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Biosíntesis de Taxol mediante mecanismos metabólicos de Taxomyces andreanae.

Hugo Munguía Orozco.


El diterpeno Taxol es un potente agente antitumoral que ataca células cancerígenas. El Taxol altera
el funcionamiento de los microtúbulos al momento de la división celular ocasiona que los pares de
cromosomas no se distribuyan de manera correcta en las células hijas, causando apoptosis.
La manera en que afecta el comportamiento de los
microtúbulos es uniéndose a las unidades de beta tubulina,
estabilizando los polímeros de tubulina y evitando que
estos se despolimericen, esto ocasiona que la célula no
pueda desprender los microtúbulos de los centrosomas lo
cual es necesario para llevar a cabo la mitosis.
La fuente primaria de Taxol es el floema del árbol Taxus
brevifolia, un tejo endémico del norte de estados unidos.
Existen tres grandes problemas con esta fuente primaria, y
son los siguientes:

 Las concentraciones de Taxol en el floema (células especializadas de las plantas que se


encargan de transportar savia bruta) son extremadamente bajas, siendo del 0.01 al 0.03 % del
peso en seco del floema.
 El tratamiento completo con taxol requiere por lo menos de dos gramos purificados del
mismo. Esto quiere decir que se requieren al menos 200 gramos de floema seco para obtener
los dos gramos de Taxol necesarios.
 La conífera Taxus brevifolia presenta un crecimiento bastante lento, requiriendo de 200 años
para llegar a la madurez, por lo que generalmente se encuentran árboles jóvenes con
problemas de salud, como putrefacción y lesiones en el interior del tronco que afectan al
floema.
El procedimiento de obtención de Taxol por medio del cultivo del hongo endófito Taxomyces
andreanae, un hifomiceto encontrado en el floema de la conífera Taxus brevifolia responsable de la
síntesis del Taxol, puede eliminar las limitantes expuestas, ya que se pueden obtener grandes
cantidades de Taxol mediante el control de variables que favorezcan a la proliferación del hongo y
por medio del enriquecimiento del sustrato con ácido ascético (C2H4O2) y fenilalanina (C9H11NO2),
sustancias precursoras del Taxol.
El hongo Taxomyces andreaenae presenta un micelio septado con hifas multinucleadas con diámetro de
1.2 a 3.75 µm. Su crecimiento forma glóbulos de células y es fácilmente cultivable en un sustrato de
APD, colonizando una placa de Petri completamente en tan solo 4 días.
El siguiente esquema muestra la metodología para la preparación de muestras para el cultivo del
hongo Taxomyces andreanae.

Identificación
Aislamiento
de un Obtención de Reproducción Selección de Preparación Incubación de
del hongo Extracción del
espécimen una muestra in Vitro de T. una cepa de de un la cepa de T.
Taxomyces Taxol.
sano de Taxus de floema. andraenae. T. andraenae. biorreactor. andraenae
andraenae.
brevifolia.

Para aislar el hongo de la muestra del floema, se desinfecta el tejido celular con una solución de
etanol al 80%, después se transfieren las hifas a un agar micológico modificado.
La reproducción in vitro se lleva a cabo en cajas de Petri con el agar modificado, manteniendo una
temperatura de 25 C, sin agitación y teniendo un radio de superficie-volumen de 1.3 cm2:ml.
Se seleccionan las hifas con mejor desarrollo y se repite el proceso de reproducción in vitro.
Después de 21 días de incubación, el medio de cultivo se filtra con una tela de nylon de 200 micras,
el residuo se mele en una omni mezcladora Sorvall y se filtra nuevamente.
Los fluidos combinados se extraen con un volumen equivalente de cloroformo-metanol (10:1v/v).
Este solvente se elimina por evaporación rotativa a 30 C.
El extracto se disuelve en 2 ml de cloroformo y se coloca en una columna de gel de sílice. La
columna se baña con cloroformo y se extrae con 20 ml de acetonitrilo, el cual será secado y
sometido a una cromatografía en una placa TLC para comprobar su contenido de Taxol.

Un método de modificación genética implica mejorar los niveles de expresión de las enzimas de
biosíntesis de Taxol Geranil-geranil pirofosfato sintasa (GGPPs) y taxadienosintasa (TS) aplicando
un estimulante conformado de compuestos de metil jasmonatos, ácido salicílico y elicitores fúngicos.
Los genes clave identificados en la producción de Taxol son los siguientes:

 Ts: codifica la taxadienosintasa, la cual forma el esqueleto del taxano.


 Dbat: codifica el 10-diacetilbaccatina III-10-O-acetiltransferasa, utilizando 10-DAB y acetil
CoA como sustratos.
 Bapt: codifica el C-13 fenilpropanoide – CoA acetiltransferasa.

La biosíntesis de Taxol en T. brevifolia involucra 19 pasos enzimáticos.


El primer paso y más importante es la ciclización del Geranil-Geranil difosfato (GGPP) por la
taxadienosintasa (TS) para formar taxa-(4,5),(11,12)-dienol intermediario polihidroxilado.
La ruta metabólica de la biosínesis de taxol se muestra en la siguiente imagen (Figure 2):

El impacto que tienen los elicitores fúngicos se muestra en la siguiente imagen (Figure 3):
Bibliogafía:
Badi, H.N., et al (2015). New approach to improve taxol biosynthetic. Bulgaria: Trakia Journal of Sciences.
Sohn, H., Okos, M. (1998). Paclitaxel (Taxol): from nutt to drug. Estados unidos de norteamérica:
Journal of microbiology and biotechnology.
Stierle, A., Strobel, G., Stierle, D. (1993). Taxol and Taxane production by Taxomyces andreanae, an
Endophytic Fungus of Pacific Yew. Estados unidos de norteamérica: Science magazine.