BIOSINTESIS DE AMINOÁCIDOS EN

ESCHERICHIA COLI

E.A.P. Ciencias Biológicas, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad Nacional Mayor

de San Marcos, Lima, Perú

Resumen
Se tiene conocimiento de que todos los
aminoácidos provienen de
intermediarios, del ciclo del acido
cítrico o de la vía de las pentosas
fosfato, sobre esta base se realizo el
siguiente trabajo.
Los distintos organismos presentan
considerables diferencias en su
capacidad para sintetizar los 20
aminoácidos estándar. Mientras que la
mayor parte de bacterias y plantas
pueden sintetizar los 20 aminoácidos,
los mamíferos solo pueden sintetizar la
mitad, generalmente aquellos cuyas vías
metabólicas son sencillas, estos son los
denominados aminoácidos no
esenciales, que no son necesarios
obtenerlos en la dieta, ya que el
organismo con simples reacciones
puede sintetizarlos. El resto, los
aminoácidos esenciales, deben
obtenerse de la dieta. Existen
microorganismos como E. Coli que
puede fabricarse sus propios
aminoácidos a partir de amoniaco.
En el presente informe se presentan las
vías de la biosíntesis de aminoácidos, en
un cultivo de E. Coli; a la cual se le añadió
glucosa marcada con 14C y un sustrato
carbonado o aminoácidos no radioactivos,
en donde se demuestra la radioactividad
de estos compuestos sobre los
aminoácidos.
Con este trabajo deducimos que los
aminoácidos competidores son precursores
de la biosíntesis de otros aminoácidos (los
aminoácidos no esenciales), que por
procesos de transaminación y aminación
reductiva de los intermediarios del ciclo de
Krebs y el piruvato. Así obtuvimos 3
familias: Familia del Ácido Aspártico,
Familia de Ácido Glutámico y Familia de
la Serina.

Palabras clave: Aminoácidos, transaminación, intermediarios, radiactividad.

 Abstract
It is known that all amino acids come
from intermediaries, citric acid cycle or
the pentose phosphate pathway, on this
basis took place the next job.
Individual agencies have considerable
differences in their ability to synthesize
the 20 standard amino acids. While the
majority of bacteria and plants can
synthesize the 20 amino acids,
mammals can synthesize only half,
generally those whose metabolic
pathways are simple, they are called
non-essential amino acids, which are
not required to obtain them in the diet,
since the organism can synthesize
simple reactions. The remainder,
essential amino acids, be obtained from
the diet. There are microorganisms
such as E. Coli can be manufactured
Keywords: Amino acids, transamination, brokers, radioactivity.
Introducción
La síntesis de aminoácidos se
desarrolla a un ritmo variable,
dependiente de las necesidades que
existan que existan en la célula
respecto a cada aminoácido en
particular. En los mamíferos existen
rutas anabólicas para los aminoácidos
considerados como esenciales
(Alanina, Arginina, Asparragina,
Aspartato, Cisteina, Glutamato,
Glutamina, Glicina, Prolina, Serina,
Tirosina)
their own amino acids from ammonia.
This report presents the pathways of
biosynthesis of amino acids in a culture
of E. Coli, to which glucose was added
14C and a carbon substrate or non-
radioactive amino acids, where it
shows the radioactivity of these
compounds on the amino acids. With
this work we conclude that amino acids
are precursors competitors for the
biosynthesis of other amino acids
(nonessential amino acids), which
processes transamination and reductive
amination of the Krebs cycle
intermediates and pyruvate. So we got
3 families: Family of Aspartic Acid,
Glutamic Acid Family and Family of
Serine.
Los 20 aminoácidos estándar(o
proteinogénicos) se dividen en 5 familias
en relación a su biosíntesis. Los miembros
de cada familia derivan a partir de
precursores comunes generados en el
ciclo de Krebs, en la glicólisis o en la vía
de las pentosas fosfato.
Los aminoácidos glucogénicos son los
que dan lugar a una producción neta de
piruvato o intermediarios del Ciclo del
TCA, tales como α-cetoglutarato u
oxaloacetato, que son precursores de la
glucosa vía gluconeogénesis. Todos los
aminoácidos excepto la lisina y la leucina
son al menos en parte glucogénicos. La
lisina y la leucina son los únicos
aminoácidos que son solamente
cetogénicos, dando lugar solamente a
acetil-CoA o a acetoacetil-CoA, ninguno
de los cuales puede traer la producción
neta de la glucosa.
Un grupo pequeño de aminoácidos
comprendidos por isoleucina, fenilalanina,
Materiales y Métodos
En el experimento realizado para
investigar las vías de la biosíntesis de
aminoácidos, un cultivo de Escherichia
coli que crecía exponencialmente en un
medio de glucosa con sales fue dividido
en dieciocho cultivos separados.
Se añadió a cada cultivo, glucosa
marcada con 14C y un sustrato
carbonado (oxalacetato, α-cetoglutarato,
piruvato, acetato y semialdehído
glutámico) o un aminoácido (ác.
aspártico, ác. glutámico, homoserina,
serina, acetato, treonina, valina, arginina,
isoleucina, glicina, leucina y prolina)
no radioactivo.
Después de crecer por una generación,
los organismos fueron lisados, aislando
luego fracciones de lípidos, ácidos
nucleícos y proteínas residuales. Se
usaron solo las fracciones proteicas las
que fueron primero, hidrolizadas en
medio básico y a altas temperaturas, para
romper el enlace peptídico, obteniendo
aminoácidos. Los
treonina, triptófano, y tirosina dan lugar a
precursores de la glucosa y de ácidos
grasos y así son caracterizados como
glucogénicos y cetogénicos. Finalmente,
debe ser reconocido que los aminoácidos
tienen un tercer posible destino. Durante
etapas de hambruna los esqueletos de
carbono reducidos se utilizan para la
producción energética, con el resultado que
se oxida a CO2 y H2O.
aminoácidos fueron separados por
cromatografía bidimensional, en la cual
se hizo una cromatografía ascendente
vertical y otra horizontal (girando el
papel 90º), usando solventes distintos.
A los aminoácidos separados se los
reconoció usando la ninhidrina (reacciona
con todos los aminoácidos alfa cuyo pH
se encuentra entre 4 y 8), dando una
coloración que varía de azul a violeta
intenso. Este producto colorido (llamado
púrpura de Ruhemann) se estabiliza por
resonancia, la coloración producida por la
ninhidrina es independiente de la
coloración original del aminoácido. La
prolina da coloración amarilla. Por su
sensibilidad esta reacción se emplea para
valoración cuantitativa de aminoácidos
por colorimetría.
Los aminoácidos separados fueron
eluídos individualmente, determinándose
su concentración y midiéndose la
radioactividad en una alícuota de la
muestra por medio de un fotocolorímetro.
 Resultados
La actividad específica de cada aminoácido, se determino sabiendo la radioactividad de cada
aminoácido. La actividad específica de los aminoácidos se encuentra en la Tabla I.

Tabla I. El efecto de Competidores Sobre la Incorporación de C14 Glucosa en Aminoácidos.

Sustrato Carbonado Actividad específica de los Aminoácidos

o Aminoacido no (cpm/μmol)
Radiactivo ala arg asp cys glu gly ile leu lys met pro ser thr val
Control 1600 1300 820 220 2500 550 340 1500 800 510 1100 450 650 600
Acetato 1580 ---- 680 ---- 1510 ---- ---- ---- ---- ---- 660 ---- 540 ----
Alanina 320 ---- ---- 215 ---- 560 ---- 1520 ---- ---- ---- 455 ---- 590
Arginina 1610 60 840 ---- 2520 ---- ---- ---- ---- ---- 1090 ---- ---- ----
Acido Aspartico 1590 ---- 205 ---- 1760 ---- 205 ---- 480 230 790 ---- 160 ----
Acido Glutamico 1570 150 375 ---- 200 550 ---- ---- ---- ---- 85 ---- 325 ----
Semialdehido
1600 1290 810 ---- 2480 ---- ---- ---- ---- ---- 90 ---- ---- ----
Glutamico
Glicina 1620 1320 820 225 2520 275 ---- 1490 ---- ---- 1100 450 ---- 610
Homoserina 1560 ---- 825 ---- ---- ---- 120 ---- 800 100 ---- ---- 30 ----
Isoleucina 1630 ---- 830 ---- ---- ---- 122 ---- 805 500 ---- ---- 645 ----
α-cetoglutarato 1610 ---- 570 ---- 1550 ---- ---- ---- ---- ---- 650 ---- 470 ----
Leucina 1560 ---- 220 ---- 560 ---- 0 ---- ---- ---- 440 ---- 600
Oxalacetato 1220 1280 580 ---- 1620 ---- ---- ---- ---- ---- 715 ---- 455 ----
Prolina 1600 ---- 820 ---- 2500 550 ---- ---- ---- ---- 50 ---- ---- ----
Piruvato 650 ---- 700 215 1850 555 ---- 615 ---- ---- 790 450 540 270
Serina 960 ---- ---- 10 ---- 270 ---- 1130 ---- ---- ---- 25 ---- 450
Treonina 1580 ---- 810 ---- ---- ---- 118 ---- 800 510 ---- ---- 30 ----
Valina 1590 ---- ---- 220 ---- 550 ---- 600 ---- ---- ---- 450 ---- 5

La actividad específica de cada aminoácido debería calcularse como un porcentaje del valor
control, encontrando de esta manera el porcentaje de inhibición de cada uno de los
aminoácidos y sustratos carbonaos no radioactivos sobre la glucosa marcada.

Tabla II. El efecto en porcentaje de Competidores Sobre la Incorporación de C14 Glucosa

en Aminoácidos.
 Sustrato Actividad específica de los Aminoácidos
Carbonado o (cpm/μmol)%
Aminoacido no
Radiactivo
ala arg asp cys glu gly ile leu lys met Pro ser thr val
Control 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
Acetato 99 --- 83 --- 60 --- --- --- --- --- 60 --- 83 ---
Alanina 20 --- --- 98 --- 100 --- 100 --- --- --- 100 --- 98
Arginina 100 5 100 --- 100 --- --- --- --- --- 99 --- --- ---
Ácido Aspártico 99 --- 25 --- 70 --- 60 --- 60 45 72 --- 25 ---
Ácido Glutámico 98 12 46 --- 8 100 --- --- --- --- 8 --- 50 ---
Semialdehído
100 99 99 --- 99 --- --- --- --- --- 8 --- --- ---
Glutámico
Glicina 100 100 100 100 100 50 --- 99 --- --- 100 100 --- 100
Homoserina 98 --- 100 --- --- --- 35 --- 100 20 --- --- 5 ---
Isoleucina 100 --- 100 --- --- --- 36 --- 100 98 --- --- 99 ---
α-cetoglutarato 100 --- 70 --- 62 --- --- --- --- --- 59 --- 72 ---
Leucina 98 --- --- 100 --- 100 --- 0 --- --- --- 98 --- 100
Oxalacetato 76 --- 71 --- 65 --- --- --- --- --- 65 --- 70 ---
Prolina 100 98 100 --- 100 100 --- --- --- --- 5 --- --- ---
Piruvato 41 --- 85 98 74 100 --- 41 --- --- 72 100 83 45
Serina 60 --- --- 5 --- 49 --- 75 --- --- --- 6 --- 75
Treonina 99 --- 99 --- --- --- 35 --- 100 100 --- --- 5 ---
Valina 99 --- --- 100 --- 100 --- 40 --- --- --- 100 --- 1

1) Según los resultados la Tabla I y la Tabla II, vemos como los aminoácidos afectan la
radioactividad del mismo aminoácido y no de otro más.

 Alanina
 Arginina
 Glicina
 Isoleucina
 Leucina
 Prolina

2) En los resultados de las tablas también podemos observar que algunos aminoácidos aparte de
afectar la radioactividad del mismo aminoácido, afectan a otros diferentes a él y que otros
aminoácidos que no son parte de las proteínas también afectan la radioactividad de otros
aminoácidos que si forman parte de las proteínas. A estos aminoácidos los llamaremos
competidores.

Grafico I. Aminoácidos presentes en cadena proteica

Ácido Ácido
Serina Treonina Valina
Aspártico Glutámico

Aspartato Arginina Alanina Isoleucina Leucina

Glutamato Aspartato Cisteina Treonina Valina

Isoleucina Glutamato Glicina

Lisina Prolina Leucina

Metionina Treonina Serina

Prolina Valina

Treonina

Grafico II. Aminoácidos no presentes en cadena proteica

Semialdehido
Homoserina
Glutamico

Isoleucina Prolina

Metionina

Treonina
3) También trabajamos con alfa cetoácidos (α-cetoglutarato, oxalacetato, piruvato, acetato),
observamos que estos compuestos también tienen efecto sobre la radioactividad de ciertos
aminoácidos. Por conocimientos de la vía metabólica de ciclo del acido cítrico, sabemos que
intermediarios de esta vía por reacciones química se convierten a ciertos aminoácidos.

Grafico III. α-cetoacidos que tienen efecto sobre la radioactividad de los aminoácidos.

α- Oxalacetat
Acetato cetoglutarato
Piruvato
o

Aspartato Aspartato Alanina Alanina

Glutamato Glutamato Aspartato Aspartato

Prolina Prolina Glutamato Glutamato

Treonina Treonina Prolina Leucina

Treonina Prolina

Treonina

Valina

4) Revisando los resultados de la Tabla II y los Gráficos I, II y por último el III, nos dimos
cuenta de que uno de los aminoácidos que más efecta o inhibe la síntesis de otros
aminoácidos era el acido aspártico, lo relacionamos con un aminoácido, pudimos
percatarnos que la mayoría de los aminoácidos que eran afectados por la Homoserina (Ile,
Met,Thr) también eran afectados por el Ác. Aspártico, luego observamos que la Treonina
afecta la radioactividad de un aminoácido (Ile), aparte del mismo afecta, con quien se
acaba la síntesis ya que como se señaló en el primer punto, es una proteína de fi n de
ciclo.
Para ver mejor estos resultados, elaboramos la Tabla III, que nos mostrara la relación
entre los aminoácidos.
5) Otro aminoácido que afecta a varios aminoácidos es el Ácido Glutámico (Arg, Asp, Glu,
Pro, Thr), el único aminoácido que afecta la síntesis de aminoácidos coincidentes con el
Ac. Glutámico es el Semialdehído Glutámico (Pro).
6) Y por último, observamos que la Serina también es otro aminoácido que afecta la síntesis
de varios aminoácidos aparte del mismo (Ala, Cys,Gly, Ala,Leu, Val) y vemos que
coincide con un aminoácidos que afecta la Valina (Leu ) aparte del mismo.

A continuación la siguiente tabla nos mostrara mejor los resultados obtenidos.

Tabla III. El efecto de los Aminoácidos Competidores sobre la incorporación de C14

Proveniente de la glucosa
Aminoácidos Otros aminoácidos
Aminoácido Competidor Inhibiciόn
Afectados significativos no afectados
Asp 75
Thr 75
Met 55
Ácido aspártico Ile 40
Lys 40
(Glu)* 30
(Pro)* 28
Thr 95 Asp
Homoserina Met 80 Lys
Ile 65
Thr 95 Asp
Treonina Ile 65 Met
Lys
Glu 92
Pro 92
Acido Glutámico Arg 88
(Asp)* 54
(Thr)* 50
Pro 92 Arg
Semialdehído Glutámico
Glu
Ser 94
Cys 95
Gly 51
Serina
Ala 40
Leu 25
Val 25
Val 99
Valina
Leu 60
 ()* No se están considerando estos aminoácidos pues probablemente provengan de un proceso de
transaminaciόn de algún intermediario del ciclo de Krebs.

Discusión
Ahora discutiremos los resultados obtenidos para llegar a las conclusiones de nuestro trabajo:

En el punto 1) observamos que habían aminoácidos que solo afectaban la síntesis de los mismo
aminoácidos, como por ejemplo Alanina que inhibe a la misma en un 80%, y a ningún otro
aminoácido mas. Así también la Glicina que inhibe a la misma en un 50%, no afecta a ningún
otro aminoácido más. Entonces llegamos podemos decir que estos aminoácidos no son
precursores de ningún otro, si no que son el producto final, son los que terminan la vía
metabólica de la biosíntesis de aminoácidos.

En el punto 2) observamos que había aminoácidos que aparte de inhibir la síntesis del mismo,
afectaban a más aminoácidos, como por ejemplo el ác. aspártico que inhibe a la isoleucina y
lisina en un 40%, asi como también inhibe a la Metionina en un 55% y a la treonina en un 75%,
aunque en los resultados de la tabla también aparece que afecta al glutamato y a la prolina, no
podemos asegurar esto, pues también tenemos conocimiento de que los aminoacidos se
sintetizan a partir de los intermediarios del ciclo de Krebs, por una reacción química que será
explicada más adelante. Entonces podemos deducir que estos aminoácidos participan en la
síntesis de esos aminoácidos a los que inhiben, a estos aa los llamamos competidores.

En el punto 3), observamos que los cetoácidos (α-cetoglutarato, oxalacetato, piruvato)

utilizados en el trabajo inhibían también la síntesis de los aminoácidos. Y de esto tenemos
conocimiento pues sabemos que los intermediarios del ciclo de Krebs pueden llegar a
convertirse en aminoácidos.

Basado en la vía catabólica en la que participen, los aminoácidos pueden tener un destino en el
cual sus esqueletos de Carbono sean incorporados en intermediarios metabólicos que puedan
posteriormente transformarse en glucosa, estos son los aminoácidos glucogénicos. Los
aminoácidos también pueden ser cetogénicos, y en este caso sus esqueletos de C son en forma
de acetoacetato, el mismo que se puede transformar posteriormente en acetil-CoA.

Tenemos conocimiento de que algunos aminoácidos se forman gracias a intermediarios del

Ciclo del Acido Cítrico o Ciclo de Krebs, por un proceso llamado Transaminaciόn.

La reacción de aminotransferasa ocurre en dos pasos:

1.- el grupo amino de un aminoácido es transferido a la enzima, produciendo el correspondiente

a-ceto ácido y la enzima aminada
 Aminoácido + enzima D → a-ceto ácido + E-NH2

2.- El grupo amino es transferido al α-ceto ácido aceptor (ej. α-cetoglutarato) formando el
producto aminoácido (ej. Glutamato) y regenerando la enzima

α-cetoglutarato + enzima-NH2 D → enzima + glutamato

Por ejemplo tenemos que el glutamato se sintetiza a partir de NH4+ y α-cetoglutarato por medio
de la glutamato deshidrogenasa. La reacción es la siguiente:

𝑁𝐻4+ + α − cetoglutarato + NAPH + + H + → glutamato + NADP + + H2 O

Otro ejemplo es el Aspartato y por este se explica porque no tomamos en cuenta al glutamato
como un aminoácido que inhibe el ác. Aspártico:

𝑂𝑥𝑎𝑙𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑡𝑜 + 𝑔𝑙𝑢𝑡𝑎𝑚𝑎𝑡𝑜 → 𝑎𝑠𝑝𝑎𝑟𝑡𝑎𝑡𝑜 + α − cetoglutarato

Como vemos por el mismo proceso de transaminaciόn, el glutamato transfiere su grupo amino
al oxalacetato para convertirlo en Aspartato. Por este motivo no tomamos en cuenta al
glutamato.

Un último ejemplo es la Alanina, que se forma gracias a la adición de un grupo amino al

piruvato, la reacción es la siguiente:

𝑃𝑖𝑟𝑢𝑣𝑎𝑡𝑜 + 𝑔𝑙𝑢𝑡𝑎𝑚𝑎𝑡𝑜 → 𝑎𝑙𝑎𝑛𝑖𝑛𝑎 + α − cetoglutarato

Aunque se ha demostrado que en ciertas especies la serina se puede convertir en piruvato

mediante una reacción catalizada por la desaminación de serina/treonina deshidratasa, esta
actividad de la enzima parece faltar en los seres humanos.

Entonces ya después de esta discusión, por ultimo podemos establecer la familia de síntesis de
aminoácidos:
Familia del Acido Aspártico
 De los datos obtenidos vemos que el Acido Aspartico afecta síntesis de Treonina,
Metionina, Isoleucina y Lisina.
 La Homoserina afecta a síntesis de Treonina, Metionina e Isoleucina.
 La Treonina participa en la síntesis de Isoleucina.
*No se considera a la glutamato pues se sabe que es producto de las reacciones de los
intermediarios del ciclo de Krebs, desde Oxalacetato que llega a ser α-cetoglutarato y
por transaminaciόn se convierte a glutamato.
*La prolina no se considero, pues no es totalmente seguro que el ácido aspártico
participe en la síntesis de este aminoácido, pues su porcentaje de inhibición es
demasiado bajo, mucho mas que la inhibición del propio Aspartato.

Metionina

Homoserina

Treonina Isoleucina

Acido
Aspártico

Relacionándolos:
 Lisina

Familia del Ácido Glutámico

 De los datos obtenidos en clase nos damos cuenta que el Acido Glutámico afecta la
síntesis del mismo Acido Glutámico, de la Prolina, de la Arginina, del Acido Aspártico y
de la Treonina.
 Continuamos con el α-Cetoglutarato que a su vez afecta al Acido Glutámico, a la Prolina,
a la Treonina y al Acido Aspártico.
 Mientras que el Semialdehído Glutámico afecta prácticamente solo la síntesis de Prolina,
es decir la Prolina.

*No se consideró a la Treonina ni al Aspartato, pues por intermediarios de ciclo de Krebs

y el proceso de transaminaciόn el Ácido Glutámico es solo un camino, mas no es su
precursor.
 Relacionándolos:

Prolina
Semialdehído
Glutámico
Glutamina
α-Cetoglutarato Treonina

Ácido Aspártico

Ácido
Glutámico

Arginina

Familia de la Serina

 Serina participa en la síntesis de Alanina, Cisteina, Glicina, Leucina, Valina.

 Valina afecta la síntesis de Leucina.
 Serina se convierte a Piruvato.
 Piruvato participa en la síntesis de Alanina, Valina.
 Relacionándolos:

Cisteína
Alanina

Serina Piruvato
Valina Leucina

Glicina

Como nuestra
base para el
trabajo, fue el conocimiento previo de que los intermediarios del Ciclo del Ácido Cítrico eran
precursores de la mayoría de aminoácidos. El siguiente gráfico nos permitirá entender la relación
de esta vía metabólica con la síntesis de aminoácidos.
 Conclusiones
 Los aminoácidos que no inhiben la síntesis de otro aminoácido que no sea el mismo, son
aminoácidos de fin de síntesis, son los que terminan la vía metabólica.
 Los aminoácidos que inhiben la síntesis de otros aminoácidos aparte de a ellos mismos se
les denomina competidores, y participan en la síntesis de otros aminoácidos.
 Los aminoácidos también se sintetizan a partir de intermediarios del ciclo del ácido
cítrico, por un proceso simple, la transaminaciόn.
 Los esqueletos carbonados de los aminoácidos provienen de intermediarios de la
glicolisis (piruvato), de las vías de las pentosas fosfato o del ciclo del ácido cítrico (α-
cetoglutarato, oxalacetato, fumarato, succinato)
 Las reacciones de transaminaciόn intervienen en la síntesis de la mayoría de
aminoácidos.

Bibliografía
 Armstrong, F Bioquímica. Editorial Reverte, S.A. Barcelona España. 1982
 Stryer, Lubert et al, Bioquímica, Quinta Edición, Editorial W.H. Freeman, EEUU.
 http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/interconversion%20aminoacidos.html