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13/03/2017

Capítulo 2: MICROBIOLOGÍA
ASPECTOS BÁSICOS

Célula

Unidad anatómica, funcional y


de origen de todo ser vivo

Diversidad de los Seres Vivos

Microorganismos con
organización celular
CELULAS

Procariotas Eucariotas

Eubacteria Arqueobacterias Hongos Protistas Animal Plantas

Mohos Levaduras

Algas protozoarios

Microorganismos sin
organización celular

Virus

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Archaebacterias

• Viven en ambientes extremos como aguas calientes o frías,


hipersalinas o muy profundas, aberturas volcánicas, etc.
• No poseen peptidoglucano en la pared celular
• Diferente secuencia del ARN ribosomal
• Diferente composición de lípidos de la membrana plasmática
• Utilizan nutrientes como hidrógeno, CO2 y azufre

Ambiente hiper ácido Ambiente hiper salino Archaeoglobus

Archaebacterias

Metanógenas
Producen metano como producto de desecho

Halófilas
Viven en ambientes altamente salinos

Termófilas
Viven en
a muy altas temperaturas
temperaturas extremadamente altas

Termoacidófilas
Crecen a altas temperaturas y bajos pH

Psicrófilas
Viven a temperaturas muy bajas

Características de las Eubacterias

• Unicelulares
• Membrana celular: proteínas y fosfolípidos
• Crecimiento rápido: t Duplicación ½ h - 1 h
• No tienen núcleo definido
• No tienen organelos
• Un solo Cromosoma con DNA circular
• Tamaño: 0.5 – 3 µm
• Volumen: 10-12 mL (50-80% agua)
• Masa: 10-12 g PROCARIOTAS

Eubacterias
Bacterias verdaderas
Arqueobacterias

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Estructura de la Célula Bacteriana


Región citoplasmática:
Nucleoide
Cromosomas
Ribosomas
Mesosomas
Cuerpos de inclusión
Envoltura celular:
Membrana citoplasmática
Pared celular
Cápsula
Apéndices:
Flagelos
Pili

Citoplasma
Matriz que contiene las estructuras u organelos de una célula

Ribosomas
Estructuras granulares donde se realiza la síntesis de las
proteínas

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Ácidos
Nucleicos

Son polímeros lineales en los que la


unidad repetitiva, llamada nucleótido,
está constituida por: (3)

(1) Una pentosa (la ribosa o la


desoxirribosa)

(2) Un ácido fosfórico (2)

(3) Una base nitrogenada (purina o


pirimidina). La unión de la pentosa con
una base constituye un nucleósido. La
unión mediante un enlace éster entre
el nucleósido y el ácido fosfórico da
lugar al nucleótido. (1)

Bases
Nitrogenadas
Las bases nitrogenadas son Purinas y
Pirimidinas.

Las bases purínicas son:


ADENINA
GUANINA

Las bases pirimidínicas son:


CITOSINA
TIMINA
URACILO

La timina sólo puede formar parte


del ADN y el uracilo sólo está
presente en el ARN.

Ácido Desoxirribonucleico (ADN)


Molécula formada por nucleótidos unidos en una cadena en forma de
doble hélice cuya secuencia codifica las características fenotípicas y
genotípicas de cada organismo

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Membrana Citoplasmática
Estructura que contiene el citoplasma.
Constituida por proteínas y dos capas lipídicas
2. Proteínas
1. Lípidos

Pared Celular
Estructura externa, rígida, polimérica que cubre la membrana
citoplasmática

Envoltura celular de bacterias Gram + y Gram -

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Cápsula
Capa externa mucilaginosa (polisacárido extracelular) que cubre la
pared celular

Flagelo
Estructuras especializadas que salen de la superficie celular,
responsables de la movilidad bacteriana

Morfología Bacteriana

Cocos: células esféricas u ovales.


Bacilos: células cilíndricas
Vibrios: Células en forma de varilla curvada
Formas filamentosas: células que crecen
en forma de largos filamentos
Espirilos: bacilos curvos, con forma espiral
y cuerpos rígidos (con flagelos)
Espiroquetas: células en forma de espiral,
helicoidales y flexibles (sin flagelos)
Bacterias apendiculadas: presentan
apéndices como largos tubos o tallos.

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Morfología Bacteriana
Cocos

Bacilos

Morfología Bacteriana

Vibrios

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Reproducción Bacteriana
Mecanismo por el cual los
microorganismos dan origen a
otros microorganismos de la
misma especie.

Reproducción asexual:
formación de nuevos
individuos a partir de
uno sólo.

Reproducción Bacteriana

FISIÓN BINARIA: proceso de reproducción asexual que se realiza


por división de una célula progenitora en dos partes iguales, o
casi iguales, cada una de las cuales, crece hasta el tamaño y forma
de la antecesora.

ESPORULACIÓN: mediante la formación de esporas en células


vegetativas o en estructuras especializadas denominadas
esporangios.

FRAGMENTACIÓN: tipo de reproducción asexual donde el talo


(cuerpo vegetativo) se quiebra y cada fragmento crece hasta
formar un nuevo talo.

FASES DE CRECIMIENTO

FASE DE LATENCIA
Adaptación al nuevo ambiente, síntesis de proteínas
FASE EXPONENCIAL O LOGARÍTMICA
Desarrollo rápido
FASE ESTACIONARIA
Escasez de sustancias nutritivas, acumulación de
sustancias inhibidoras
FASE DE MUERTE
Lisis celular, producción de metabolitos tóxicos

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FASES DE CRECIMIENTO
Logaritmo del número de bactetias

A: Latencia; B: Logarítmica; C: Estacionaria; D: Muerte


C

B
D

Tiempo, h

METABOLISMO

Conjunto de procesos bioquímicos y


fisiológicos, implicados en la
degradación (catabolismo) y en la
síntesis (anabolismo), de sustancias
orgánicas así como el transporte en las
membranas celulares.

METABOLISMO

Nutrientes que Energía


contienen Utilizada y
Energía: Catabolismo Productos:
Carbohidratos CO2
Grasas H2O
Proteínas NH3
ADP+P ATP
NAD+ NADH2 Energía
NADP+ NADPH Química
FADH2
FAD+
Macromoleculas Moléculas
Celulares: Precursoras:
Proteínas Aminoácidos
Anabolismo Azúcar
Polisacáridos
Lípidos Ácidos Grasos
Ácidos Nucleicos Bases
Nitrogenadas

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CATABOLISMO ANABOLISMO

Libera Energía Requiere energía

Reacciones degradativas Reacciones biosintéticas

Catalizadas por enzimas Catalizadas por enzimas

Convierte compuestos Convierte compuestos


complejos a simples simples a complejos

MECANISMOS DE GENERACIÓN DE ENERGÍA

MECANISMOS DE GENERACIÓN DE ENERGÍA

 Respiración:

Respiración aerobia
Respiración anaerobia

 Fermentación

 Fotosíntesis

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RESPIRACIÓN

Oxidación de las cadenas


carbonadas por los seres vivos
para la obtención de la energía
necesaria utilizada durante los
procesos vitales

RESPIRACIÓN AEROBIA
Proceso metabólico en el que las moléculas
orgánicas se oxidan para liberar energía,
siendo el oxígeno el último aceptor de
electrones

RESPIRACIÓN ANAEROBIA
Proceso metabólico liberador de energía,
en el cual el aceptor final de la cadena
transportadora de electrones es una
molécula inorgánica diferente al oxígeno
(SO4, NO3, H2)

Glucólisis

Formación del Compuesto


Acetilcoenzima

RESPIRACIÓN

Ciclo del Ácido Cítrico

Sistema de Transporte
de Electrones

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GLUCOLISIS

FORMACION DEL ACETIL-COENZIMA A

Ciclo del Ácido Cítrico

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El Sistema de Transporte de Electrones

Aceptar electrones Conservar algo de la


de un donador y energía liberada durante
la transferencia de
transferirlos a un electrones para la
aceptor síntesis de ATP

• NADH deshidrogenasas
• Flavoproteínas
• Citocromos
• Ferrosulfoproteínas
• Quinonas

El Sistema de Transporte de Electrones

e-
NADH2 NAD

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2CO2

4CO2

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La reacción global del metabolismo de la


glucosa puede resumirse:

C6H12O6 + O2 + H2O 6CO2 + 12H2O + energía


(38 ATP)

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Nutrición
Sustancias químicas que los seres vivos toman del
medio donde habitan necesarias para crecer.

Macronutrientes: (C, H, O, N, P, S, K, Mg)

Micronutrientes o elementos traza: (Co, Cu, Zn, Mo.)

Universales: Agua, CO2, fosfatos y sales minerales.

Particulares: Nitrógeno y azufre

Factores de crecimiento: Biotina, Vitamina K6.

Medios de Cultivo

Solución acuosa (bien como tal, o bien incorporada a un coloide en


estado de gel) en la que están presentes todas las sustancias
necesarias para el crecimiento de un determinado microorganismo

Medios complejos o indefinidos


Medios sintéticos o definidos

Medio semisintético

Medios Formulados para el cultivo


de BSR

Medio Postgate B Medio Postgate C


Componente Cantidad (gr/L) Componente Cantidad (gr/L)

KH2PO4 0,5 KH2PO4 0,5


NH4CL 1 NH4CL 1
CaSO4 1 Na2SO4 1
MgSO4. 7 H20 2 CaCL2. 6 H20 0,06
Lactato de sodio 3,5 MgSO4. 7 H20 0,06
Extracto de levadura 1 Lactato de sodio 6
Acido ascórbico 0,1 Extracto de levadura 1
Acido tioglicolico 0,1 FeS04. 7 H20 0,004
FeS04. 7 H20 0,5 Citrato de sodio. 2 H20 0,3

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Contaje de BSR por la Técnica de Dilución Seriada

1 ml
(Viables)

1 ml
Muestra 101 102 103 104 105 106

INCUBAR
por 24 horas a 37 ºC

Muestra 101 102 103 104 105 106

Contaje de BSR por la Técnica de Placa Vertida


(Viables)
1 ml

1 ml

Muestra 101 102 103 104 105 106

0,1 ml

INCUBAR
por 21dias a 37 ºC

Contar numero de Colonias

Métodos rápidos comerciales

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Métodos rápidos comerciales

Métodos rápidos comerciales

Medida de la APS-reductasa (mediante un anticuerpo)


Se determina la actividad de las BSR por medida de la actividad de la
enzima APS reductasa

APS + 2e --> AMP + SO3-2

(APS: adenosin-5-fosfosulfato)
El anticuerpo se torna azul en 10 minutos. El grado de coloración, es
proporcional a la cantidad de enzima en la muestra, y los resultados son
leídos en una carta de colores proporcionada con el kit. La carta
correlaciona el color obtenido con el número aproximado de BSR presente.

Se obtienen resultados en 15 a 20 minutos


No requiere de crecimiento bacteriano en medio de cultivo
No es afectado por: temperatura, salinidad y potencial redox
Puede aplicarse tanto en campo como en el laboratorio

Métodos Microscópicos
Microscopia de Fluorescencia
Cuantificación directa del número de bacterias presentes en la muestra por
tinción total o diferencial

M. Fluorescencia directa: se cuantifican todas las bacterias presentes en la


muestra (totales)

M. Inmufluorescencia: se cuantifica un grupo especifico de bacterias (totales)

M. Epifluorescencia: se cuantifica todas las bacterias vivas y muertas


presentes en la muestra.

Se obtienen resultados en 2 horas


Mayor exactitud

Requiere de un alto grado de experticia


Técnica muy especializada que requiere de equipos costosos
Manejo de los reactivos esta muy regulado (sustancias peligrosas para la salud )

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Contaje de BSR Vivas y Muertas


por la Técnica de Microscopia de Epifluorescencia

SITO 9
Pequeña molécula que puede penetrar tanto en las bacterias con las
membranas intactas como en las que tienen sus membranas dañadas.
Con fluorescencia verde.

Ioduro de Propidio
Penetra solo en las células que poseen sus membranas dañadas (no
viables), proporcionando una fluorescencia de color rojo.

Métodos Microscópicos

4-,6-diamino-2-fenilindol (DAPI): indicador para microscopía óptica cuyo objetivo es el


ácido desoxirribonucleico (ADN) en todas las células microbianas intactas (vivas e
inactivas).

Células epiteliales teñidas


Vista microscópica de comunidades con DAPI (azul) y dos
microbianas en sedimentos marinos anticuerpos (verde y rojo)
teñidos con DAPI

Métodos Moleculares

Se determina la presencia de las BSR por identificación de sus genes


característicos
Gen de la APS reductasa
Gen del Citrocromo C3
Genes en el ARN r (ácido ribonucleico ribosómico). Solo vivas y activas.

Se obtienen resultados en 1 día


No requiere de crecimiento bacteriano en medio de cultivo
Permite la identificación de las especies bacterianas presentes

Técnica muy especializada que requiere de equipos costosos


Pueden existir inhibidores de la reacción en la muestra
Manejo de los reactivos esta muy regulado (sustancias peligrosas para la salud )

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Métodos Moleculares
FISH (Hibridación Fluorescente en sitio): método molecular microbiológico usado
para la enumeración de microorganismos. El método se basa en sondas de genes
dirigidos al ácido ribonucleico ribosómico (ARNr) (16S o 23S rRNA) en las células
microbianas. Sólo las células vivas y activas contienen los ribosomas suficientes
que pueden ser detectados por el método FISH.

Métodos Moleculares

PCR (Reacción en cadena de la polimerasa): es una técnica molecular que


permite la producción de grandes cantidades de un ADN en específico a partir de
un patrón de ADN usando una reacción enzimática sencilla.

qPCR (Reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa): utilizado para


cuantificar el número total de microorganismos o un género/especie determinado
en casi cualquier tipo de muestra.
DGGE (Electroforesis en gel con gradiente de desnaturalización): técnica
molecular microbiológica usada para perfilar los grupos microbianos más
predominantes en una muestra.

Métodos Moleculares

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Métodos Moleculares

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