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J. AMER. SOC. HORT. SCI 113(1): 160-163. 1988

Efecto de los compuestos fenólicos sobre los cultivos de callos de tabaco y brotes de
zarzamora
Michael E. Compton y John E. Preece
Departamento de Ciencia Vegetal y del Suelo, Universidad del Sur de Illinois, Carbondale, IL 62901
Resumen
Los efectos del catecol, juglona, floridzina, floroglucinol, y ác. tánico fueron examinados con
respecto al crecimiento de callos de tabaco y en la proliferación de brotes de la zarzamora. La juglona
(500 uM) promovió el crecimiento de callos de tabaco (Nicotiana tabacum L. ‘Mc Nair 944’),
mientras que el catecol y el floroglucinol (500 uM) incrementaron la formación de brotes adventicios,
pero no el crecimiento de callos. El ác. tánico incrementó la frecuencia de brotes vitrificados. Ningún
compuesto fenólico estimuló la proliferación de brotes axilares en la zarzamora (Rubus sp. ‘Dirkson
Thornless’), y el floroglucinol (1 mM) inhibió la elongación de brotes. La auxina incrementó el
enraizamiento de la zarzamora independientemente de la presencia o ausencia de fenoles incorporados.
En brotes derivados de medios de proliferación libre de fenoles, el número de raíces y porcentaje de
enraizamiento fueron grandes, si es que habían sido tratadas con la auxina fenólica P – ITB a
comparación con el IBA. Al contrario, los brotes que se originaron de un medio de proliferación
conteniendo fenoles enraizaron de igual modo con ambas auxinas. Nombres químicos usados : 1,2-
benceno diol (catecol); 5-hidroxi-1,4- nafatalendiona (juglona); 1- 2-(B-D-glucopiranosloxy)-
4,6- dihidroxifenil-3-{4-hidrofenil}-1- propanona (floridzina); 1,3,5- bencenotriol (floroglucinol);
ácido 1H-indol-3 butírico (IBA); N-(fenilmetil)-6-amino-1H-purina (BA); ácido fenil-3-indol
tiobutírico (P-ITB); (1a2B,4aa,4bB,10B)-2,4a,7-trihidroxi-1-metil-8-metilene-3-en-1, ácido 10
dicarboxílico 1,4 a – lactona (GA3).

Palabras clave: Nicotiana tabacum, Rubus sp., auxina, enraizamiento, in vitro, bioensayo
Introducción
Los fenoles están presentes en todos los tejidos vegetales y se hallan localizados en el citoplasma, la
vacuola, frecuentemente en las paredes celulares o en idioblastos de taninos (7). Durante la escisión del
explante, las células son dañadas, sus contenidos se mezclan, y los compuestos fenólicos son oxidados
por el aire (22), peroxidasas (17, 24) o polifenol oxidasas (11, 18). Adicionalmente, las heridas también
estimularían la síntesis de compuestos fenólicos monoméricos y poliméricos (21).
Los compuestos fenólicos han demostrado tener tanto efectos estimulatorios como inhibitorios sobre
el desarrollo vegetal. Ellos pueden influenciar el crecimiento de la planta promoviendo la expansión
foliar (10), estimulando el crecimiento de callos(8, 16), e incrementando el enraizamiento de explantes
(8, 13, 14). Cuando utilizaron el sistema estándar de callos de tabaco, Compton y Preece (5)
demostraron que los exudados de los explantes de ápices de brotes podían o no ser inhibitorios,
dependiendo de la especie de explante.
Cinco compuestos fenólicos endógenos fueron empleados en este estudio. La juglona se escogió
porque puede inhibir el crecimiento vegetal (6, 15) y presumiblemente sea el mayor constituyente del
exudado del nogal, el cual tiene efectos inhibitorios sobre el callo de tabaco (5). El ácido tánico se
presenta en la corteza y frutos de muchas especies (25), así se le ha reportado en exudados (2, 3) y ha
demostrado estimular el enraizamiento inicial en explantes de judías (14). El catecol, es bantante
sabido, que estimula el enraizamiento adventicio de algunas especies (14); sin embargo, este no
incrementa el enraizamiento de brotes de manzana in vitro (13). El floroglucinol y la floridzina,
fueron incluídas debido a que ellas han sido estudiadas in vitro con sistemas vegetales (12, 13, 27, 28)
dando lugar a una comparación con los otros fenoles.
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Objetivos
Los objetivos de nuestro estudio fueron observar los efectos de los compuestos fenólicos
seleccionados sobre:
a) El crecimiento y formación de brotes adventicios en cultivos de callo de tabaco.
b) El establecimiento del explante, proliferación de brotes axilares, y subsecuente enraizamiento
de la zarzamora en el invernadero.
c) Comparar los efectos de IBA y P-ITB (una auxina fenólica) sobre el enraizamiento de
microvástagos de zarzamora.
Material y Métodos
Ensayo en callo de tabaco. Las plantas de tabaco (Nicotiana tabacum L. ‘Mc Nair 944’) estuvieron
creciendo en invernadero bajo fotoperíodo natural a 25 o+/- 5oC. Los explantes fueron preparados de
acuerdo a como lo describiera Compton y Preece (5).
El medio experimental constó de las sales más compuestos orgánicos del MS y 3 % de sacarosa, lo
cual fue suplementado con 1 uM de IBA y 10 uM de BA. El catecol, juglona, floridzina, floroglucinol y
ácido tánico fueron agregados independientemente al medio a concentraciones de 0, 5, 50 y 500 uM
previo al autoclavamiento. El pH del medio fue ajustado a 5.8 con 1 N de KOH o HCl previo a la
adición de 7 g.litro-1 de agar Bacto Difco. Todos los recipientes de cultivo fueron tubos de borosilicato
de 25 x 125 mm conteniendo 15 ml de medio y tapados con tapas de plástico antes del autoclavado a
121 o C por 20 min.
Segmentos de callo de tabaco (1 cm 3) a partir de cultivos stock fueron colocados sobre el medio
experimental creciendo en la cámara de crecimiento bajo un fotoperíodo de 16 hrs y un PPF de 33 a 46
umol. s-1.m-2 y a 30/24 o C (día / noche) por 4 semanas. Las variables evaluadas fueron la altura del
callo, diámetro ( limitado por las dimensiones del recipiente de cultivo), y el peso seco; el número y
longitud de los brotes; y el número y longitud de las raíces. Todos los tratamientos fueron dispuestos en
un diseño completamente randomizado con 10 repeticiones, donde cada experimento fue llevado a
cabo dos veces.
Ensayo de micropropagación de la zarzamora. Los cultivos para proliferación de zarzamora fueron
establecidos de acuerdo a Broome y Zimmerman (1) y Slivinski et al. (23). Simples explantes
nodales (2cm) fueron superficialmente esterilizados por 20 min en 0.5 % de NaClO con 5 gotas de
Tween 20 por litro, para luego ser lavados por tres veces con agua estéril y desionizada.
El medio empleado fue el de Zimmerman y Broome (28) a excepción de los compuestos orgánicos
del MS que se empleo. Los compuestos fenólicos fueron los mismos que para el ensayo de tabaco, pero
las concentraciones fueron 0, 0.01, 0.1 y 1 mM. El pH del medio, la esterilización y las condiciones
ambientales del medio de cultivo fueron las misma que para el ensayo en tabaco. Un diseño
completamente al azar con 10 repeticiones fue empleado .
Los vástagos grandes fueron cosechados a partir de los cultivos de 7 semanas de edad, donde el 1 cm
basal de cada tallo fueron sumergidas por 30 segundos en 1 mM de IBA , P-ITB, o en 70 % de
etanol/agua (CONTROL). Los microvástagos entonces fueron colocados por dos semanas en frascos
conteniendo 2 de musgo : 1 de perlita : y 1 de vermiculta (por volumen) o en hoyos en línea de 14 mm
con fibra de vidrio en unidades aeropónicas de 38 x 37 x 108 cm ( alto x ancho x longitud), donde 1 a 2
cm basales fueron regados con agua por 8 segundos. Cada 3 minutos, los microbrotes en los frascos y
en las unidades aeropónicas fueron dispuestas en un diseño completamente randomizado con 5
repeticiones donde cada uno de ellos fue colocado bajo riego intermitente.
Resultados y Discusión
La juglona, una monohidroxinaftoquinona, promovió el crecimiento de callos de tabaco, mientras que
el catecol, un dihidroximonofenol, y el floroglucinol un trihidroximonofenol, promovió la formación
de brotes adventicios (Tabla 1). Lee y Skoog (16) encontraron que los dihidroxifenoles promovían el
crecimiento de callos de tabaco, mientras que los monohidroxifenoles estimulaban la formación de
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Tabla 1. Efecto de la juglona sobre el peso seco del callo y del catecol y floroglucinol sobre la
formación de brotes adventicios en cultivos de callo de tabaco.
Concentración (uM) Peso seco(mg) No de brotes adventicios
juglona catecol floridzina
1
0 197.8 a 1.2 a 1.3 a
5 189.0 a 2.0 a 2.1 a
50 221.9 a 2.5 a 1.8 a
500 374.5 b 3.8 b 3.6 b
LSD0.05 109.6 1.8 1.6
1
Significa separación desde el control por LSD. P = 5 %
Tabla2. Efecto de los cinco compuestos fenólicos sobre la longitud de los brotes y el enraizamiento de
microvástagos de zarzamora.
Fenol Concentración fenólica (mM) en el medio de proliferación
0.01 0.1 1.0
Longitud raíz Longitud raíz Longitud raíz
del brote (no.) (%) del brote (no.) (%) del brote (no.) (%)
(mm) (mm)
Control 17.2 b1 3.4 ab 46 17.2 b 3.4 ab 46 17.2 b 3.4 ab 46
Catecol 22.7 ef 8.7 c 87 17.8 bc 4.1 abc 57 19.1 bcd 5.9 bcd 67
Juglona 22.2 def 6.9 dc 93 17.8 bc 4.1 abc 63 20.1 bcdef 3.7 ab 47
Floridzina 23.3 f 9.1 c 83 20.7 bcdef 4.6 abcd 53 21.5 cdef 5.4 bcd 90
Floroglucinol 22.2 def 6.5 cdc 73 20.4 bcdef 5.5 bcd 70 12.7 a 2.6 a 30
Ac. tánico 22.9 f 5.2 abcd 70 22.9 f 5.9 bcd 57 18.5 bcd 2.7 a 40
LSD0.05
Longitud del 3.79
brote
No. raíces 2.68
LSD0.01
Longitud del 4.99
brote
No. raíces 3.53
1
Significa separación dentro de un parámetro por LSD, P= 5%. Cada número representa una media de
18 a 30 microvástagos. Los datos se colectaron par ambos parámetros luego de dos semanas en el
medio de enraizamiento. Los dos modos de interacción de fenol x concentración fue significativo de
acuerdo a la prueba de F con 8 y 299 grados de libertad.
Tabla 3. Efecto de la auxina y los medios sobre el enraizamiento de microvástagos de zarzamora.
Tratamiento A través de fenoles Control
(no. raíces) (%) (no. raíces) (%)
Auxina
0 3.4 a1 70 1.3 a 30
IBA (1 mM) 6.8 b 88 1.1 a 25
P-ITB (1mM) 6.3 b 81 7.3 b 70
Medio
Aeropónico 4.4 70 2.4 27
Musgo- Perlita 6.5 89 4.1 53
Significancia * NS
Contrastes ortogonales
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Auxina vs sin ** NS
auxina
IBA vs P-ITB NS **
1
Significa separación desde el control por LSAD , P= 5 %.
*, ** Son significativamente directamente a los niveles 5 % y 1 % o no significativos,
respectivamente, de acuerdo a la prueba de F con 1 y 299 grados de libertad (fenoles) o 1 y 20 grados
de libertad (controles).
Tabla 4. Efecto de los compuestos fenólicos, auxinas, y de los medios sobre el enraizamiento de
microvástagos de zarzamora.
Control IBA (1 mM) P-ITB (1 mM)
Longitud Raíz Longitud Raíz Longitud Raíz
del brote longitud (%) del brote longitud (%) del brote longitud (%)
Medio Fenol (mm) (mm) (mm) (mm)

Aeropónico ninguno 15.4 bcdz 1.8 a 20 19.4 defgh 3.8 ab 20 22.8 efgh 8.0 abcd 40
Catecol 21.4 efgh 7.7 abc 27 20.3 defgh 9.3 abcde 73 15.3 bcd 6.8 abc 67
Juglona 20.7 defgh 10.9 abcde 46 18.6 cdef 8.5 abcd 53 19.9 cdefgh 12.8 bcde 73
Floridzina 23.0 efgh 8.3 abcd 53 20.3 defgh 10.2 abcde 73 22.6 efgh 11.3 abcde 87
Floroglucinol 20.7 defgh 6.3 abc 40 18.2 cdef 6.2 abc 67 22.2 efgh 6.9 abc 47
Ác. tánico 22.5 efgh 8.8 abcde 47 23.4 fgh 7.4 abc 40 19.8 cdefgh 9.2 abcde 40
Musgo- ninguno 14.6 bc 14.6 cde 40 8.4 a 8.8 abcde 20 19.0 cdefgh 19.4 efg 100
Perlita Catecol 23.1 efgh 26.8 fgh 80 17.7 cde 18.5 def 87 22.4 efgh 26.8 fgh 87
Juglona 24.3 gh 43.2 i 73 20.7 defgh 34.8 hi 80 18.7 cdefg 26.8 fgh 80
Floridzina 23.7 fgh 34.0 hi 60 22.1 efgh 26.1 fgh 93 17.9 cde 12.1 abcde 87
Floroglucinol 20.9 defgh 34.0 hi 73 20.7 defgh 26.3 fgh 80 11.3 ab 13.0 bcde 47
Ác. tánico 20.9 defgh 14.9 cde 67 20.5 defgh 19.4 efg 93 24.4 h 30.0 gh 47
LSD0.05
Longitud 5.60
del brote
Longitud
de la raíz 10.71
LSD0.01
Longitud 7.37
del brote
Longitud 14.09
de la raíz
Z
Significa separación dentro de un parámetro por LSD, P= 5 % . Cada número representa la media de
5 a 15 microvástagos. Tres modos de interacción de medios x fenol x auxina fue significativo de
acuerdo a la prueba de F con 8 y 299 grados de libertad.
yemas, pero tendiendo a inhibir la formación de callos. Nosotros no encontramos ningún efecto de los
compuestos con dos o más anillos fenólicos (floridzina y ác. tánico) sobre el crecimiento y
diferenciación de callos de tabaco (datos no publicados).
La juglona no tiene ningún efecto sobre la formación de brotes adventicios (datos no publicados),
pero estimula el crecimiento de cultivo de callos de tabaco (Tabla 1). A 5 y 50 uM, la juglona no tiene
efecto sobre el cultivo de callos de tabaco, sin embargo el crecimiento de callos fue estimulado a 500
uM. Hubo una duplicación incrementada en el peso seco de los callos a un nivel de 500 uM a
comparación de los controles. Davis (6) previamente había reportado que la juglona era tóxica cuando
era inyectado dentro del tallo de tabaco y alfalfa y Wang (datos no publicados citado en la referencia
15) encontró que concentraciones tan bajas como 10 ppm de juglona comercialmente purificada redujo
el crecimiento de plántulas de tomate. Nuestros resultados sugieren que las células del callo pueden
responder de diferente manera que en la planta completa como ha sido expresado por otros (9, 26), o
que el autoclavamiento modifica la juglona que sería estimulatoria, sin embargo cuando comparamos la
juglona esterilizada por filtro y las autoclavadas no hubieron diferencias significativas en el
crecimiento de callos de tabaco (datos no publicados).
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Aunque no hubo ningún efecto sobre el crecimiento de callos de tabaco, el catecol incrementó la
formación de brotes adventicios (Tabla 1). Ninguna diferencia fue observada entre los controles y las
concentraciones de 5 y 50 uM, pero hubo un incremento significativo (tres veces) reflejado en el
número de brotes cuando una concentración de 500 uM de dihidroximonofenol fue empleado. El
catecol ha demostrado incrementar la formación de raíces adventicias en varias especies (14), pero no
estimuló la rizogénesis en nuestros cultivos de callos de tabaco.
Un nivel alto (500 uM) de floroglucinol incrementó la formación de brotes adventicios en cultivos
de callos de tabaco (Tabla 1), pero no modificó el crecimiento del callo, aunque la formación de raíces
adventicias no se observó en nuestro estudio, Jones y Hatfield (13) y Zimmerman encontraron que el
floroglucinol incrementó el enraizamiento de brotes de manzano.
No hubieron diferencias significativas en el crecimiento de los callos, ni en la formación de brotes
adventicios tanto cuando la floridzina o el ácido tánico fueron agregados al medio; sin embargo,
muchos de los brotes formados sobre el medio conteniendo ácido tánico mostraron signos de
vitrificación (Fig. 1). Se ha reportado que plantas vitrificadas tienen deficiencia en síntesis de lignina
(20). Hegedus y Phan (10) encontraron que la vitrificación podía ser eliminada agregando floridzina y
floroglucinol al medio de cultivo. Este tratamiento estimuló la actividad de la fenilalanina amonioliasa
y del hidroxicinamato : Co A ligasa, dos importantes enzimas para la síntesis de lignina.
La adición de fenoles al medio MS no incrementó la formación de brotes axilares, en cultivos de
zarzamora; sin embargo la longitud de los brotes se incrementó significativamente para los 5 fenoles
cuando fueron incorporados a una concentración de 0.01 Mm, comparado con los controles (Tabla 2).
El número de raíces se incrementó significativamente en microvástagos cosechados a partir de cultivos
conteniendo catecol, juglona, floridzina y floroglucinol (0.01 M) que sobre vástagos cogidos a partir
del medio control (Tabla 2). Las altas concentraciones (0.1 y 1.0 mM) no estimularon, ni inhibieron el
enraizamiento comparado con los controles. La auxina incrementó significativamente el número de
raices en microvástagos de zarzamora cosechados a partir de los medios conteniendo los compuestos
fenólicos, pero ninguna diferencia fue encontrada entre el IBA y P-ITB (Tabla 3). El P-ITB incrementó
significativamente el enraizamiento de microvástagos cosechados a partir de cultivos que no contenían
compuestos fenólicos. Este incremento sugiere que el grupo fenólico del P-ITB estimula la actividad
auxinica, cuya ventaja sobre el IBA se pierde cuando los fenoles han sido incorporados dentro del
medio de proliferación.
El número, longitud y porcentaje de raíces fueron generalmente más bajos cuando los microvástagos
fueron colocados en las unidades aeropónicas que en el medio musgo-perlita-vermiculita; sin embargo
la elongación de los brotes fue el mismo en ambos sistemas (Tabla 4). En el medio musgo-perlita-
vermiculita, la longitud de las raíces fue inhibida por P-ITB cuando los brotes fueron cosechados a
partir de cultivos conteniendo floridzina o floroglucinol, pero estimulado en brotes cosechados que
contenían ácido tánico.
Este estudio demostró que estos compuestos fenólicos no son generalmente inhibitorios para el
crecimiento de callos de tabaco o cultivos de brotes de zarzamora a las concentraciones evaluadas. Su
efecto estimulatorio sobre el crecimiento y organogénesis de callos de tabaco o cultivo de brotes de
zarzamora sugiere que un amplio uso podría ser beneficioso. Al contrario , la exudación inhibitoria de
explantes podría ser debido a sustancias casualmente como taninos o fenoles hasta compuestos
específicos que han sido caracterizados . Dicha exudación es al parecer una mezcla de sustancias que
pueden ser realmente tóxicas. Sin embargo, no esta claro si la exudación es una causa o un síntoma del
estrés del explante o ambos.