Análisis cualitativo de secuencia específica de unión de flavonas a ADN Análisis

CUALITATIVA de secuencia específica de encuadernación.

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RESUMEN:
Las flavonas, que se encuentran en la naturaleza en forma de metabolitos secundarios de las
plantas, han mostrado eficacia como agentes anti-cáncer. Hemos examinado la unión de dos
flavonas, 5,7-dihidroxi 3,6,8-trimetoxi-2-fenil-4H-cromen-4-ona (flavona 5,7- dihidroxi-3,6,8-
trimetoxi; flava) y 3,5- dihidroxi-6,7,8- trimetoxi-2-fenil-4H-cromen-4-ona (Flavona 3,5-dihidroxi-
6,7,8-trimetoxi; FlavB), al ADN RF phiX174 usando ensayos de actividad de la enzima de
restricción empleando las enzimas de restricción Alw44, AvaII, BssHII, DraI, MluI, NarI, NciI, NruI,
PstI, y XhoI. Estas enzimas poseen diferentes diana y secuencias flanqueantes que permitan la
observación de análisis de la secuencia especificidad. El uso de enzimas de restricción que
escinden una vez con una mezcla de sustratos de ADN superenrollado y relajado proporciona para
la observación de los efectos sobre la unión topológicas. Flava y
FlavB mostrar diferentes especificidades de secuencia en su respectiva unión a phix. Por ejemplo,
con el ADN relajado, flava muestra la inhibición de la escisión con DraI (Reacción en el lugar 50
TTTAAA) pero no BssHII (50 GCGCGC) mientras FlavB muestra los resultados opuestos. También
se observa evidencia de especificidad tolological, el modelado molecular y el análisis
conformacional de las flavonas sugiere que el anillo de fenilo de FlavB es coplanar con el anillo de
flavonoide mientras que el anillo de fenilo de flava está en un ángulo con respecto al anillo de
flavonoides. Esto puede explicar los aspectos de la secuencia observada y especificidades
topológicos en los efectos sobre la actividad de la enzima de restricción. # 2013 Wiley
Periódicos, Inc. Biopolímeros 99: 530-537, 2013.

Palabras clave: flavonas; ADN; especificidad de secuencia.

INTRODUCCIÓN

Flavonoids comprenden una gran familia de compuestos caracterizado por un phenylbenzopyrone

C6-C3-C6 backbone.1 Se subclasifican aún más como flavonas, flavonoles, flavanonas,
flavonoides, antocianidinas, iso- flavonas y chalconas, contingentes de sustituyente
distintivo acuerdos sobre el anillo C3. Estos relativamente compuestos pequeños se encuentran
por doquier en la naturaleza como secundaria metabolitos vegetales. Ellos han sido implicados en
una la riqueza de los mecanismos fisiológicos que confieren protección contra una amplia gama de
patologías, incluyendo varios tipos de cáncer, diabetes y cardiovasculares diseases.2-6 Los
estudios también apuntar a sus muchas funciones medicinales como anti-inflamatorio, anti-alérgica,
antioxidante, antifúngica, antiviral y agents.7,8 Las propiedades anticancerígenas de estos
compuestos tienen especial interés estimulado en los últimos años entre los científicos comunidad
debido a la naturaleza altamente nocivo de la moderna fármacos quimioterapéuticos sobre los
tejidos sanos. Como flavonoides ocurrir naturalmente en nuestras dietas y por tanto son no tóxicos,
la comprensión
las características estructurales que confieren su anti-tumor actividad y sus modos de acción
podrían llevar a avances en el desarrollo de más eficaz y mucho menos citotóxico tratamientos
contra el cáncer.

Estructura de afinidad múltiple estudios demuestran la relación que flavonas como la quercetina
(3,5,7,3 ', 4'-OH), kaempferol (3,5,7,4'-OH), y flavopiridol, un apigenina (5,7,4'-OH) derivado, son
capaces de intercalarse en el ADN duplexes.9,10 La planaridad del esqueleto de
benzopirona flavonas les permite intercalar fácilmente las hélices de ADN como sugerida por los
estudios que comparan estos a otro menos planar y flavonoides no planas tales como flavanonas y
catequinas respectivamente. También se han encontrado flavonas para promover transiciones de
ADN de orden superior (es decir, B a A-ADN) sobre la formación de complejos,
lo que sugiere la posibilidad de unión preferencial a secuencias asociadas con estas
conformaciones.

La selectividad secuencia mostrada por las flavonas en anterior estudios fue modest.11 Las
flavonas en este estudio son altamente
sustituido en contraste a los utilizados en la interacción ADN anterior estudios. Estas
modificaciones estructurales podrían alterar o
mejorar la secuencia de selectividad. Ensayos de actividad de la enzima de restricción se han
empleado para examinar la secuencia de selectividad en la unión de una variedad de las moléculas
de ADN. Una metodología para estos ensayos era descrito recientemente por Winkle y
compañeros de trabajo. Secuencia y selectividad topológica se observó para las moléculas de
unión al surco tales como netropsina, intercaladores tales como ametantrona y actinomicina, y el
aglutinante covalente, cisplatin.12 Este
metodología resultó ser un medio rápido para examinar ligando de unión al ADN.

En este artículo, se describen los resultados de la restricción ensayos de actividad enzimática con
flavona A y B. El uso de una mezcla phiX174RF ADN relajado y superenrollado nos
permite examinar selectividad topológico. Once de restricción diferente
enzimas que escinden este ADN una vez o dos veces fueron elegidos para proporcionar una
variedad de secuencias. Los sitios de escisión de estos enzimas también tienen diferentes
secuencias de acompañamiento. Por lo tanto, secuencia de selectividad en la unión de flavona
pudo ser determinada. Los resultados de estos estudios indicaron que los dos flavonas
hacen poseen diferentes especificidades de secuencia y topológicas derivadas a partir de sus
diferencias estructurales.

MATERIALES Y METODOS

DNA RF PhiX-174 y todas las enzimas de restricción (Tabla I) con su respectivos tampones se
obtuvieron de Promega / Fisher Scientific. El ADN PhiX-174 RF obtenido era una mezcla de
superenrollado y moléculas de ADN circular relajado. Los compuestos adicionales utilizados
para crear el tampón de electroforesis en geles de agarosa y se obtuvieron todos de Fischer
Scientific.

Procedimiento obtener Flavone A (5,7-dihidroxi-3,6,8-trimethoxyflavone)

1,5 kg de G. elegans flores secas se extrajeron con CHCl3. los extracto se concentró mediante
vacío seco, disolvió en MeOH y se filtró para eliminar las grasas y los hidrocarburos. El extracto se
concentró y disuelto en C6H6, seguido por cromatografía en gel de sílice usando C6H6: Me2CO
(19: 1) como eluyente. 50 mg de la flavonoide era purificada a partir de las fracciones 12-18 por
cristalizaciones en hexano. los compuesto se identificó por sus propiedades físicas y
espectroscópicas como 5,7-dihidroxi 3,6,8 trimethoxyflavone (Figura 1A), Pf 170- 1718C, 1 H RMN
(300 MHz) 3,86 (3H, s), 3,97 (3H, s), 4,20 (3H, s), 7,50-7,6 (3H, m), 8.8 a 8.16 (2H, m).

Procedimiento obtener Flavone B (3,5-dihidroxi-6,7,8- trimethoxyflavone)

200 g de A. bogotensis hojas frescas se sumerge en CHCl3 para 20 min. El extracto se filtró, se
concentró y se disolvió en caliente
MeOH. El extracto frío se filtró para eliminar las grasas y se concentró Una vez más; el sólido
obtenido se disolvió en hexano caliente. 100 mg del flavonol purificado se obtienen mediante
recristalizaciones sucesivas en hexano. El compuesto se identificó por su físico y las propiedades
espectroscópicas como 3,5-dihidroxi-6,7,8-trimethoxyflavone
(Figura 1B), Mp149-1508C, 1 H RMN (300 MHz) 3,86 (3H, s), 3,97 (3H, s), 3,99 (3H, s), 4,12 (3H,
s), 7,30-7,45 (3H, m), 8,70-8,82 (3H, m), 11,46 (1H, s).

Enzima de restricción Ensayos de actividad Las flavonas se disolvieron inicialmente en cloroformo.

apropiado cantidades de una de las flavonas se colocaron en tubos de microcentrífuga y el
cloroformo se evapora antes de la adición de la restricción enzima soluciones de ensayo. Cada
muestra contenía 0,4 lg de ADN. Flavona concentraciones variaron de 0 a 62 ligando / pb. Las
muestras fueron tamponadas con el tampón de enzima de restricción apropiada para cada enzima
de restricción. Las muestras se equilibraron durante 30 min a 378c antes de la adición de la enzima
de restricción. después de la adición de tres unidades de una enzima de restricción, se digirieron
muestras para 30 min a 378c. Las reacciones se inactivaron mediante la adición de SDS a una
concentración de 0,2% seguido de calentamiento a 658C durante 5 min.

Tabla I enzima de restricción sitios de escisión en PhiX-174 con secuencias flanqueantes.

Electroforesis En Gel
Los productos de digestión se separaron mediante electroforesis en gel en 1% geles de agarosa.
Los ensayos se llevaron a cabo con una muestra de control (carril uno en las figuras de gel) que
contiene sólo el ADN tamponada a la misma concentración
de los ensayos digeridos. Este carril de control contiene dos bandas que corresponde al ADN
circular relajado (banda superior) y la
ADN superenrollado (banda inferior). La segunda muestra de control contenía Una mezcla de ADN
relajado y superenrollado digerido en ausencia de cualquiera de flavona. Para estas muestras, en
los geles o bien hay una banda de ADN lineal para las enzimas que escinden una vez o dos más
pequeños Bandas de ADN para las enzimas que escinden dos veces. También puede haber
bandas a partir del ADN relajado y superenrollado sin digerir con cierta restricción enzimas. Los
carriles 3-6 contienen creciente concentración de ligando, o bien 5,7-dihidroxi-3,6,8-trimetoxi
flavona o 3,5-dihidroxi Flavona 6,7,8-trimetoxi, en adelante, flavonas A y B (Flava y FlavB),
respectivamente, para la simplicidad. Los geles se tiñeron con bromuro de etidio y las intensidades
de las bandas analizadas con un gel de Lógica 100 sistema de escáner de imágenes de gel óptico
(Kodak, Rochester, NY).

Modelado Molecular
El modelado de flavonas A y B se obtuvo mediante el uso de la HyperChem 8.0.8 paquete (PM3) y
el gradiente de RMS fue de 0,01 kcal / mol. La optimización estructural utilizado fue el conjugado
gradiente Polak Algoritmo Ribiere. Análisis conformacional de flavonas A y B fue realizado
utilizando el programa de búsqueda conformacional de la HyperChem paquete. Gradiente de RMS
de 0,01 kcal / mol, con un ángulo de torsión acíclico (1-2-1'-2 ') variación de 6 608 6 1808, un
criterio de máxima aceptación de 5 kcal / mol por encima de la mejor, con un máximo de 250
iteración. Las estructuras se consideraron un duplicado si la energía estaba dentro 0,05 kcal / mol,
la distancia entre los átomos correspondientes era inferior a 0,5 A, o si la distancia entre la torsión
correspondiente ángulos fue inferior a 158. Las estructuras reportadas son los más
bajos confórmeros de energía para cada búsqueda conformacional.

FIGURA 1 A. Estructura de flavona 5,7-dihidroxi-3,6,8-trimetoxi. B. Estructura de 3,5-dihidroxi-

6,7,8-trimetoxi
flavona.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Para probar la afinidad del ligando para diversas secuencias, se prepararon ensayos con el método
anteriormente descrito para 11 enzimas de restricción (Tabla I) con diferentes sitios de escisión en
phix-174. La Figura 2A muestra la digestión de phix-174 por Pst I (reacción secuencia CTGCAG)
en presencia de flavona B. control A la muestra se llevó a cabo en el carril 1 contiene ADN única
tamponada a la misma concentración de los ensayos digeridos. Los dos distinguibles bandas por
este carril se corresponden con la relajada forma de ADN más cerca de los pozos de la muestra, y
el superenrollado Banda (SC) DNA debajo de ella. Carril 2 contiene ADN digerido con Pst I que
muestra el producto de digestión de ADN lineal.
FIGURA 2: 1% de agarosa geles de electroforesis de la digestión de DNA por phiX174RF
especifica enzimas de restricción en presencia de flavona especificado. Los geles se tiñeron con
bromuro de etidio para visualizar las bandas de ADN. En el etiquetado de gel, R5 ADN Relajado,
SC 5 Supercoiled ADN, L 5 lineal de ADN, Frag 5 fragmentos de ADN (por Dra I, que escinde ADN
RF phiX174 dos veces). para todos geles, los carriles de gel fueron como sigue: Carril 1: DNA
tamponada; carril 2: DNA digerido con la especificada enzima de restricción; carriles 3-6 ADN
tratado con concentraciones crecientes de la flavona especificado seguido por la digestión con la
enzima de restricción especificada. (A) la digestión por Pst I en presencia de FlavB. (B) La
digestión de phix-174RF por la Dra-I en presencia de flavona A. (C) La digestión por la Dra I en la
Presencia de FlavB. (D) Digestión por Stu I en presencia de flava.
Lanes 3-6 contienen ADN digerido con Pst-I en presencia de concentraciones crecientes de
flavona B. Para ensayar los efectos del aumento de [FlavB], la intensidad de la banda de ADN
digerido en cada carril se comparó con la intensidad de la ADN relajado y a la intensidad de la
ADN-en que el gel de superenrollado carril. El gel sugiere que el aumento de la concentración
de Flav B produce una disminución en la cantidad de ADN lineal lo que sugiere que la presencia de
productos de B inhibe Flav
la escisión de ADN PhiX-174RF por la enzima de restricción Pst I. Las cifras son 2B-2D geles para
la digestión de otra restricción
enzimas en presencia de cualquiera de Flav A o B. Los análisis Flav de estos y los otros geles se
realizaron de la misma manera
como FlavB / Pst I gel.

La Figura 2B es el gel de los resultados de la digestión por Dra I en la presencia de cada vez
mayor [FlavA]. En este gel ninguna digestión parcial la cinta de ADN lineal es evidente. A medida
que el [Flava] aumenta, las cantidades de los dos fragmentos de ADN del producto disminuye y las
cantidades de ADN superenrollado y lineales tanto de inhibición del aumento que indica de Dra I
tanto sobre el ADN superenrollado como sobre relajado.

En la Figura 2C, los resultados de la digestión por la Dra I dan (TTTAAA) en presencia de FlavB.
Dra I escinde el ADN phiX174RF en dos ocasiones, a ser posible dando lugar a dos bandas de
productos. (Eso Cabe señalar que, debido a una ligera variación en el gel condiciones de tampón,
el fragmento lineal mayor viajaron más en el gel que el ADN superenrollado en contraste a lo que
es observado en la Figura 2B). Digestión incompleta en un resultado del sitio, como se muestra en
el gel, en presencia de una banda de ADN lineal . El aumento de [FlavB] produce una disminución
en los dos productos de la digestión completa, un aumento en la digestión parcial de ADN lineal y
en aumento en el ADN relajado pero ningún aspecto de ADN superenrollado. Esto refleja una
inhibición de relajado pero no de ADN superenrollado.

Figura 2D contiene los resultados de gel para la digestión por Stu I (AGGCCT) en presencia de
aumento de [flava]. Stu I tiene un sitio de escisión, produciendo un producto de ADN lineal.
Inicialmente, la presencia de Flava produce un aumento de la escisión de la ADN relajado.
Posteriormente, en mayor [Flava], la escisión de el ADN lineal es inhibida. Con el ADN
superenrollado, solamentese observó inhibición.

Para más visualización de los efectos de FlavA o de FlavB sobre la actividad de la enzima de
restricción, los argumentos de muestra digestión% control de digestion /% digestión frente [ligando]
/ [ADN en la base de pares] se construyeron utilizando las intensidades de bandas gel.
Observación de digestión de la muestra% /% de control de la digestión valores inferiores a 1 son
una indicación de una inhibición de la escote. La observación de los valores superiores a 1 son una
indicación de mejora de la escisión. Este último se observó a bajas concentraciones en ciertos
casos. La Escisión mejorada era seguido de la escisión inhibida a concentraciones de ligando más
altas. Las Figuras 3-6 ilustran los gráficos representativos de las diversas formas en que es ligando
o interrumpido la restricción de la actividad de la enzima.

La figura 3, muestra los datos para la reacción de la enzima de restricción Alw 44 (secuencia de
reacción GTGCAC) en el presencia de cada vez mayor cantidad de flavona A (0-62 ligando / pb).
Como se muestra en la figura, la digestión% del ADN relajado no es afectado por la cantidad de
moléculas de ligando presente por Pb de ADN lo que sugiere que la actividad de la enzima no se
ve afectada por la presencia de ligando. En contraste, la digestión% de la muestra de ADN
superenrollado a disminuir a medida que la concentración de ligando aumenta. Esto sugiere que el
ligando está inhibiendo enzimática la digestión mediante la unión ya sea directamente en, o muy
cerca la secuencia de restricción. En el caso de Alw 44, la restricción El sitio se encuentra en el pb
4779 en phix-174. Resultados similares fueron observado tanto para Flav A y Flav B con la
restricción enzimas Ava II (GGACC) y Nru I (TCGCGA), aunque con menos inhibición observada.
Con Flava, la inhibición de la escisión en mayor [flava] superenrollado de ADN se observó con Stu I
(AGGCCT) y Xho I (CTCGAG). En menor [Flava], no se observó aumento de la hendidura. Tal
inhibición efectos no se observaron con FlavB-lo que sugiere que la alteración estructura de
ligando puede alterar la unión al ADN en cierta ubicaciones.

FIGURA 3 Parcela de digestión% control de ejemplo /% digestión vs. [FlaA] / [ADN en pb] para la
digestión de phix-174RF por la restricción enzima Alw 44 en presencia de flavona A.
La Figura 4 muestra los resultados para el efecto de la presencia de flava de la reactividad de Dra I
(sitio TTTAAA reacción).
Como se muestra,% digestión de ADN relajado disminuye con aumento de la concentración de
ligando, mientras que la de la superenrollado ADN no lo hace. La actividad enzimática es inhibida
en el ADN relajado, pero no el ADN superenrollado. resultados similares se obtuvieron para Nar I
(GGCGCC) en presencia de flavona A.

FIGURA 4 Parcela de digestión% control de ejemplo /% digestión vs. [Flava] / [ADN en pb]
para la digestión de phix-174RF por la restricción enzima Dra I en presencia de flavona A.
La Figura 4 muestra los resultados para el efecto de la presencia de flavA sobre la reactividad de
Dra I (sitio TTTAAA reacción). Como se muestra,% digestión de ADN relajado disminuye con el
aumento de la concentración de ligando, mientras que la de la superenrollado ADN no lo hace. La
actividad enzimática es inhibida en el ADN relajado, pero no el ADN superenrollado. resultados
similares se obtuvieron para Nar I (GGCGCC) en presencia de flavona A. Con FlavB, la inhibición
de ADN relajado pero no el ADN superenrollado se observó con BssH II (GCGCGC), Stu I, y Xho I.
El contraste en estos datos con los de la Figura 3 y con los resultados para las enzimas
mencionado anteriormente sugiere que la topología del DNA puede jugar un papel importante en el
unión de estos flavonas a ADN-al menos en ciertos lugares.
Estos datos también sugieren especificidad de secuencia-la inhibición de BssH II por FlavB pero no
por Flava, aunque los resultados también sugieren que la especificidad no es más que una GC vs
una preferencia AT.
Figura 5 se presentan los resultados para FlavB con Dra I. Aquí tanto la supercoiled y las hebras
relajadas son inhibidas por aumento de la concentración de ligando. Con la restricción enzimas Mlu
I (ACGCGT) y Pst I (CTGCAG), ambos flava y FlavB produjo inhibición con relajado y
superenrollado ADN como sustrato. Esto, tal vez, sugiere una falta de un topológico preferencia en
la unión de cualquiera de flavona en el locales de estos sitios de escisión enzimática. ,Figura 6 da
resultado para los efectos de Flav A sobre la reactividad de Stu I. Con ADN superenrollado como
sustrato, flava producen inhibición de la escisión. Con ADN lineal como sustrato, mejorado la
escisión por Stu me observé a baja [Flava], que es decir, para los que se observó una inhibición del
intervalo de concentración con otras enzimas, con inhibición se produce en mayor [FlaA]. La
inhibición de la actividad de la enzima de restricción puede resultar Del flava de unión en o cerca
del sitio de enzima de restricción.

FIGURA 5% Parcela de digestión de control muestra /% digestión vs. [FlavB] / [ADN en pb]
para la digestión de phix-174RF por la restricción enzima Dra I en presencia de flavona B.

Una mejora en la reactividad podría surgir de la cota Flava la alteración de la conformación del
ADN para producir un sustrato de ADN que es más reactivo con la enzima de restricción. En un
caso, la restricción por BssH II en presencia de flavona A, no inhibición de cualquiera de la relajado
de superenrollado hebras era discernible, lo que sugiere que el ligando no se unirse en o cerca de
ese sitio de escisión. La Tabla II resume los resultados para estos restricción ensayos de actividad
enzimática con Flava y FlavB. Las abreviaturas PR o PSC se utilizaron para distinguir los casos
donde sólo inhibición leve se observó a partir de los casos en que importantes se observó
inhibición. Como se ha señalado anteriormente, en concentraciones bajas de cualquiera de
flavona, la mejora de la escisión era observado con ciertas enzimas. En estos casos, E (por
mejora) aparece en la Tabla II. Para estos casos, la inhibición se observó a concentraciones más
altas de flavona. A medida que los resultados en esta tabla espectáculo, los dos flavonas sí
muestran evidencia de secuencia y especificidad topológica en su unión. Si el unión de las flavonas
eran independiente de la secuencia, la reactividad en todos los sitios se verían afectados de una
manera similar, con independencia de la restricción empleada enzima. La existencia de secuencia
de selectividad se demuestra por la observación de que algunas enzimas de restricción fueron
inhibidos, pero otros no.

FIGURA 6 Parcela de digestión% de control de muestra /% digestión vs. [Flava] / [ADN en

pb] La digestión de phix-174RF por la restricción enzima Stu I en presencia de flavona A.

Del mismo modo, la existencia de especificidad topológica se demuestra por la diferencia en los
efectos, con cada ADN, con cierta enzimas en cualquiera de ADN superenrollado o relajado.
La comparación de las secuencias de los sitios de reacción para enzimas para las que la inhibición
(o potenciación) de la reactividad se observó sugiere que la secuencia exacta es la selectividad no
una simple. Esto podría sugerir que las flavonas son en realidad la unión a secuencias que
flanquean al menos algunos de la sitios de enzimas. Esta propuesta es apoyada por la observación
que las enzimas con secuencias de reconocimiento similares, por ejemplo, XhoI (CTCGAG) y
Alw44 (GTGCAC), dar diferentes resultados para ambos flavonas.
También es posible que la naturaleza de secuencias flanqueantes, por ejemplo, ricas en AT frente
rica en GC, afecta a la unión. Con base en el número de restricción enzimas para las que se
observó ningún efecto con el ADN relajado, Flava podría ser un poco más selectivo en su
secuencia la unión a un ADN relajado. A la inversa, puede ser algo FlavB más selectivos en su
unión a ADN superenrollado. Flava posee un grupo metoxi unido a carbono C3 mientras FlavB
tiene un grupo hidroxi en esta posición. Esta estructural diferencia podría afectar a la planaridad de
las moléculas por que afecta a la colocación del anillo de fenilo. Las estructuras de los confórmeros
más estables de Flava y FlavB basada en modelado molecular se dan en la Figura 7.
El modelo sugiere que el anillo de fenilo de FlavB es coplanar con el flavonoide anillo mientras que
el anillo fenilo de Flava está fuera del avión. Este podría afectar a la capacidad de estas moléculas
para interactuar con el ADN, especialmente si la interacción es a través de la intercalación.
Intercalación se ha sugerido como el modo de unión de diversas estructuras .10 flavonoide una
diferencia estructural de este tipo podría cuenta de las diferencias en la selectividad de unión
observados con Flava y FlavB. Cuando se compara con los resultados de estudios anteriores,
estos datos sugieren que los grados más altos de sustitución, es decir, la metilación de grupos
hidroxilo, flavona A y B flavona confieren un mayor grado de especificidad en la unión duplicar
cadena de ADN. Por ejemplo, el trabajo de Ragazzon et al., 11 indica diferencias modestas en la
unión de una especies flavona variedad de poli (DAT) frente a poli (dGC). Este estudio, realizado
utilizando menos de 2 mg de cada flavona, proporciona evidencia por el valor de la enzima de
restricción ensayos de actividad como un método para la detección de unión al ADN propiedades
de moléculas nuevas o novedosas, como los productos naturales.

FIGURA 7 optimizado estructuras de flavona A (A) y B flavona (B) usando el método semi-
empírico PM3.

Para este tipo de moléculas, los métodos tradicionales para el estudio de ADN propiedades de
unión, por ejemplo, titulaciones UV, podrían ser cil culto a utilizar debido a la limitada disponibilidad
de las moléculas y / o debido a las características físicas, por ejemplo, limitado solubilidad en agua,
de las moléculas.

CONCLUSIÓN
Los resultados presentados sugieren que los dos flavonas en este estudio se unen al ADN con
secuencia y especificidad topológico.
Los resultados también sugieren que la diferencia estructural entre los dos flavonas altera la
secuencia y especificidad topológica de la interacción con el ADN. Además, este estudio
demuestra la utilidad de los ensayos de actividad de enzimas de restricción como un método para
evaluar rápidamente la unión de moléculas nuevas a DNA