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PRE – INFORME PRACTICA N°3 BIOQUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS

ANGELICA MARIA VILLEGAS FERNANDEZ – 1.114.821.907

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

TUTORA

ALEJANDRA GONZALEZ

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA – UNAD


ESCUELA DE CIENCIAS BÁSICAS TECNOLOGÍAS E INGENIERÍA
BIOQUÍMICA
NOVIEMBRE
2016
Contenido

INTRODUCCIÓN .............................................................................................................................. 3
MATERIALES, REACTIVOS Y PROCEDIMIENTOS ................................................................ 3
MATERIALES ............................................................................................................................... 3
REACTIVOS ................................................................................................................................. 3
Procedimientos ............................................................................................................................... 4
 REACCIÓN DE BIURET ..................................................................................................... 4
 REACCIÓN DE AMINOÁCIDOS AZUFRADOS ............................................................. 4
DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE PROTEINAS: METODO DE
BRADFORD. ..................................................................................................................................... 5
INTRODUCCION .............................................................................................................................. 5
 REACTIVO DE BRADFORD.............................................................................................. 5
INTRODUCCIÓN
Las proteínas son uno de los principales componentes de todas nuestras células.
Los aminoácidos (compuestos orgánicos) son los ladrillos de construcción de la
proteínas. Los aminoácidos se agrupan de acuerdo con su comportamiento
químico. La síntesis de las proteínas ocurre mediante la unión entre sí de las
cadenas de aminoácidos. Los distintos aminoácidos imparten diferentes
comportamientos químicos en la estructura de las proteínas. Debido a la presencia
de diferentes aminoácidos en las uniones peptídicas las proteínas reaccionan con
una variedad de compuestos formando productos coloreados.

MATERIALES, REACTIVOS Y PROCEDIMIENTOS


MATERIALES
 Tubos de ensayo (140 mm*14mm)
 Gradilla
 Pinza para tubos
 Pipetas Pauster con bulbo
 Beaker o vasos de precipitados de 500 mL
 Estufa 1
 Cámara de flujo laminas
 Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 ml y 10 ml. 4
 Pera de goma para pipetas 4
 Vidrios reloj grandes
 Probeta 100 ml
 Balón aforado de 25 ml
 Agitador de vidrio
 Balanza analítica
 Espectrofotómetro
 Micropipeta 10 μL
 Micropipeta 20- 200 μL
 Micropipeta 20- 200 μL
 Micropipeta 200-1000 μL
 1 caja con puntas de 200 μL (amarillas) para Micropipeta
 1 caja con puntas de 200 μL (amarillas) para Micropipeta
 1 caja con puntas de 1000 μL (azules) para Micropipeta.
 Agitador vórtex múltiple para tubos
REACTIVOS

 Reactivo ninhidrina
 NaOH
 Sulfato cúprico (CuSO)
 Ácido acético(CH3COOH)
 Cloruro de sodio (NaCl)
 albúmina
 Ácido nítrico (HNO3)
 Hidróxido de sodio (NaOH)
 Acetato de Plomo
 α Naftol
 Hipoclorito de sodio
 Reactivo de Hopkins-
 Ácido sulfúrico (H2SO)
 Reactivo de Millón
 Aminoácidos: Glicina, tirosina, triptófano, fenilalanina y arginina
 Fenol
 Albumina de huevo
 Agua destilada
 Ácido fosfórico
 Etanol

Procedimientos

 REACCIÓN DE BIURET

Preparar los tubos de


ensayo

A cada tubo de ensayo agregar el reactivo correspondiente:

Tubo 1: con 3 mL de solución de Albumina de huevo 1%


Tubo 2: con 3 mL de solución de aminoácidos Tirosina, Triptófano o Fenilalanina.
Tubo 3: con 3 mL de Leche 1%
Tubo 4: con 3 mL de Aceite de cocina
Tubo 5: con 3 mL de Glucosa

A cada tubo de ensayo agregar:

Anadir de 4 a 5 gotas de solución de CuSO4 al 1%.


Anadir 2 ml de solución de hidróxido sódico al 20%.

Agitar cada tubo de ensayo,


observar y tomar apuntes de
los cambios.

 REACCIÓN DE AMINOÁCIDOS AZUFRADOS

Preparar los tubos de


ensayo
A cada tubo de ensayo agregar el reactivo correspondiente:

Tubo 1: con 3 mL de solución de Albumina de huevo 1%


Tubo 2: con 3 mL de solución de aminoácidos Tirosina, Triptófano o Fenilalanina.
Tubo 3: con 3 mL de Leche 1%
Tubo 4: con 3 mL de Aceite de cocina
Tubo 5: con 3 mL de Glucosa

Añadir 2 ml de solución de hidróxido sódico al 20%.


Añadir 10 gotas de solución de acetato de plomo al 5%

Calentar el tubo hasta ebullición.

Observar y tomar apuntes de los cambios.

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE PROTEINAS: METODO DE


BRADFORD.

INTRODUCCION

Existen varios métodos para determinar la concentración de proteínas de una muestra, tales
como la determinación de la absorbancia a 280 nm, o mediante la formación de derivados
coloreados de las proteínas, base de los métodos de BIURET o de LOWRY. En estos casos
se forma un complejo coloreado de cobre con el enlace peptídico; en el método de Lowry,
además del complejo anterior también se forma un derivado de las tirosinas que contribuye
a la absorbancia total.

 REACTIVO DE BRADFORD

Azul de coomasie G-250 5 mg


Etanol 2.5 ml
Ácido fosfórico 5 ml
Agua Hasta 50 ml

Mezclar en el orden indicado,


disolver con agitación y a
continuación filtrar
Patrón de albumina. Disolver 10 mg de
albumina bovina en 10 ml de agua
destilada, con lo que tenemos una
disolución madre con una concentración de
1 mg/ml.

METODO

Preparar la curva patrón de albumina bovina en un rango desde 0


hasta 60 μg; de tal manera que el volumen final en cada tubo sea de
300 μl. Mezclar para ello el volumen adecuado de la disolución
madre de albumina bovina de un 1 mg/ml y el correspondiente
volumen necesario de agua, de acuerdo con la siguiente tabla.

Preparación de tres diluciones de la muestra problema:


Hacer una dilución 1:20 de la leche comercial; a continuacion realizar
las diferentes diluciones

De acuerdo con la siguiente tabla.

Finalmente añadir 3 ml del reactivo de Bradford a todos los tubos;


tanto a las diluciones que contienen la albumina como a las que
contienen la leche diluida.

Agitar los tubos y a continuacion proceder a la lectura


de la absorbancia a 595 nm en el colorímetro.
RESULTADOS

RECOMENDACIONES GENERALES PARA LA MANIPULACIÓN SEGURA DE


LOS PRODUCTOS QUÍMICOS PELIGROSOS EN EL LABORATORIO

 En las mesas de trabajo se mantendrán únicamente las cantidades de producto


mínimas necesarias para la operación que se realice.
 Antes de la utilización de cualquier producto, leer atentamente su etiqueta e
indicaciones de peligro, así como la ficha de datos de seguridad.
 Los envases con productos químicos se mantendrán siempre cerrados para evitar
su paso al ambiente del laboratorio o bien accidentes por vertido accidental o
derrames.
 Al acabar las tareas se recogerán todos los materiales, reactivos, etc. evitando que
se acumulen y manteniendo el área de trabajo en perfecto estado de orden y
limpieza.
 No se utilizarán los envases, una vez vacíos, para otros propósitos. Se usarán
recipientes adecuados para cada tipo de producto.
 Los productos químicos se almacenarán en un lugar especialmente diseñado para
tal fin (sala de almacenamiento, armarios) y teniendo en cuenta las posibles
incompatibilidades entre ellos.
 Se dispondrá de un inventario de los mismos y de los medios de separación,
aislamiento o confinamiento adecuados. Las estanterías para reactivos serán
accesibles y proporcionadas a la capacidad de los envases que se dispone.
 Se guardarán siempre los productos en los envases originales.
 Cuando no sea posible, los nuevos envases se etiquetarán convenientemente,
mediante una etiqueta igual a la del envase original, nombre del producto, riesgos
más importantes, concentración, etc.
 Utilizar gradillas y soportes para colocar los distintos útiles, sobre todo material de
vidrio. Cuando se realicen mezclas, tener en cuenta las posibles incompatibilidades
de los productos, evitando reacciones violentas, desprendimiento de gases tóxicos,
etc.
 Controlar la velocidad de adición y agitación de un producto cuando se hagan
mezclas. Todos los equipos que se utilicen deben tener un responsable.
 No se deben utilizar sin conocer perfectamente su funcionamiento.
 Se tendrán a mano pero sin acumulados y evitando que nos puedan llegar a
estorbar. Antes de empezar a trabajar hay que asegurarse que los montajes y
aparatos estén en perfectas condiciones de uso.
 No utilizar nunca material de vidrio en mal estado. Una vez se acaben de utilizar se
dejarán limpios y en perfecto estado de uso.
 Al acabar los trabajos se desconectarán los equipos y los servicios (agua, gas,
vacío, etc.)
 No probar nunca los productos químicos ni olerlos con vistas a su identificación.
 No se tirarán los residuos al desagüe.
 Los envases y materiales contaminados usados se depositarán en los bidones de
residuos tóxicos, o se destruirán.
 El material de vidrio roto se colocará en recipientes rígidos especiales, nunca en las
papeleras.
 No mezclar, en los mismos recipientes de basura, trapos, papeles o similares
impregnados con productos químicos incompatibles.
 Los derrames se limpiarán inmediatamente después de producirse mediante
sistemas de absorción o neutralización.
 Las sustancias y materiales utilizados se tratarán como residuos.
 Una vez absorbido o recogido el producto derramado, se ventilarán
convenientemente las zonas afectadas.
 En caso de accidente debido a la manipulación de productos peligrosos se debe
actuar rápidamente, minimizando las consecuencias.