Artikel ilmiah sidang sarjana 2017

Aplikasi Desain Faktorial Dalam Optimalisasi Ekstraksi Pucuk Daun Afrika (Vernonia
amygdalina Del.) Dan Uji Antioksidan Formlua Optimum Dengan Metode DPPH

Adani Adilarayani
08121006060

PS. Farmasi FMIPA Universitas Sriwijaya

Abstract

Antioxidant are compounds who can resist free radical formation in the body. Free radical are
reactive molecule can cause death cells. Natural compounds that are able to act as antioxidants are
phenol, flavonoids, and alkaloid. One of the plants that are rich in this compounds is Vernonia
amygdalina Del.This research is to optimize yield of rendement and total phenolic content from
young african leaves (Vernonia amygdalina Del.) by investigating the effect of ethanol concentrations
(30, 70, and 96% v / v) and stirring time (30, 60, and 75 min) on phenol extraction using factorial
experiments. The difference in stirring time and solvent concentration with different polarity affects
the acquisition of TPC and the yield. The optimum treatment of extract with 71,9% ethanol
concentration and stirring time for 55,76 minutes was done by 2,2'-diphenyl1-picrilhidrazil (DPPH)
antioxidant test to measure antioxidant capacity of young african leaves extract. The highest total
phenolic content of 201,45 mg GAE/g and a yield of 34,21%. It also shows the antioxidant power of
440,053 .

Keywords(s): Vernonia amygdalina Del, factorial design, stirring time, solvent concentration,
2,2'-diphenyl-1-picrilhidrazil

Abstrak

Antioksidan merupakan senyawa yang mampu mencegah pembentukan senyawa radikal

bebas dalam tubuh. Senyawa radikal bebas sangat reaktif sehingga dapat menyebabkan kerusakan dan
kematian sel. Senyawa alam yang diketahui bertindak sebagai antioksidan adalah fenolik, flavonoid,
dan alkaloid. Salah satu tumbuhan yang kaya akan kandungan tersebut adalah Vernonia amygdalina
Del. Penelitian ini dilakukan untuk mengoptimalkan hasil rendemen dan kandungan total fenolik dari
pucuk daun afrika (Vernonia amygdalina Del.) berdasarkan pengaruh konsentrasi etanol (30, 70, dan
96% v/v) dan waktu pengadukan (30, 60, dan 75 menit) terhadap ekstraksi fenolik menggunakan
percobaan faktorial. Perbedaan waktu pengadukan dan konsentrasi pelarut dengan kepolaran yang
berbeda mempengaruhi perolehan TPC dan rendemen. Berdasarkan analisis desain expert didapatkan
perlakuan optimal ekstraksi dengan pelarut etanol 71,9 % dan waktu pengadukan selama 55,76 menit
yang kemudian dilakukan uji antioksidan dengan metode 2,2'-diphenyl-1-pikrilhidrazil (DPPH) untuk
mengukur kapasitas antioksidan ekstrak pucuk daun afrika. Ekstrak perlakuan optimal menghasilkan
kandungan fenolik total tertinggi sebesar 201,45 mg GAE/g dan rendemen sebesar 34,21%. Hal ini
juga menunjukkan kekuatan antioksidan sebesar 440,053 .

Kata kunci: Vernonia amygdalina Del, desain faktorial, waktu pengadukan, konsentrasi pelarut,
2,2'-difeni1-1-pikrilhidrazil
E-mail : adaniadila@yahoo.co.id

I. PENDAHULUAN sering digunakan adalah maserasi, karena alat

Senyawa metabolit sekunder telah
banyak digunakan untuk zat warna, racun,
aroma makanan, dan obat-obatan. Teknik
mengisolasi senyawa metabolit sekunder dari
suatu bahan alam dikenal sebagai ekstraksi
(Depkes RI, 2000). Metode ekstraksi yang
dan cara ekstraksi yang digunakan sederhana,
selain itu dapat digunakan untuk zat yang
tahan dan tidak tahan pemanasan. Menurut
Ramadhan dan Phasa (2010) keberhasilan
maserasi dipengaruhi beberapa faktor yaitu
penyiapan bahan, ukuran partikel, pelarut,

PS. Farmasi FMIPA UNSRI Page 1


waktu pengadukan, suhu, dan proses
pemisahan pelarut dari hasil ekstraksi.
Konsentrasi pelarut dan waktu
pengadukan yang optimal dapat menyari
senyawa aktif dengan baik dan selektif,
optimalnya suatu pelarut dalam menyari
ekstrak dapat dilihat dengan melakukan suatu
proses optimalisasi. Upaya untuk
mendapatkan konsentrasi optimal dapat
diperoleh dengan menggunakan optimalisasi
berdasarkan metode desain faktorial. Metode
desain faktorial adalah metode yang
digunakan untuk penentuan efek dari
beberapa faktor dan interaksinya. Desain
faktorial memiliki keuntungan antara lain
yaitu efisiensi maksimum dalam
memperkirakan efek yang dominan, dapat
mengidentifikasi interaksi antar masing-
masing faktor, dan maksimal dalam
penentuan data karena semua efek utama dan
interaksi dihitung dari semua data (Bolton
and Bon, 2000).
Salah satu tumbuhan yang kaya akan
metabolit sekunder adalah Vernonia
amygdalina Del. (tumbuhan daun afrika).
Berdasarkan hasil uji skrining fitokimia yang
dilakukan Atangwho (2009) daun afrika
(Vernonia amygdalina Del.) mengandung
senyawa kimia golongan fenolik. yang
dianggap memainkan peran yang sangat
penting untuk pencegahan kerusakan oksidatif
dalam sistem kehidupan (Perron et al., 2008).
Keberadaan kandungan fenolik pada
daun afrika terakumulasi pada tingkat
maturasi tertentu. Penelitian Lestari (2016)
menunjukkan bahwa daun afrika bagian
mature memiliki kandungan fenolik sebesar
105,2 mg GAE/g. Senyawa fenolik
terakumulasi pada tingkat maturasi tertentu,
daun muda umumnya memiliki kandungan
fenolik yang tinggi. Berdasarkan uji
pendahuluan yang dilakukan terhadap ekstrak
etanol daun mature dan pucuk daun afrika
didapatkan hasil bahwa pucuk daun afrika
memiliki kandungan fenolik lebih tinggi
sebesar 199,02 mg GAE/g dibanding daun
mature sebesar 173,96 mg GAE/g. Hasil
tersebut menunjukkan bahwa komponen
fenolik dari pucuk daun afrika berpotensi
memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi
Berdasarkan data tersebut maka perlu
dilakukan pengukuran aktivitas antioksidan.
Metode uji antioksidan yang digunakan dalam
penelitian ini adalah metode DPPH. Metode
ini merupakan metode yang sederhana, cepat,
PS. Farmasi FMIPA UNSRI
Artikel ilmiah sidang sarjana 2017
dan mudah dilakukan. Hal ini dikarenakan
ekstrak yang diuji dengan DPPH dapat
langsung diukur absorbansinya dengan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang
gelombang (λ) maksimum untuk pengujian
reduksi radikal dari antioksidan (Oliveira,
2011).
Penelitian mengenai optimalisasi
ekstraksi dari pucuk daun afrika dengan
desain faktorial sangat penting untuk
dikembangkan sebagai antioksidan ataupun
produk olahannya. Hal tersebut
melatarbelakangi penelitian ini untuk
memperoleh kandungan fenolik dan nilai
rendemen tertinggi dengan optimalisasi
ekstraksi pucuk daun afrika berdasarkan
variasi konsentrasi pelarut dan waktu
pengadukan, serta mengetahui nilai aktivitas
antioksidan formula optimum ekstrak yang
diperoleh.
2. METODOLOGI PENELITIAN
2.1 Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dikerjakan dari bulan
September 2016 sampai dengan April 2017.
Determinasi tanaman dilakukan di Herbarium
ANDA, Universitas Andalas. Proses
preparasi, ekstraksi dan uji fitokimia
dilakukan di Laboratorium Biologi Farmasi
Program studi Farmasi FMIPA Universitas
Sriwijaya. Proses pengujian sampel dilakukan
di Laboratorium Penelitian Kimia FMIPA
Universitas Sriwijaya.
2.2 Alat dan Bahan
2.2.1 Alat
Alat yang digunakan untuk penelitian
ini adalah timbangan analitik (Ohaus®),
magnetic stirrer (IKA® C-MAG HS 4), spin
bar (BRAND®), rotary evaporator
(Yamato® RE301), hot plate, alat-alat gelas
(Pyrex®), spektrofotometer UV-Vis
(Shimadzu Uvmini-1240®), software design
expert®10.
2.2.2 Bahan
Bahan yang digunakan dalam
penelitian ini adalah pucuk daun afrika segar
yang telah dikeringkan, aluminium foil, kertas
Whatman No. 1, silika gel GF254, akuades
(Bratacho®), etanol 96%, 70%, dan 30%
(Bratacho®), pelarut butanol: asam asetat: air
(b:a:w), reagen Folin Ciocalteu (Sigma
Aldrich®), reagen Dragendorff, reagen
Wagner, reagen Mayer, HCl (Paison®),
FeCl3 (Merck®), Na2CO3, asam galat (Sigma
Aldrich®), etanol P.A, serbuk 1,1-Difenil-2-
pikrilhidrazil DPPH (Sigma Aldrich®).
Page 2
 Artikel ilmiah sidang sarjana 2017

2.3 Preparasi Sampel ditambahkan 1 mL H2SO4 2N dan dikocok

Tumbuhan daun afrika segar teratur selama 1 menit hingga terbentuk dua
diperoleh dari Indralaya, Sumatera Selatan. lapisan. Lapisan bawah ditetesi 1 tetes
Pemetikan terhadap pucuk daun dilakukan H2SO4 pekat melalui dinding tabung. Sampel
setelah bunga mulai muncul/ mekar, atau pada positif terpenoid ditandai dengan timbulnya
pucuk tersebut mulai muncul bunga. Daun warna merah-jingga hingga ungu. Sampel
afrika disortasi selanjutnya dikeringkan positif steroid bila terbentuk warna hijau
dibawah sinar matahari dengan ditutupi kain hingga biru.
hitam selama 3 hari. Daun yang telah kering 2.4.5 Uji Tanin
dihaluskan dan diayak hingga didapatkan ekstrak dilarutkan dalam 10 mL
sebuk simplisia dengan ukuran serbuk yang aquadest kemudian disaring dan filtrat
seragam (Soegihardjo, 2013). ditambahkan dengan 3 tetes FeCl3 1 %.
2.4 Skrining Fitokimia Simplisia Sampel yang positif mengandung tanin
2.4.1 Uji Alkaloid ditandai dengan perubahan warna menjadi
Identifikasi alkaloid dilakukan warna hitam kehijauan.
dengan mengambil sebanyak 0,5 gram ekstrak 2.4.6 Uji Saponin
pucuk daun afrika ditambah dengan 1 mL Ekstrak sebanyak 0,5 gram
HCL 2M dan 9 mL akuades dipanaskan dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang
selama 2 menit, didinginkan dan kemudian telah berisikan aquades 10 ml, dikocok dan
disaring. Filtrat yang didapat dibagi menjadi 3 ditambahkan satu tetes larutan asam klorida 2
bagian, masing-masing ditambah dengan 2 N. Tabung reaksi tersebut didiamkan dan
tetes pereaksi Mayer, Wagner, dan diperhatikan ada atau tidak adanya busa
Dragendorff. Hasil positif jika sampel stabil. Sampel mengandung saponin jika
mengandung endapan. terbentuk busa stabil dengan ketinggian 1-3
2.4.2 Uji Flavonoid cm selama 30 detik.
Uji flavonoid dilakukan dengan 2.5 Penentuan Perlakuan Ekstraksi
menggunakan NaOH 10%. Sampel diteteskan Penentuan perlakuan maserasi daun
pada plat tetes kemudian ditambahkan NaOH afrika dirancang dengan desain faktorial 32
10%. Sampel positif mengandung flavonoid pada program DX® 10. yaitu 9 formula pada
ditandai dengan perubahan warna kuning- Tabel 5. Variabel bebas konsentrasi pelarut
orange-merah. etanol dan waktu pengadukan dikombinasikan
2.4.4 Uji Terpenoid dan Steroid pada 3 level (level rendah, sedang dan level
Pengujian dilakukan dengan tinggi). Level konsentrasi pelarut dan level
melarutkan ekstrak dalam larutan amonia waktu pengadukan didapatkan pada literatur
dalam kloroform, kemudian disaring ke dalam menurut Arista (2008).
tabung reaksi. Filtrat yang didapatkan
Tabel 1. Rancangan perlakuan ekstraksi
Faktor Perlakuan
F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F9
30% 70% 96% 30% 70% 96% 30% 70% 96%
Konsentrasi Pelarut X1 ⁄ ⁄ ⁄ ⁄ ⁄ ⁄ ⁄ ⁄ ⁄
Waktu Pengadukan X2 30 30 30 60 60 60 75 75 75
2.6 Pembuatan Ekstrak Pucuk Daun evaporator pada suhu ±60oC selama ±1,5 jam
Afrika sehingga diperoleh ekstrak kental.
Simplisia ditimbang sebanyak 50 gram 2.7 Penentuan Kandungan Total
dengan perbandingan simplisia pelarut (1:10), Fenolik
kemudian dimaserasi menggunakan pelarut 2.7.1 Pembuatan Larutan Induk Asam
etanol P% dan pengadukan selama T (menit). Galat
P mewakili variabel konsentrasi pelarut (%) Pembuatan larutan induk asam galat
sedangkan T (menit) mewakili variabel waktu 1000 µg/ml dibuat dengan cara mengambil
pengadukan. Filtrat yang diperoleh disaring sebanyak 10 mg asam galat dilarutkan dalam
dengan kertas saring hingga diperoleh ekstrak 10 ml etanol p.a, kemudian diencerkan dengan
cair yang bebas dari ampas daun afrika. air suling sampai volume 100 ml (Murtijaya
Ekstrak cair tersebut dipekatkan dengan rotary dan Lim, 2007).

PS. Farmasi FMIPA UNSRI Page 3


2.7.2 Pembuatan Larutan Na2CO3 20%
Sebanyak 10 g Na2CO3 ditambah 50
ml air suling, kemudian didihkan sampai
serbuk Na2CO3 larut sempurna. Setelah itu
diamkan selama 24 jam, disaring dan
diencerkan dengan air suling sampai volume
100 ml (Murtijaya dan Lim, 2007).
2.7.3 Penentuan Panjang Gelombang
Absorbansi Maksimum
Sebanyak 0,1 ml asam galat ditambah
0,25 ml reagen Folin ciocalteau dan 3,95 ml
akuades. Setelah didiamkan selama 3 menit,
masing-masing larutan ditambah 0,75 ml
larutan Na2CO3 20% dihomogenkan,
kemudian absorbansinya diukur pada panjang
gelombang 752 nm.
2.7.4 Pembuatan Kurva Baku Asam
Galat
Sebanyak 1000 ppm larutan asam
galat dibuat konsentrasi 0, 50, 100, 150, 200,
250 dan 300 µg/ml. Masing-masing diambil
0,1 ml dimasukkan dalam tabung, kemudian
ditambah 0,25 ml reagen Folin Ciocalteau dan
3,95 ml akuades. Setelah didiamkan selama 3
menit, masing-masing larutan ditambah 0,75
ml larutan Na2CO3 20% dihomogenkan, dan
diinkubasi selama 30 menit pada suhu 37oC.
Semua larutan diukur absorbansinya pada
panjang gelombang absorbansi maksimum,
kemudian dibuat kurva kalibrasi hubungan
antara konsentrasi asam galat (µg/ml) dengan
absorbansi.
2.7.5 Analisis Kandungan Fenolik Sampel
Larutan sampel sebanyak 0,5 µL
ditambahkan 3,95 mL akuades dan 0,25 mL
reagen Folin Ciocalteu dihomogenkan, larutan
yang telah homogen didiamkan selama 3 menit
kemudian ditambahkan 0,75 mL natrium
karbonat dan diinkubasi selama 30 menit pada
suhu 37oC, kemudian diukur absorbansinya
pada panjang gelombang 752 nm. Pengukuran
sampel dilakukan sebanyak 3 kali.
2.8 Uji Antioksidan dengan metode
DPPH
2.8.1 Penentuan Panjang Gelombang
Absorbansi Maksimum
Sebanyak 1 ml larutan DPPH 0,3 mM
diamati serapan pada panjang gelombang 517
nm dengan blanko etanol.
2.8.2 Pembuatan Larutan Pembanding
Kuersetin
Larutan stok 100 ppm dibuat dengan
cara menimbang sebanyak 0,005 g kuersetin
ke dalam etanol dalam labu takar 50 mL.
Selanjutnya dibuat variasi konsentrasi 2, 4, 6,
PS. Farmasi FMIPA UNSRI
Artikel ilmiah sidang sarjana 2017
8, dan 10 ppm larutan induk, selanjutnya
sebanyak 1 mL larutan DPPH 0,3 mM
ditambahkan 2,5 ml kuersetin tiap konsentrasi,
kemudian dihomogenkan dan dibiarkan selama
45 menit, kemudian diamati absorbansinya
pada panjang gelombang 517 nm.
2.8.3 Pembuatan Larutan Induk Sampel
Larutan stok 1000 ppm dibuat dengan
cara menimbang sebanyak 50 mg ekstrak
formula optimum ditimbang dan dilarutkan
dalam 50 mL etanol kemudian dikocok hingga
homogen.
2.8.4 Pengukuran Absorbansi Sampel
Perlakuan optimum ekstrak dibuat
dengan konsentrasi 100, 150, 200, 250 dan 300
µg/mL, masing-masing diambil 2,5 mL
ditambahkan 1 mL larutan DPPH 0,3 mM
kemudian dihomogenkan dan dibiarkan selama
45 menit, dengan replikasi sebanyak tiga kali.
Kemudian diukur absorbansi sampel pada
panjang gelombang 517 nm.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1 Determinasi Tumbuhan
Tumbuhan daun afrika diambil dari
gang Lampung 1 Timbangan kecamatan
Indralaya, Ogan Ilir. Tumbuhan daun afrika
selanjutnya dibuat herbarium untuk kemudian
dilakukan determinasi di Herbarium
Universitas Andalas Jurusan Biologi Fakultas
MIPA Universitas Andalas. Determinasi
tumbuhan ini bertujuan untuk mengetahui dan
memastikan kebenaran identitas tanaman
yang akan digunakan dalam penelitian serta
untuk menghindari tejadinya kesalahan
pengambilan sampel. Hasil determinasi
menunjukan bahwa sampel yang digunakan
merupakan daun afrika dengan nama ilmiah
Vernonia amygdalina Del.
3.2 Preparasi Sampel
Sampel pucuk daun afrika
dikumpulkan, diolah sesuai prosedur untuk
menghilangkan benda asing maupun pengotor
yang masih melekat pada sampel. Pucuk daun
afrika yang telah dibersihkan selanjutnya
dikeringkan. Pengeringan bertujuan untuk
mengurangi kadar air dan menghentikan reaksi
enzimatis agar didapatkan simplisia yang tidak
mudah rusak. Kandungan air yang masih
tersisa dalam simplisia pada kadar lebih dari
10% dapat menjadi media pertumbuhan
kapang (Depkes RI, 2000). Simplisia kering
yang telah didapat dihaluskan menjadi bentuk
yang lebih kecil yang bertujuan untuk
memperkecil ukuran partikel sehingga luas
permukaan kontak dengan pelarut semakin
Page 4

besar. Kontak dengan pelarut semakin besar
dapat meningkatkan proses penarikan senyawa
yang diinginkan sehingga hasil ekstraksi lebih
optimal.
Ekstrak etanol pucuk daun afrika
didapat melalui ekstraksi yang dilakukan
berdasarkan metode maserasi. Pelarut yang
digunakan dalam proses ekstraksi dipilih
berdasarkan tingkat kepolarannya. Senyawa-
senyawa yang ingin diekstrak pada penelitian
ini adalah senyawa turunan fenol yang
umumnya bersifat polar sehingga dibutuhkan
pelarut yang bersifat polar pula. Salah satu
jenis pelarut polar yang baik adalah etanol.
Pelarut yang digunakan adalah etanol yang
memiliki titik didih rendah ± 78,30C yang
mudah menguap Proses pemekatan sampel
dapat dilakukan pada suhu rendah swhingga
dapat meminimalkan kerusakan senyawa pada
sampel. (Yoshwatana & Eshtiaghi, 2015).
Ekstraksi senyawa fenolik pucuk daun
afrika dilakukan dengan menggunakan pelarut
etanol konsentrasi 96, 70, dan 30% dengan
perbandingan sampel pelarut 1:10. Variasi
konsentrasi tersebut digunakan untuk
memaksimalkan proses ekstraksi. Pelarut
etanol mempunyai gugus yang bersifat polar
dan non-polar. Gugus hidroksil (-OH)
merupakan gugus yang sangat polar karena
tingkat keelektronegatifan yang tinggi dari
oksigen. Di sisi lain, etanol juga memiliki
karbon non-polar (C2H5-) sehingga dapat
melarutkan senyawa non-polar. Adanya dua
gugus tersebut pada etanol menyebabkan
etanol dapat digunakan untuk mengekstrak
senyawa yang berbeda tingkat kepolarannya.
Selain itu etanol merupakan pelarut yang
aman, mudah menguap, kapang sulit tumbuh
dalam etanol 20% ke atas, tidak beracun,
absorbsinya baik dan etanol dapat bercampur
dengan air pada segala perbandingan (Sa’adah
dan Nurhasnawati, 2015). Penggunaan air
sebagai larutan pengekstrak yang dipadukan
dengan etanol menyebabkan kemampuan
campuran etanol air dalam mengekstrak lebih
maksimal, dimana air merupakan senyawa
polar sehingga dapat mengekstrak senyawa
dengan tingkat kepolaran yang berbeda
(Lumempouwa dkk., 2012).
Dalam penelitian ini akan dilihat
pengaruh dari metode ekstraksi terhadap
rendemen dan kandungan fenolik total yang
dihasilkan. Proses maserasi umumnya
membutuhkan waktu yang lama ± 3 hari,
setelah waktu tersebut keseimbangan antara
PS. Farmasi FMIPA UNSRI
Artikel ilmiah sidang sarjana 2017
bahan yang diekstraksi pada bagian dalam sel
dengan luar sel telah tercapai, untuk efisiensi
waktu maka proses ekstraksi pucuk daun
afrika dilakukan dengan bantuan mesin
pengaduk magnetic stirrer. Proses pengadukan
dapat meningkatkan kesetimbangan antara
konsentrasi senyawa dalam pelarut dengan
konsentrasi dalam sel simplisia, dan kecepatan
perpindahan massa dari permukaan partikel ke
dalam larutan akan semakin meningkat.
Keadaan diam selama maserasi menyebabkan
turunnya perpindahan bahan aktif (Voight,
1994). Pengadukkan dapat memperluas bidang
kontak dengan meningkatnya kecepatan
pengadukan dapat meningkatkan homogenitas
dari suatu campuran. Maserasi menggunakan
bantuan mesin pengaduk dapat mempersingkat
waktu dan lebih efisien (Ashraf et al., 2016).
3.3 Skrining Fitokimia Simplisia
Skrining fitokimia dilakukan pada
simplisia pucuk daun Vernonia amygdalina
Del. dilakukan dengan 2 metode yaitu uji plat
dan KLT. Uji plat digunakan sebagai uji
pendahuluan untuk mengetahui senyawa yang
terkandung dalam sampel. Hasil skrining
fitokimia simplisia pucuk daun afrika disajikan
pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil skrining fitokimia simplisia pucuk
daun afrika
Uji Pengamatan Hasil
Alkaloid Wagner (Endapan coklat) +
Mayer (endapan putih)
Dragendorf (endapan kuning
Flavonoid Endapan kuning +
Tanin Kehitaman +
Saponin Terbentuk buih setinggi 3 cm +
Steroid Biru kehijauan +
Fenol Biru kehitaman +
Berdasarkan tabel hasil skrining
fitokimia diketahui simplisia pucuk daun
afrika positif mengandung senyawa metabolit
sekunder yang telah disebutkan, hal ini sejalan
dengan penelitian yang dilakukan Santoso
(2015). Sampel memberikan hasil positif
dengan penambahan pereaksi mayer, wagner
dan dragendorf. Endapan yang terbentuk
tersebut menurut Marliana dkk, (2005) adalah
kalium alkaloid.
Simplisia juga diketahui positif
mengandung saponin dengan timbulnya busa
setinggi 3 cm menunjukan adanya glikosida
yang mampu membentuk buih dalam air.
Menurut Pertiwi (2014) kombinasi struktur
penyusun saponin yaitu gugus hidrofil dan
Page 5
 Artikel ilmiah sidang sarjana 2017

hidrofob dapat bertindak sebagai permukaan Analisis hasil desain faktorial terhadap
aktif dalam pembentukan busa. Uji FeCl3 respon rendemen pada gambar 1(a).
dilakukan untuk mendeteksi keberadaan gugus menunjukkan bahwa konsentrasi pelarut
fenol dan tanin pada sampel, hasil uji fenol dengan level sedang dengan waktu
yang dilakukan positif ditunjukkan oleh pengadukan level rendah dapat meningkatkan
adanya perubahan sampel menjadi berwarna nilai rendemen ditunjukkan dengan daerah
ungu. Perubahan warna ini terjadi karena berwarna kuning. Nilai rendemen ini semakin
FeCl3 bereaksi dengan gugus fenol pada meningkat seiring dengan meningkatnya
sampel ekstrak pucuk daun afrika sehingga waktu pengadukan ditunjukkan dengan warna
membentuk kompleks. Sedangkan pada merah yaitu perlakuan F8. Proses pengadukan
pengujian tanin didapatkan hasil positif akan memepercepat kesetimbangan
dengan perubahan warna sampel menjadi biru konsentrasi didalam dan diluar sel simplisia,
kehitaman. Pada pengujian senyawa hal ini dapat mempercepat perpindahan zat
steroid/triterpenoid setelah direaksikan dengan aktif. Sehingga semakin meningkatnya waktu
asam asetat anhidrat dan H2SO4 pekat pengadukan mampu menghasilkan rendemen
membentuk kompleks asetil steroid berwarna ekstrak yang lebih besar. Namun konsentrasi
biru, menunjukkan simplisia positif pelarut terrendah dan tertinggi serta waktu
mengandung steroid. pengadukan yang makin meningkat dapat
3.4 Analisis Respon Rendemen menurunkan respon rendemen ditandai oleh
Hasil rendemen dapat menunjukkan daerah biru. Hal ini dimungkinkan karena
kemungkinan jumlah senyawa kimia yang didalam ekstrak pucuk daun afrika
terkandung dalam ekstrak. Rendemen mengandung metabolit yang bersifat semi
didapatkan dari hasil pembagian ekstrak polar-polar, menurut Saifudin (2014)
dengan bobot awal simplisia dikali 100%. umumnya senyawa metabolit sekunder di alam
Data rendemen tiap ekstrak ditunjukkan dalam bersifat semi polar-polar antara lain fenolik,
Tabel 3. kumarin, alkaloid dan steroid.
Tabel 3. Hasil perhitungan rendemen rata-rata Tabel 4. Efek faktor konsentrasi, waktu pengadukan
ekstrak pucuk daun afrika dan interaksi keduanya terhadap rendemen
Perlakuan Rendemen (%) Efek faktor Respon rendemen
F1 (30% v/v, 30 menit) 16,55
F2 (70% v/v, 30 menit) 33,51 Konsentrasi -0,45
F3 (96% v/v, 30 menit) 13,84 Waktu pengadukan 2,736
F4 (30% v/v, 60 menit) 17,535 Efek interaksi 0,1375
F5 (70% v/v, 60 menit) 35,7
F6 (96% v/v, 60 menit) 16,2 Tabel 4. menunjukkan bahwa faktor
F7 (30% v/v, 75 menit) 25,495 konsentrasi pelarut secara tunggal dapat
F8 (70% v/v, 75 menit) 38,83
F9 (96% v/v, 75 menit) 16,5
menurunkan perolehan rendemen pada tiap
perlakuan dengan nilai efek sebesar -0,45
Tabel diatas menujukkan bahwa pada sedangkan waktu pengadukan dapat
konsentrasi etanol level sedang 70% perlakuan meningkatkan perolehan rendemen rata-rata
F2, F5 dan F8 menghasilkan respon rendemen perlakuan. Namun efek lamanya pengadukan
yang besar. Nilai rendemen terbesar pada secara tunggal akan menghasilkan rendemen
pengadukan maksimal 75 menit yaitu lebih besar. Sebab lamanya pengadukan akan
perlakuan F8. Sedangkan perlakuan yang meningkatkan kesetimbangan sehingga
menghasilkan rendemen paling sedikit pada rendemen yang didapatkan lebih banyak, tanpa
F3. Hal ini sesuai dengan data pada Gambar 1. pengadukan selama maserasi dapat
Design-Expert® Software
Factor Coding: Actual Interaction
Rendemen (%)

F F
Design Points
95% CI Bands

X1 = A: Konsentrasi
F
50 B: Waktu pengadukan (menit)
menyebabkan turunnya perpindahan
X2 = B: Waktu pengadukan

B- 30
B+ 75
40 komponen. Kombinasi dari kedua faktor
mampu meningkatkan hasil rendemen dengan
Rendemen (%)

F F F
30

nilai interaksi sebesar 0,1375 karena

20
3 2 perbedaan konsentrasi pelarut dibantu dengan
10 pengadukan mampu mengekstrak senyawa
F F F
30 41 52 63 74

A: Konsentrasi (%v/v)
85 96

sesuai tingkat kepolarannya. Grafik interaksi

dapat dilihat pada Gambar 1(b).
(a) (b)
Gambar 1. Contour plot (a); grafik interaksi Sebaran data evaluasi respon
rendemen (b) rendemen mengikuti model cubic. Model

PS. Farmasi FMIPA UNSRI Page 6

 Artikel ilmiah sidang sarjana 2017

cubic dipilih karena memberikan nilai lack of selanjutnya digunakan untuk penetapan kadar
fit sebesar 0,9859 >0,05 (not significant) yang total fenolik dalam sampel. Larutan asam galat
berarti kecendrungan suatu data mengikuti (baku pembanding) dibuat dengan berbagai
error tidak significant. Nilai p-value yang konsentrasi antara lain 50, 100, 150, 200, 250
didapatkan 0,0001 (significant) yang dan 300 ppm.
mengartikan bahwa perbedaan perlakuan Kadar total fenolik larutan baku asam
setiap sampel berpengaruh pada nilai galat dinyatakan berdasarkan regresi linier
rendemen. antara absorbansi dan konsentrasi asam galat
3.5 Analisis Kandungan Total Fenolik dalam persamaan y = 0,0025x + 0,157 dengan
Pengujian aktivitas total fenolik nilai koefisien korelasinya (r = 0,9902) yang
merupakan dasar dilakukan pengujian aktivitas ditunjukkan pada grafik. Nilai r-hitung ini
antioksidan, karena diketahui bahwa senyawa memenuhi persyaratan sehingga persamaan
fenolik berperan dalam mencegah terjadinya regresi linier di atas dapat digunakan untuk
peristiwa oksidasi. Pengukuran total menghitung kandungan fenolik total dalam 9
antioksidan sampel pucuk daun afrika diawali perlakuan ekstrak. Hasil pengukuran
dengan mengukur kadar total fenolik absorbansi pada seri kurva baku menunjukkan
menggunakan reagen Folin-Ciocalteau dengan bahwa dengan adanya kenaikan konsentrasi,
prinsip reaksi antara senyawa fenol dengan nilai absorbansi yang dihasilkan pun
reagen Folin-Ciocalteu. meningkat.
Kandungan total fenolik atau yang Kadar fenolik total dalam ekstrak
biasa disebut Total Phenolic Compound (TPC) pucuk daun afrika dihitung berdasarkan
ditentukan melalui persamaan regresi linier persamaan regresi linier yang diperoleh.
antara absorbansi terhadap konsentrasi asam Berdasarkan perhitungan TPC yang telah
galat. Asam galat digunakan sebagai standar dilakukan pada Lampiran 7, kandungan
pengukuran karena asam galat tergolong fenol fenolik total pada ekstrak pucuk daun afrika
sederhana yang terdiri dari cincin benzen dan ditunjukkan dalam Tabel 5.
gugus hidroksil, tersedia dalam kemurnian Tabel 5. Hasil perhitungan Total Phenolic Compound
yang tinggi, stabil, dan harganya yang relatif (TPC) rata-rata 9 perlakuan
lebih murah (Wachidah, 2013). Perlakuan TPC (mg GAE/g)
Senyawa fenolik dapat bereaksi F1 (30%, 30 menit) 109,8
F2 (70%, 30 menit) 172,8
dengan reagen Folin Ciocalteu dalam suasana F3 (96%, 35 menit) 213,8
basa yaitu Na2CO3 berguna untuk mengubah F4 (30%, 60 menit) 161,8
senyawa fenolik menjadi ion fenolat. Ion F5 (70%, 60 menit) 185,4
fenolat akan berekasi dengan regen Folin F6 (96%, 60 menit) 238,4
Ciocalteu yang mengandung asam F7 (30%, 75 menit) 157,6
F8 (70%, 75 menit) 167,9
fosfomolibdat dan asam heteropolifosfotungsat F9 (96%, 75 menit) 187,6
untuk membentuk kompleks molibdenum-
tungsen berwarna biru. Reaksi pembentukan
Tabel diatas menujukkan bahwa pada
kompleks molibdenum dapat dilihat pada
konsentrasi etanol 90% dengan level
Gambar 8.
OH O pengadukan sedang 60 menit F6 menghasilkan
respon TPC yang besar. Sedangkan pada
H3PO4(MoO3)12 + + H2O
+ H3(PMo12O40) perlakuan F1, F4 dan F7 konsentrasi 30% TPC
Kompleks yang dihasilkan relatif rendah. Hal ini sesuai
molybdenum- blue
Pereaksi Folin-Ciocalteu Senyawa Fenol
O
dengan data pada Gambar 10.
Design-Expert® Software
Factor Coding: Actual Interaction
Total Fenolik (mg GAE/g)
Kuinon Design Points
95% CI Bands
300 B: Waktu pengadukan (menit)

X1 = A: Konsentrasi

Gambar 2. Reaksi pembentukan kompleks X2 = B: Waktu pengadukan

250
Total Fenolik (mg GAE/g)

B- 30

molibdenum blue (Prior et al., 2005) B+ 75

200

Berdasarkan hasil pengukuran 150

2

spektrofotometri UV-Visibel, Scanning 100

panjang gelombang maksimum terhadap asam 50

galat menunjukkan panjang gelombang 30 41 52 63 74 85 96

maksimum asam galat berada pada 752 nm. A: Konsentrasi (%v/v)

(a) (b)
Panjang gelombang maksimum yang Gambar 3. Contour plot (a); grafik interaksi
didapatkan masuk ke dalam rentang, yakni konsentrasi dan waktu pengadukan terhadap
antara 750-765 nm. Panjang gelombang ini perolehan TPC (b)

PS. Farmasi FMIPA UNSRI Page 7


Analisis desain faktorial terhadap
respon kandungan total fenolik pada Gambar
10 (a) contour plot F3 dan F6 terletak di
daerah berwarna merah yang menunjukkan
perolehan TPC semakin besar seiring dengan
semakin tingginya level konsentrasi pelarut
yaitu TPC terbesar pada F6 konsentrasi 96%
waktu pengadukan 60 menit. TPC yang
diperoleh adalah sebesar 238,4mg GAE /g
berat sampel ekstrak daun afrika, artinya
dalam setiap gram ekstrak setara dengan 238,4
mg asam galat.
Pada perlakuan F2, F5, F8, daerah
berwarna hijau dengan pelarut etanol 70% juga
meningkatkan perolehan TPC. Keberadaan air
sebanyak 4-30% dapat membantu proses difusi
senyawa fenolik. Hal ini menunjukan bahwa
komposisi air pada rentang tersebut di dalam
pelarut akan menarik lebih banyak senyawa
fenolik dalam pucuk daun afrika. Kenaikan
kadar air yang lebih besar lagi yaitu pada F1
dengan konsentrasi etanol 30% daerah
berwarna biru memberikan perolehan TPC
yang lebih rendah. Penurunan nilai TPC ini
(dibandingkan dengan penggunaan pelarut
etanol 70%) mengindikasikan bahwa di dalam
pucuk daun afrika lebih banyak terkandung
senyawa fenolik serta metabolit sekunder yang
bersifat polar-semi polar.
Tabel 6 menunjukkan bahwa efek
faktor konsentrasi merupakan faktor yang
paling dominan karena memiliki nilai terbesar
dengan memberikan pengaruh positif yaitu
meningkatkan respon TPC sebesar 35,066.
Efek faktor pengadukan juga memberikan
pengaruh positif dengan meningkatkan
perolehan TPC sebesar 2,1333. Efek interaksi
kedua faktor menurunkan respon TPC.
Tabel 6. Efek faktor konsentrasi, waktu pengadukan
dan interaksi keduanya terhadap respon TPC
Efek faktor Respon TPC
Konsentrasi 35,066
Waktu pengadukan 2,1333
Efek interaksi -19,45
Interaksi antara faktor pengadukan dan
konsentrasi pelarut menurunkan perolehan
TPC. Pengadukan level rendah dengan
konsentrasi level rendah pada F1 relatif
menurunkan TPC karena waktu kontak antara
sampel dengan pelarut terlalu singkat,
sehingga sebelum bahan dan pelarut berikatan
secara sempurna, putaran pengaduk yang
singkat menyebabkan ikatan tersebut terlepas
kembali. Sedangkan, kandungan total fenolik
terbesar didapat pada konsentrasi etanol 96%
PS. Farmasi FMIPA UNSRI
Artikel ilmiah sidang sarjana 2017
perlakuan F3 dan F6 dengan waktu
pengadukan level rendah 30 dan sedang 60
menit. Semakin lama pengadukan pada
ekstraksi, hasil yang diperoleh semakin
meningkat. Hal tersebut terjadi karena lama
waktu pengadukan mengakibatkan kontak
antara bahan dan pelarut dapat berlangsung
lebih lama, kelarutan meningkat. Namun
setelah waktu tersebut, pada F9 pengadukan
75 menit TPC yang diperoleh menurun. Proses
pengadukan yang berkepanjangan akan
menyebabkan paparan oksigen lebih banyak
dan dengan demikian meningkatkan peluang
untuk terjadinya oksidasi senyawa fenolik
(Naczk dan Shahidi, 2004; Chirinos et al.,
2007). Adapun hasil penentuan signifikansi
terhadap respon TPC kesembilan perlakuan
ekstraksi dinyatakan bahwa hasil nilai p
0,0001 (p-value < 0,050) mengindikasikan
terdapat perbedaan signifikan pada variasi
konsentrasi dan waktu pengadukan.
Perhitungan manual anova pada Lampiran 8
menunjukkan p-value yang sama yaitu
significant.
3.6 Penentuan Perlakuan Optimal
Ekstrak pucuk daun afrika optimal
ditentukan dengan Design Expert®10
menggunakan kriteria rendemen dan
kandungan total fenolik yang maximum.
Ekstrak dengan rendemen yang tinggi
menunjukkan proses ekstraksi senyawa aktif
berlangsung efektif sehingga senyawa yang
dihasilkan semakin banyak. Kandungan total
fenolik yang tinggi diharapkan dapat
meningkatkan kemampuan senyawa bertindak
sebagai antioksidan. Menurut Yulia (2007)
pengujian total fenol bertujuan untuk
menentukan total senyawa fenolik yang
terkandung di dalam sampel, sehingga diduga
bila kandungan senyawa fenolik di dalam
sampel tinggi maka aktivitas antioksidannya
akan tinggi.
Setelah analisis dilakukan, didapatkan
perlakuan optimal yang dapat menghasilkan
ekstrak sesuai dengan kriteria yang diinginkan.
Analisis Design Expert®10 menghasilkan 1
solutions yang dapat dilihat pada Gambar 4.
Hasil gambar berwarna kuning menunjukkan
bahwa uji yang dilakukan terhadap 9
perlakuan menunjukkan hasil yang baik,
namun pada jumlah konsentrasi etanol 71,895
% dan waktu pengadukan adalah 55,4619
menit merupakan perlakuan yang paling tepat
untuk menghasikan ekstrak optimal dengan
kritera nilai rendemen dan TPC yang
Page 8
 Artikel ilmiah sidang sarjana 2017

dihasilkan tertinggi dibanding perlakuan Tabel 7. Perbandingan hasil prediksi dan penelitian
lainnya. Perlakuan ini dipilih karena Respon Prediksi Penelitian % error
memenuhi syarat, dilihat dari nilai desirability
sebesar 0,722. Nilai desirability merupakan Rendemen 34,4509 34,21 0,6992
nilai yang menyatakan seberapa dekat nilai TPC 199,185 201,45 1,1371
respon ekstrak yang diprediksi dengan nilai
respon yang diinginkan, dinyatakan dalam
3.7.2 Uji Antioksidan
rentang 0–1. Semakin besar nilai desirability,
Pengukuran panjang gelombang
maka semakin dekat nilai respon ekstrak yang
DPPH dilakukan melalui konsentrasi larutan
diprediksi dengam nilai respon yang DPPH 0,3 mM. Pengulangan sebanyak tiga
diinginkan. Semakin kecil nilai desirability, kali diharapkan dapat menginterpretasikan
maka semakin jauh nilai respon yang
panjang gelombang serapan maksimum dari
diprediksi dengan nilai respon yang diinginkan konsentrasi berbeda. Scanning panjang
(Stat-ease, 2016).
Design-Expert® Software
Factor Coding: Actual Overlay Plot
gelombang serapan maksimum DPPH diukur
Overlay Plot 75 2 2 2

Total Fenolik
Rendemen
pada panjang gelombang visibel 400-800 nm.
Hasil penelitian menunjukan bahwa
Design Points
66
B: Waktu pengadukan (menit)

X1 = A: Konsentrasi Total Fenolik: 199,185

X2 = B: Waktu pengadukan Rendemen: 34,4509

57
2 2 X1 71,8951
X2 55,4619
2
panjang gelombang maksimum rata-rata
masuk dalam rentang teoritis yaitu sebesar 517
48

nm. Nilai panjang gelombang maksimum

39
30 2
30
Gambar 4. Superimposed contour plot/ overlay plot
ekstrak pucuk daun afrika
Kemungkinan hasil uji yang akan
diperoleh bila menggunakan konsentrasi
optimal tersebut, yaitu nilai rendemen sebesar
34,4509% dan TPC sebesar 199,185 mg
GAE/g. Hasil prediksi ini berdasarkan analisis
desain faktorial, diharapkan solutions tersebut
dapat memberikan kriteria ekstrak pucuk daun
afrika yang sesuai dengan yang diprediksikan.
3.7 Analisis Perlakuan Optimal
3.7.1 Analisis Rendemen dan Kandungan
Total Fenolik Perlakuan Optimal
Perlakuan optimal ekstrak etanol pucuk
daun afrika yang didapatkan berdasar Desain
Expert 10 menghasilkan nilai rendemen
sebesar 34,4509% dan nilai TPC sebesar
199,185 mg GAE/g. Hasil % error yang
DPPH dipilih berdasarkan panjang gelombang
2 2
yang sesuai literatur, pergeseran panjang
41 52 63 74 85 96
gelombang tidak melebihi 2 nm. Panjang
A: Konsentrasi (%v/v)
gelombang maksimum DPPH secara teoritis
menurut Zhu et al. (2002) sebesar 517 nm.
Penentuan operating time (OT)
bertujuan menentukan waktu optimum
inkubasi sampel dengan larutan DPPH untuk
bereaksi sempurna. Pengukuran saat OT
dilakukan terhadap larutan baku 6 ppm yang
direaksikan dengan larutan DPPH diamati
absorbansinya pada panjang gelombang 517
nm di mulai dari menit ke-0 hingga menit ke-
60 dengan interval waktu 5 menit. Operating
time dipilih yang menunjukkan kestabilan nilai
absorbansi tertinggi yang dihasilkan relatif
stabil atau selisih nilai absorbansi tiap selang
waktu mulai kecil (Molyneux, 2004). Hasil
pengukuran OT ditunjukkan dalam grafik.
1
0,8
Absorbansi

dihasilkan antara hasil uji perlakuan optimal 0,6

dengan nilai prediksi Design Expert®10
0,4
menunjukkan nilai % rendemen yang paling
0,2
akurat yaitu paling mendekati nilai prediksi.
Semakin rendah nilai % error, semakin akurat 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
nilai prediksi yang diperoleh (Moin, 2010).
Waktu (menit)
Perbedaan hasil prediksi dengan penelitian
kemungkinan disebabkan oleh pembulatan
konsentrasi pelarut yang seharusnya sebesar Gambar 5. Grafik operating time DPPH
71,8951% menjadi 71,9% dan waktu
pengadukan yang juga mengalami pembulatan Penentuan OT pada larutan baku
menjadi 55,76 menit. Perbandingan hasil kuersetin yang tertera pada Gambar 5,
prediksi dengan penelitian dapat dilihat pada menunjukkan bahwa absorbansi mulai stabil
Tabel 7. pada menit ke-45 hingga menit ke-60. Hasil ini

PS. Farmasi FMIPA UNSRI Page 9

 Artikel ilmiah sidang sarjana 2017

menunjukkan bahwa pada menit ke-45 sampel berturut-turut sebesar 6,472 dan
senyawa DPPH sudah bereaksi dengan sampel 440,053 ppm. Perhitungan nilai IC50. Nilai
secara sempurna. Sehingga uji antioksidan IC50 suatu senyawa antioksidan berbanding
selanjutnya dilakukan pada menit ke-45. terbalik dengan aktivitas antioksidannya. Nilai
Secara praktis dapat disimpulkan bahwa aktivitas antioksidan semakin kecil
larutan baku akan memberi hasil yang baik menunjukkan nilai IC50 yang semakin besar.
bila diukur antara menit ke-45 hingga ke-60. Hasil nilai IC50 kuersetin lebih kecil dibanding
OH
dengan IC50 ekstrak pucuk daun afrika karena
3'
OH merupakan senyawa yang murni, sedangkan
2'
4' ekstrak tersebut masih dalam bentuk campuran
HO
8
O 2 5'
dari beberapa senyawa. Aktivitas antioksidan
1
7 6' dari senyawa bahan alam dipengaruhi oleh
6
3 gugus hidroksil yang terkandung dalam
5 4 OH senyawa tersebut, kuersetin memilik 5 gugus –
OH O OH bebas, semakin banyak gugus hidroksil
Gambar 6. Struktur kuersetin bebas yang dapat menyumbangkan hidrogen,
Ekstrak pucuk daun afrika diukur maka semakin banyak pula reduksi yang dapat
absorbansinya pada panjang gelombang 517 dilakukan senyawa terhadap DPPH
nm dengan kuersetin sebagai kontrol positif (Molyneux, 2004).
yang telah terbukti mempunyai aktivitas Aktivitas antioksidan ekstrak etanol
penangkapan radikal bebas karena kuersetin pucuk daun afrika memberikan IC50 sebesar
memiliki gugus OH pada posisi 3’, 4’, 3, 5, 440,053 artinya bahwa pada
dan 7 (Gambar 6). Penggunaan kontrol positif konsentrasi 440,053 ekstrak pucuk
pada pengujian aktivitas antioksidan ini adalah daun afrika dapat menghambat 50% aktivitas
untuk mengetahui seberapa kuat potensi radikal bebas DPPH. Aktivitas antioksidan ini
antioksidan yang ada pada ekstrak etanol tidak sama dengan penelitian Dillasamola dan
pucuk daun afrika jika dibandingkan dengan Linda (2016) yang mendapatkan hasil bahwa
kuersetin. Data absorbansi yang didapatkan ekstrak etanol bagian daun mature (tua) afrika
kemudian dihitung persen inhibisinya. Persen memiliki IC50 sebesar 3489,1758 .
inhibisi didapatkan dari perbedaan serapan Berdasarkan data tersebut ekstrak etanol pucuk
antara absorbansi blanko dengan absorbansi daun afrika lebih berpotensi sebagai
sampel. Melalui hubungan persen inhibisi antioksidan dibandingkan dengan bagian daun
dengan konsentrasi dihasilkan persamaan tua. Semakin tinggi aktivitas antioksidan
regresi linear y=ax+b. Hasil % inhibisi dan menunjukkan semakin besar kandungan
IC50 kuersetin dan sampel dapat dilihat pada senyawa fenolik pada sampel. Senyawa
Tabel 8. fenolik pada tanaman terakumulasi pada
Tabel 8. Persen penangkapan radikal DPPH oleh
tingkat maturasi tertentu. Daun pada masa
kuersetin dan ekstrak pucuk daun afrika pada
berbagai konsentrasi pertumbuhan membutuhkan nutrisi yang
Sampel Konsentrasi % Inhibisi IC50 cukup sehingga unsur hara yang berasal dari
tanah akan cenderung diakumulasikan ke
2 12,44503 6,472 bagian pucuk dibanding daun tua, sehingga
4 29,19085 pucuk mengandung lebih banyak senyawa
Kuersetin 6 46,56992
8 67,13280
fenolik yang berpotensi sebagai antioksidan.
10 75,33421 Selain itu, perbedaan hasil dapat disebabkan
100 9,3289 440,053 oleh variasi metode ekstraksi termodifikasi
Ekstrak 200 19,6399 (konsentrasi pelarut dan waktu pengadukan)
pucuk daun dan cara penyimpanan sampel sebab senyawa
afrika 300 32,4058
400 45,1718 fenolik yang berpotensi sebagai antioksidan
500 57,7741 mudah rusak oleh paparan oksigen dan cahaya.
Persamaan regresi linier kuersetin dan Suatu senyawa digolongkan sebagai
ekstrak etanol pucuk daun afrika secara antioksidan sangat kuat apabila nilai IC50
berturut-turut adalah y=8,186x-2,9815 dengan kurang dari 50 ppm, kuat apabila nilai IC50
r2=0,987 dan y=0,1224x-3,8625 dengan antara 50-100 ppm, sedang apabila nilai IC50
r2=0,998, sehingga IC50 dari masing-masing berkisar 100-150 ppm dan lemah apabila nilai
IC50 berkisar 150-200 ppm. Jika nilai IC50

PS. Farmasi FMIPA UNSRI Page 10


yang diperoleh berkisar 200-1000 ppm maka
zat tersebut kurang aktif namun masih
berpotensi sebagai zat antioksidan (Molyneux,
2004). Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak
pucuk daun afrika dapat digolongkan sebagai
antioksidan sangat lemah namun masih
berpotensi sebagai antioksidan.
4. Kesimpulan Dan Saran
4.1 Kesimpulan
Berdasarkan rumusan masalah dan
penelitian yang telah dilakukan dapat ditarik
kesimpulan sebagai berikut:
1. Faktor konsentrasi pelarut memberikan
efek menurunkan respon rendemen dan
meningkatkan kandungan total fenolik
ekstrak pucuk dan afrika, Sedangkan waktu
pengadukan mampu meningkatkan kedua
respon. Interaksi kedua faktor
meningkatkan rendemen namun
menurunkan kandungan total fenolik
ekstrak.
2. Konsentrasi pelarut serta waktu
pengadukan yang dibutuhkan untuk
menghasilkan perlakuan optimal berturut-
turut adalah konsentrasi etanol 71,895 %
dan pengadukan 55,46 menit menggunakan
magnetic stirrer.
3. Uji aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol
pucuk daun afrika (Vernonia amygdalina
Del.) secara in vitro menggunakan metode
peredaman radikal bebas DPPH dengan
konsentrasi etanol 71,9% dan waktu
pengadukan 55,46 menit diperoleh nilai
IC50 sebesar 440,053 μg/ml. Hal ini
menunjukan bahwa ekstrak etanol pucuk
daun afrika memiliki tingkat kekuatan
antioksidan sangat lemah.
4.2 Saran
Berdasarkan hasil penelitian yang
diperoleh disarankan:
1. Perlu dilakukan penelitian terhadap
stabilisasi ekstrak guna menjamin senyawa
terhindar paparan cahaya, oksigen, maupun
hal yang dapat menurunkan fungsi ataupun
merusak kandungan ekstrak.
2. Perlu dilakukan pengujian aktivitas
antioksidan secara in vivo terhadap ekstrak
perlakuan optimal.
3. Perlu dilakukan pengujian farmakologi lain
selain uji antioksidan, seperti uji
hepatoprotektor ataupun uji antikanker.
DAFTAR PUSTAKA
Arista, I. 2008, ‘Optimasi pembuatan ekstrak
daun dewandaru (eugenia uniflora L.)
PS. Farmasi FMIPA UNSRI
Artikel ilmiah sidang sarjana 2017
menggunakan metode maserasi dengan
parameter kadar total senyawa fenolik dan
flavonoid’, Skripsi, S.Farm, Fakultas Farmasi,
Universitas Muhammadiyah Surakarta,
Indonesia.
Ashraf, A., Bhatti, I.A., Sultana, B. & Jamil, A.
2016, Study of Variations in the Extraction
Yield, Phenolic Contents and Antioxidant
Activities of the Bark of F. religiosa as a
Function of Extraction Procedure, Journal of
Basic & Applied Sciences, 12 8-13.
Atangwho, I.J., Ebong, P.E., Egbung, G.E. & Obi,
A.U. 2010, Extract of vernonia amygdalina
Del. (african bitter leaf) can reverse pancreatic
cellular lesion after alloxan damage in the rat,
Australian Journal of Basic & Applied
Sciences, 4(5):711-716.
Bolton, S. & Bon, C. 2004, Pharmaceutical
statistic practical and clinical applications,
Edition 4th, Marcel Dekker, Inc, New York,
USA.
Chirinos, R., Rogez, H., Campos, D., Pedreschi,
R. & Larondelle, Y. 2007, Optimization of
extraction conditions of antioxidant phenolic
compounds from mashua (Tropaeolum
tuberosum Ruíz and Pavón) tubers. Separation
and Purification Technology, 55(2): 217-225.
Depkes RI. 2000, Parameter Standar Umum
Ekstrak Tumbuhan Obat, Derektorat Jendral
Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta,
Indonesia.
Dillasamola, D. & Linda, M. 2016, Uji Aktivitas
Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Afrika
Selatan (Vernonia amygdalina Del.) dengan
Menggunakan Metode DPPH (1,1- diphenil-2-
picryhidrazyl), Jurnal Akademi Farmasi
Prayoga, 1(1), 29-35.
Lestari, W.A. 2016, ‘Preparasi dan karakterisasi
phytosome pembawa ekstrak etanol daun
vernonia amygdalina del. menggunakan
propilen glikol dan gliserol sebagai penetration
enhancer’, Skripsi, S.Farm, Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Sriwijaya, Palembang, Indonesia.
Lumempouwa, L.I., Suryantoa, E. & Paendonga,
J. 2012, Aktivitas Anti UV-B Ekstrak Fenolik
dari Tongkol Jagung (Zea mays L.), Jurnal
Mipa Unsrat Online, 1(1): p, 1-4.
Marliana, S.D., Suryanti, V. & Suyono. 2005,
Skrining Fitokimia dan Analisis Kromatografi
Lapis Tipis Komponen Kimia Buah Labu
Siam (Sechium edule Jacq. Swartz.) dalam
Ekstrak Etanol, Biofarmasi Jurusan Kimia
FMIPA Universitas Sebelas Maret (UNS),
Surakarta, 3 (1): 26-31.
Page 11
 Artikel ilmiah sidang sarjana 2017

Moin, P. 2010, Fundamentals of Engineering Per Oral Menurunkan Kadar Glukosa Darah
Numerical Analysis, Cambridge university Post Prandial Dan Meningkatkan Kadar
press, New York, USA. insulin puasa Pada Tikus Putih Jantan (Rattus
Molyneux, P. 2004, The use of the stable free Norvegicus) Yang DM Tipe 2’, tesis,
radical diphenylpicryl-hydrazyl (dpph) for Universitas Udayana, Denpasar, Indonesia.
estimating antioxidant activity, Stat-ease. 2016, Handbook for experimenters,
Songklanakarin Journal Science Technology, Stat-ease, Inc, Minneapolis, USA.
26(2), 211-21. Wachidah, L.N. 2003, ‘Uji Aktivitas Antioksidan
Murtijaya, J. & Lim Y.Y. 2007, Antioxidant Sebagai Penentuan Kandungan Fenolat dan
properties of phylanthus amarus extracts as Flavonoid Total Dari Buah Parijo (Medinilla
affected by different drying methods, LWT- spesiosa Blume.)’, Skripsi, S.Farm, Fakultas
Food Science Technology, 40: 1664-1669. Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, UIN Syarif
Naczk, M. and Shahidi, F. 2004. Extraction and Hidayatullah, Jakarta, Indonesia.
analysis of phenolics in food. Journal of Yoshwatana, N. & Eshtiaghi, M. N. 2015,
Chormatography, (1-2): 95-111. Optimization of Subcritical Ethanol Extraction
Oliveira, M.S., Morais, D.V. & Magalhaes. 2011, for Xanthone from Mangosteen Pericarp,
Antioxidant, larvicidal and International Journal of Chemical
antiacetylcholinesterase activities of cashew Engineering and Applications, (2).
nut shell liquid constituents, Acta Trop, 117 Yulia, O. 2007. Pengujian Kapasitas Antioksidan
(3), 165-170. Ekstrak Polar, Nonpolar, Fraksi Protein Dan
Perron, N.R. & Julia, L.B. 2009, A review of the Nonprotein Kacang Komak (Lablab purpureus
antioxidant mechanisms of polyphenol (L.) sweet), Depertemen Ilmu Dan Teknologi
compounds related to iron binding, Cell Pangan, Institut Pertanian. Bogor, Jawa Barat,
Biochem Biophys, 53:75-100. Indonesia.
Pertiwi, M., Soetjipto, H. & Hartini, S. 2014. Zhu, Q.Y., Hackman, R.M., Ensunsa, J.L., Holt,
Optimalisasi Konsentrasi Ekstrak Saponin R.R. and Keen, C.L. 2002, Antioxidative
Daun Petai Cina (Leucaena leucocephala activities of oolong tea, Journal Agricultur
(Lam.) De Wit.) Sebagai Agensia Pembusa Food Chemistry, 50: 6929-6934.
Alami Sampo. Seminar Nasional Kimia dan
Pendidikan Kimia VI. Program Studi
Pendidikan Kimia Jurusan PMIPA FKIP UNS,
Surakarta, Indonesia.
Prior, R.L., Wu, X. & Schaich, K. 2005,
Standardized methods for the determination of
antioxidant capacity and phenolics in foods
and dietary supplements. Journal Agriculture
Food Chemistry, 53:4290-4302.
Ramadhan, A.E. & Phasa, H.A. 2010,’ Pengaruh
konsentrasi etanol, suhu dan jumlah stage pada
ekstraksi oleoresin jahe (zingiber officinale
Rosc) secara batch’, Skripsi, S.T, Jurusan
Teknik Kimia, Universitas Diponegoro,
Semarang, Indonesia.
Sa’adah, H. & Nurhasnawati, H. 2015, Perbandingan
Pelarut Etanol Dan Air Pada Pembuatan
Ekstrak Umbi Bawang Tiwai (Eleutherine
americana Merr.) Menggunakan Metode
Maserasi, Jurnal Ilmiah Manuntung, 1(2) 149-
153.
Saifudin, A. 2014, Senyawa Alam Metabolit
Sekunder Teori, Konsep dan Teknik
Pemurnian, Deepublish, Sleman, Yogyakarta,
Indonesia.
Santoso, I.A. 2015, ’Pemberian Ekstrak Etanol
Daun Afrika Selatan (Vernonia amgydalina)

PS. Farmasi FMIPA UNSRI Page 12