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TAREA 3. Biotecnología.

BamHI NruI
1 gtaggttgga atcgatgagc caGGATCCtc aatcaatctg tgtgaagcgg aaaATGcact

SacI EcoRV
61 GAGCTCgttg tttgttcttt gacgtcatgc ataggtaaac atgtgcaagt ataacctgac

PstI
121 atttgggaag cagtcgctct ttcatctgat tctttagaaa taggaatcct caCTGCAGcc

SacI
181 cagttcatcc atctctgtct TAGccttctc ctcctcctta ctcGAGCTCc tttgcccttt

XhoI HindIII
241 ccgtaataat ttcatgcaac gactcgcgtt gcctcacgct ccccAAGCTT ctgcagcaga

KpnI PstI
301 GGTACCcaca ATGcacattc tccagcagtc aaaCTGCAGc atgtccaaca tcatcagcca

SalI SphI
361 ggccggccaa aaggccaagg agGTCGACac cagtgccccc agcagcaaga aggGCATGCa

PstI
421 tctcaagTAA gagttcaagg agaCTGCAGa gagtgcccgc ctcaccaccg actatggtgt

SphI EcoRI
481 GCATGCgacc acggccgacg actggctgag gatcGAATTC gacgacaaga ttggtccttc

541 gttgctcgag gacccctttg cccgtgaaag ggtacgtatc ccatcctact aacacttttc

601 tgcccgtatc gcggctaaca acattctttc agatcatgcg cttcgaccac gagagaatcc

SalI
661 cagagcgagt agtccacgcc cgtCTGCAGg gtgcctttgg caagttcaag gtctacgaga

PstI
721 gcgcctccga cctcacaatg ATGcctgtcc ttaccgatac ttcCTGCAGg actcccgtct

781 ttgtgcgctt ctctaccgtt ctcggcagtc gaggcagtgc cgacacggtc cgtgatgtcc

841 gtggtttcgc cgtcaagttc tacacagagg agggcaactg ggatctggtc ggcaacaata

SacI
901 tccccgtctt cttcatccag gGAGCTCtca agttccccga tgtcatccac gctggcaagc

961 ccgagcccca caacgaggtg ccccaggccc agagcgccca caacaacttt tgggatttcc

1021 agttcaacca caccgaggcc actcacatgt tcacctgggc catgagtgat cgcgccattc

1081 cccgttccct ccgcatgatg cagggtttcg gtgtTAGcac ctacactctc atcaacgccc

XbaI EcoRV
1141 agggcaagcg tcaTCTAGAc aagttccact ggactcccga gctcggtgtc cactccctcg
La figura muestra una secuencia hipotética con tres
marcos de lectura abiertos, que se encuentran subrayados y
con los codones de inicio y término indicados con mayúsculas.
También se indican las secuencias intergénicas no subrayadas
y los sitios donde cortan diferentes enzimas de restricción.

Observa cuidadosamente cada marco de lectura y los


sitios de restricción dentro de la propia secuencia y los que
le rodean. En base a esta información y consultando el mapa
de restricción del plásmido pUC18 incluido en las copias de
la clase, contesta las siguientes preguntas:

1. Suponiendo que quieres clonar cada uno de los 3 genes


subrayados en el vector pUC18, con qué enzimas digerirías
la secuencia anterior y el pUC18 para clonarlos?
Considera que quieres tener cada gen por separado clonado
en el pUC18 y también que hay varias opciones para cada
gen. Explica solamente una estrategia para cada gen,
justificando la selección de enzimas.

2. Para clonar estos genes, qué enzima debes emplear para


unir los fragmentos de DNA con el vector? ¿Cómo funciona
esta enzima?

3. Una vez clonados los genes en el plásmido, se requiere


introducirlos en E. coli. Menciona brevemente una
metodología para hacer esto.

4. Una vez que tienes tus genes clonados en las células de


E.coli, en qué medio plaquearías las células para
seleccionar tus colonias con el gen clonado? ¿Por qué?

5. ¿Cómo comprobarías que el gen clonado corresponde con el


que querías clonar en un principio?