Adhesión y señalización de células endoteliales

Abstracto

Las células endoteliales recubren los vasos sanguíneos y proporcionan una interfaz dinámica entre la sangre
y los tejidos. Se remodelan para permitir que leucocitos, fluidos y moléculas pequeñas entren en los tejidos
durante la inflamación y las infecciones. Aquí comparamos las redes de señalización que contribuyen a la
permeabilidad endotelial y la migración transendotelial de leucocitos, centrándose particularmente en
señales mediadas por pequeñas GTPasas que regulan la adhesión celular y el citoesqueleto de actina. La
señalización de Rho y Rap GTPasa es importante para ambos procesos, pero difieren en que las señales se
activan localmente bajo leucocitos, mientras que la permeabilidad endotelial es un evento más amplio que
afecta a toda la célula. Algunas moléculas desempeñan un papel único en uno de los dos procesos y, por lo
tanto, podrían dirigirse a alterar selectivamente la permeabilidad endotelial o la migración transendotelial
de leucocitos.

1. Introducción
Las células endoteliales (EC) forman una barrera semipermeable para separar la corriente sanguínea de los
órganos y tejidos subyacentes y controlar el transporte de fluidos, solutos y células a través de las paredes de
los vasos sanguíneos. La barrera está mediada por adhesiones de células endoteliales incluyendo uniones
estrechas (TJ), uniones adherentes (AJ) y una variedad de otras moléculas de adhesión que incluyen PECAM-
1 y nectinas, que están conectadas al citoesqueleto de actina a través de diferentes moléculas adaptadoras
( Fig. 1 ). La arquitectura y la composición de las uniones de células y células varía entre los lechos vasculares
dependiendo de los requisitos específicos del órgano [1] , [2]. Además de mantener la adhesión entre EC, las
uniones célula-célula controlan la permeabilidad vascular y la migración de leucocitos mediante un complejo
equilibrio entre múltiples moléculas de señalización ( Fig. 1, Fig. 2 ) [3] , [4] .

Figura 1
Las principales proteínas
transmembrana en las uniones
célula-célula endoteliales. Las
células endoteliales se alinean en el
torrente sanguíneo y están
constantemente expuestas al estrés
por cizalladura del fluido (panel
superior). El panel inferior muestra
las principales proteínas
transmembrana en las uniones
célula-célula endoteliales ...
Figura 2
Moléculas de señalización que regulan la permeabilidad vascular. Las principales proteínas de unión que
regulan la permeabilidad vascular se muestran en la célula derecha. La celda izquierda muestra ejemplos de
receptores que aumentan la permeabilidad vascular, y la intracelular ...
TJs regulan la difusión de iones y solutos polares y bloquean la penetración de grandes macromoléculas a
través de EC. Los TJ están formados por moléculas de adhesión celular homófila occludin, claudinas y
moléculas de adhesión de unión (JAM) ( Fig. 1 ) [5] , [6] . Las claudinas son las principales proteínas que
forman barreras, en particular la claudina-5 es crítica para la permeabilidad endotelial in vivo e in vitro [7]. La
ocludina y las claudinas están relacionadas con zonula ocludens (ZO) -1, ZO-2, ZO-3, cingulina y otros
complejos proteicos, que median la interacción entre las moléculas de adhesión y los filamentos de
actina [5]. La familia JAM está compuesta por tres proteínas estrechamente relacionadas JAM-A, -B y -C, y
por el receptor coxsackie y adenovirus (CAR). Los JAM median la interacción célula-célula endotelial y
regulan la migración transendotelial de leucocitos (TEM) [8] . Tanto JAM como CAR regulan la
permeabilidad al soportar la función y el ensamblaje de TJ [9] .
VE-cadherina es el componente transmembrana clave de AJs endoteliales y se expresa solo en EC [10] . La
VE-cadherina junto con PECAM-1 inicia y mantiene el contacto célula-célula endotelial, uniendo los CE para
dar soporte mecánico al endotelio y proporcionar estabilidad a la unión endotelial [11] , [12] . Los AJ pueden
regular la expresión de los componentes TJ y la organización TJ sigue la formación AJ [11] , [13] . Además,
AJs y TJs están interconectados [14] , por ejemplo, la diafonía de las proteínas ZO con AJs [15]. VE-cadherina
se une indirectamente a través de su cola citoplásmica a los filamentos de actina por un complejo de proteínas
que incluyen α- y β-cateninas, placoglobina (γ-catenina), p120-catenina, vinculina y α-actinina ( Fig. 1 ) [16] ,
que son vitales para la estabilidad de las uniones y también para la apertura y el cierre dinámicos de las
uniones [17] .
Aquí discutimos los roles de las uniones endoteliales de células y células en la señalización que conducen a
cambios en la permeabilidad endotelial y durante la migración transendotelial de leucocitos (TEM), con un
enfoque particular en las pequeñas GTPasas.

2. Regulación de pequeñas GTPasas

Varios miembros de la superfamilia Ras de pequeñas GTPasas contribuyen a la adhesión de células
endoteliales y, por lo tanto, regulan la permeabilidad endotelial y / o la TEM de leucocitos. Estos incluyen
Rap1, Rap2 y varias familia de Rho GTPases ( Fig. 2 , Fig. 3) La mayoría de las pequeñas GTPasas ciclan
entre una conformación inactiva unida a GDP y una conformación activa unida a GTP. Este ciclo está regulado
por factores de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF), que catalizan el intercambio de GDP por GTP,
activando así las proteínas, y por las proteínas activadoras de GTPasa (GAP), que estimulan la hidrólisis de
GTP e inactivan las proteínas. La interacción entre las pequeñas GTPasas y sus efectores aguas abajo a
menudo requiere su localización a las membranas, que está mediada por la modificación postraduccional por
los lípidos (prenilación y / o palmitoilación) [18] , [19] . Por ejemplo, se requiere geranilgeranilación de Rho
GTPasas para la permeabilidad inducida por trombina en EC [20]. Algunas pequeñas GTPasas se inhiben al
unirse a las proteínas que las extraen de las membranas, incluidos los inhibidores de la disociación de
nucleótidos de guanina (GDI) y las proteínas 14-3-3 [21] , [22] . Las pequeñas GTPasas se activan
rápidamente por los receptores de la superficie celular, y una sola GTPasa puede interactuar con múltiples
objetivos aguas abajo para inducir un rango de respuestas celulares en una forma espacio-temporal,
dependiendo del estímulo y el tipo de célula [19] .

Fig. 3
Moléculas de señalización que regulan la migración transendotelial de leucocitos. La unión de los
leucocitos a la transmigración a través de las células endoteliales es un proceso de varias etapas, que implica
una variedad de diferentes moléculas de adhesión en los leucocitos y las células endoteliales ...

3. Señalización a las uniones endoteliales en la permeabilidad vascular

Las uniones endoteliales célula-célula se remodelan dinámicamente en respuesta a estímulos extracelulares
múltiples, que aumentan o disminuyen transitoriamente la permeabilidad endotelial y de ese modo regulan la
entrada de solutos polares y macromoléculas en los tejidos del torrente sanguíneo ( Fig. 2 ) [4] . Por ejemplo,
los estímulos proinflamatorios como la trombina, la histamina y el TNFα aumentan la permeabilidad, mientras
que los mediadores antiinflamatorios como la esfingosina 1-fosfato (S1P) y la angiopoyetina-1 disminuyen la
permeabilidad [23] . El aumento de la fuga de la barrera vascular se asocia con la interrupción de las uniones
endoteliales, en particular AJs [10] , y se produce en enfermedades como el cáncer, la aterosclerosis, la
diabetes, la hipertensión, la inflamación y la isquemia [24], [25] . Además, las malformaciones cavernosas
cerebrales (MCP) son enfermedades hereditarias o esporádicas que se asocian con la desorganización de las
uniones microvasculares cerebrales venosas y el aumento de la permeabilidad [26] .

3.1. Señales que aumentan la permeabilidad endotelial

Los estímulos proinflamatorios aumentan la permeabilidad a través de una combinación de cambios en AJ, TJ
y el citoesqueleto de actina asociado ( Fig. 2 ). La composición e integridad de AJ está regulada por cambios
en la fosforilación de las proteínas de unión. Por ejemplo, la trombina activa la serina / treonina quinasa
proteína quinasa C (PKC) α, que induce el desensamblaje del complejo VE-cadherina mediante la
fosforilación de p120ctn [27] . En ECs estimulados por VEGF, Src media la activación de Rac1, lo que
conduce a la fosforilación de VE-cadherina a través de la serina / treonina quinasa PAK, y por lo tanto aumenta
la permeabilidad endotelial [28] . El LPS activa la familia Rab GTPasa Rab5, que media la internalización de
VE-cadherina, dando como resultado un aumento de la permeabilidad [29] .
La fosforilación de la tirosina de los componentes AJ también se asocia con una mayor permeabilidad. En las
EC no estimuladas, el receptor y las proteínas tirosina fosfatasas citoplásmicas (PTP) se localizan en AJ
endoteliales y desfosforilan los componentes AJ para reducir la permeabilidad [17] , [30] , [31] . Por ejemplo,
la tirosina fosfatasa SHP2 se asocia con β-catenina en VE-cadherin / p120 / plakoglobin complejos [32] . El
agotamiento de SHP2 mejora la fosforilación de componentes complejos AJ conduce a aumento de la
permeabilidad en respuesta a la trombina [32] , [33] . El TNFα aumenta la fosforilación de tirosina de VE-
cadherina para mejorar la permeabilidad vascular [34] , [35]. La fosforilación VE-cadherin Tyr685 es
necesaria para la permeabilidad inducida por VEGF e histamina in vivo [36] . Además, se informó que la
fosforilación de VE-cadherina en Tyr658 y Tyr685 era necesaria para aumentar la permeabilidad y la
endocitosis de VE-cadherina en respuesta a bradiquinina e histamina [37] .
Los contactos célula-célula endoteliales están relacionados con el citoesqueleto de actina, que es fundamental
para la estabilidad de la unión y contribuye a los cambios en la permeabilidad vascular [38] . Los factores
inductores de permeabilidad desestabilizan las uniones célula-célula al cambiar la orientación del haz de
actina, que pasa de ser paralela a las uniones a ser perpendicular. Los filamentos de actina perpendiculares,
incluidas las fibras de tensión, imponen una fuerza mecánica sobre las uniones y alteran su
integridad [39] , [40] , [41] . RhoA induce fibras de estrés y aumenta la contractilidad que conduce a una
mayor permeabilidad vascular en respuesta a una variedad de estímulos extracelulares que incluyen trombina
e histamina ( Fig. 2) RhoA activa la serina / treonina quinasa ROCK, que fosforila la subunidad MYPT1 de
la fosfatasa de la cadena ligera de miosina trimérica (MLC), inhibiendo así su actividad
enzimática [42] , [43] . La posterior fosforilación incrementada de MLC conduce a un aumento de la
contractilidad de la actomiosina. RhoA se requiere para una mayor permeabilidad en respuesta a varios
estímulos, incluidos la trombina y el TNF α [44] . Curiosamente, RhoB y RhoC también se activan por la
trombina [45] , y RhoB promueve la contracción sostenida inducida por la trombina [46].. Por el contrario, la
activación de RhoA por angiopoyetina-1 conduce a la estabilización de la unión célula-célula e inhibe la
permeabilidad inducida por VEGF, y esta respuesta depende de la formina mdi1 activada por Rho, pero no de
la ROCK [47] . Esto sugiere que el efecto de RhoA sobre las uniones depende de si activa ROCK,
promoviendo la contractilidad de la actomiosina, o sobre mDia1, que estimula la polimerización de la
actina [48] .
El aumento de la permeabilidad a menudo refleja la pérdida de proteínas TJ a partir de las uniones, lo que está
relacionado con la señalización mejorada de RhoA / ROCK. Por ejemplo, ROCK induce la fosforilación de
claudin-5 y occludin [49] . El TNFα aumenta la permeabilidad al inducir una disminución de claudina-5 en
las uniones a través de ROCK1 y ROCK2 [50] . LPS induce la pérdida de proteínas TJ y el aumento de la
permeabilidad endotelial a través de la activación de RhoA por p115RhoGEF [51] . En el complejo TJ, ZO-1
está unido a la cingulina que está unida al citoesqueleto de actina ( figura 1 ). La cingulina promueve la función
de barrera endotelial in vitro e in vivo , en parte al interactuar e inhibir el RhoA GEF-H1 [52] , [53], mientras
que la proteína de tipo cingulina JACOP se asocia con p114RhoGEF para mantener las TJ y AJ endoteliales,
presumiblemente mediante la estimulación de la actividad de RhoA en las uniones célula-célula [15] . Esto
indica que el sitio de activación de RhoA, y cuál de sus objetivos estimula, determina si inhibe o estimula la
interrupción de la unión.
3.2. Señales que reducen la permeabilidad
Los estímulos que reducen la permeabilidad y promueven la función de barrera endotelial generalmente actúan
a través de tres pequeñas GTPasas, Rap1, Rac1 y Cdc42, y como se describió anteriormente en algunos casos
RhoA, que actúan juntas a través de redes de señalización interconectadas ( figura 2 ). Por ejemplo, la
trombina inicialmente aumenta la permeabilidad endotelial a través de RhoA, pero también aumenta la
generación de S1P, que luego estimula la activación de Rac1, lo que da como resultado una mayor integridad
de la barrera para revertir la permeabilidad inducida por la trombina [54] .
La integridad de la unión endotelial se ve reforzada por estímulos que elevan los niveles de cAMP, como
adrenomedulina, prostaciclina, prostaglandina E2 y agonistas β-adrenérgicos, que reducen la permeabilidad
de la CE [55] . cAMP activa directamente el RapGEF Epac, que activa Rap1 [56] . Hay dos proteínas Rap1,
Rap1a y Rap1b. Rap1b es el más expresado en EC, pero la depleción de Rap1a reduce la función de barrera
de EC más que la depleción de Rap1b, lo que podría explicarse por su colocalización con VE-cadherin en
AJs [57] .
Rap1 actúa a través de múltiples vías para promover la adhesión mediada por VE-cadherina y mantener la
función de barrera [56] . En primer lugar, conduce a la activación de Rac1 y Cdc42, que a su vez fortalecen
las uniones célula-célula endoteliales. Por ejemplo, Epac1 / Rap1 actúan a través de Rac GEFs Tiam1 y Vav2
para promover la activación de Rac1 [55] . Además, los eritrocitos circulantes o las plaquetas liberan S1P que
activa Rac1 aguas abajo de Rap1 a través de Akt, lo que lleva a la estabilización de la barrera
endotelial [58] , [59] . Rap1 también promueve el ensamblaje de un complejo mecanosensor de unión de
PECAM1, VE-cadherina y VEGFR2 en respuesta al estrés de cizalladura, que luego activa Rac1 a través de
Vav2 y Tiam1 para aumentar la función de barrera [60] , [61], [62] . Finalmente, Rap1 activa Cdc42 a través
de RhoGEF FGD5 para promover la estabilización de la unión célula-célula [63] , [64] .
Además de activar Rac1 y Cdc42, Rap1 actúa a través de varios mecanismos para reducir la actividad de RhoA
/ ROCK, lo que resulta en una mayor función de barrera endotelial ( Fig. 2 ). Actúa a través de su efector
Rasip1, que recluta el RhoGAP ARHGAP29 para inhibir la actividad de RhoA y ROCK [65] , [66]. Rasip1
también disminuye la formación de fibras de estrés y la permeabilidad endotelial por interacción directa con
el corazón del receptor transmembrana de vidrio (HEG1) [67] . Además, Rap1 controla la barrera endotelial
mediante el reclutamiento de su efector CCM1 / KRIT1 a las uniones EC, que reduce las fibras de estrés y la
actividad de RhoA en los CE [68] , [69]. A diferencia de Rap1, el agotamiento de Rap2 aumenta la resistencia
a la barrera endotelial, aunque no se conoce el mecanismo por el que la función de barrera de Rap2 altera [70] .
Rac1 aumenta la estabilidad unión CE y por lo tanto reduce la permeabilidad, tanto mediante la estimulación
de la extensión de lamellipodia para cerrar las brechas intercelulares y mediante la inducción de montaje de
haces de F-actina cortical y la reducción de la tensión de actomiosina [71] , [72] . Además, el estrés de
cizallamiento actúa a través de VE-cadherina, Tiam1 y Rac1 para reducir el nivel de fosforilación de la tirosina
en ocludina, lo que lleva a la mejora de la barrera [73] , aunque la tirosina fosfatasa implicada en esta vía no
ha sido identificada, la angiopoyetina-1 reduce la ocludina. fosforilación de tirosina a través de la proteína
tirosina fosfatasa N-2 y promueve la interacción ocludina con ZO-1 para mejorar TJs [74] , y por lo tanto, será
interesante probar si esta fosfatasa actúa aguas abajo de Rac1.
Rac1 actúa a través de varios efectores aguas abajo para mediar la estabilización de unión, incluido IQGAP1,
que se une a Rac1 y Cdc42, e interactúa con activadores de la polimerización de actina (N-WASP, complejo
Arp2 / 3) para promover el ensamblaje AJ [75] , [76] . Por el contrario, se ha informado que Rac1 aumenta la
permeabilidad aguas abajo de VEGF a través de la fosforilación mediada por PAK de un motivo altamente
conservado dentro de la cola intracelular de VE-cadherina, Ser665, dando como resultado la internalización
de cadherina VE [47] . VEGF activa VEGFR2 que se asocia con VE-cadherina y activa Rac1 a través de Src
y RacGEF Vav2 [47] . El VEGF también puede actuar a través del intercambiador de Rac 1 dependiente de
fosfatidilinositol (3,4,5) -trifosfato (P-Rex1) para activar Rac1 y aumentar la permeabilidad[77] . Por lo tanto,
es probable que el efecto de Rac1 sobre la permeabilidad dependa del contexto celular.
Además de activarse aguas abajo de Rap1, Rac1 se activa localmente en las uniones célula-célula, en parte a
través de RhoGEFs Trio y Tiam1, que interactúan con VE-cadherina [44] , [78] , [79] , [80] . Por otro lado,
los mediadores inflamatorios tales como LPS, TNFα, angiotensina 2 y trombina reducen la actividad de Rac1
lo que resulta en la apertura de la unión y el aumento de la permeabilidad [81] . RhoB inhibe la actividad de
Rac1 en las uniones al reducir el tráfico de Rac1 a las uniones célula-célula. La expresión de RhoB es inducida
por las citocinas inflamatorias TNFα e IL-1β, y promueve la contracción sostenida de la CE sobre la
exposición a la trombina en el contexto de la inflamación [46] .
Como Rac1, Cdc42 es importante para mantener AJs [82] , [83] , [84] . Por ejemplo, Cdc42 restaura la
función de barrera endotelial sobre la estimulación con trombina [85] . El aumento de la permeabilidad
endotelial inducida por la pérdida o desestabilización de VE-cadherina aumenta la actividad de
Cdc42 [84], [86] , lo que presumiblemente promueve la restauración de las uniones. In vivo, se requiere Cdc42
para la adhesión célula-célula endotelial durante el desarrollo, y es necesaria para la polaridad endotelial [87] .
Cdc42 actúa a través de varios mecanismos para estimular el ensamblaje AJ. Promueve el transporte de VE-
cadherina después de Golgi a AJs [88] y controla la unión de α-catenina con β-catenina y la interacción del
complejo VE-cadherina con el citoesqueleto de actina [84] . Además, Cdc42 controla la organización de actina
pensó dos vías: primero a través de sus efectores PAK2 y PAK4 que regulan la actomiosina de unión, y en
segundo lugar a través de N-WASP que se requiere para el ensamblaje de la actina de unión [87] . También
se ha informado que Cdc42 actúa a través de la proteína quinasa C PKC1 atípica para mediar en la adhesión
de células endoteliales in vivo [89] .
En general, la permeabilidad endotelial refleja las acciones combinadas de múltiples moléculas de
señalización, incluidas pequeñas GTPasas, quinasas y fosfatasas, que modifican directamente las moléculas
de unión y actúan sobre el citoesqueleto de actina asociado para alterar la integridad de la unión ( figura 2).
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4. Señalización en las uniones endoteliales y migración transendotelial

leucocitaria
La TEM de leucocitos es esencial tanto en inmunosurvencias como durante el daño o la infección
tisular [90] , [91] . El TEM es un proceso único en el cual un leucocito se comprime a través del endotelio e
implica una señalización dinámica entre los leucocitos y las EC que conduce a los cambios en la morfología
requerida para TEM ( Fig. 3 ).
Los leucocitos cruzan el endotelio a través de una cascada de pasos múltiples que involucra la captura,
enrollamiento, adhesión y rastreo de leucocitos, seguida de migración de leucocitos a través del endotelio en
presencia de fuerzas de cizalla ejercidas por el flujo sanguíneo ( Fig. 3 ) [92] , [93] , [94] . Los leucocitos
pueden atravesar el endotelio a través de dos rutas diferentes: paracelular, a través de las uniones célula-célula,
o transcelular, a través del cuerpo celular endotelial [95] , [96] . La elección de la ruta depende del tipo de
célula de transmigración, el sitio de TEM y el tipo de endotelio vascular [97] , [98]. Además, la ruta de la
diapedesis depende de la integridad de la unión endotelial: es más probable que las células T tomen una ruta
transcelular cuando las uniones se fortalecen [99] .
Varias moléculas de adhesión expresadas por EC contribuyen a TEM, incluyendo ICAM-1 y / o VCAM-1 en
la superficie luminal y PECAM-1 y / o JAM en las membranas basolaterales [8] , [93] , [100] . La expresión
y la regulación de estas moléculas depende de la tensión de cizallamiento del flujo de sangre, las citoquinas
proinflamatorias y quimiocinas, el lecho vascular y la rigidez del tejido [101] , [102] .

4.1. Arrastre de leucocitos y extensión endotelial de estructuras de atraque

Los leucocitos inicialmente se arrastran sobre CE antes de arrestar y transmigrar. La interacción de la integrina
leucocitaria LFA-1 / αLβ2 con ICAM-1 activa RhoA [94] . RhoA promueve la rigidez de la superficie
endotelial, mejorando la migración de leucocitos sobre ella y, por lo tanto, la capacidad de los leucocitos para
encontrar un sitio para TEM. ICAM-1 activa RhoA a través de RhoGEF LARG (Rho GEF asis- tido por
leucemia, ARHGEF12), y el agotamiento de LARG endotelial reduce la proliferación de leucocitos en los
CE [103] .
Los CE a menudo extienden protuberancias dinámicas similares a microvellosidades conocidas como
estructuras de atraque o copas transmigratorias alrededor de leucocitos adherentes ( Figura 3 ) [94] . Estas
estructuras contribuyen a TEM, probablemente al aumentar el área de contacto leucocito-endotelio con una
interrupción mínima de la barrera y para ayudar a los leucocitos a extender las protuberancias para cruzar el
endotelio [104] . Inicialmente ICAM-1 y VCAM-1 se agrupan en estructuras similares a anillos alrededor del
leucocito, seguidas por la protrusión de la membrana apical. El anclaje de ICAM-1 al citoesqueleto de actina
a través de proteínas adaptadoras, tales como filamina y cortactina, es esencial para la formación de anillos
ICAM-1 y leucocitos TEM [105] , [106] , [107] .
Se requiere Rac1 para la agrupación ICAM-1, mientras que RhoG controla la protrusión de la membrana ( Fig.
3 ). RhoG se activa mediante la unión de ICAM-1 al GEF SGEF específico de RhoG [108] . ICAM-1 también
se asocia y activa el GEF Trio, que activa Rac1 y luego RhoG a través de sus dos dominios
RhoGEF [109] . Curiosamente, la expresión de Trio está fuertemente regulada positivamente por estimulación
de TNFα, lo que sugiere que el ensamblaje de la estructura de acoplamiento está acoplado a la inducción de
ICAM-1 y VCAM-1 [109] .

4.2. Cruzando el endotelio y cerrando el poro de transmigración

Para TEM paracelular, se producen dos eventos de señalización una vez que el leucocito está anclado al
endotelio: internalización VE-cadherina local a través de vesículas recubiertas de clatrina y afluencia de
proteínas de membrana y membrana que incluyen PECAM-1 desde un compartimiento de reciclado de borde
lateral (LBRC) al TEM sitio [110] , [111] , [112] , [113] .
La apertura de la unión implica la señalización de VCAM-1 a VE-cadherina. La interacción de VCAM-1 con
la integrina leucocitaria VLA-4 induce la activación de Rac1 y la producción subsiguiente de especies de
oxígeno reactivo intracelular (ROS) por NADPH oxidasa [114] . Esto a su vez activa la tirosina quinasa rica
en prolina (Pyk2) [115] que luego fosforila VE-cadherina en Tyr658 y Tyr731 dando como resultado la
pérdida local de la función de cadherina VE, apertura de la unión y aumento de TEM ( Fig.
3 ) [36] , [116], [117] , [118] . La inhibición de esta vía, a través de la PI3-quinasa p110α, Pyk2 y Rac1, reduce
TEM [114] , [118] , [119] ,[120] . Rac1, ROS y Pyk2 también inducen la disociación de VE-PTP de VE-
cadherina, dando lugar a un aumento de la fosforilación de tirosina de la cadherina VE y de la internalización
de VE-cadherina facilitando así la transmigración [3] , [31] , [113] , [121] . Además, la señalización
endotelial estimula la contractilidad de la actomiosina de unión y actúa sobre las proteínas de unión célula-
célula, lo que conduce al desensamblaje de la unión transitoria y local esencial para la TEM de los
leucocitos [94] , [122] .
Múltiples proteínas se asocian con la fracción LBRC durante TEM incluyendo PECAM-1, que es importante
para TEM [123] , [124] . La interacción homotípica PECAM-1 inicia el reclutamiento del LBRC al sitio de
interacción leucocitaria. Esto está relacionado con el reclutamiento localizado del canal de Ca2 + TRPC6, que
aumenta el Ca2 + intracelular y se requiere para la etapa final de TEM, similar a PECAM-1 [125] . El aumento
de Ca 2+ intracelular desencadena la contractilidad de la actomiosina por la cinasa de la cadena ligera de
miosina (MLCK), que se requiere para TEM [102]. PECAM-1 también está involucrado en TEM transcelular,
ya que la agrupación de ICAM-1 en EC no es suficiente para promover la vía transcelular si PECAM-1 está
bloqueado [126] .
Endotelial RhoA se activa localmente por ICAM-1 durante TEM a través del reclutamiento de los RhoGEFs
LARG y Ect2 [45] , [97] . La actividad de RhoA es máxima durante la etapa final de extravasación, y media
la remodelación de actina F endotelial para formar estructuras circulares alrededor de leucocitos
transmigratorios, que previenen la pérdida vascular durante la diapedesis leucocitaria y promueven el cierre
de poro y la transmigración [97] .
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5. Conclusiones y perspectivas futuras

La permeabilidad endotelial y la TEM de leucocitos implican mecanismos de señalización intracelular
similares, que incluyen la señalización Rho y Rap GTPasa, la unión célula-célula y la remodelación de la F-
actina, y por lo tanto, ha sido difícil separar los dos procesos de forma mecánica. Sin embargo, una diferencia
clave entre ellos es cuándo y dónde ocurren las señales en EC. Para la TEM de leucocitos, los receptores se
activan localmente en EC debajo y alrededor del leucocito [94] , mientras que para la permeabilidad endotelial
los receptores generalmente se activan en toda la membrana plasmática de la EC y / o las uniones célula-
célula [4] . Además, TEM no implica un aumento en la permeabilidad vascular, sino que existen mecanismos
para asegurar una fuga mínima [36] , [97] ,[127] . Además, los estímulos que conducen a la permeabilidad
vascular generalmente actúan en cuestión de minutos [23] , mientras que la TEM de los leucocitos durante la
inflamación requiere una regulación positiva de los receptores de unión a los leucocitos en los CE [91] .
Aunque varios mecanismos de señalización son similares entre la permeabilidad endotelial y TEM, también
hay señales que difieren, que podrían manipularse para inhibir uno u otro proceso. Por ejemplo, se han
informado diferencias en la fosforilación de la tirosina VE-cadherina entre los dos procesos [36] , [128] . Las
investigaciones futuras deberían identificar cómo estos sitios de fosforilación median los cambios locales
frente a los globales en las uniones de las CE. Además, RhoG hasta ahora solo está implicado en
TEM [108]. Por otro lado, Rap1, RhoA y Rac1 están involucrados en ambos procesos. Sin embargo, es
probable que formen parte de complejos proteicos diferentes porque los receptores transmembrana implicados
en la permeabilidad y TEM son diferentes. Aunque se han identificado varios GEF para contribuir a la
permeabilidad y al TEM, las investigaciones futuras deberían tener como objetivo identificar qué objetivos
aguas abajo y GAP de Rho y Rap GTPasas son críticos para la permeabilidad vascular frente al TEM de los
leucocitos.
A diferencia de los leucocitos TEM, comparativamente se sabe poco sobre la contribución de la señalización
de la CE al cáncer TEM. Se han implicado múltiples receptores en las CE para mediar la TEM de las células
cancerígenas, pero se sabe poco de sus funciones mecánicas más allá de simplemente facilitar la
adhesión [129] . Recientemente, Ephrin-1 se identificó como un ligando en EC que estimula la fosforilación
de la tirosina de EphA2 en las células cancerosas, induciendo la repulsión de las células y conduciendo a la
disminución de TEM de las células de cáncer de mama [130] . Será interesante determinar cómo otros
receptores contribuyen a la señalización dinámica entre las células cancerosas y los EC.
En conclusión, los cambios en la permeabilidad vascular y la TEM de los leucocitos están orquestados por
una combinación de pequeñas GTPasas, proteínas quinasas y fosfatasas, que coordinan los cambios a las
uniones célula-célula endoteliales con el citoesqueleto de actina. Dirigirse a estas moléculas de señalización
podría usarse para reducir la inflamación y las enfermedades autoinmunes.