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Ingeniería Bioquímica I.

Guía de estudio Módulo II

METABOLISMO

1.- Describir los distintos mecanismos que permiten a diferentes biomoléculas entrar a una célula. ¿Las
características químicas de la molécula permiten asociarlas a alguno de estos mecanismos en particular?
¿Con qué tipo de biomolécula es posible comparar a un transportador y por qué? ¿Cómo podría
diferenciar estrategias de entrada?
¿Qué entiende por metabolismo, cómo lo divide, y qué rol cumple cada uno de ellos? Describa las
primeras etapas en que las macromoléculas son degradadas en los circuitos de obtención de energía.

Las características químicas de cada molécula permiten asociarlas a los diferentes mecanismos de
transporte:

● Difusión simple: La molécula puede pasar directamente a través de la membrana, no consume


energía. La difusión es siempre a favor de un gradiente de concentración. La efectividad está limitada
por la velocidad de difusión de la molécula. Es un mecanismo de transporte suficientemente efectivo para
sustancias apolares disueltas de muy bajo peso molecular, cuanto menor tamaño molecular y mayor
carácter hidrófobo, mejor difunde una sustancia a través de la membrana. Por ejemplo: agua (ósmosis),
oxígeno, dióxido de carbono, moléculas liposolubles.
● Difusión facilitada: Consta de un transporte de sustancias a favor del gradiente de concentración sin
la utilización de energía. La molécula se une a una proteína llamada transportador o carrier, que es
altamente selectivo, el cual permite el paso de la molécula desde un lado de la membrana hacia el otro.
Es utilizado por moléculas como la glucosa y otros monosacáridos que no pueden atravesar la
membrana directamente. La velocidad de transporte se puede ver limitada por la saturación de las
proteínas transportadoras
● Transporte activo: Este mecanismo requiere un gasto de energía para transportar la molécula de un
lado al otro de la membrana, pero es el único que puede transportar moléculas contra un gradiente de
concentración. Existen dos tipos de transporte activo:
❖ Primario: usa energía a nivel de la misma proteína de membrana produciendo un cambio
conformacional que resulta en el transporte de una molécula a través de la proteína.
❖ Secundario: utiliza la energía para establecer un gradiente a través de la membrana celular,
y luego utiliza ese gradiente para transportar una molécula de interés contra su gradiente
de concentración.

Los transportadores se pueden comparar, en su función, a las enzimas ya que son altamente específicos,
no se modifican al finalizar su acción y pueden inhibirse frente a la presencia de ciertas sustancias.

Metabolismo: Conjunto de reacciones bioquímicas requeridas para la generación de energía y el uso de


esta para sintetizar material celular a partir de moléculas del medio ambiente. Se puede dividir en:
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● Catabolismo: Reacciones de generación de energía a partir de la degradación de compuestos (ej:
generación de ATP)
● Anabolismo: Reacciones de síntesis que requieren energía. Usan el ATP generado en las
reacciones catabólicas.

Las celulas microbianas utilizan la energía química para:


 Sintetizar grandes moléculas a partir de otras más pequeñas
 Transportar sustancias hacia la célula microbiana y organizarlas en su interior
 Sacar sustancias de desecho de la célula
 Realiza trabajo mecánico de las células

La primera etapa de la degradación de macromoléculas (glucólisis-paso de entrada-ciclo de Krebs) se


llama glucólisis. Esta se puede dividir en 2 etapas:
❖ 1º etapa: La glucosa es degradada a gliceraldehido-3-fosfato a partir del gasto de 2 moléculas de
ATP por molécula de glucosa.
❖ 2º etapa: A partir de la molécula formada anteriormente se forman 2 moléculas de ácido pirúvico
con la liberación de 4 moléculas de ATP y 2 de NADH.

2.-Describir las diferentes vías metabólicas que puede seguir un hidrato de carbono a fin de obtener
energía. Indique diferentes productos finales de las rutas de fermentación y ecuaciones finales para al
menos dos de ellas.

Las diferentes vías que puede seguir un hidrato de carbono para obtener energía son:
 Respiración aeróbica: el aceptor final de electrones es el O2
 Respiración anaeróbica: El aceptor final es un compuesto inorgánico
 Fermentación: El aceptor final de electrones es un compuesto orgánico.

Dos productos posibles de la fermentación son el Ácido láctico y el etanol.


 Fermentación alcohólica
𝐶𝑂𝑂𝐻 − 𝐶𝑂 − 𝐶𝐻3 → 𝐶𝑂2 + 𝐶𝐻𝑂 − 𝐶𝐻3 → 𝐶𝐻3 − 𝐶𝐻2 − 𝑂𝐻
 Fermentación láctica
𝐶𝑂𝑂𝐻 − 𝐶𝑂 − 𝐶𝐻3 + 2𝑁𝐴𝐷𝐻 + 2𝐻 + → 2 𝐻𝑂 − 𝐶𝐻 − 𝐶𝑂𝑂𝐻 − 𝐶𝐻3 + 2𝑁𝐴𝐷+

3.- ¿Qué entiende por respiración aeróbica y por respiración anaeróbica? Detalle todas las etapas
involucradas en cada proceso, receptor final de electrones y balances y rendimientos energéticos en
las distintas etapas y finales.

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Compare los rendimientos de energía obtenidos en los fermentativos aeróbica con los anaeróbicos,
justifique las diferencias.

● Respiración aeróbica: Es la transformación de un hidrato de carbono en energía cuando el aceptor


final de electrones es el oxígeno.
Tienen 3 etapas:
❖ Glucolisis: El azúcar se transforma en dos moléculas de 3 carbonos (ác pirúvico).
❖ Paso de entrada: El pirovato (ácido pirúvico con una carga) se transforma a partir de la
piruvatodeshidrogenasa en 2 dióxidos de carbono, 2 moléculas de acetil CoA y 2 moléculas de
NADH.
❖ Ciclo de Krebs: El acetil Coa es oxidado a CO2 en este ciclo. Por acetil CoA se forman 6 NADH2 y
2 FADH2.
Balances y rendimientos energéticos:
❖ Glucolisis: 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 → 2 Á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝑝𝑖𝑟ú𝑣𝑖𝑐𝑜 + 2𝐶𝑂2 + 2𝑁𝐴𝐷𝐻 (≡ 6𝐴𝑇𝑃) + 2𝐴𝑇𝑃
❖ Paso de entrada: 2Á𝑐 𝑝𝑖𝑟ú𝑣𝑖𝑐𝑜 → 2𝐴𝑐𝑒𝑡𝑖𝑙 𝐶𝑜𝐴 + 2𝐶𝑂2 + 2𝑁𝐴𝐷𝐻 (≡ 6𝐴𝑇𝑃)
❖ Ciclo de Krebs: 2𝐴𝑐𝑒𝑡𝑖𝑙 𝐶𝑜𝐴 → 4𝐶𝑂2 + 6𝑁𝐴𝐷𝐻(≡ 18𝐴𝑇𝑃) + 2𝐹𝐴𝐷𝐻 (≡ 4𝐴𝑇𝑃) + 2𝐴𝑇𝑃
❖ Rendimiento total:
𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 + 6𝑂2 + 38𝐴𝐷𝑃 + 38𝑃𝐼 → 6𝐶𝑂2 + 44𝐻2 𝑂 + 38𝐴𝑇𝑃(≡ 686𝐾𝑐𝑎𝑙)
● Respiración anaeróbica: Es la transformación de un hidrato de carbono en energía cuando el
aceptor final es un compuesto inorgánico distinto al oxígeno. Tiene 2 etapas:
❖ Glucólisis: cuando hay ausencia de oxígeno, la glucólisis es la única vía que produce ATP en los
animales. secuencia compleja de reacciones que se efectúan en el citosol de una célula mediante
las cuales una molécula de glucosa se desdobla en dos moléculas de ácido pirúvico.
❖ Fermentación:se produce en la ausencia de oxígeno como aceptor final de los electrones del
NADH producido en la glucólisis. En los seres vivos la fermentación es un proceso anaeróbico y
en él no interviene la cadena respiratoria que son propios del microorganismo como las bacterias
y levaduras. Puede ser de dos tipo: Fermentación láctica y fermentación alcohólica.
Balances y rendimientos energéticos:
❖ Glucólisis:
❖ Fermentación: fermentación láctica: ácido pirúvico + NADH+𝐻+ →ácido láctico + 𝑁𝐴𝐷+
Fermentación alcohólica: ácido pirúvico →acetaldehído + 𝐶𝑂2
acetaldehído + NADH +𝐻+ →etanol + 𝑁𝐴𝐷+ Commented [1]: recien vi que la siguiente pregunta es
esa, pero en internet me aparecieron esas, asique no
se
4.- Describa las etapas involucradas en las fermentaciones láctica y alcohólica. Ecuaciones finales en
cada caso.

Fermentación alcohólica: Es un proceso biológico de fermentación anaeróbico, originado por la


actividad de algunos microorganismos que procesan los hidratos de carbono. Los microorganismos
presentes en este proceso son de tres tipos: levaduras, mohos y hongos.
A lo largo de todo el proceso de fermentación, y en función de las condiciones (cantidad de azúcar
disponible, temperatura, oxigeno, etc.) cambia el tipo de levadura que predomina pudiéndose distinguir
varias fases en la fermentación:
1er fase: (primeras 24 horas), predominan levaduras no esporógenas, que resisten un grado alcohólico
4-5.
2da fase: (2º-4º día), predomina el Sacharomyces cerevisiae que resiste hasta un grado de alcohol entre
8 y 16. En esta fase es cuando se da la máxima capacidad fermentativa
3er fase: sigue actuando Sacharomyces Cerevisiae junto a Sacharomyces Oviformis. También pueden
existir otros MO procedentes principalmente de las bodegas y de los utensilios, suelen ser hongos entre
los que destacan Penicillium, Aspergilus, Oidium,etc.

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Fermentación láctica: ciertos tipos de bacterias y hongos toman la glucosa presente en plantas, semillas
y tejidos animales para generar, por reducción, ácido láctico y dióxido de carbono. etapas

5.- ¿En qué lugares de un organismo procariota o de un eucariota se produce la síntesis de ATP, conoce
alguna teoría que explique dicha síntesis? ¿De qué forma podría formarse ATP a nivel de célula
eucariota?

En los organismos procariotas la cadena de transferencia de electrones, a partir de la cual se sintetizan


las moléculas de ATP, se da a nivel de la membrana celular, mientras que en las células de los organismos
eucariotes, esta se da en la membrana de las mitocondrias.
Peter Mitchell propuso la "hipótesis quimiosmótica": propuso que un gradiente de concentración
electroquímico de protones a través de la membrana podría ser usado para crear ATP, mediante el uso Commented [2]: es wiki, asiq si no les parece lo sacan
de la energía de NADH y FADH2 que se han formado por la ruptura de moléculas ricas en energía, como
la glucosa.

ESTERILIZACIÓN

1.- ¿Cuál es el objetivo de la esterilización? ¿Qué importancia tiene la esterilización en la industria


biotecnológica? Diferencie un agente desinfectante de un antiséptico. ¿Qué diferencias hay entre un
producto estéril y uno pasteurizado?

● Esterilización: Eliminación o muerte de todos los MO que contiene un objeto o sustancia. Es


importante a nivel biotecnológico para evitar contaminación ya que esta puede producir sustancias
tóxicas, variaciones de pH y competencia entre MO que disminuyen los rendimientos del producto
de interés.
● Agente desinfectante: Agente que elimina la carga microbiana total en superficies inanimadas
(mesada). Ej: Cloro, aldehídos, compuestos clorados, óxido de etileno.
● Agente Antiséptico: Agente que controla y reduce la presencia de MO potencialmente patógenos
sobre piel y/o mucosas. Ej: Alcoholes, iodo.

La diferencia entre un objeto estéril y uno pasteurizado es que la pasteurización sólo destruye patógenos
y reduce la flora de deterioro (1º LHT, 2º HTST), en cambio la esterilización destruye patógenos y todo
tipo de MO.

2.- Qué distintos procesos de esterilización conoce. Describa las principales características en qué tipo
de compuestos o materiales pueden ser aplicados cada uno de ellos

Esterilización por calor:


● Calor húmedo: Los mecanismos de acción son la desnaturalización de proteínas y la destrucción
de ácidos nucleicos. Se usa en:
○ Pasteurización: Lácteos, jugo de frutas, etc.
○ UHT: Esterilización continua, necesita envasado aséptico.
○ Tindalización: Se usa para esterilización de productos de baja resistencia térmica cuando
no existe otra opción. Es un proceso discontinuo.
○ Vapor saturado a P>Patm : Se puede conseguir esterilización de materiales y productos
termoestables y descontaminación de desechos biológicos. Se usa un autoclave y las
condiciones son vapor saturado a T>100°C, y eliminación completa de aire.
● Calor seco: El mecanismo de acción son los procesos de oxidación.

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○ Aire caliente: Se usa para la esterilización de materiales resistentes al calor, de sustancias
no miscibles en el agua y de polvos. También para despirogenización. Se usa horno
eléctrico.
○ Incineración: Se usa para la destrucción del material contaminado.
○ Flameado: Desinfección.

Esterilización por filtración: Se logra por el paso de un líquido o un gas a través de un material capaz
de retener los MO presentes. Se emplea para materiales sensibles al calor(azúcares, medicamentos,
antibióticos, etc). Tenemos:
● Filtros de profundidad: Vías tortuosas donde quedan retenidos los contaminantes (material
fibroso).
● Filtros de superficie: Son de acetato. Ventaja: Al conocer el tamaño de poro se selecciona el filtro
que elimine todos los contaminantes. Desventaja: Se saturan rápido y la v de filtración es lenta.
Se esterilizan en autoclave.
● Filtración de aire: Se usan en cabinas de flujo laminar que usan filtros HEPA. La remoción es muy
eficiente para partículas mayores a 0.3 micrones de diámetros. Se usan para lograr ambientes con
nº de partículas controlado.

Esterilización por radiación: La actividad microbiana se da en medias-altas energías.


● Esterilización por radiaciones ionizantes: Alta energía, baja longitud de onda, gran poder de
penetración. Ionizan átomos y moléculas, no requieren alta T. Sus mecanismos de acción son
formar radicales libres y dañar el ADN y ARN. Desventaja: Equipo especial, no todos los materiales
resisten el tratamiento, reacciones no deseadas en alimentos. Los priones son los más resistentes
a esta esterilización y las bacterias las menos resistentes.
● Radiaciones no ionizantes: Se usan para desinfección de superficies, de aire y de agua. Baja
energía, sin poder de penetración. Los mecanismos de acción son en sitio blanco de ADN la
formación de dímeros de timina.
● Esterilización por radiación UV: (250 nm) La producción de ozono en los rayos UV producen la
asepsia. Los principales compuestos blancos afectados por esta son los AA aromáticos de las
proteínas, las bases púricas y las pirimidínicas, en particular la timina del ADN.

3.- Para llevar a cabo la esterilización de un medio de cultivo, que distintas estrategias podría emplear?
Justifique las ventajas y desventajas de cada procedimiento.
Se podría emplear una esterilización de tipo batch o contínua.

BATCH CONTINUA

VENTAJAS DESVENTAJAS VENTAJAS DESVENTAJAS

Práctico para V chicos. Tiempo de parada entre No hay t de parada. Paradas por los
Flexible para cargas. Control de proceso y mantenimientos
operaciones con Control de proceso y uniformidad de inesperados muy
multiproductos. uniformidad de producto fácilmente costosas.
Costo de equipos bajo. producto más difícil de controlables (debido a Costo de equipos alto.
Fácil de parar y limpiar. conseguir (debido a que se trabaja en EE)
que no se trabaja en Bajo costo de
EE). operación.

4.- ¿Qué distintas estrategias podría llevar a cabo la esterilización de un medio de cultivo en un reactor?
Qué precauciones debe tomar para cada estrategia?

Con vapor directo: precauciones con volúmenes.


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Con vapor por camisa: precauciones en las variaciones de volumen. Commented [3]: ?

5.- Grafique el perfil temperatura Vs. tiempo para una esterilización con vapor tipo batch indicando las
etapas del proceso. Indique cómo varían los perfiles de temperatura con el aumento del volumen del
reactor

La esterilización se divide en 3 etapas:


1) Calentamiento: Comienza con una temperatura de 100°C. Se genera vapor de agua, y durante el
mismo se debe abrir la válvula para eliminar el aire presente en la parte superior del equipo. El
aire se debe eliminar para alcanzar la temperatura correcta de esterilización.
2) Tiempo de retención: Cuando la presión del sistema llega a 2 atm se abre la válvula de seguridad.
En este punto, a esa presión, la temperatura del sistema es de 121°C. El tiempo es el necesario
para alcanzar una correcta eliminación de los microorganismos presentes en el sistema.
3) Tiempo de enfriamiento: Se corta el calentamiento y se disminuye la P y T del sistema hasta llegar
a los 100°C. El enfriamiento debe ser forzado para evitar interacciones entre los microorganismos
remanentes y que estos se reproduzcan.
Un aumento en el volumen del reactor aumenta los tiempos de calentamiento y de enfriamiento, por lo
tanto, las pendientes de las rectas serán de menor valor.

6.- Describa la ecuación empleada para caracterizar una cinética de esterilización por vapor e indique el
significado de cada término. Unidades.
La cinética de inactivación de los MO es una cinética de primer orden respecta al número de m.o. Se
expresa como:

K’: Constante de decaimiento o muerte. Unidades de t-1.


N: Número de MO en el tiempo t. Adimensional.
dN/dt: Variación del número de MO en un infinitesimal de tiempo.

7.- ¿Qué datos necesita para cuantificar la mortandad celular en cada etapa? ¿Qué datos necesita para
determinar el tiempo de retención en una esterilización por vapor en sistema batch?
Para cuantificar la mortandad celular se necesitan el tiempo de cada etapa, el número inicial de MO y K’
para cada etapa. El objetivo 𝑁2 (a cuántos MO quiero llegar, generalmente toma valores entre 10-2 y 10-3)
(𝑁0 −𝑁𝑓 )
es lo que se intenta determinar para luego realizar la diferencia :
𝑁0
𝑁
𝑙𝑛(𝑁 𝑖 ) = −𝐾′ ∗ (𝑡𝑖+1 − 𝑡𝑖 ), se aplica en cada etapa y se calcula el Nf. (Ecuación de la pregunta 6 ya
𝑖+1
integrada).

8.- ¿Qué entiende por tiempo de reducción decimal y factor z?

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● Parámetro D: Tiempo de reducción decimal. Es el tiempo necesario para que el número de
supervivientes caiga al 10% del valor inicial. A mayores T, D es menor. Es diferente para distintos
microorganismos, entornos y condiciones fisiológicas. Es un parámetro de la sensibilidad de un
MO al tratamiento.

● Parámetro Z: Indica el incremento en la T necesario para que D se reduzca a la décima parte del
valor inicial.

9.- Describa la esterilización por filtración. ¿En qué casos la emplearía?

Respondida en la pregunta 2

10.- ¿Cómo controlaría si un proceso de esterilización se llevó a cabo correctamente?

Durante el proceso se debe controlar la esterilización mediante indicadores físicos (T y P), químicos
(cambio de color) y biológicos (MO resistente). Post proceso debe hacerse un test de esterilidad. La
prueba de esterilidad tiene fundamento en la detección de formas viables de microorganismos, en medios
de cultivo adecuados para el crecimiento de bacterias, hongos y levaduras, que se encuentran como
contaminantes en productos estériles. Si en los ensayos no se observa desarrollo de cultivos microbianos,
el producto cumple con los requisitos del ensayo de esterilidad.

11.- ¿Cuáles son los 4 niveles de bioseguridad (BSL) que se han establecido para el manejo de
microorganismos. Qué características tienen los agentes que se incluyen en cada uno de ellas?
Los niveles de bioseguridad(BSL) son condiciones bajo las cuales los agentes biológicos pueden
comúnmente manipularse de forma segura.

NIVELES DE BIOSEGURIDAD AGENTES DE RIESGO

BSL 1:representa un nivel básico que se Sin riesgo o bajo riesgo individual y comunitario.
fundamenta en prácticas microbiológicas Agentes bien identificados que se sabe que no
estándar sin ninguna barrera primaria o producen enfermedad en humanos sanos y existe
secundaria especialmente recomendada
un potencial mínimo de peligro para el personal del
laboratorio y el ambiente.
Ejemplo: virus de la hepatitis canina infecciosa

BSL 2:está asociado con enfermedad humana de Riesgo individual moderado y bajo riesgo

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variada gravedad. comunitario. Agentes asociados con
enfermedades en humanos, especialmente por
ingestión o exposición percutánea o mucosa.
Poco probable que sea un problema para los
trabajadores del laboratorio, la comunidad, los
animales o el ambiente. La exposición en el
laboratorio puede producir una enfermedad seria
pero existe tratamiento efectivo y las medidas
preventivas están disponibles, el riesgo de
dispersión de la enfermedad es limitado
Ejemplo:Virus de la Hepatitis B

BSL 3: nivel de contención Alto riesgo individual, bajo riesgo comunitario.


Trabajo con animales infectados con agentes
exóticos que tienen riesgo de transmisión por
aerosoles y pueden causar una enfermedad seria
o potencialmente letal.
Patógenos que usualmente causan serias
enfermedades en animales y humanos pero que
comúnmente no se propagan de un individuo
infectado a otro. Las medidas preventivas y de
tratamiento efectivo están disponibles.
Ejemplo: Brucella abortus

BSL 4: nivel de contención máxima. Alto riesgo individual y comunitario. Trabajo con
agentes peligrosos que tienen alto riesgo de
amenazar la vida, transmitirse por vía aérea o que
se desconoce su riesgo de transmisión.
Patógenos que usualmente causas serias
enfermedades en los animales o los humanos y
que pueden transmitirse de un individuo de forma
directa o indirecta. Usualmente no están
disponibles ni medidas preventivas ni tratamiento
efectivo.
Ejemplo:Ébola

12.- ¿Qué característica tienen los gabinetes de bioseguridad o banco de flujos laminar que permiten
trabajar con organismos del Grupo II, III y IV?

Gabinete de seguridad I, CAMPANA: Son cámaras cerradas con una abertura al frente para permitir el
acceso de los brazos del operador. El aire penetra por este frontal, atraviesa la zona de trabajo y todo él
sale al exterior a través de un filtro HEPA. Su desventaja es que presentan es que no proporcionan
protección al material con el que se trabaja, no evitando por lo tanto que éste se pueda contaminar. Son
válidos para agentes de grupos I, II y III.
Gabinete de seguridad II, FLUJO LAMINAR: Además de, al operario y su entorno, ofrecen protección al
producto frente a la contaminación. La superficie de trabajo está bañada por aire limpio que atravesó un
filtro HEPA. La salida de aire se produce a través de otro filtro HEPA. Son equipos válidos para el manejo
de agentes biológicos de los grupos I, II y III.
Gabinete de seguridad III, FLUJO LAMINAR: Constituyen el máximo nivel de seguridad. Son recintos
herméticos en presión negativa y, por ello, su interior está completamente aislado del entorno. Se opera
en ellas por medio de unos guantes, con trampa para introducir el producto, el aire entra a través de un

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filtro HEPA y se expulsa al exterior a través de dos filtros HEPA. Se recomiendan para el manejo de
agentes de los grupos I, II, III y IV.