACEN LOS ENZIMAS?
LOS ENZIMAS FACILITAN LA FORMACIÓN DEL ESTADO DE TRANSICIÓN
(Proporcionando una superficie complementaria a su estereoquímica, polaridad
o carga)
Estado de transición S
Energía libre

Energía
Estado libre
basal
Estado
basal
Coordenada de reacción
(cambios químicos)
REACCIÓN QUÍMICA
EL EQUILIBRIO DEPENDE DEL ∆G
S P
Y LA VELOCIDAD DE LA ENERGÍA LIBRE
DE ACTIVACIÓN

EN UNA REACCIÓN CATALIZADA POR UN ENZIMA,

ÉSTA MODIFICA LA VELOCIDAD
CINÉTICA ENZIMÁTICA.- Disciplina que se encarga de
estudiar el mecanismo de una reacción catalizada
enzimáticamente.

OBJETIVO.- Determinar la velocidad de la reacción y

evaluar como se ve modificada ésta en
respuesta a cambios en los parámetros
experimentales
VELOCIDAD= Cantidad de sustrato desaparecido o
producto formado por la enzima por unidad de tiempo

Por tanto sus unidades son

cantidad de compuesto sobre unidad de tiempo:
moles
µmoles hora
nmoles
gramos minuto
miligramos
µgramos segundo
S P E+S ES E+P

ESTADO
PRE-ESTACIONARIO
VELOCIDAD DE LA REACCIÓN

Concentración del sustrato

 ¿QUÉ ES ACTIVIDAD Y CANTIDAD DE UN
ENZIMA?

• ACTIVIDAD: Cantidad transformada por

unidad de tiempo
(moles/s)
• ACTIVIDAD ESPECÍFICA: Actividad
enzimática por cantidad de enzima
(moles/s/mg de proteína)
• CANTIDAD: Se refiere a la concentración
del enzima (mg, mg/mL, actividad
enzimática/mL)
 ¿CÓMO SE DETERMINA LA
CANTIDAD DE ENZIMA EN UNA
MUESTRA?
METODOLOGÍA UTILIZADA PARA LA DETERMINACIÓN DE
ENZIMAS EN MUESTRAS BIOLÓGICAS

MÉTODOS INMUNOLÓGICOS.- Que

determinan la cantidad de enzima

MÉTODOS
ESPECTROFOTOMÉTRICOS.- Que
establecen la actividad catalítica de las
enzimas
DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
La velocidad de una reacción se puede expresar
como cantidad de sustrato consumido
o como cantidad de producto formado

Lo cual puede monitorearse espectrofotométricamente a través de determinar

los cambios en la absorción óptica de la solución que contiene los
sustratos y el enzima

1 UNIDAD DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Cantidad de enzima que puede transformar 1 µmol de sustrato por minuto
DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA EN
UNA MUESTRA BIOLÓGICA
 PROCEDIMIENTO´PARA LA DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD
ENZIMÁTICA DE LA MUESTRA BIOLÓGICA

1.

2.
3.

4.
¿CÓMO CONVIERTO LA
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
OBTENIDA EN UI?
Para obtener el valor definitivo de actividad
enzimática aplicamos la siguiente fórmula:
 Donde:
· ε = coeficiente de extinción molar
· b = es el espesor de la cubeta
· VF = es el volumen total de reacción
· VI = es el volumen de muestra en el ensayo

Los parámetros:

son constantes por tanto podemos la fórmula anterior

queda como:

UI/L=?A/min · cte
CONSIDERACIONES IMPORTANTES EN LOS ENSAYOS DE
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
 No utilizar muestras congeladas y descongeladas
varias veces.

• Separar lo antes posible el coágulo del suero

• Evitar trabajar con muestras hemolizadas

• Evitar estasis venosa durante la extracción

• Evitar el envejecimiento de las muestras

• El transporte de las muestras debe realizarse en frío sin

congelar, salvo que se vaya a prolongar mucho tiempo.
CONSIDERACIONES IMPORTANTES EN LOS ENSAYOS DE
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Variables que afectan al análisis clínico. EDTA y hemólisis

EDTA:
Su efecto anticoagulante se basa en su capacidad para quelar iones
divalentes como calcio o magnesio. No es posible determinar la
actividad de enzimas que requieran estos iones.

MUESTRAS HEMOLÍTICAS:
La ruptura de los eritrocitos hace que su contenido pase al plasma.
Las muestras presentan una coloración roja intensa muy característica
debida a la presencia de hemoglobina.
La hemólisis puede ser causada por una patología o, en la
mayor parte de los casos, un procesamiento
indebido de la muestra.
CARACTERÍSTICAS DE LOS ENZIMAS UTILIZADOS
COMO MARCADORES EN LA CLÍNICA
LOS ENZIMAS SE UTILIZAN COMO MARCADORES
DE LESIÓN TISULAR

SIGNIFICADO CLÍNICO DEL PATRÓN

ISOENZIMÁTICO DE ALGUNOS ENZIMAS
DETERMINACIÓN DEL PATRÓN ISOENZIMÁTICO DE
LACTATO DESHIDROGENASA (LDH)
DISTRIBUCIÓN TISULAR DE LAS ISOFORMAS DE LDH

PATRÓN ISOENZIMÁTICO DE LDH EN DIFERENTES PATOLOGÍAS

¿QUÉ PUEDE PROMOVER CAMBIOS EN
LAS CONCENTRACIONES DE LOS
ENZIMAS?
LOS ENZIMAS PUEDEN SER INDICADORES DE UNA
LESIÓN CELULAR Y TISULAR
IMPORTANCIA DEL ESTUDIO ENZIMÁTICO
ENZIMAS UTILIZADOS EN EL DIAGNÓSTICO CLÍNICO

- Alanina aminotransferasa (ALT)

- Aspartato aminotransferasa (AST)
- Creatina kinasa (CK)
- Fosfatasa alcalina (AP, ALP, SAP)
- g-glutamil transpeptidasa (GGT)
- Amilasas
-Lipasas
DISTRIBUCIÓN TISULAR DE LAS TRANSAMINASAS
ALANINA AMINOTRANSFERASA (ALT)
También llamada GPT (Transaminasa glutámico-pirúvica)

Función: cataliza la transferencia de alanina al ácido a-

cetoglutárato, formando piruvato y ácido glutámico)

Localización: citoplasma
•Valores normales: < 50 U/ml
•Aumento importante: Shock, hepatitis
•Aumento moderado: cirrosis, mononucleosis,
ictericia,
ASPARTATO AMINOTRANSFERASA (AST)
También conocida como GOT (Transaminasa
glutámico-oxalacético)
-Función: cataliza la transferencia del grupo a-amino del ácido
aspártico al ácido a-cetoglutárico, formando oxaloacetato y
glutámico)

Localización: citoplasma y mitocondria

•Valores normales: < 40U/ml
•Aumento importante: Infarto del miocardio, hepatitis, traumatismos
•Aumento moderado: cirrosis, mononucleosis, ictericia, hemólisis
DISTRIBUCIÓN TISULAR DE LA CREATINA CINASA
 CREATINA CINASA (CK Ó CPK)

Función: importante para la contracción muscular. Transfiere el

fosfato de la fosfocreatina al ADP, formando ATP
Localización: citoplasma y mitocondria de miocitos

Isoenzimas:
CK-1: isoenzima BB, cerebro
CK-2: isoenzima MB, músculo cardíaco y esquelético
CK-3: isoenzima MM, músculo esquelético y cardíaco
CK-Mt: membranas mitocondriales. Músculo cardíaco

•Valores normales: < 160U/ml en varones

y <130U/ml en mujeres
•Aumento importante: Infarto de
miocardio CK-MB
•Aumento moderado: miopatías, distrofia
muscular, accidente cerebro-vascular
DISTRIBUCIÓN TISULAR DE LA FOSFATASA ALCALINA
FOSFATASA ALCALINA (AP, ALP, SAP)

Función: metaloenzima que cataliza la hidrólisis de

diferentes ésteres de fosfato. Requiere pH alcalino y
cofactores (iones zinc y magnesio)

Localización: asociada a membrana

• Valores normales: 85-190U/ml en el adulto. Hasta 500U/ml en niños en

desarrollo

• Aumento importante: ictericia obstructiva, colelitiasis, neoplasia de

vías biliares, cirrosis, hepatomas
• Aumento moderado: neoplasias óseas osteogénicas, osteomalacia,
enf. Paget, hiperparatiroidismo
G-GLUTAMIL TRANSPEPTIDASA (GGT)

Función: Cataliza la transferencia de grupos glutamil

C-terminales de unos péptidos a otros o a
aminoácidos. Es importante en el metabolismo del
glutatión, la absorción de aminoácidos y en la anti-
oxidación

Localización: membrana y citoplasma (5%)

•Valores normales: < 35U/ml en varones y <25U/ml en mujeres

•Aumento importante: Hepatitis vírica, obstrucción biliar, metástasis
hepáticas, enf. alcohólica
•Aumento moderado: infecciones que afectan al hígado
(citomegalovirus, mononucleosis infecciosa)
AMILASAS (α
α-AMILASA)

Función: hidroliza carbohidratos complejos para formar

maltosa y glucosa

Localización: Se produce en páncreas, hígado e intestino

delgado. Se filtra y reabsorbe a través del riñón

• Valores normales: <50U/ml

•Aumento importante: pancreatitis aguda y crónica,
cáncer de páncreas.
•Aumento moderado: parotiditis, algunos carcinomas,
procesos parapancreáticos (gastritis, úlcera duodenal,
peritonitis, obstrucción intestinal.
LIPASAS

Función: hidroliza triglicéridos

Localización: Se sintetiza en el páncreas y en la mucosa

gástrica. Se elimina a través del riñón

Causas del incremento de lipasa:

Pancreatitis
Gastrointestinales
Renales
DISTRIBUCIÓN TISULAR DE LA FOSFATASA ÁCIDA
DISTRIBUCIÓN TISULAR DE LA LACTATO
DESHIDROGENASA
 Las enzimas son indispensables en
DIAGNÓSTICO CLÍNICO porque la alteración
de la actividad enzimática puede estar
asociada a un estado patológico