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INFORMACIÓN A INCLUIR EN LA EXPOSICIÓN DE UN PROCESO FERMENTATIVO

Mencionar procesos que se lleven a cabo con el tipo de organismo que se asigno

Elegir un producto
El trastuzumab comercializado con la marca Herceptin

Describir que es
El Herceptin (nombre genérico: trastuzumab) es un medicamento de terapia dirigida que se utiliza para
tratar el cáncer de mama HER2 positivo. Es un anticuerpo monoclonal humanizado semejante a los
anticuerpos que produce el organismo de forma natural para protegerse de las infecciones
por virus y bacterias. El trastuzumab es un producto biotecnológico producido en células de ovario de hámster
chino (CHO) en cultivo.

Fue el segundo anticuerpo monoclonal comercializado como medicamento, y el primero para el tratamiento del cáncer
de mama. El uso principal del medicamento va dirigido a disminuir el riesgo de recidiva del tumor tras la cirugía

¿Cómo es?

FOTOS DE WIKIPEDIA
Agente antineoplásico. Código ATC: L01 XC03

El efecto farmacológico de este mab radica en que el bloqueo del receptor HER2, inhibiendo la vía de señalización de
HER2 independiente del ligando30 y activando la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) que se ejerce
preferentemente sobre células cancerosas que sobre-expresan HER230 .
¿Para qué sirve y para que se usa?
Mecanismo de acción

Trastuzumab se une con una alta afinidad y especificidad al subdominio IV, una región yuxtamembrana del dominio
extracelular de HER2. La unión del trastuzumab a HER2 inhibe la vía de señalización de HER2 independiente del ligando y
previene la división proteolítica de su dominio 19 extracelular, un mecanismo de activación de HER2. Como resultado
Trastuzumab ha demostrado, tanto en ensayos in vitro como en animales, que inhibe la proliferación de células
humanas tumorales que sobreexpresan HER2. Además, trastuzumab es un potente mediador de la citotoxicidad
dependiente de anticuerpos mediada por células (ADCC). Se ha demostrado in vitro, que la ADCC mediada por
trastuzumab se ejerce preferentemente sobre células que sobreexpresan HER2 si se compara con células cancerosas que
no sobreexpresan HER2.

Usos

Algunos casos de cáncer HER2 positivo no responden o dejan de responder al Herceptin. Basándose en
la genética del cáncer, los investigadores hallaron que hay al menos dos tipos de cáncer de mama HER2
positivo. Esto significa que estos dos tipos de cáncer HER2 positivo tienen diferentes genes anómalos.
Esto explicaría en parte por qué algunos casos de cáncer HER2 positivo responden al Herceptin y otros
no.
El cáncer de mama con exceso de receptores HER2 tiende a tener peor pronóstico que el cáncer con
receptores de hormonas positivos. Las mujeres con diagnóstico de cáncer de mama con exceso de
receptores HER2 tienden a ser más jóvenes en comparación con las mujeres con diagnóstico de otros
tipos de cáncer de mama.

Algunas células del cáncer de mama producen (expresan excesivamente) demasiadas copias de un gen
en particular, conocido como HER2. El gen HER2 produce una proteína denominada receptor HER2. Los
receptores HER2 son como oídos o antenas en la superficie de todas las células. Estos receptores HER2
reciben las señales que estimulan el crecimiento y la multiplicación celular. Pero las células del cáncer de
mama con demasiados receptores HER2 reciben demasiadas señales de crecimiento y comienzan a
crecer y multiplicarse muy rápidamente. Las células del cáncer de mama que presentan sobreexpresión
del gen HER2 se consideran receptores HER2 positivos.

Herceptin ataca los receptores HER2 en la superficie de las células cancerosas e impide que reciban
señales de multiplicación. Mediante el bloqueo de las señales, Herceptin puede demorar o interrumpir el
crecimiento del tumor. Este medicamento es un ejemplo de terapia dirigida al sistema inmunitario.
Además de bloquear los receptores HER2, Herceptin también puede ayudar a combatir el cáncer de
mama indicando al sistema inmunitario que destruya las células cancerosas a las que se une.

Herceptin está indicado para el tratamiento de pacientes adultos con cáncer de mama metastásico (CMM)
HER2 positivo.
- en monoterapia para el tratamiento de aquellos pacientes que hayan recibido al menos dos regímenes
quimioterápicos para su enfermedad metastásica. La quimioterapia previa debe haber incluido al menos una
antraciclina y un taxano a menos que estos tratamientos no estén indicados en los pacientes. Los pacientes
con receptores hormonales positivos también deben haber fracasado al tratamiento hormonal a menos que
este no esté indicado.
- en combinación con paclitaxel para el tratamiento de aquellos pacientes que no hayan recibido quimioterapia
para su enfermedad metastásica y en los cuales no esté indicado un tratamiento con antraciclinas.
- en combinación con docetaxel para el tratamiento de aquellos pacientes que no hayan recibido quimioterapia
para su enfermedad metastásica.
- en combinación con un inhibidor de la aromatasa para el tratamiento de pacientes posmenopáusicas con
CMM y receptor hormonal positivo, que no hayan sido previamente tratadas con trastuzumab

DATOS EXTRAS DEL USO DE HERCEPTIN


Una investigación realizada en 4000 mujeres con diagnóstico de cáncer de mama positivo para HER2 en etapa
temprana reporta que:

Diez años después del tratamiento, la supervivencia general fue mejor en las mujeres que recibieron
tratamiento con Herceptin:

 El 84 % de las mujeres que recibieron quimioterapia y Herceptin estaban vivas.

 El 75,2 % de las mujeres que recibieron solo quimioterapia estaban vivas.

Esto indica que la supervivencia general fue un 37 % mejor en las mujeres que recibieron Herceptin y
quimioterapia, en comparación con las que solo recibieron quimioterapia.

Diez años después del tratamiento, la supervivencia sin enfermedad también fue mejor en las mujeres
que recibieron tratamiento con Herceptin:

 El 73,7 % de las mujeres que recibieron quimioterapia y Herceptin estaban vivas sin avance del
cáncer.

 El 62,2 % de las mujeres que recibieron solo quimioterapia estaban vivas sin avance del cáncer.

Esto indica que la supervivencia sin enfermedad fue un 40 % mejor en las mujeres que recibieron
Herceptin y quimioterapia, en comparación con las que solo recibieron quimioterapia.

Herceptin también puede causar efectos secundarios, incluidos los siguientes:

 presión arterial elevada


 dolor de espalda y de articulaciones

 bochornos

 dolor de cabeza

 diarrea

Algunas mujeres que reciben Herceptin padecen una disminución de la función cardíaca durante el
tratamiento. En casos poco frecuentes, se puede producir una insuficiencia cardíaca. Otros estudios
demostraron que es más probable que el Herceptin provoque problemas cardíacos en mujeres mayores,
mujeres que padecen diabetes y con factores de riesgo preexistentes, como presión arterial elevada,
colesterol alto y obesidad. La función cardíaca se recupera cuando se finaliza el tratamiento con
Herceptin.

En este estudio, las mujeres que recibieron Herceptin presentaron un aumento ínfimo del riesgo de
padecer problemas cardíacos:

 El 0,2 % de las mujeres tratadas con Herceptin fallecieron debido a problemas cardíacos.

 El 0,1 % de las mujeres tratadas únicamente con quimioterapia fallecieron debido a problemas
cardíacos.

¿Cómo se obtiene?
Este producto se obtiene a partir de anticuerpos monoclonales IgG1 humanizado producido por células de
mamífero (Ovario de hámster chino) cultivadas en suspensión y purificadas por cromatografía de afinidad e
intercambio iónico incluyendo inactivación viral específica y procedimientos de eliminación.

¿Cuánto se vende?
Los casos susceptibles de ser tratados con trastuzumab sólo representan de 15 a 25 por ciento de los
cánceres de mama

Este medicamento de Roche tuvo en 2008 ventas por 1800 millones de dólares.
¿A cómo se vende?¿quién lo vende?

El precio para Herceptin® 440 MG HERCEPTIN INYECCIÓN 1 PIEZA FRASCO ÁMPULA PRECIO DE $41 652.00 , producida
y comercializada por el emporio farmacéutico suizo Hoffmann La Roche (Roche)

Otra página pone el precio en $46 067.50 pesos

El tramiento con herceptin cuesta por paciente de 30 mil a 40 mil dólares o más.

Microorganismos que lo producen


Los AcMs son Acs producidos por un único clon de células B. A diferencia de los Acs policlonales, los AcMs son
monoespecíficos y homogéneos, siendo muy eficaces para el desarrollo de nuevas terapias y métodos diagnósticos.
Las células CHO son células derivadas de ovario de hámster chino (Cricetulus griseus) y cuyo uso está
ampliamente extendido en el campo de la biotecnologia como cultivos celulares para la expresión y producción
de proteínas recombinantes.

Características del microorganismo que se usa para su producción


Los anticuerpos monoclonales son proteínas solubles, que forman parte de la inmunidad específica y poseen pesos
moleculares comprendidos entre 160.000 y 970.000 daltons12 . Están constituidos por combinaciones de dos cadenas
ligeras y dos cadenas pesadas unidas ambas mediante puentes disulfuro. La zona del anticuerpo responsable de la unión
específica al antígeno se denomina Fab (Fixation antigen binding) y el fragmento restante se denomina Fc (fracción
cristalizable) 13.

¿De dónde se obtiene el microorganismo? (colecciones o aislamiento o ambas)


COLECCIÓN DE LA ATCC

CHO-K1 (ATCC® CCL-61™)

Formas de conservación del microorganismo


Conservación de las células CHO

Storage Temp. liquid nitrogen vapor phase

To insure the highest level of viability, thaw the vial and initiate the culture as soon as possible upon receipt. If
upon arrival, continued storage of the frozen culture is necessary, it should be stored in liquid nitrogen vapor
phase and not at -70°C. Storage at -70°C will result in loss of viability.

Conservación del producto

4 años. Conservar en nevera (entre 2ºC y 8ºC).

Tras la reconstitución con agua estéril para preparación inyectable, la solución reconstituida es física y químicamente
estable durante 48 horas a 2ºC - 8ºC. Cualquier resto de solución reconstituida debe ser desechado.

Las soluciones de Herceptin para perfusión intravenosa son física y químicamente estables en bolsas de cloruro de
polivinilo, polietileno o polipropileno que contengan solución inyectable de 9 mg/ml (0,9 %) de cloruro sódico, durante
24 horas a temperatura que no exceda de 30ºC.
Desde un punto de vista microbiológico, la solución reconstituida y la solución para perfusión de Herceptin deben ser
empleadas inmediatamente. El producto no está diseñado para ser conservado tras la reconstitución y dilución a menos
que éstas tengan lugar bajo condiciones asépticas controladas y validadas. Si no se emplea inmediatamente, el tiempo
de conservación hasta el uso y las condiciones de dicha conservación serán responsabilidad del usuario.

Se deben emplear métodos asépticos adecuados. Cada vial de Herceptin se reconstituye con 7,2 ml de agua estéril para
preparación inyectable (no suministrada). Se debe evitar el empleo de otros disolventes para reconstitución. Esto
produce una solución de 7,4 ml para dosis única que contiene 21 mg/ml de trastuzumab, a un pH de aproximadamente
6,0. Una sobrecarga de volumen del 4 % permite que la dosis de 150 mg reflejada en la etiqueta pueda ser extraída de
cada vial. Se debe manejar cuidadosamente el Herceptin durante la reconstitución. Si se produce espuma excesiva
durante la reconstitución o se agita la solución reconstituida puede causar problemas con la cantidad de Herceptin que
se pueda extraer del vial. La solución reconstituida no se debe congelar.

Proceso de producción que incluya:


 Tratamiento del microorganismo
 Preparación del inóculo
 Composición de los medios de cultivo
 Rutas metabólicas para la producción del metabolito de interés
 Formas de cultivo que se han empleado
 Cantidades que se produce y tiempo en que se obtiene

PROCESO PRODUCTIVO

Etapa Upstream

Etapa I

Se descongelan 20x106 de células del banco celular y se expanden durante 4 pasajes de 72hs cada uno. Todos los
Erlenmeyers son estériles y de un solo uso. Las células se manipulan dentro de una Cabina de seguridad biológica. Se
incuban en una estufa con control de humedad, temperatura, agitación y atmósfera de dióxido de carbono. En cada
pasaje las células son diluidas en medio de cultivo tal que las mismas estén a una Viabilidad celular de 0.35 a 0.65 x
106/mL. Se comienza con un volumen de 25mL y se finaliza con 1600mL.

(Estufa de control de humedad, temperatura, agitación y atmósfera de de


dióxido de carbono)
Etapa II
Las células son cultivadas en un biorreactor descartable WAVE por dos pasajes de 72hs cada uno. Se comienza
con un volumen de 7L y se finaliza con 20L. Todo el proceso de cultivo y dilución de las células es cerrado. El
biorreactor controla el ángulo de agitación, revoluciones por minuto, temperatura, aire y dióxido de carbono.

Etapa III
Las células del biorreactor WAVE son utilizadas para inocular el Biorreactor SUB de 100L. En dicho tanque las
células crecen por 4 días y a una densidad ≥4x106/mL. En el SUB de 100L las células crecen con control de pH,
DO, temperatura y agitación. Toda la operación es cerrada y se lleva a cabo con sistemas descartables.

Etapa IV
Las células del SUB 100L son utilizadas para inocular el biorreactor de 1000L a una viabilidad celular de 0.35 a
0.65 x 106/mL. En dicho tanque las células crecen por 16 días produciendo el anticuerpo de interés. Los días 0 a
3 se cultivan a 37°C y luego a 34°C. Durante el proceso el biorreactor controla pH, oxígeno disuelto, temperatura
y agitación. Se aplica un esquema de alimentación (batch alimentado). Toda la operación es cerrada y con
sistemas descartables.

Etapa V
Luego de 16 días de producción las células son removidas y separadas del medio de cultivo previo al comienzo
de la purificación. Esta clarificación se lleva a cabo con sistemas de filtración por lecho profundo. Se utilizan un
máximo de dos trenes de 9.6m2 de membrana filtrante donde las células quedan retenidas. Luego el producto
es filtrado por 0.45 y 0.2um (2.35 a 4.7m2 de área filtrante). El proceso es cerrado.
SINTESIS ETAPA UPSTREAM
Una línea celular de mamífero CHO DHFR- modificada genéticamente, conteniendo la secuencia que codifica
para el anticuerpo Trastuzumab, es cultivada en medio de cultivo químicamente definido. Las células son
expandidas desde 25mL hasta 100L para luego inocular un biorreactor de 1000L donde se lleva a cabo la etapa
productiva por 16 días. Pasados los 16 días de crecimiento celular las mismas son filtradas y descartadas. Toda la
operación se lleva a cabo en sistemas descartables (Erlenmeyers, biorreactores y filtros descartables).
 Etapas de purificación lo más detalladas posible

Etapa Downstream

Etapa VI

El medio de cultivo clarificado es filtrado por una resina cromatográfica de afinidad por Proteína A, a un tiempo de
residencia de entre 3 y 7 minutos, a pH neutro. La relación de carga es de 3 a 38mg de IgG por mL de resina. El producto
queda retenido en la resina, luego se hace un lavado con buffer de equilibrio con alta fuerza iónica para remover
potenciales pegados inespecíficos, finalmente se eluye el producto en 2 CV mediante una disminución del pH. El
producto se recibe en un mezclador SUM cerrado. Toda la operación se lleva a cabo en sistemas cerrados.
Etapa VII

Al producto eluído a pH ácido en la etapa anterior se le debe ajustar el pH a 3.6 ± 0.1. Este material es transferido a un
BPC cerrado. El BPC cerrado es trasladado a un área con clasificación D. A partir de este momento el producto es
incubado por un período de entre 90 a 120 minutos a pH ácido. Cumplido este tiempo el pH de la solución debe ser
neutralizado y filtrado por 0.8-0.65 y 0.22 m para remover partículas formadas durante la inactivación viral.

Etapa VIII

El producto inactivado y neutralizado es filtrado por una resina de cromatografía de intercambio aniónico. Esta
cromatografía es hecha en modo flow-through, es decir que el producto fluye quedando retenidos contaminantes como
HCDNA, HCP, Insulina residual así como Proteína A residual. La relación de carga en esta cromatografía es de entre 0 y
60mg de IgG/mL. El material eluído es filtrado en línea por una membrana de 0.22um y recibido en un tanque agitado
tipo SUM (Single use) con una BPC estéril donde se llevará acabo la siguiente operación.

Etapa IX

El producto purificado por la cromatografía de intercambio iónico es incubado por 48hs ±12 hs a 37°C en agitación en un
sistema cerrado. El producto es manipulado con prácticas de asepsia para evitar contaminaciones dadas las favorables
condiciones para el crecimiento de microrganismos (agitación, temperatura, pH). Pasadas las 48hs ±12 hs se debe
apagar el control de temperatura y agitación y dejar reposar el producto por otras 48 ± 12hs.

Etapa X

El producto es pegado a una resina cromatográfica de intercambio catiónico fuerte a un pH de 5.5 ± 0.1. Se eluye con un
gradiente de NaCl entre 0 a 180mM en 18.5 CV. La relación de carga debe ser de entre 0 y 40mg/mL de IgG por mL de
resina. El pico de elución es colectado en varias fracciones (BPCs cerradas de 3.5 a 7L) y analizadas por el departamento
de control de calidad. A partir del análisis de control de calidad se define cuales fracciones son descartadas y cuáles
homogenizadas. En esta etapa se eliminan formas moleculares deamidadas así como parcialmente piroglutamizadas.
Una vez que las fracciones son homogenizadas las mismas se conservan a Temperatura ambiente.

Etapa XI
El producto es filtrado a través de un cartucho de fibra hueca de 20nm de tamaño de poro. La relación de carga no debe
superar los 500g de IgG por m2 de área filtrante, se utilizan tantos filtros como sea necesario respetando dicha
especificación. La presión máxima del filtro es de 1.5bar y una presión de trabajo de 0.8bar. Previo a la operación se
hace una prueba de estanqueidad de cada filtro y posterior a su uso un ensayo de integridad.

Etapa XII:

En esta etapa el producto es concentrado a 15mg/mL, diafiltrado contra un mínimo de 8 volúmenes de buffer de
formulación sin polisorbato. Una vez concentrado y diafiltrado se ajusta la concentración por dilución a 10 ± 0.6 mg/mL,
confirmado este valor por el departamento de control de calidad se agrega una solución de Tween 20 al 10% para llevar
a concentración final de polisorbato. El producto es filtrado por 0.22um y conservado a temperatura ambiente en un
sistema BPC cerrado. Los cassettes utilizados tienen un MWCO de 30KDa y se mantiene una relación de carga menor a
400g/m2. En todo momento se controla la TMP tal que no supere 1.5bar y se verifica la integridad por difusión antes de
su uso. El producto retenido es mantenido en todo momento en un agitador SUM cerrado y los cassettes, manifold y
mangueras son de un solo uso.

Etapa XIII

El producto es filtrado por una membrana de PVDF con 0.22um de tamaño de poro y recibido en botellas estériles de
PETG de 2 y/o 5L. El filtro debe cumplir con un rango de 375 – 650 mg/cm2. Se verifica la integridad del filtro antes y
después de su uso. Toda la operación se lleva a cabo dentro de una cabina de seguridad biológica o flujo laminar. En las
botellas se fracciona cuantificando por gravimetría.

Etapa XIV
Finalizada la operación se verifica el torque de todas las botellas, se les coloca un precinto de seguridad y 3 envoltorios
sellados. Tanto sobre el envase primario como en el exterior del envoltorio se les coloca el rótulo correspondiente.

SINTESIS ETAPA DOWNSTREAM

El medio de cultivo clarificado y filtrado conteniendo el anticuerpo monoclonal producido en la etapa de Cultivo Celular,
es entregado al departamento de Purificación el cuál lo somete a 3 cromatografías y distintas etapas de
acondicionamiento obteniendo el IFA.
Bibliografía

ATCC. (2016). CHO-K1 (ATCC® CCL-61™). Obtenido de All products: https://www.atcc.org/products/all/CCL-


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Bradach, V., & Casasola, N. A. (2014). Sustitución de importaciones: Trastuzumab (Doctoral dissertation, Universidad
Argentina de la Empresa).

Breast cancer org. (25 de Septiembre de 2012). El estudio analiza la genética del cáncer de mama y encuentra cuatro
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Breast cancer org. (9 de Noviembre de 2016). Cómo funciona Herceptin. Obtenido de Tratamiento y efectos secundarios:
http://www.breastcancer.org/es/tratamiento/terapias_dirigidas/herceptin/como_funciona
CALVO, E. R. G. TRABAJO FIN DE GRADO ANTICUERPOS MONOCLONALES EN EL TRATAMIENTO DEL CÁNCER.

Ficha técnica obtenida de http://www.ema.europa.eu/docs/es_ES/document_library/EPAR_-


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Ficha técnica obtenida de


http://www.roche.cl/content/dam/roche_chile/es_CL/corporate/Files/Folleto%20Medico%20Herceptin%20IV%20%20440%
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Wikipedia. (19 de Mayo de 2015). Células CHO. Obtenido de wiki: https://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A9lulas_CHO

Wikipedia. (19 de Septiembre de 2017). Trastuzumab. Obtenido de wiki: https://es.wikipedia.org/wiki/Trastuzumab